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二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单链抗体的制备及广谱特异性
被引量：
7
1
作者
周丽君
黄启欣
+5 位作者
雷红涛
王欲晓
王强
徐振林
王弘
孙远明
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期2269-2274,共6页
从分泌抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞系(12C2)中提取了总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计带linker引物,采用重叠延伸PCR制备单链抗体(scFv)基因,将其克隆到噬菌体载体p3MH中,构建成噬菌体单链抗体...
从分泌抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞系(12C2)中提取了总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计带linker引物,采用重叠延伸PCR制备单链抗体(scFv)基因,将其克隆到噬菌体载体p3MH中,构建成噬菌体单链抗体表达载体,转化大肠杆菌表达出噬菌体表面展示scFv,对经过Phage-ELISA鉴定的阳性克隆进行噬菌体外壳蛋白基因geneⅢ的去除,用IPTG诱导其可溶性表达,对表达产物进行SDS-PAGE,Western-Blot及ELISA鉴定,并与亲本MAb进行性能对比.结果表明,可溶性表达的scFv分子量为27000;scFv与DPPs的交叉反应率比其亲本MAb提高了1.3～3.5倍,表明其广谱特异性有所提高.由于scFv与MAb相比具有诸多优点,因此本研究为有机磷农药多残留检测方法的建立提供了一种更广谱、更灵敏的新型识别分子.
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关键词
二
乙氧基
硫代磷酸
酯类
有机磷
农药
单链抗体
噬菌体展示
广谱特异性
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职称材料
DPPs类有机磷农药宽谱酶联免疫吸附分析方法的建立
被引量：
9
2
作者
吕丽兰
张娅
+7 位作者
陆覃昱
邹承武
甘志勇
李冬桂
吴静娜
王艺霖
李鑫生
何丽珊
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2022年第11期2659-2666,共8页
【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全...
【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全抗原。筛选免疫小鼠,制备稳定分泌可识别DPPs抗体的单克隆细胞株,筛选出抗原和抗体最佳工作浓度组合,建立该单抗的ic-ELISA标准曲线,并分析该单抗与6种DPPs的交叉反应率,评估ic-ELISA的广谱性。利用所得抗体与喹硫磷交叉反应最强的特性对采购的柑橘和鲜橙样品进行喹硫磷添加回收试验。【结果】成功合成识别DPPs的人工抗原,包括包被抗原DPPs-OVA和免疫抗原DPPs-BSA。通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、广谱性最强的单克隆细胞株5G_(8)。以0.5μg/mL包被抗原DPPs-OVA、1.0μg/mL抗体5G_(8)2D_(5)为最佳工作浓度组合,将细胞株筛选过程中抗体识别率较高的有机磷农药——对硫磷选定为抑制标准物,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC_(50))为41.78 ng/mL,检测范围(IC_(20)~IC_(80))为3.21~239.59 ng/mL;所建立的ic-ELISA与5种DPPs(蝇毒磷、喹硫磷、甲拌磷、甲基对硫磷和倍硫磷)均存在不同程度的交叉反应,其中以喹硫磷的交叉反应率最高,达19.79%。比较ic-ELISA和气相色谱法(GC)对柑橘和鲜橙样品中喹硫磷的添加回收结果发现,ic-ELISA的添加回收率为75.80%~116.12%,GC的添加回收率介于92.5%~115.00%,2种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA经GC交叉验证准确性较高,可用于快速检测农产品中的喹硫磷残留。
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关键词
二
乙氧基
硫代磷酸
酯类
有机磷
农药
(
dpps
)
单克隆抗体
间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA)
气相色谱法(GC)
农药
残留检测
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职称材料
题名
二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单链抗体的制备及广谱特异性
被引量：
7
1
作者
周丽君
黄启欣
雷红涛
王欲晓
王强
徐振林
王弘
孙远明
机构
解放军海军总医院中心实验科
广东省食品质量安全重点实验室
出处
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期2269-2274,共6页
基金
国家“九七三”计划项目(批准号:2012CB720803)
国家自然科学基金(批准号:30700663)
+1 种基金
高等学校博士点基金项目(批准号:20114404130002)
广州市科技计划项目(批准号:12C12101663)资助
文摘
从分泌抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞系(12C2)中提取了总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计带linker引物,采用重叠延伸PCR制备单链抗体(scFv)基因,将其克隆到噬菌体载体p3MH中,构建成噬菌体单链抗体表达载体,转化大肠杆菌表达出噬菌体表面展示scFv,对经过Phage-ELISA鉴定的阳性克隆进行噬菌体外壳蛋白基因geneⅢ的去除,用IPTG诱导其可溶性表达,对表达产物进行SDS-PAGE,Western-Blot及ELISA鉴定,并与亲本MAb进行性能对比.结果表明,可溶性表达的scFv分子量为27000;scFv与DPPs的交叉反应率比其亲本MAb提高了1.3～3.5倍,表明其广谱特异性有所提高.由于scFv与MAb相比具有诸多优点,因此本研究为有机磷农药多残留检测方法的建立提供了一种更广谱、更灵敏的新型识别分子.
关键词
二
乙氧基
硫代磷酸
酯类
有机磷
农药
单链抗体
噬菌体展示
广谱特异性
Keywords
O, O-Diethyl phosphorothioate pesticides
Single chain Fv （scFv）
Phage-display
Broad-speci-ficity
分类号
O652 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
DPPs类有机磷农药宽谱酶联免疫吸附分析方法的建立
被引量：
9
2
作者
吕丽兰
张娅
陆覃昱
邹承武
甘志勇
李冬桂
吴静娜
王艺霖
李鑫生
何丽珊
机构
广西亚热带作物研究所/农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(南宁)/农业农村部亚热带果品蔬菜质量监督检验测试中心
广西大学农学院/广西农业环境与农产品安全重点实验室
出处
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2022年第11期2659-2666,共8页
基金
广西重点研发计划项目(桂科AB17292070)
广西农业科学院基本科研业务专项(桂农科2021YT148)。
文摘
【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全抗原。筛选免疫小鼠,制备稳定分泌可识别DPPs抗体的单克隆细胞株,筛选出抗原和抗体最佳工作浓度组合,建立该单抗的ic-ELISA标准曲线,并分析该单抗与6种DPPs的交叉反应率,评估ic-ELISA的广谱性。利用所得抗体与喹硫磷交叉反应最强的特性对采购的柑橘和鲜橙样品进行喹硫磷添加回收试验。【结果】成功合成识别DPPs的人工抗原,包括包被抗原DPPs-OVA和免疫抗原DPPs-BSA。通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、广谱性最强的单克隆细胞株5G_(8)。以0.5μg/mL包被抗原DPPs-OVA、1.0μg/mL抗体5G_(8)2D_(5)为最佳工作浓度组合,将细胞株筛选过程中抗体识别率较高的有机磷农药——对硫磷选定为抑制标准物,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC_(50))为41.78 ng/mL,检测范围(IC_(20)~IC_(80))为3.21~239.59 ng/mL;所建立的ic-ELISA与5种DPPs(蝇毒磷、喹硫磷、甲拌磷、甲基对硫磷和倍硫磷)均存在不同程度的交叉反应,其中以喹硫磷的交叉反应率最高,达19.79%。比较ic-ELISA和气相色谱法(GC)对柑橘和鲜橙样品中喹硫磷的添加回收结果发现,ic-ELISA的添加回收率为75.80%~116.12%,GC的添加回收率介于92.5%~115.00%,2种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA经GC交叉验证准确性较高,可用于快速检测农产品中的喹硫磷残留。
关键词
二
乙氧基
硫代磷酸
酯类
有机磷
农药
(
dpps
)
单克隆抗体
间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA)
气相色谱法(GC)
农药
残留检测
Keywords
O
O-diethyl organophosphorus pesticides(
dpps
)
Monoclonal antibody
Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay(ic-ELISA)
Gas chromatography(GC)
Pesticide residue detection
分类号
S481.8 [农业科学—农药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单链抗体的制备及广谱特异性
周丽君
黄启欣
雷红涛
王欲晓
王强
徐振林
王弘
孙远明
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2012
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
DPPs类有机磷农药宽谱酶联免疫吸附分析方法的建立
吕丽兰
张娅
陆覃昱
邹承武
甘志勇
李冬桂
吴静娜
王艺霖
李鑫生
何丽珊
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2022
9
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下载PDF
职称材料
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