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乳腺特异表达载体缺失片段的鉴定与修复
1
作者
房希碧
刘晶
+2 位作者
刘一诺
卢春燕
赵志辉
《青岛农业大学学报（自然科学版）》
2010年第3期228-231,共4页
通过对pBC1中的乳腺特异表达启动子成分进行分析,鉴定了位于β酪蛋白启动子上游两个EcoRⅠ位点(-89^-94和-120^-125)之间的缺失片段,31bp的缺失使得该载体中的一个乳控盒元件(-112^-141)和一个乳腺因子识别序列(-92^-102)遭到破坏,并使...
通过对pBC1中的乳腺特异表达启动子成分进行分析,鉴定了位于β酪蛋白启动子上游两个EcoRⅠ位点(-89^-94和-120^-125)之间的缺失片段,31bp的缺失使得该载体中的一个乳控盒元件(-112^-141)和一个乳腺因子识别序列(-92^-102)遭到破坏,并使得位于TATA框上游的所有启动子成分发生了位置改变。通过与山羊β酪蛋白启动子序列进行比较,设计并合成了缺失片段,经一系列的酶切和连接处理,使得该缺失得到了修复,修复后的载体具有所有乳蛋白表达需要的启动子调控原件。本试验结果为利用修复后的乳腺特异高效表达载体进行乳腺生物反应器的研究奠定了分子生物学基础。
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关键词
乳腺特异表达载体
β酪蛋白
启动子
修复
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职称材料
转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选
2
作者
王春生
李咏乐
+2 位作者
仇雨歌
朴善花
安铁洙
《安徽农业科学》
CAS
2014年第24期8099-8101,8166,共4页
[目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法。[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞。[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞...
[目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法。[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞。[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞后,通过最适G418浓度(400μg/ml)筛选获得转基因阳性细胞;转基因阳性细胞形态呈现梭形且核仁清晰,其生长曲线呈现正常的"S";转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍呈现与冷冻前新鲜转基因细胞相似的形态和生长曲线;PCR鉴定结果表明,STP-pBC1已整合入转基因细胞的基因组中。[结论]成功获得乳腺特异的转甜味蛋白基因Brazzein的山羊成纤维细胞株。
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关键词
山羊
乳腺特异表达载体
BRAZZEIN基因
转基因细胞
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职称材料
题名
乳腺特异表达载体缺失片段的鉴定与修复
1
作者
房希碧
刘晶
刘一诺
卢春燕
赵志辉
机构
吉林大学畜牧兽医学院
出处
《青岛农业大学学报（自然科学版）》
2010年第3期228-231,共4页
基金
国家转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08007-001和2009ZX08009-156B)资助
文摘
通过对pBC1中的乳腺特异表达启动子成分进行分析,鉴定了位于β酪蛋白启动子上游两个EcoRⅠ位点(-89^-94和-120^-125)之间的缺失片段,31bp的缺失使得该载体中的一个乳控盒元件(-112^-141)和一个乳腺因子识别序列(-92^-102)遭到破坏,并使得位于TATA框上游的所有启动子成分发生了位置改变。通过与山羊β酪蛋白启动子序列进行比较,设计并合成了缺失片段,经一系列的酶切和连接处理,使得该缺失得到了修复,修复后的载体具有所有乳蛋白表达需要的启动子调控原件。本试验结果为利用修复后的乳腺特异高效表达载体进行乳腺生物反应器的研究奠定了分子生物学基础。
关键词
乳腺特异表达载体
β酪蛋白
启动子
修复
Keywords
mammary gland specific expression vector
β-casein gene
promoter
repairment
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选
2
作者
王春生
李咏乐
仇雨歌
朴善花
安铁洙
机构
东北林业大学生命科学学院
出处
《安徽农业科学》
CAS
2014年第24期8099-8101,8166,共4页
基金
中央高校基本科研业务费专项资金项目(DL13EA06-02)
国家自然科学基金项目(30771538)
文摘
[目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法。[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞。[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞后,通过最适G418浓度(400μg/ml)筛选获得转基因阳性细胞;转基因阳性细胞形态呈现梭形且核仁清晰,其生长曲线呈现正常的"S";转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍呈现与冷冻前新鲜转基因细胞相似的形态和生长曲线;PCR鉴定结果表明,STP-pBC1已整合入转基因细胞的基因组中。[结论]成功获得乳腺特异的转甜味蛋白基因Brazzein的山羊成纤维细胞株。
关键词
山羊
乳腺特异表达载体
BRAZZEIN基因
转基因细胞
Keywords
Goat
Mammary gland specific expression vector
Brazzein gene
Transgenic cell
分类号
S827 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
乳腺特异表达载体缺失片段的鉴定与修复
房希碧
刘晶
刘一诺
卢春燕
赵志辉
《青岛农业大学学报（自然科学版）》
2010
0
在线阅读
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职称材料
2
转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选
王春生
李咏乐
仇雨歌
朴善花
安铁洙
《安徽农业科学》
CAS
2014
0
在线阅读
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职称材料
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