牛β-乳球蛋白基因5′调控成分的分离、克隆及序列分析 被引量：5

1

作者 石玉强 张涌 +2 位作者 郑月茂 刘建忠 张志平 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第3期1-4,共4页

利用 PCR方法克隆了牛 β-乳球蛋白基因 5′调控成分 (1 4 4 9bp) ,其中包括 5′侧翼序列 (6 4 5 bp) ,第一外显子及第一内含子 (80 4 bp)。PCR产物回收纯化后 ,克隆在 p MD1 8- T Vector的 T位点。序列分析表明 ,该序列与牛 β-乳球蛋... 利用 PCR方法克隆了牛 β-乳球蛋白基因 5′调控成分 (1 4 4 9bp) ,其中包括 5′侧翼序列 (6 4 5 bp) ,第一外显子及第一内含子 (80 4 bp)。PCR产物回收纯化后 ,克隆在 p MD1 8- T Vector的 T位点。序列分析表明 ,该序列与牛 β-乳球蛋白 A型基因、牛 β-乳球蛋白 B型基因、山羊和绵羊 β-乳球蛋白基因的同源性分别为 98.5 5 % ,99.79% ,90 .70 %和 90 .0 9%。计算机分析表明 ,此调控成分含有诸多调节因子结合位点或反应元件 ,其中包括视黄酸反应元件 (RARE)、佛波酯反应元件 (TRE)、乳腺特异性因子 (MSBF)和核因子 1 (NF1 )结合位点等 ,提示此调控成分可调控外源基因在乳腺细胞中高效表达 。 展开更多

关键词 牛 Β-乳球蛋白基因 PCR 序列分析 基因调控 乳腺生物反应器 生长激素基因 基因分离 基因克隆

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牦牛乳球蛋白基因5′调控区的分离、克隆及序列分析 被引量：2

2

作者 刘建忠 朱艳君 +1 位作者 周丽芳 马季骅 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期553-556,共4页

根据文献设计1对PCR引物,寡聚核苷酸序列上游引物为:5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3′,下游引物:5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后扩增出长度为1 447 bp的DNA片段,将该片段从琼脂糖凝... 根据文献设计1对PCR引物,寡聚核苷酸序列上游引物为:5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3′,下游引物:5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后扩增出长度为1 447 bp的DNA片段,将该片段从琼脂糖凝胶中回收,克隆到pMD18-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明,牦牛乳球蛋白基因5′调控区与文献报道的奶牛该基因同源性为97.65%,突出的碱基差异为牦牛乳球蛋白基因5′调控区发生了1个位点连续3个碱基的缺失突变和另一位点1个碱基的插入突变。该研究也为开展以牦牛乳球蛋白基因5′调控区为启动子的乳腺生物反应器研究准备了条件。 展开更多

关键词 乳球蛋白基因 5’调控区 牦牛 PCR扩增

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β乳球蛋白基因(βlg)的表达调控及其应用 被引量：2

3

作者 刘建喜 林爱星 +1 位作者 周云 陈永福 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第3期23-27,共5页

β乳球蛋白 (BLG)是反刍动物乳汁中的主要乳清蛋白 ,BLG表达受到 βlg核心启动子、LCR、MAR等顺式作用元件和激素、转录因子等反式作用因子的调控。利用 βlg启动子已在乳腺成功表达外源基因 ,但乳腺组织特异性表达外源基因时尚存在异... β乳球蛋白 (BLG)是反刍动物乳汁中的主要乳清蛋白 ,BLG表达受到 βlg核心启动子、LCR、MAR等顺式作用元件和激素、转录因子等反式作用因子的调控。利用 βlg启动子已在乳腺成功表达外源基因 ,但乳腺组织特异性表达外源基因时尚存在异位表达、差异表达、表达水平低和表达受位置效应影响等问题。构建表达载体时充分考虑 βlg启动子和远端调控元件 ,有可能使外源基因获得稳定、高效、特异的表达。 展开更多

关键词 β乳球蛋白基因 表达调控 乳腺组织 特异性表达 表达载体

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西农萨能奶山羊β-乳球蛋白基因5′侧翼区多态性分析 被引量：1

4

作者 李瑞彪 陈宏 +3 位作者 雷初朝 孙维斌 雷雪芹 胡沈荣 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第1期74-76,共3页

　根据β-乳球蛋白基因的DNA序列设计了1对引物,用PCR-RFLP技术对56只西农萨能奶山羊β-乳球蛋白基因5′侧翼区进行了多态性分析。结果发现,在西农萨能奶山羊群体中,PCR所扩增出的710bp片段经限制性内切酶Sam 消化后,表现出3种基因型。... 　根据β-乳球蛋白基因的DNA序列设计了1对引物,用PCR-RFLP技术对56只西农萨能奶山羊β-乳球蛋白基因5′侧翼区进行了多态性分析。结果发现,在西农萨能奶山羊群体中,PCR所扩增出的710bp片段经限制性内切酶Sam 消化后,表现出3种基因型。等位基因A,B的频率分别为0.91和0.09,3种基因型AA,AB,BB的频率分别为0.821,0.179和0.000。经检验,在所研究的群体中,该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态。 展开更多

关键词 西农萨能奶山羊 Β-乳球蛋白基因 5′侧翼区 多态性分析 PCR—RFLP

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奶牛酪蛋白和β-乳球蛋白基因多态及其对泌乳性状的影响 被引量：3

5

作者 赖淑静 齐瑞利 +4 位作者 袁陶燕 何俊 吴兵兵 傅衍 牛冬 《浙江畜牧兽医》 2013年第1期8-11,共4页

牛乳蛋白主要包括酪蛋白和乳清蛋白，其中酪蛋白基因和β-球蛋白基因是对奶牛产奶性能有较大影响的两种基因。牛乳蛋白基因多态性与泌乳性状，如泌乳量、乳脂率、乳蛋白量及乳蛋白率有很强的相关性。本文主要对酪蛋白和β-乳球蛋白基因... 牛乳蛋白主要包括酪蛋白和乳清蛋白，其中酪蛋白基因和β-球蛋白基因是对奶牛产奶性能有较大影响的两种基因。牛乳蛋白基因多态性与泌乳性状，如泌乳量、乳脂率、乳蛋白量及乳蛋白率有很强的相关性。本文主要对酪蛋白和β-乳球蛋白基因的结构及功能进行综述，以期为提高奶牛生产性能的研究工作提供基础资料。 展开更多

关键词 Β-乳球蛋白基因 酪蛋白基因 基因多态性 泌乳性状 奶牛 β-球蛋白基因 牛乳蛋白 乳清蛋白

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牛β-乳球蛋白基因的克隆及其调控外源基因表达的研究

6

作者 陈红星 程萱 +3 位作者 杨晓 邓继先 苏国富 黄培堂 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第2期78-82,共5页

目的　制备乳腺生物反应器所必需的乳腺特异性表达的调控序列 ,并验证其指导外源基因表达的能力。方法　用PCR法从奶牛染色体上分 5段扩增出了全长 8 2Kb的牛 β 乳球蛋白基因 ,包括 1 8Kb的 5′侧翼区、1 7Kb的 3′侧翼区及 4 7Kb的g... 目的　制备乳腺生物反应器所必需的乳腺特异性表达的调控序列 ,并验证其指导外源基因表达的能力。方法　用PCR法从奶牛染色体上分 5段扩增出了全长 8 2Kb的牛 β 乳球蛋白基因 ,包括 1 8Kb的 5′侧翼区、1 7Kb的 3′侧翼区及 4 7Kb的gDNA区。扩增出的各片段克隆到T 载体上 ,酶切鉴定及序列分析均证实了所扩增片段的正确性。将五个片段与荧光素酶cDNA拼接成荧光素酶瞬时表达载体并在小鼠乳腺中瞬时表达。结果　注射荧光素酶瞬时表达载体的小鼠乳汁中明显测出了荧光素酶活性。结论　所克隆的牛 β 乳球蛋白基因表达调控序列能够指导外源基因在小鼠乳腺中表达。 展开更多

关键词 小鼠 乳腺 克隆 扩增 荧光素酶 瞬时表达 载体 外源基因表达 Β-乳球蛋白基因 表达调控

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青海牦牛与云南牦牛乳球蛋白基因5′调控区核苷酸序列同源性比较

7

作者 刘建忠 周丽芳 +3 位作者 朱艳君 田为宇 敖敬 马季骅 《武汉科技大学学报》 CAS 2006年第4期419-421,共3页

利用一对PCR引物,寡聚核苷酸序列的上游引物为5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3;′下游引物为5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后,分别克隆来自我国青海和云南地区牦牛的乳球蛋白基因的5′... 利用一对PCR引物,寡聚核苷酸序列的上游引物为5-′gCg,AAT,TCA,TCC,CAC,gTg,CCT,gC-3;′下游引物为5-′gAg,AAT,TCC,Tgg,ggA,ggg,ACC,TT-3′。经68℃退火及30轮循环的PCR程序后,分别克隆来自我国青海和云南地区牦牛的乳球蛋白基因的5′调控区1 447 bp的DNA片段。将该片段从琼脂糖凝胶中回收,克隆在pMD18-T Vector后进行序列测定。序列分析结果表明,青海牦牛该序列的核苷酸序列与文献报道的奶牛该基因的同源性为97.65%,云南牦牛该序列的核苷酸序列与奶牛该基因的同源性为96.8%,青海牦牛与云南牦牛该基因片段的核苷酸序列同源性为99.4%。 展开更多

关键词 牦牛 乳球蛋白基因 5’调控区 同源性

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山羊β乳球蛋白基因的克隆及其在转基因小鼠乳汁中的高效表达 被引量：1

8

作者 高建军 颜景斌 +1 位作者 黄英 曾溢滔 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期499-503,共5页

通过长距离PCR从山羊基因组DNA分两段扩增山羊β乳球蛋白(β lactoglobulin,BLG)基因,扩增出的两个片段分别克隆到T载体上,利用BLG基因序列自身存在的NarI单酶切位点进行拼接,获得了全长为7.2kb的山羊BLG基因克隆,并构建了它的真核表达... 通过长距离PCR从山羊基因组DNA分两段扩增山羊β乳球蛋白(β lactoglobulin,BLG)基因,扩增出的两个片段分别克隆到T载体上,利用BLG基因序列自身存在的NarI单酶切位点进行拼接,获得了全长为7.2kb的山羊BLG基因克隆,并构建了它的真核表达载体,经酶切鉴定和序列分析证实了克隆的正确性。用线性化的BLG基因显微注射小鼠受精卵以建立转基因鼠,经PCR和Southern印迹分析证实获得了6只首建者(Founder)转基因小鼠(3♀,3♂),在泌乳期采集两只F0代转基因雌鼠乳汁并用ELISA测定山羊β乳球蛋白的含量,其表达水平分别为23.49mg/mL和2.19mg/mL。 展开更多

关键词 转基因小鼠 乳腺表达 乳汁蛋白 山羊β乳球蛋白基因

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同源臂长度对CRISPR/Cas9介导hLF基因打靶山羊β-乳球蛋白位点效率的影响 被引量：1

9

作者 李丹 周鸣鸣 +2 位作者 何正义 吴赵曼秋 宋绍征 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期182-190,共9页

【目的】探究同源臂长度对CRISPR/Cas9系统介导人乳铁蛋白基因(hLF)打靶山羊β-乳球蛋白基因(BLG)座位点效率的影响,为今后体细胞核移植制备BLG-/hLF+基因打靶山羊提供科学依据,也为CRISPR/Cas9基因编辑系统介导BLG基因或其他基因座位... 【目的】探究同源臂长度对CRISPR/Cas9系统介导人乳铁蛋白基因(hLF)打靶山羊β-乳球蛋白基因(BLG)座位点效率的影响,为今后体细胞核移植制备BLG-/hLF+基因打靶山羊提供科学依据,也为CRISPR/Cas9基因编辑系统介导BLG基因或其他基因座位点定向精准分子修饰的遗传育种提供借鉴。【方法】针对山羊BLG基因第一外显子区域设计构建sgBLG/Cas9载体,电转染山羊胎儿成纤维细胞,PCR验证BLG基因座位点致突变活性;以BLC14乳腺特异性表达载体为基础构建3种同源臂长度(6.0、3.5和1.2 kb)的hLF基因打靶载体,分别与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经500μg/mLG418筛选后,采用PCR检测基因打靶情况。【结果】sgBLG/Cas9载体在山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座附近切割DNA双链的致突变活性效率在30%~35%。构建获得3种同源臂长度的hLF基因打靶载体(BLC14-1、BLC14-2和BLC14-3),对应的同源臂长度分别为6.0、3.5和1.2 kb;将3种hLF基因打靶载体与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞,经5次电转染和G418筛选,分别获得83、77和86株药物抗性细胞,经PCR同源重组检测最终获得42、38和44株BLG-/hLF+基因打靶细胞株,即hLF基因在山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座的平均打靶效率分别为50.6%(42/83)、49.4%(38/77)和51.2%(44/86)。3种不同长度同源臂构建的hLF基因打靶载体在山羊BLG基因座位点的打靶效率在统计学上无显著差异(P>0.05),表明同源臂长度对CRISPR/Cas9介导hLF基因打靶山羊BLG基因座位点无显著影响。【结论】利用CRISPR/Cas9系统介导hLF基因打靶山羊胎儿成纤维细胞BLG基因座位点能成功获得多株hLF+/BLG-基因打靶细胞株(BLG基因座定点打靶hLF基因),但打靶载体同源臂长度对CRISPR/Cas9系统介导BLG位点定向整合hLF基因的打靶效率无明显影响。 展开更多

关键词 山羊 CRISPR/Cas9 基因打靶 同源臂长度 β-乳球蛋白基因(BLG) 人乳铁蛋白基因(hLF)

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奶牛β-Lg基因第1外显子PCR-SSCP多态性与泌乳性能的相关性

10

作者 马彦男 朱静 +3 位作者 雷赵民 刘哲 贺鹏迦 吴建平 《四川动物》 CSCD 北大核心 2013年第5期701-706,共6页

采用PCR-SSCP技术并结合测序对233头奶牛β乳球蛋白(β-Lg)基因5’端部分序列和外显子1全部序列进行了多态性研究,分析了该基因与奶牛泌乳性状的相关性。结果表明:β-Lg基因5’端和外显子1共存在2个等位基因3种基因型,BB型为优势基因型,... 采用PCR-SSCP技术并结合测序对233头奶牛β乳球蛋白(β-Lg)基因5’端部分序列和外显子1全部序列进行了多态性研究,分析了该基因与奶牛泌乳性状的相关性。结果表明:β-Lg基因5’端和外显子1共存在2个等位基因3种基因型,BB型为优势基因型,B为优势等位基因。该群体在这一位点上偏离Hardy-Weinberg平衡状态,多态信息含量(PIC)为0.3548。测序结果显示,与普通牛该基因序列(X14710)相比,B等位基因在2073 bp、2202 bp和2206 bp处发生了G→C、C→T和A→G的碱基突变,其中2202 bp处的C→T突变导致第11位氨基酸由苏氨酸变为异亮氨酸,而A等位基因在3个位点上与X14710相同。最小二乘法分析表明,BB型305 d乳蛋白量显著高于AA型和AB型(P<0.05);AB型305 d乳脂量显著高于AA型(P<0.05),BB型与AB型之间差异不显著(P>0.05);等位基因B为高乳蛋白量和乳脂量的优势基因,可作为奶牛选育的分子遗传标记。 展开更多

关键词 奶牛 β-乳球蛋白(β-Lg)基因 单核苷酸多态性 泌乳性能

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山羊BLG基因5′调控序列克隆及其调控GFP基因细胞的表达 被引量：3

11

作者 宋红卫 郑月茂 +2 位作者 张明烽 唐爽 张涌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第5期12-14,18,共4页

通过PCR扩增出2.2kb的山羊β-乳球蛋白基因5′端的调控序列,包括第一外显子和第一内含子。测序结果表明,该序列与GenBank中登录序列相比,同源性为99.5%。用其替代表达载体pEGFP-c1上原来的启动子CMV,指导报告基因绿色荧光蛋白(GFP)在山... 通过PCR扩增出2.2kb的山羊β-乳球蛋白基因5′端的调控序列,包括第一外显子和第一内含子。测序结果表明,该序列与GenBank中登录序列相比,同源性为99.5%。用其替代表达载体pEGFP-c1上原来的启动子CMV,指导报告基因绿色荧光蛋白(GFP)在山羊乳腺细胞中的瞬时表达,结果发现该调控序列可以有效指导报告基因的表达,从而初步验证了所克隆的山羊乳球蛋白(BLG)基因表达调控序列的有效性。表明克隆的调控序列可用于乳腺生物反应器的研究。 展开更多

关键词 山羊 Β-乳球蛋白基因 GFP基因

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利用寡核苷酸探针快速筛选重组克隆

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作者 卢一凡 邓继先 程萱 《生物技术通报》 CAS CSCD 1998年第2期35-37,共3页

提出了利用寡核苷酸探针快速筛选重组克隆的方法，在数小时内即可完成杂交和自显影的过程。以克隆羊β－乳球蛋白基因（ＢＬＧ）第一内含子为例进行了说明。

关键词 寡核苷酸探针 筛选重组克隆 乳球蛋白基因

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