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睾酮对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响 被引量:5
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作者 孙丽娜 王颖 +4 位作者 燕树勋 张彦周 魏子涵 秦鹏 孙素珂 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2014年第4期461-464,共4页
目的:观察睾酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌成纤维细胞(CF)增殖和胶原合成的影响。方法:分离、培养CF,分别用无血清DMEM培养液(对照组)、含10-6mol/L AngⅡ的无血清DMEM培养液(AngⅡ组)、含30 nmol/L睾酮的无血清DMEM培养液(睾... 目的:观察睾酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌成纤维细胞(CF)增殖和胶原合成的影响。方法:分离、培养CF,分别用无血清DMEM培养液(对照组)、含10-6mol/L AngⅡ的无血清DMEM培养液(AngⅡ组)、含30 nmol/L睾酮的无血清DMEM培养液(睾酮组)、含30 nmol/L睾酮和10-6mol/L AngⅡ的无血清DMEM培养液(睾酮+AngⅡ组)培养24 h,应用流式细胞技术检测细胞周期分布,VG染色法检测胶原含量,免疫细胞化学染色法检测磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达。结果:AngⅡ组S期细胞比例、胶原含量和p-ERK1/2表达水平较对照组和睾酮组明显增加,睾酮+AngⅡ组S期细胞比例、胶原含量和p-ERK1/2表达水平较AngⅡ组明显降低(S期细胞比例:FAngⅡ=30.403,F睾酮=5.812,F交互=18.073,P<0.05;胶原含量:FAngⅡ=10.365,F睾酮=4.533,F交互=42.049,P<0.05;p-ERK1/2表达水平:FAngⅡ=174.762,F睾酮=184.828,F交互=152.240,P<0.05)。结论:睾酮可能通过抑制ERK1/2的活化,抑制AngⅡ诱导的CF的增殖和胶原合成。 展开更多
关键词 睾酮 血管紧张素Ⅱ 心肌纤维细胞 增殖 胶原 ERK1 2
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大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞的分离培养及鉴定 被引量:4
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作者 周正炜 郭派派 +8 位作者 王曼曼 孙寒飞 王珍 邰宇 刘琪 张巧琳 吴华勋 汪庆童 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第5期814-819,共6页
探讨大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞体外分离及培养的方法。采用0.125%胰酶多次消化法收集新生SD大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞。高内涵细胞成像法检测细胞增殖能力,免疫荧光、Western blot和RT-PCR法检测波形蛋白表达水平,CD90标记成纤维细胞、... 探讨大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞体外分离及培养的方法。采用0.125%胰酶多次消化法收集新生SD大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞。高内涵细胞成像法检测细胞增殖能力,免疫荧光、Western blot和RT-PCR法检测波形蛋白表达水平,CD90标记成纤维细胞、鉴定细胞纯度。最新消化分离得到的细胞呈亮球形,轮廓清晰,单个散在或聚集成团分布,90 min后即有大量细胞贴壁,其中部分细胞已开始伸展。5~6 d可形成单层细胞,传代后的细胞呈长纺锤形或多边形。波形蛋白表达呈强阳性。传代3代的细胞培养体系中成纤维细胞约占87%。含5%FBS的DMEM/F12培养基培养24 h即可检测到细胞的大量增殖。胰酶消化法是获得大鼠乳鼠颌下腺成纤维细胞的有效方法。 展开更多
关键词 大鼠 颌下腺纤维细胞 原代培养 胰酶消化法 波形蛋白
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分别转染TBX18后乳鼠成纤维细胞对心肌细胞搏动频率的影响
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作者 权大君 曹政 +2 位作者 李奇 孔彬 王光记 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期5-9,共5页
目的用TBX18分别转染成纤维细胞(CFs)与心肌细胞(NRVMs),探究转染的成纤维细胞对整个共培养系统的影响。方法用TBX18分别转染乳鼠心脏CFs与NRVMs,并分成5组:NRVMs组,TBX18-NRVMs组,TBX18-NRVMs+CFs组,TBX18-NRVMs+GFP(绿色荧光蛋白)-CF... 目的用TBX18分别转染成纤维细胞(CFs)与心肌细胞(NRVMs),探究转染的成纤维细胞对整个共培养系统的影响。方法用TBX18分别转染乳鼠心脏CFs与NRVMs,并分成5组:NRVMs组,TBX18-NRVMs组,TBX18-NRVMs+CFs组,TBX18-NRVMs+GFP(绿色荧光蛋白)-CFs组与TBX18-NRVMs+TBX18-CFs组。培养7d后观察并比较各组细胞的搏动频率。结果共培养7d后发现TBX18可显著提高心肌细胞的自发搏动[(94.20±7.38)b/min vs.(62.10±11.67)b/min,P<0.01],且相比TBX18-NRVMs组,GFP-CFs或CFs与TBX18-NRVMs共培养并没有明显改变搏动频率,但CFs具有减缓心肌自发搏动的趋势,经TBX18转染后的CFs与TBX18-NRVMs共培养可显著提高心肌细胞的搏动频率[(118.50±7.25)b/min vs.(82.80±15.82)b/min,P<0.01]。结论在分别转染TBX18的成纤维细胞与心肌细胞共培养系统中,成纤维细胞可显著提高心肌细胞的搏动频率。 展开更多
关键词 TBX18 纤维细胞 心肌细胞 生物起搏
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转化生长因子-β1受体依赖的心肌纤维化伴随大电导钙激活钾通道的表达和功能下调 被引量:5
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作者 李磊 董亚辉 +4 位作者 杨探 李秋芳 聂永梅 李光 于风旭 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2021年第6期612-618,共7页
目的:探讨大电导钙激活钾通道(BKCa)是否参与转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心肌纤维化过程,以及在这一过程中的作用机制。方法:分离培养乳大鼠心室成纤维细胞,并根据TGF-β1的不同浓度(5 ng/ml组、10 ng/ml组),以及在10 ng/ml TGF-β... 目的:探讨大电导钙激活钾通道(BKCa)是否参与转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的心肌纤维化过程,以及在这一过程中的作用机制。方法:分离培养乳大鼠心室成纤维细胞,并根据TGF-β1的不同浓度(5 ng/ml组、10 ng/ml组),以及在10 ng/ml TGF-β1基础上加入不同浓度TGF-β1受体特异阻断剂SB431542(0.1μmol/L组、1μmol/L组、10μmol/L组)进行分组,处理后提取蛋白及RNA,应用蛋白免疫印迹(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组TGF-β1受体蛋白,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、BKCa蛋白和信使RNA(mRNA)的表达情况。单通道及全细胞膜片钳技术记录TGF-β1作用24 h前后的BKCa电流特点及其变化情况。结果:TGF-β15 ng/ml组和10 ng/ml组均上调TGF-β1受体蛋白,α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和mRNA的表达,10 ng/ml组TGF-β1下调BKCa蛋白和mRNA的表达。与TGF-β110 ng/ml组相比,在10 ng/ml TGF-β1基础上加入SB4315421μmol/L组、10μmol/L组下调TGF-β1受体蛋白,α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和mRNA的表达,加入SB43154210μmol/L组上调BKCa蛋白和mRNA的表达,差异均具有统计学意义。此外,单通道及全细胞膜片钳技术记录结果表明TGF-β1预处理24 h后可明显抑制成纤维细胞上BKCa电流。结论:BKCa可能参与了TGF-β1诱导乳大鼠心室成纤维细胞纤维化通路,其机制可能是TGF-β1抑制了成纤维细胞上BKCa的电流。这提示BKCa可能是防治心肌纤维化的潜在靶点。 展开更多
关键词 心肌纤维 转化生长因子Β1 转化生长因子β1受体阻断剂SB431542 大电导钙激活钾通道 乳大鼠心室成纤维细胞
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