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猫重组变应原Fel d 1与乙肝病毒核心抗原融合基因的原核表达 被引量:3
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作者 裴业春 安晓荣 +5 位作者 侯健 陈永福 闫凤祥 关宏 韦双双 王大勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第11期2826-2833,共8页
为将猫重组变应原Fel d 1蛋白展示在乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒的表面,本试验将编码Fel d 1蛋白的两个基因chain1和chain2拼接在一起形成重组Fel d 1(rFel d 1),然后插入到HBcAg的c/e1loop区,取代HBcAg c/e1loop区的D78与E83之... 为将猫重组变应原Fel d 1蛋白展示在乙肝病毒核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒的表面,本试验将编码Fel d 1蛋白的两个基因chain1和chain2拼接在一起形成重组Fel d 1(rFel d 1),然后插入到HBcAg的c/e1loop区,取代HBcAg c/e1loop区的D78与E83之间的氨基酸。经密码子优化后进行全基因合成,成功构建了pET28aHBcAg-rFel d 1原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核诱导表达与Ni-NTA亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE电泳、Western blotting和透射电镜检测。结果显示,本试验成功表达了HBcAg-r Fel d 1融合蛋白,并利用镍柱纯化得到了较纯的HBcAg-rFel d 1融合蛋白,进一步利用负染法透射电子显微镜检测到HBcAgrFel d 1融合蛋白呈现病毒样颗粒结构。HBcAg-rFel d 1融合蛋白能自发形成病毒样颗粒结构,为猫过敏症的预防与治疗性疫苗的开发奠定基础。 展开更多
关键词 猫变应原 乙肝病毒核心抗原 FEL d 1 病毒样颗粒
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禽类血管活性肠肽与乙肝病毒核心抗原融合基因的构建 被引量:2
2
作者 施振旦 黄运茂 +1 位作者 曹永长 毕英佐 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期60-63,共4页
:在制备以禽类血管活性肠肽 (VIP)为基础的基因工程疫苗工作中 ,选择乙肝病毒核心抗原 (HBcAg)作为载体来提高鹅VIP的免疫原性 .首先将克隆于鹅VIPcDNA和HBc基因第 1至 435bp的序列片段先后插入到质粒pRSETA的BamHI\EcoRI和NheI\BamHI... :在制备以禽类血管活性肠肽 (VIP)为基础的基因工程疫苗工作中 ,选择乙肝病毒核心抗原 (HBcAg)作为载体来提高鹅VIP的免疫原性 .首先将克隆于鹅VIPcDNA和HBc基因第 1至 435bp的序列片段先后插入到质粒pRSETA的BamHI\EcoRI和NheI\BamHI克隆位点之间 ,构建成VIP序列位于HBc序列之后的VIP融合基因的重组质粒pHBc -VIP .其次将HBc第 1至 2 2 5bp序列的扩增片段和HBc第 2 44bp之后包括VIP的序列经扩增、EcoRI酶切、连接、再扩增的片段先后插入到质粒pBSKS + / -的BamHI\PstI和PstI\HindIII克隆位点 ,构建成VIP插入到HBc基因中间 (HBcAg的第 75和 82位氨基酸之间 )融合基因的重组质粒pVIP HBc . 展开更多
关键词 血管活性肠肽 乙肝病毒核心抗原 融合基因 禽类
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PDGF受体结合域与乙肝病毒核心抗原的融合表达 被引量:2
3
作者 武湘兵 李进 王彩平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第5期525-530,共6页
化学合成血小板源性生长因子受体结合域13肽基因,并与乙肝病毒核心抗原基因5′端融合,序列分析表明化学合成的13肽基因及融合后基因的阅读框架正确.将融合基因亚克隆于tac启动子控制的pET3a表达质粒中并于大肠杆菌中表... 化学合成血小板源性生长因子受体结合域13肽基因,并与乙肝病毒核心抗原基因5′端融合,序列分析表明化学合成的13肽基因及融合后基因的阅读框架正确.将融合基因亚克隆于tac启动子控制的pET3a表达质粒中并于大肠杆菌中表达.表达产物经ELISA、WestrenBlot鉴定表明,融合蛋白已被表达,其单位分子量与推算值一致.电镜观察证明所表达的融合蛋白能形成颗粒. 展开更多
关键词 乙肝病毒 核心抗原 融合蛋白 PDGF
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重组乙肝病毒核心基因DNA与表面抗原-抗体共免疫应答研究 被引量:1
4
作者 张悦庆 王文逸 +3 位作者 应哲康 陈敏捷 瞿涤 闻玉梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期13-16,共4页
目的:了解小鼠对乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因免疫及与乙肝表面抗原-抗体复合物(HBsAg-抗HBs)联合免疫的应答。方法:用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100μg及含1μgHBsAg的重组乙肝表面抗原-鼠抗体组... 目的:了解小鼠对乙肝病毒核心抗原(HBcAg)基因免疫及与乙肝表面抗原-抗体复合物(HBsAg-抗HBs)联合免疫的应答。方法:用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100μg及含1μgHBsAg的重组乙肝表面抗原-鼠抗体组建的复合物(简称sIC)免疫Balb/c小鼠。用ELISA法检测血清抗体IgG和IgG1、IgG2a亚类的效价。用半定量PCR法分别检测鼠脾细胞IFN-γ及IL-4的mRNA。结果:pHBc144及sIC联合免疫鼠的抗HBs IgG、IgG1、IgG2a效价均显著高于sIC组(P<0.05)。同时小鼠还可产生抗HBc及由HBsAg、HBcAg特异诱生的IFN-γ及IL-4。但与sIC共免疫,小鼠对HBcAg诱生的IFN-γ mRNA有所降低。结论:可用HBcAg基因与sIC共免疫,以获得针对乙肝病毒2种结构蛋白的免疫应答。 展开更多
关键词 乙肝病毒核心抗原 基因免疫 免疫原性复合物 乙型肝炎 DNA 免疫反应
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乙肝病毒核心相关抗原检测试剂盒的研发及临床检测 被引量:4
5
作者 马家秀 卢卉双 +4 位作者 张津 李亚兰 杜薇 安娅欣 蔡雪飞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期798-804,共7页
目的:研发一种检测乙肝病毒核心相关抗原(hepatitis B core-related antigen,HBcrAg)的定量检测试剂盒并评价其性能。方法:通过研究原材料抗体、优化制备工艺和调整反应体系建立HBcrAg化学发光免疫检测方法,组装成试剂盒后利用重组HBcrA... 目的:研发一种检测乙肝病毒核心相关抗原(hepatitis B core-related antigen,HBcrAg)的定量检测试剂盒并评价其性能。方法:通过研究原材料抗体、优化制备工艺和调整反应体系建立HBcrAg化学发光免疫检测方法,组装成试剂盒后利用重组HBcrAg和临床血清进行检测性能评估,数据处理使用IBM SPSS Statistics 20软件。结果:该试剂盒标准曲线为y=143.37x+344.91,R^(2)=0.9998;检测灵敏度为1.43 pg/mL;健康人参考区间≤25.595 pg/mL;检测208例慢性乙型肝炎患者血清,所有(18/18)乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA10^(8)~10^(4)IU/mL血清HBcrAg检出值都在这个临界值以上;92.31%(24/26)HBV DNA10^(3)~10^(2)IU/mL血清HBcrAg检出阳性;44.51%(73/164)HBV DNA低于检出限血清HBcrAg检出阳性。结论:本试剂盒能较好地检测慢性乙型肝炎患者血清中的HBcrAg水平,在辅助慢性乙型肝炎患者治疗效果监测和正确判断治疗终点方面具有重要应用价值。 展开更多
关键词 乙肝病毒核心相关抗原 化学发光免疫分析法 试剂盒
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乙肝病毒核心抗原DNA疫苗诱导小鼠抗原特异性CD8^+T细胞动态变化和动态分布
6
作者 张炜 董生福 +3 位作者 孙淑惠 汪垣 李光地 瞿涤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期379-383,共5页
目的 :研究乙肝病毒核心抗原 (HBcAg)DNA疫苗诱导的细胞免疫应答。方法 :用表达乙肝病毒核心抗原N端1 4 4个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc1 4 4 ) 1 0 0 μg免疫C5 7BL 6小鼠 ,用细胞内细胞因子染色技术检测小鼠体内抗原特异性CD8+ T细... 目的 :研究乙肝病毒核心抗原 (HBcAg)DNA疫苗诱导的细胞免疫应答。方法 :用表达乙肝病毒核心抗原N端1 4 4个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc1 4 4 ) 1 0 0 μg免疫C5 7BL 6小鼠 ,用细胞内细胞因子染色技术检测小鼠体内抗原特异性CD8+ T细胞的动态变化。结果 :pHBc1 4 4免疫后抗原特异性CD8+ T细胞逐渐增多 ,在初次免疫的第 1 4天出现第一个免疫应答高峰 ,此后抗原特异性CD8+ T细胞数量逐渐下降进入免疫记忆期并在 1年内维持在稳定水平。加强免疫后在第 1 0天抗原特异性CD8+ T细胞数量达到高峰 ,约是初次免疫应答高峰的 2倍 ,此后抗原特异性CD8+ T细胞数量逐渐下降 ,但下降的速度比初次免疫应答减缓。结论 :pHBc1 4 展开更多
关键词 乙肝病毒核心抗原 DNA疫苗
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传染性法氏囊病病毒抗原表位与乙型肝炎病毒核心抗原嵌合基因的构建及其表达产物分析 被引量:3
7
作者 刘小娟 王永山 +3 位作者 欧阳伟 张海彬 王忠灿 唐雨德 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期879-883,共5页
为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位基因5epis的免疫效力,本研究应用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的231位~232位核苷酸(77位~78位氨基酸残基)之间插入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,构建基于HBcAg修饰基因(mHBc)... 为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位基因5epis的免疫效力,本研究应用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的231位~232位核苷酸(77位~78位氨基酸残基)之间插入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,构建基于HBcAg修饰基因(mHBc)的抗原表位嵌合体基因分子载体pET-mHBc。将编码IBDV多表位基因5epis定向插入到pET-mHBc的mHBc基因中,获得嵌合体基因mHBc-5epis表达重组质粒pET-mHBc-5epis,并在大肠杆菌中表达。经SDS-PAGE分析,重组嵌合体蛋白的分子量约29 ku,表达量约占菌体总蛋白的47.6%;Western blot结果表明,重组嵌合体蛋白可与IBDV抗体反应形成1条特异性蛋白带;重组嵌合体蛋白呈病毒样颗粒(VLP),直径约100 nm~120 nm;用IBDV抗体夹心ELISA检测,抗原效价达到1∶200。本实验成功构建了5epis与HBcAg嵌合体基因,并在大肠杆菌中高效表达,具有IBDV抗原反应性的重组病毒样颗粒嵌合体蛋白,为研究其表位型基因工程疫苗提供了新途径。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 抗原表位 乙肝病毒核心抗原(hbcag) 嵌合体
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携带BCoV抗原表位的乙型肝炎病毒核心抗原病毒样颗粒的制备及免疫效果评价 被引量:3
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作者 郭晓旭 张帅 +5 位作者 刘莹 赵云环 王传文 李妍 范京惠 左玉柱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期178-184,共7页
为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351~aa403(159 bp)和aa771~aa784(42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗... 为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP),本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351~aa403(159 bp)和aa771~aa784(42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)主要免疫显性区域(MIR),合成该重组基因后克隆至pET-32a(+),经酶切鉴定显示正确构建了重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2。将该重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3)和伴侣感受态细胞BL21(DE3)(含pG-KJE8分子伴侣质粒),经诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化两种不同表达形式的重组蛋白,SDS-PAGE检测重组蛋白的表达及纯化效果,结果显示两种表达系统均正确表达了重组蛋白,分别命名为VLP-A、VLP-B,前者为包涵体表达,后者为可溶性表达。纯化后浓度分别为0.9 mg/mL、1.4 mg/mL。利用透射电镜观察纯化后的两种重组蛋白是否形成VLP,结果显示二者均形成VLP,且可溶性表达的重组蛋白形成的VLP产量略高。将两种VLP乳化后以50μg/只分别免疫小鼠,于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42 d采血制备血清,采用ELISA方法检测小鼠血清中的BCoV IgG特异性抗体水平及细胞因子IFN-γ、IL-4,结果显示,将两种VLP乳化后免疫小鼠产生的BCoV IgG抗体(P<0.01)和两种细胞因子水平(P<0.05)均显著高于对照组,且可溶性表达的VLP诱导产生的抗体水平和细胞因子水平更高。本研究首次制备了含BCoV S蛋白抗原表位的VLP,两种不同表达形式的重组蛋白均形成VLP,且在小鼠体内均能够产生免疫应答,为BCoV亚单位疫苗及相关生物制品的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 乙肝病毒核心抗原 牛冠状病毒 病毒样颗粒 分子伴侣质粒
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含牛轮状病毒VP6的嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备及其免疫原性分析
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作者 邢亚茹 张增贤 +4 位作者 顾文源 郭禹 彭志豪 左玉柱 范京惠 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期79-84,共6页
本研究将编码牛轮状病毒VP6蛋白的部分基因插入到HBcAg的免疫显性区的基因中,构建了pET32a-HBcAg-VP6原核表达载体,并将其转化至大肠杆菌BL21中进行表达。重组蛋白经纯化和Western blot鉴定后,通过透射电镜观察重组蛋白HBc-VP6是否形成... 本研究将编码牛轮状病毒VP6蛋白的部分基因插入到HBcAg的免疫显性区的基因中,构建了pET32a-HBcAg-VP6原核表达载体,并将其转化至大肠杆菌BL21中进行表达。重组蛋白经纯化和Western blot鉴定后,通过透射电镜观察重组蛋白HBc-VP6是否形成病毒样颗粒。以重组蛋白HBc-VP6皮下注射BALB/c小鼠,对免疫原性进行初步评价。结果显示:重组蛋白HBc-VP6在BL21中主要以沉淀的形式表达,经纯化、复性后的重组蛋白HBc-VP6能够自我折叠装配成病毒样颗粒结构,能够与BRV阳性血清发生特异性反应。重组蛋白HBc-VP6能够刺激小鼠产生抗BRV特异性抗体,同时可以产生相关的Th1型和Th2型细胞因子,试验结果证实,本研究成功制备了含VP6和HBcAg的重组蛋白HBc-VP6,并在小鼠模型中初步评价了其免疫原性,为今后牛轮状病毒疫苗的研制提供了新的思路。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 乙肝病毒核心抗原 病毒样颗粒 VP6基因
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肝炎肝硬化患者肝组织中HBcAg、HBVDNA表达的初步探讨 被引量:3
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作者 刘伟 赵伟 +2 位作者 罗婵 刘兰侠 王兰 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2002年第3期173-174,共2页
观察乙型肝炎引起的肝炎肝硬化患者肝组织中HBcAg和HBVDNA的表达。随机采取 10 0例乙型肝炎肝硬化患者 ,行肝活检术取肝组织 ,采用免疫组织化学和原位分子杂交法 ,检测其中HBcAg和HBVDNA。肝组织中HBcAg、HBVDNA的检出率分别为 6 4%和 6... 观察乙型肝炎引起的肝炎肝硬化患者肝组织中HBcAg和HBVDNA的表达。随机采取 10 0例乙型肝炎肝硬化患者 ,行肝活检术取肝组织 ,采用免疫组织化学和原位分子杂交法 ,检测其中HBcAg和HBVDNA。肝组织中HBcAg、HBVDNA的检出率分别为 6 4%和 6 2 %(P >0 0 5 )。血清HBV呈高复制时 ,肝组织中HBcAg和HB VDNA的阳性表达 ,有较好的一致性 ;HBcAg颗粒在肝呈弥漫的浆、膜型分布者 ,其肝组织中HBVDNA呈高表达 ;其肝组织病变是活动的 (P <0 0 5 )。乙型肝炎肝硬化患者肝组织中有较高的HBV复制率 ;肝组织中HBcAg和HBVDNA的分布类型与其中的HBV的复制状况和组织病变的活动性有关。 展开更多
关键词 hbcag HBVDNA 表达 乙型肝炎病毒核心抗原 肝炎硬肝化 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 乙型肝炎 HBV 复制
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重组HBcAg激活p38MAPK信号通路增加髓源性树突状细胞IL-15的分泌 被引量:4
11
作者 张鑫 周振华 +3 位作者 李曼 高亚婷 孙学华 高月求 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期289-294,共6页
目的探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制。方法采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF... 目的探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制。方法采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导分化为mDC,10μg/m L rhHBcAg刺激mDC 1~6 d;分别用25μmol/L磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002、1μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂SB203580、100 nmol/L c-Jun N末端激酶(JNK)信号通路抑制剂SP600125和150 nmol/L胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制剂U0126预处理1 h,再给予10μg/m L rhHBcAg刺激48 h。之后收集细胞和细胞培养上清,实时定量PCR检测IL-15 mRNA水平,ELISA检测IL-15蛋白水平,Western blot法检测PI3K/Akt和MAPK信号通路分子磷酸化水平。结果与rhHBcAg未刺激组比较,rhHBcAg刺激组IL-15 mRNA和蛋白水平显著升高;与rhHBcAg刺激组比较,p38抑制剂预处理组IL-15水平明显降低,但PI3K/Akt、JNK和ERK抑制剂预处理组IL-15水平未见显著性改变。结论 rhHBcAg通过p38MAPK信号通路上调外周血mDC IL-15的分泌。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎病毒感染 树突状细胞 乙型肝炎病毒核心抗原(hbcag) 白细胞介素15(IL-15) p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)
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器官移植术后乙型肝炎病毒感染诊疗规范(2019版) 被引量:5
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作者 李钢 药晨 +2 位作者 石炳毅 孙丽莹 中华医学会器官移植学分会 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期243-248,共6页
为了进一步规范实体器官移植(SOT)术后乙型肝炎病毒(HBV)感染的诊断和治疗,中华医学会器官移植学分会组织器官移植专家和感染病学专家,从流行病学、SOT术后HBV再感染或新发感染的危险因素、SOT术后HBV再感染或新发感染的诊断、SOT术后HB... 为了进一步规范实体器官移植(SOT)术后乙型肝炎病毒(HBV)感染的诊断和治疗,中华医学会器官移植学分会组织器官移植专家和感染病学专家,从流行病学、SOT术后HBV再感染或新发感染的危险因素、SOT术后HBV再感染或新发感染的诊断、SOT术后HBV再感染或新发感染的预防和治疗等方面,制订本规范,以帮助器官移植工作者规范和优化HBV感染的诊断和治疗。 展开更多
关键词 器官移植 乙型肝炎病毒 乙型肝炎表面抗原(HBsAg) 乙型肝炎核心抗原(hbcag) 乙型肝炎核心抗体(抗-HBc) 乙型肝炎表面抗体(抗-HBs) 乙型肝炎e抗原(HBeAg) 乙型肝炎e抗体(抗-HBe)
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毕赤酵母分泌表达嵌合HEV表位的HBcAg颗粒
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作者 章建楠 李少伟 +7 位作者 杨坤宇 何芳萍 唐明 顾颖 王颖彬 杜海莲 张军 夏宁邵 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期107-112,共6页
在毕赤酵母分泌表达嵌合有HEV受体相关表位12A10的HBcAg蛋白,经甲醇诱导后的培养液上清通过切向流浓缩、更换缓冲液后,进行疏水层析纯化.CsCl等密度梯度离心测得分泌的重组颗粒的密度为1.32 g/mL.透射电镜观察显示,纯化的重组颗粒为均... 在毕赤酵母分泌表达嵌合有HEV受体相关表位12A10的HBcAg蛋白,经甲醇诱导后的培养液上清通过切向流浓缩、更换缓冲液后,进行疏水层析纯化.CsCl等密度梯度离心测得分泌的重组颗粒的密度为1.32 g/mL.透射电镜观察显示,纯化的重组颗粒为均一的直径30 nm左右的空心颗粒.小鼠免疫实验表明,纯化颗粒免疫8周后鼠血清中的特异性12A10抗体滴度可达到1.6×105,并且重组颗粒较好地呈递了HEV受体相关的非免疫优势表位.本文的结果为毕赤酵母胞外分泌表达其它大尺度的重组蛋白颗粒提供了参考,为研究携带表位多肽的疫苗载体提供了范例. 展开更多
关键词 乙肝病毒核心抗原 融合蛋白 毕赤酵母 分泌表达
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人乳头瘤病毒L2蛋白的病毒样颗粒疫苗研究 被引量:2
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作者 蒋蓉 李军强 +3 位作者 杨鸣鸣 朱涛 宇学锋 邵忠琦(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期366-371,共6页
目的:构建乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与人乳头瘤病毒(HPV)L2抗原的融合蛋白,在大肠杆菌中重组表达形成病毒样颗粒结构;通过小鼠模型检测HBc-L2融合蛋白的免疫原性,并研究免疫后获得的小鼠血清对HPV假病毒的中和效力。方法:通过DNA合成构... 目的:构建乙肝病毒核心抗原(HBcAg)与人乳头瘤病毒(HPV)L2抗原的融合蛋白,在大肠杆菌中重组表达形成病毒样颗粒结构;通过小鼠模型检测HBc-L2融合蛋白的免疫原性,并研究免疫后获得的小鼠血清对HPV假病毒的中和效力。方法:通过DNA合成构建16型人乳头瘤病毒L2基因片段与HBcAg基因的融合基因,将其克隆至表达载体p ET9a并在大肠杆菌中进行HBc-L2融合蛋白表达;将经纯化、鉴定后的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测小鼠血清中针对L2抗原的抗体效价,并分别研究小鼠血清对16型和18型HPV假病毒的中和效力。结果:HBc-L2融合基因经大肠杆菌系统表达形成可溶性蛋白,经硫酸铵沉淀和CL-4B凝胶分离纯化后获得纯度>80%的HBc-L2蛋白;分子筛高效液相色谱-多角度激光光散射(SEC-MALS)联用技术和透射电子显微镜的分析结果表明,HBc-L2融合蛋白在表达过程中自动组装形成稳定的病毒样颗粒;将纯化后的HBc-L2蛋白免疫BALB/c小鼠可获得针对L2抗原的高滴度抗体,且小鼠血清具有中和16和18型两种假病毒的中和抗体活性。结论:HBc-L2病毒样颗粒可以有效地增强L2抗原的免疫原性,并可刺激机体产生针对多型HPV的免疫保护力,是一个具有潜力的新型广谱HPV疫苗。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 L2抗原 乙肝病毒核心抗原 病毒样颗粒 免疫原性 中和抗体
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