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有机磷水解酶异源表达纯化及抗乙基对氧磷中毒能力初步评价
1
作者
马铭
翟亚楠
+3 位作者
王顺业
张中华
李前
高静
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
北大核心
2024年第9期672-680,共9页
目的异源表达纯化有机磷水解酶(OPH),初步评价其动物体内抗乙基对氧磷中毒能力。方法构建OPH的大肠杆菌表达菌株,采用镍柱亲和色谱及凝胶过滤色谱进行纯化,对纯化产物进行蛋白质谱鉴定;以乙基对氧磷为底物测定酶活力及其动力学常数K_(m)...
目的异源表达纯化有机磷水解酶(OPH),初步评价其动物体内抗乙基对氧磷中毒能力。方法构建OPH的大肠杆菌表达菌株,采用镍柱亲和色谱及凝胶过滤色谱进行纯化,对纯化产物进行蛋白质谱鉴定;以乙基对氧磷为底物测定酶活力及其动力学常数K_(m),V_(max),k_(cat)和k_(cat)/K_(m);12只SD大鼠随机分为OPH组和溶剂对照组,OPH组按1 mg·kg^(-1)剂量iv给予OPH溶液,对照组给予等体积生理盐水,给药后2组立刻sc给予2倍半数致死量(LD_(50))乙基对氧磷(0.86 mg·kg^(-1))染毒,观察大鼠状态,对中毒症状进行评分。对存活大鼠每隔24 h重复sc给予2倍LD_(50)乙基对氧磷,根据大鼠存活情况与中毒症状分别绘制生存曲线与症状评分图,评价OPH的抗有机磷中毒能力。结果成功构建了OPH的大肠杆菌表达菌株,经过两步纯化后由十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳表征得单一条带,OPH纯度较高,经蛋白质谱测定制备蛋白与目标蛋白序列一致;以乙基对氧磷为底物时,OPH的Km=7.5×10^(-5)mol·L^(-1),V_(max)=2.2×10^(-7)mol·L^(-1)·s^(-1),k_(cat)=158.4 s^(-1),k_(cat)/K_(m)=2.1×10^(6) L·mol^(-1)·s^(-1);对照组大鼠sc给予2倍LD_(50)乙基对氧磷后,出现严重中毒症状,15 min内全部死亡,实验组大鼠在首次染毒后均未出现中毒症状,连续染毒后中毒症状逐渐加重直至第4天全部死亡。结论成功制备高纯度OPH,且OPH在大鼠体内能有效对抗乙基对氧磷中毒。
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关键词
有机
磷
化合物
生物清除剂
有机
磷
水解酶
乙基对氧磷
酶动力学参数
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职称材料
基于SERS与PCA-SLR实现乙基对氧磷定量检测
被引量：
1
2
作者
翁士状
陈晟
+5 位作者
曾新华
李盼
郑守国
尤聚军
李淼
朱泽德
《光谱学与光谱分析》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期2438-2442,共5页
利用表面增强拉曼光谱(SERS),结合主成分分析(PCA)与分段线性回归(SLR)算法实现乙基对氧磷的定量检测。首先采集820～1 630cm-1乙基对氧磷溶液SERS,并对820～1 630cm-1(全范围)与845～875cm-1(特征范围)光谱分别进行标准正态变换(SNV)...
利用表面增强拉曼光谱(SERS),结合主成分分析(PCA)与分段线性回归(SLR)算法实现乙基对氧磷的定量检测。首先采集820～1 630cm-1乙基对氧磷溶液SERS,并对820～1 630cm-1(全范围)与845～875cm-1(特征范围)光谱分别进行标准正态变换(SNV)、多元散射校正(MSC)、一阶导数绝对值、二阶导数等预处理;然后经PCA降维后利用SLR建立乙基对氧磷溶液浓度预测模型。通过对比不同模型的预测准确度,发现特征范围光谱采用MSC预处理后所建立的模型为最优,总体预测均方误差值(RMSEP)为0.33,满足乙基对氧磷定量检测的需要。
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关键词
乙基对氧磷
表面增强拉曼光谱
主成分分析
分段线性回归
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职称材料
题名
有机磷水解酶异源表达纯化及抗乙基对氧磷中毒能力初步评价
1
作者
马铭
翟亚楠
王顺业
张中华
李前
高静
机构
军事医学研究院
中国人民解放军联勤保障部队第
出处
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
北大核心
2024年第9期672-680,共9页
文摘
目的异源表达纯化有机磷水解酶(OPH),初步评价其动物体内抗乙基对氧磷中毒能力。方法构建OPH的大肠杆菌表达菌株,采用镍柱亲和色谱及凝胶过滤色谱进行纯化,对纯化产物进行蛋白质谱鉴定;以乙基对氧磷为底物测定酶活力及其动力学常数K_(m),V_(max),k_(cat)和k_(cat)/K_(m);12只SD大鼠随机分为OPH组和溶剂对照组,OPH组按1 mg·kg^(-1)剂量iv给予OPH溶液,对照组给予等体积生理盐水,给药后2组立刻sc给予2倍半数致死量(LD_(50))乙基对氧磷(0.86 mg·kg^(-1))染毒,观察大鼠状态,对中毒症状进行评分。对存活大鼠每隔24 h重复sc给予2倍LD_(50)乙基对氧磷,根据大鼠存活情况与中毒症状分别绘制生存曲线与症状评分图,评价OPH的抗有机磷中毒能力。结果成功构建了OPH的大肠杆菌表达菌株,经过两步纯化后由十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳表征得单一条带,OPH纯度较高,经蛋白质谱测定制备蛋白与目标蛋白序列一致;以乙基对氧磷为底物时,OPH的Km=7.5×10^(-5)mol·L^(-1),V_(max)=2.2×10^(-7)mol·L^(-1)·s^(-1),k_(cat)=158.4 s^(-1),k_(cat)/K_(m)=2.1×10^(6) L·mol^(-1)·s^(-1);对照组大鼠sc给予2倍LD_(50)乙基对氧磷后,出现严重中毒症状,15 min内全部死亡,实验组大鼠在首次染毒后均未出现中毒症状,连续染毒后中毒症状逐渐加重直至第4天全部死亡。结论成功制备高纯度OPH,且OPH在大鼠体内能有效对抗乙基对氧磷中毒。
关键词
有机
磷
化合物
生物清除剂
有机
磷
水解酶
乙基对氧磷
酶动力学参数
Keywords
organophosphorus compounds
bioscavenger
organophosphorus hydrolase
ethyl paraoxon
enzyme kinetic parameter
分类号
R99 [医药卫生—毒理学]
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职称材料
题名
基于SERS与PCA-SLR实现乙基对氧磷定量检测
被引量：
1
2
作者
翁士状
陈晟
曾新华
李盼
郑守国
尤聚军
李淼
朱泽德
机构
中国科学技术大学
中国科学院合肥智能机械研究所
出处
《光谱学与光谱分析》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期2438-2442,共5页
基金
国家高技术研究发展计划("863计划")项目(SS2013AA100302)资助
文摘
利用表面增强拉曼光谱(SERS),结合主成分分析(PCA)与分段线性回归(SLR)算法实现乙基对氧磷的定量检测。首先采集820～1 630cm-1乙基对氧磷溶液SERS,并对820～1 630cm-1(全范围)与845～875cm-1(特征范围)光谱分别进行标准正态变换(SNV)、多元散射校正(MSC)、一阶导数绝对值、二阶导数等预处理;然后经PCA降维后利用SLR建立乙基对氧磷溶液浓度预测模型。通过对比不同模型的预测准确度,发现特征范围光谱采用MSC预处理后所建立的模型为最优,总体预测均方误差值(RMSEP)为0.33,满足乙基对氧磷定量检测的需要。
关键词
乙基对氧磷
表面增强拉曼光谱
主成分分析
分段线性回归
Keywords
Ethyl paraoxon
SERS
PCA
SLR
分类号
O657.3 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
有机磷水解酶异源表达纯化及抗乙基对氧磷中毒能力初步评价
马铭
翟亚楠
王顺业
张中华
李前
高静
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
北大核心
2024
0
在线阅读
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职称材料
2
基于SERS与PCA-SLR实现乙基对氧磷定量检测
翁士状
陈晟
曾新华
李盼
郑守国
尤聚军
李淼
朱泽德
《光谱学与光谱分析》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
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