乙型肝炎病毒X蛋白通过DNMT3A诱导肝癌细胞RUNX3基因高甲基化 被引量：5

1

作者 林万松 林洁 +3 位作者 林巧燕 周智锋 李洁羽 叶韵斌 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期717-721,727,共6页

目的研究肝癌细胞中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对抑癌基因Runt相关转录因子3(RUNX3)表达的影响及相关作用机制,探讨乙肝病毒促肝癌发生的表观遗传调控。方法HBx重组表达载体转染5-aza-CdR处理或未处理的Huh7、HepG2肝癌细胞,Western Blot及... 目的研究肝癌细胞中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对抑癌基因Runt相关转录因子3(RUNX3)表达的影响及相关作用机制,探讨乙肝病毒促肝癌发生的表观遗传调控。方法HBx重组表达载体转染5-aza-CdR处理或未处理的Huh7、HepG2肝癌细胞,Western Blot及RT-qPCR检测RUNX3的表达,分析RUNX3基因启动子CpG岛甲基化水平。合成DNA甲基转移酶3A的小干扰RNA(siRNA_3A)单独转染或与HBx共转染,检测RUNX3的表达。PCR检测21例手术切除的肝细胞癌新鲜组织标本HBx表达情况,比较HBx阴性与HBx阳性组织样本间RUNX3的表达差异以及启动子甲基化程度。结果过表达HBx可导致肝癌细胞内RUNX3表达下调,且甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR可完全阻断HBx对RUNX3的抑制作用。HBx诱导RUNX3基因启动子CpG岛发生高甲基化,但不影响DNA甲基转移酶的表达。siRNA_3A转染肝癌细胞后,RUNX3 mRNA与蛋白表达均显著上调;其与HBx共转染后,逆转了单独HBx对RUNX3的抑制作用。HBx阳性的肝癌组织中RUNX3mRNA表达水平较HBx阴性组低,且RUNX3启动子甲基化程度也相对较高。结论 HBx通过促进RUNX3启动子区域发生高甲基化而抑制其表达,且这一过程是由DNMT3A所介导的。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 肝细胞癌 RUNT相关转录因子3 DNA甲基转移酶3A 甲基化

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乙型肝炎病毒X蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡及p53、PTEN表达的影响 被引量：3

2

作者 王霞 杨林 +4 位作者 佘吉佳 范红梅 张富程 陈幼明 谢奇峰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1775-1778,共4页

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡及p53、PTEN表达的影响。方法用阿霉素(2.5μg/ml)分别处理HepG2及稳定表达GFP、GFP-HBx融合蛋白的细胞系HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx,处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变... 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡及p53、PTEN表达的影响。方法用阿霉素(2.5μg/ml)分别处理HepG2及稳定表达GFP、GFP-HBx融合蛋白的细胞系HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx,处理后不同时间在显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR检测p53、PTENmRNA水平;Westernblotting检测p53、PTEN蛋白水平。结果流式细胞术检测显示阿霉素处理后36h,HepG2/GFP-HBx细胞凋亡率为3.94%,明显低于HepG2(59.03%)、HepG2/GFP细胞(61.38%)(P<0.001),而与未处理对照组细胞(2.12%、2.78%、2.55%)无显著差别(P>0.05)。RT-PCR分析显示HepG2/GFP-HBx细胞PTENmRNA水平低于HepG2及HepG2/GFP细胞,而p53mRNA水平无明显差别。Westernblotting检测显示HepG2/GFP-HBx细胞PTEN蛋白明显低于HepG2及HepG2/GFP细胞,而p53蛋白无明显差别。结论 HBVX蛋白能够抑制阿霉素诱导的细胞凋亡及PTEN表达,HBVX蛋白对其细胞凋亡的抑制可能与其对p53-PTEN的抑制有关。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 阿霉素 P53 PTEN 细胞凋亡

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乙型肝炎病毒X蛋白抑制SFRP5启动子的活性 被引量：3

3

作者 陈林林 谢青 +5 位作者 单晓亮 权会琴 陈庆美 周帆 聂丹 唐霓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期200-204,共5页

目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)抑制分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)启动子活性的分子机制。方法:扩增不同长度的SFRP5启动子区片段,构建到萤光素酶报告基因载体pGL3-Basic上,并将构建好的重组质粒转染入正常肝细胞系LO2细胞,再分别感染编... 目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)抑制分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)启动子活性的分子机制。方法:扩增不同长度的SFRP5启动子区片段,构建到萤光素酶报告基因载体pGL3-Basic上,并将构建好的重组质粒转染入正常肝细胞系LO2细胞,再分别感染编码HBx的腺病毒(Ad-HBx)或编码绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-GFP),荧光显微镜下观察病毒感染效率,检测萤光素酶活性以观察HBx对SFRP5启动子活性的影响。结果:(1)含不同长度的SFRP5启动子区截短突变报告质粒构建成功。(2)截短突变报告质粒的萤光素酶活性与pGL3-Basic对照组相比,分别为(6.32±0.04)倍(-478 bp～+47 bp)、(5.79±0.32)倍(-811 bp～+47 bp)、(3.59±0.34)倍(-1 235 bp～+47 bp)、(3.86±0.39)倍(-1 677 bp～+47 bp)、(3.26±0.42)倍(-2 072 bp～+47 bp)(均P<0.05)。过表达HBx可以明显抑制SFRP5启动子活性,抑制率分别为44%(-478 bp～+47 bp)(P<0.05)、46%(-811 bp～+47 bp)(P<0.05)、28%(-1 235 bp～+47 bp)、24%(-1 677 bp～+47 bp)和40%(-2 072 bp～+47 bp)。结论:HBx可以明显抑制SFRP5启动子区活性,可能导致SFRP5基因表达下调。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 分泌型卷曲相关蛋白5 启动子区

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乙型肝炎病毒X蛋白通过降低P4启动子甲基化水平上调人IGF-Ⅱ基因的转录 被引量：2

4

作者 汤绍辉 张良鹏 +5 位作者 吴小娟 张嫚嫚 王旷靖 周鸿科 罗羽宏 曹明溶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1633-1638,共6页

目的:构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝癌细胞株HepG2-HBx,探讨HBx对胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因P4启动子甲基化水平及转录表达的影响。方法:应用基因重组技术,构建含HBx基因的重组逆转录病毒载体pBABE-puro-HBx,采用磷酸钙... 目的:构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝癌细胞株HepG2-HBx,探讨HBx对胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因P4启动子甲基化水平及转录表达的影响。方法:应用基因重组技术,构建含HBx基因的重组逆转录病毒载体pBABE-puro-HBx,采用磷酸钙共沉淀法将其转染293FT包装细胞产生逆转录病毒,感染HepG2肝癌细胞,采用嘌呤霉素进行阳性克隆筛选,Western blotting鉴定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx。采用亚硫酸氢盐测序法及实时荧光定量RT-PCR检测HepG2-HBx细胞中P4启动子甲基化水平及P4mRNA表达水平变化。进一步将体外甲基化的人IGF-Ⅱ基因P4启动子驱动的荧光素酶报告载体pGL3-P4及含HBx基因的pCMV-tag2B-X质粒共转染HepG2肝癌细胞,采用亚硫酸氢盐测序法及双萤光素酶实验检测pGL3-P4载体上P4启动子甲基化水平及转录调控活性变化。结果:(1)经Western blotting鉴定,成功构建了稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx;(2)表达HBx蛋白的HepG2-HBx细胞中P4启动子甲基化CpG位点的比例(9.0%)明显低于对照细胞HepG2-control(25.0%)(P<0.01),而其P4 mRNA表达水平则为对照细胞HepG2-control的2.8倍;(3)共转染pCMV-tag2B-X质粒的HepG2细胞中pGL3-P4载体上P4启动子甲基化CpG位点的比例(60.8%)明显低于共转染对照质粒pCMV-tag2B的HepG2细胞(84.1%)(P<0.01),而前者P4启动子相对萤光素酶活性(14.12±0.89)则明显高于后者(4.61±0.76)(P<0.01)。结论:HBx蛋白可降低IGF-Ⅱ基因P4启动子甲基化水平,进而上调其转录表达。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 胰岛素样生长因子Ⅱ 启动子 DNA甲基化

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乙型肝炎病毒x蛋白在HBV宫内感染中的作用 被引量：1

5

作者 白桂芹 张凌燕 +1 位作者 付逢萍 唐瑶 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期615-618,共4页

目的研究HBV(hepatitis B virus)感染胎盘和正常胎盘在HBxAg(hepatitis B x antigen)蛋白表达上的不同,探讨HBxAg在HBV宫内感染中可能发挥的作用。方法选择24例已证实发生宫内感染的HBsAg(hepatitis Bsurface antigen)阳性孕妇(感染组)... 目的研究HBV(hepatitis B virus)感染胎盘和正常胎盘在HBxAg(hepatitis B x antigen)蛋白表达上的不同,探讨HBxAg在HBV宫内感染中可能发挥的作用。方法选择24例已证实发生宫内感染的HBsAg(hepatitis Bsurface antigen)阳性孕妇(感染组)和10例正常健康孕妇(对照组)的胎盘组织,应用免疫组织化学SP染色法,检测各组胎盘中HBxAg的表达,用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果在HBV感染组的胎盘中可检测到HBxAg的表达,且高复制组(HBV DNA>1×103拷贝/mL)染色吸光度值明显高于低复制组(HBV DNA<1×103拷贝/mL),差异有统计学意义(P<0.05);HBV感染高复制组细胞凋亡指数低于低复制组和对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 HBxAg/抗细胞凋亡是HBV DNA高复制孕妇发生宫内感染的可能机制,而HBV DNA阴性孕妇存在不同的作用机制。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白(HBxAg) 细胞凋亡 宫内感染

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乙型肝炎病毒X蛋白与肝细胞癌 被引量：3

6

作者 彭玉莲 陈曲波 《实用医学杂志》 CAS 2008年第14期2536-2539,共4页

肝细胞癌（hepatic cellular carcinoma，HCC）是临床最常见的恶性肿瘤之一。在我国，约80％的HCC合并乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染，HBV感染者发生HCC的危险性是无感染者的200余倍。，人们发现HBV基因中编码17000的多... 肝细胞癌（hepatic cellular carcinoma，HCC）是临床最常见的恶性肿瘤之一。在我国，约80％的HCC合并乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染，HBV感染者发生HCC的危险性是无感染者的200余倍。，人们发现HBV基因中编码17000的多功能蛋白命名为X蛋白．也称HBxAg，为病毒基因组转录所必需。其对HCC的多种生物学活性，可能影响HCC形成和发展的多个环节， 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 肝细胞癌 carcinoma HBV感染者 HBxAG HBV基因 病毒基因组 生物学活性

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乙型肝炎病毒X蛋白与端粒酶的关系 被引量：1

7

作者 张烜 张晓东 叶丽虹 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期519-523,共5页

端粒(telomere)是真核细胞染色体末端的重复序列,对维持染色体的稳定性具有重要作用.端粒酶(telomerase)是维持端粒长度必需的一种逆转录酶,在细胞增殖、衰老、永生化和癌变等方面具有重要的作用.在肿瘤细胞中端粒酶发生明显变化,有较... 端粒(telomere)是真核细胞染色体末端的重复序列,对维持染色体的稳定性具有重要作用.端粒酶(telomerase)是维持端粒长度必需的一种逆转录酶,在细胞增殖、衰老、永生化和癌变等方面具有重要的作用.在肿瘤细胞中端粒酶发生明显变化,有较高水平的表达和很强的活性,成为肿瘤细胞的重要特征之一.乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus)X蛋白(HBx)与肝癌的发生密切相关,HBx可以通过多种途径发挥致癌作用,其中一个重要的分子机制,即激活人端粒酶反转录酶hTERT(为端粒酶的催化亚单位)使细胞发生永生化而癌变.因此,详细阐明HBx与hTERT的关系对于揭示乙肝病毒致癌机制具有重要的意义.本文对HBV的分子结构和HBx的分子生物学特性进行了详细的阐述,对HBx与hTERT及其调控因子的关系进行了归纳和总结,有助于进一步阐明HBx的致癌机制. 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 端粒 端粒酶 人端粒酶反转录酶

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抑制性消减杂交构建乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失40个氨基酸cDNA文库

8

作者 王力 朱明华 +1 位作者 李咏梅 李芳梅 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1081-1084,共4页

目的：应用抑制性消减杂交（SSH）技术筛选乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白羧基端缺失40个氨基酸（HBx3＇-40）反式激活基因,克隆其反式激活的相关靶基因.方法：以HBx3＇-40蛋白表达质粒pcDNA3（-）-HBx3＇-40 转染Huh-7细胞,以转染pcDNA3（-... 目的：应用抑制性消减杂交（SSH）技术筛选乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白羧基端缺失40个氨基酸（HBx3＇-40）反式激活基因,克隆其反式激活的相关靶基因.方法：以HBx3＇-40蛋白表达质粒pcDNA3（-）-HBx3＇-40 转染Huh-7细胞,以转染pcDNA3（-）-HBx为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取总RNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与pUCm-T载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌JM109进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果：成功构建了HBx3＇-40反式激活基因差异表达的cDNA文库,文库扩增后得到154个白色克隆,经菌落PCR分析,克隆包含有200～800 bp的插入片段,部分片段编码蛋白涉及原癌基因、信号转导相关基因、细胞生长因子相关基因、细胞凋亡、代谢和蛋白合成等相关基因.结论：应用抑制性消减杂交技术成功构建了HBx和HBx3＇-40差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HBx3＇-40在HBV感染相关的肝细胞癌发生中的分子生物学机制提供理论依据. 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 基因文库 抑制性消减杂交

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乙型肝炎病毒X蛋白相关微小RNA差异表达在乙型肝炎病毒复制中的作用研究 被引量：4

9

作者 陈静 陈磊 +1 位作者 吴孟超 石晓祯 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第15期1786-1791,共6页

背景乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)在乙型肝炎病毒复制及肝癌形成中扮演着重要的角色。研究HBX相关微小RNA(miRNAs)的差异表达有可能为调控乙型肝炎病毒复制、阐明肝癌发展进程及开展预后干预提供重要信息。目的探讨肝癌细胞中HBX相关miRNAs... 背景乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)在乙型肝炎病毒复制及肝癌形成中扮演着重要的角色。研究HBX相关微小RNA(miRNAs)的差异表达有可能为调控乙型肝炎病毒复制、阐明肝癌发展进程及开展预后干预提供重要信息。目的探讨肝癌细胞中HBX相关miRNAs的差异表达及其在乙型肝炎病毒复制中的作用。方法选取2014年1—10月第二军医大学附属东方肝胆外科医院收治的13例肝癌患者的肝癌组织及距离肝癌组织>2 cm癌旁组织的新鲜石蜡包埋标本,采用微阵列技术分析HBX相关miRNAs的差异表达,实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-q PCR)法定量分析肝癌组织与癌旁组织中7个与肝脏功能相关的miRNAs及HBX mRNA表达水平,同时分析过表达hsa-miR-373或抑制hsa-miR-22对乙型肝炎病毒复制的影响。结果微阵列技术分析显示,HepG2-X细胞系和HepG2-CAT细胞系中有46种miRNAs差异表达,与HepG2-CAT细胞系相比,HepG2-X细胞系中20种miRNAs表达上调,26种miRNAs表达下调。肝癌组织与癌旁组织中hsa-miR-22、hsa-miR-373、hsa-miR-92、hsa-miR-155及HBX mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);肝癌组织与癌旁组织中hsa-miR-181a、hsa-miR-34a、hsa-let-7i表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关性分析结果显示,hsa-miR-22表达水平与HBX mRNA表达水平呈正相关(r=0.415,P=0.018),hsa-miR-373、hsa-miR-92、hsa-miR-155表达水平与HBX mRNA表达水平呈负相关(r=-0.322,P=0.043;r=-0.369,P=0.028;r=-0.426,P=0.016);hsa-miR-181a、hsa-miR-34a、hsa-let-7i表达水平与HBX mRNA表达水平无直线相关关系(r=0.076,P=0.363;r=0.017,P=0.676;r=0.122,P=0.242)。第2天和第3天hsa-miR-22抑制剂组、hsamiR-373前体组HepG2.2.15细胞系及HepAD-38细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较阴性对照组降低(P<0.05);第2天和第3天hsa-miR-373前体组Hep G2.2.15细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较hsa-miR-22抑制剂组降低(P<0.05)。第2天hsa-miR-373前体组Hep AD-38细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较hsa-miR-22抑制剂组升高,第3天hsa-miR-373前体组Hep AD-38细胞系乙型肝炎病毒拷贝数较hsa-miR-22抑制剂组降低(P<0.05)。第2天和第3天hsa-miR-373前体组HepG 2.2.15细胞系乙型肝炎病毒拷贝抑制率较hsa-miR-22抑制剂组升高(P<0.05)。第2天hsa-miR-373前体组Hep AD-38细胞系乙型肝炎病毒拷贝抑制率较hsa-miR-22抑制剂组降低,第3天hsa-miR-373前体组Hep AD-38细胞系乙型肝炎病毒拷贝抑制率较hsa-miR-22抑制剂组升高(P<0.05)。结论 HBX相关miRNAs的差异表达可通过靶向相关信号转导通路影响乙型肝炎病毒在肝癌细胞内的复制。 展开更多

关键词 肝肿瘤 乙型肝炎病毒x蛋白 微小RNA 病毒复制

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羧基末端截短型乙型肝炎病毒X蛋白在肝细胞癌与癌旁组织中的表达及其在术后预后中的作用 被引量：3

10

作者 钟晓怡 马龙腾 +4 位作者 陈曦 吴婷 李楠 曹广文 殷建华 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期125-132,共8页

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者肝癌组织和癌旁组织中羧基末端截短型乙型肝炎病毒X蛋白(Ct-HBx)的表达及其与患者术后预后的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测462例肝癌组织、配对的263例癌旁组织和配对的25例癌栓组织中Ct-HBx蛋白的表... 目的探讨肝细胞癌(HCC)患者肝癌组织和癌旁组织中羧基末端截短型乙型肝炎病毒X蛋白(Ct-HBx)的表达及其与患者术后预后的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测462例肝癌组织、配对的263例癌旁组织和配对的25例癌栓组织中Ct-HBx蛋白的表达,分析其与临床病理参数的关系,探讨Ct-HBx蛋白的表达与HCC患者术后预后的关系。结果 Ct-HBx蛋白表达在配对的263例肝癌组织和癌旁组织中阳性率分别为43.73%(115/263)和11.79%(31/263);多因素Cox风险回归模型分析结果显示年龄、门静脉癌栓(PVTT)、术前天冬氨酸转氨酶(AST)、术前甲胎蛋白(AFP)、主瘤旁微小子灶、术前巴塞罗那临床肿瘤(BCLC)分期和术后抗病毒治疗是HCC患者术后复发的独立危险因素(P均<0.05),门静脉癌栓、术前AFP、肿瘤包膜、术前BCLC分期和Ct-HBx蛋白表达是HCC患者术后生存的独立危险因素(P均<0.05)。在263对配对样本中,肝癌组织中Ct-HBx蛋白的表达与性别、糖类抗原19-9(CA19-9)、术后抗病毒治疗有关(P均<0.05)。肝癌组织和癌旁组织中Ct-HBx蛋白均为阴性表达的患者术后3年无瘤生存率高于Ct-HBx蛋白在肝癌组织阴性表达且在癌旁组织阳性表达的患者(P=0.050 1)。结论当HCC患者肝癌组织中Ct-HBx蛋白表达呈阴性时,癌旁组织中Ct-HBx蛋白的表达情况可能与术后预后有关,可作为预测术后肿瘤生存和复发的标志物。 展开更多

关键词 肝肿瘤 肝细胞癌 乙型肝炎病毒 羧基末端截短型乙型肝炎病毒x蛋白 存活率分析 预后

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乙型肝炎病毒X蛋白促进肝癌细胞株生长及其分子机制的实验研究 被引量：3

11

作者 范丽 陈建婷 《海南医学院学报》 CAS 2017年第13期1737-1739,1743,共4页

目的:研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对肝癌细胞株中增殖分子、侵袭分子、血管新生分子表达的影响。方法:培养肝癌细胞株HepG2并分为HBx组和对照组,分别转染pcDNA3.1-HBx质粒以及空白的pcDNA3.1质粒。转染后24h和48h,检测细胞中增殖分子Sur... 目的:研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对肝癌细胞株中增殖分子、侵袭分子、血管新生分子表达的影响。方法:培养肝癌细胞株HepG2并分为HBx组和对照组,分别转染pcDNA3.1-HBx质粒以及空白的pcDNA3.1质粒。转染后24h和48h,检测细胞中增殖分子Survivin、cyclinD1、c-myc以及侵袭分子CD44v6、MT1-MMP、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP7以及血管新生分子血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管生成素(Ang)-1、Ang-2、成纤维细胞生长因子(FGF-2)的mRNA表达量。结果:转染24、48h后,HBx组细胞中Survivin、cyclinD1、c-myc、CD44v6、MT1-MMP、MMP2、MMP7、VEGF、Ang-1、Ang-2、FGF-2的mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05)。结论:HBx能够促进肝癌细胞株中增殖分子、侵袭分子、血管新生分子的表达。 展开更多

关键词 原发性肝癌 乙型肝炎病毒x蛋白(HBx) 增殖 侵袭 血管新生

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乙型肝炎病毒X蛋白截短突变体的构建及其对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响 被引量：1

12

作者 谢青 陈林林 +5 位作者 李治 单晓亮 聂丹 段玉洁 权会琴 唐霓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期35-40,共6页

目的:观察乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)截短突变体在细胞内的定位及其对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响。方法:采用PCR克隆全长野生型HBx基因,在此基础上,分别构建融合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和缺失HBx基因C端49~154 aa、C端85~... 目的:观察乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)截短突变体在细胞内的定位及其对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响。方法:采用PCR克隆全长野生型HBx基因,在此基础上,分别构建融合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和缺失HBx基因C端49~154 aa、C端85~154 aa、N端1~57 aa+C端141~154 aa、N端1~57 aa或N端1~84 aa截短突变体的表达载体;激光共聚焦显微镜下观察HBx截短突变体在HEK293细胞中的定位;采用萤光素酶报告系统检测HBx截短突变体对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响。结果:(1)成功构建了HBx截短突变体与EGFP基因融合的表达载体。(2)野生型HBx及截短突变体在HEK293细胞中具有不同的定位,其中N端缺失突变体主要定位于细胞核周胞质;C端缺失突变体在胞质胞核中呈均匀分布;N端+C端缺失突变体的定位类似于野生型HBx,主要定位于胞质,呈不均一的粗大颗粒,胞核中也有少量表达。(3)与野生型HBx相比,HBx C端49~154 aa、C端85~154 aa、N端1~57 aa+C端141~154 aa、N端1~57 aa和N端1~84 aa缺失突变体在Huh7细胞中均使Wnt/β-catenin信号通路的转录活性明显下降,分别下降了78.7%、84.7%、75.7%、93.8%和95.5%。结论:HBx不同截短突变体的细胞定位及对Wnt/β-catenin信号通路转录活性不同,提示HBx的不同功能区对Wnt信号的转录激活发挥着不同的作用。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 截短突变体 细胞内定位 转录活性

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乙型肝炎病毒X蛋白在促进肝细胞衰老中的作用 被引量：1

13

作者 熊莹晖 傅永明 +5 位作者 周鹏程 王晓芳 黄泽炳 全俊 胡兴旺 范学工 《中国感染控制杂志》 CAS 北大核心 2018年第7期571-576,共6页

目的探讨乙型肝炎病毒通过乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对肝细胞衰老的影响。方法对HepG2.2.15细胞、HBx沉默HepG2.2.15细胞(HepG2.2.15-HBx-si)及HBx过表达HepG2细胞(HepG2-HBx)进行β-半乳糖苷酶染色,采用Western Blot对肝细胞衰老相关蛋... 目的探讨乙型肝炎病毒通过乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对肝细胞衰老的影响。方法对HepG2.2.15细胞、HBx沉默HepG2.2.15细胞(HepG2.2.15-HBx-si)及HBx过表达HepG2细胞(HepG2-HBx)进行β-半乳糖苷酶染色,采用Western Blot对肝细胞衰老相关蛋白进行检测;对比分析HBx对肝细胞衰老的影响。结果β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例:HepG2.2.15组为(0.480±0.096),HepG2组为(0.016±0.005),两组比较差异有统计学意义(P<0.001);HepG2.2.15-HBx-si组为(0.278±0.065),对照组HepG2.2.15-HBx-nc组为(0.329±0.044),两组比较差异无统计学意义(P=0.092);HepG2-HBx组为(0.319±0.033),对照组HepG2-HBx-con组为(0.064±0.012),两组比较差异有统计学意义(P<0.001)。Western Blot检测肝细胞衰老蛋白:HepG2.2.15组和HepG2-HBx组肝细胞衰老相关蛋白p53及p21表达量均高于其对照组,HepG2.2.15-HBx-si组肝细胞衰老相关蛋白p53及p21表达量低于HepG2.2.15-HBx-nc组。结论乙型肝炎病毒可通过HBx促进肝细胞衰老。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒x蛋白 肝细胞衰老

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乙型肝炎病毒X蛋白下调微RNA-544-3p并激活Arf6/Akt-mTOR信号轴促进肝脏细胞迁移和侵袭

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作者 况钦 吴勇 +5 位作者 杜彬 毋楠 周梦瑶 杨鑫 卢杨 冯涛 《海军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期604-613,共10页

目的探讨mi RNA-544-3p对乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)诱导的肝细胞癌的影响及分子机制。方法培养含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HBx的慢病毒稳转小鼠永生化肝前体细胞株14-19(HBx-EGFP-14-19细胞),并通过向昆明小鼠肝门静脉注射上述细胞构建... 目的探讨mi RNA-544-3p对乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)诱导的肝细胞癌的影响及分子机制。方法培养含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HBx的慢病毒稳转小鼠永生化肝前体细胞株14-19(HBx-EGFP-14-19细胞),并通过向昆明小鼠肝门静脉注射上述细胞构建可长期稳定表达HBx的模型,采用q PCR检测mi RNA-544-3p在HBxEGFP-14-19细胞及小鼠模型肝组织中的表达。在HBx-EGFP-14-19细胞中瞬时转染mi RNA-544-3p模拟物(mimic)或抑制剂(inhibitor),应用划痕愈合实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验检测mi RNA-544-3p对HBx-EGFP-14-19细胞迁移和侵袭的影响,采用q PCR和蛋白质印迹法探究mi RNA-544-3p对二磷酸腺苷核糖基化因子6(Arf6)、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)表达的调控作用。结果成功构建了可长期稳定表达HBx的小鼠模型,该小鼠在造模后360 d处死时可见肝组织有恶性肿瘤生成。与对照组相比,HBx-EGFP-14-19细胞和HBx模型小鼠各时间点(造模后30、90、180、360 d)肝组织中mi RNA-544-3p表达水平均降低(P均<0.05)。与对照组比较,转染mi RNA-544-3p mimic的HBx-EGFP-14-19细胞迁移和侵袭能力均降低,转染mi RNA-544-3p inhibitor的HBxEGFP-14-19细胞迁移和侵袭能力均增强(P均<0.05)。q PCR和蛋白质印迹法检测结果显示mi RNA-544-3p低表达与Arf6表达水平上调、Akt-m TOR信号轴的激活有关。结论HBx可能通过下调mi RNA-544-3p激活Arf6/AktmTOR信号轴促进小鼠肝癌细胞的侵袭和迁移能力。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 肝细胞癌 微RNA-544-3p 二磷酸腺苷核糖基化因子6 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

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乙型肝炎病毒X蛋白在肝细胞癌微环境中的作用及其机制

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作者 崔冉亮(综述) 任丽 李悦国(审阅) 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期833-838,共6页

乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染是诱发肝细胞癌(HCC)的重要危险因素,而炎症的持续存在可形成一种适宜肿瘤存活的微环境(TME),其X基因编码并表达的乙型肝炎病毒X蛋白(HbX)作为一个多功能调节蛋白,它通过与TME中的肿瘤细胞及周围基质成分相互... 乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染是诱发肝细胞癌(HCC)的重要危险因素,而炎症的持续存在可形成一种适宜肿瘤存活的微环境(TME),其X基因编码并表达的乙型肝炎病毒X蛋白(HbX)作为一个多功能调节蛋白,它通过与TME中的肿瘤细胞及周围基质成分相互作用,促进HCC的发生和发展。本文通过对近期文献进行回顾总结,着重分析了HbX在HCC-TME中引发HCC侵袭和转移的作用机制,包括参与癌细胞增殖与凋亡、抑制机体免疫、促进肝细胞自噬、诱导细胞外基质重塑以及调控干细胞特性等方面,以期为临床HBV相关HCC提供新的治疗思路。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 肝癌 肿瘤微环境 致癌机制

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乙型肝炎病毒x蛋白与肝癌生物学特性的研究

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作者 关剑 陈孝平 丁磊 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期158-158,共1页

观察乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)对肝癌多药耐药基因(MDR1，MRP1)和促血管生长因子(VEGF)的作用，探讨HBx影响肝癌生物学特性的分子机制。利用瞬时转染HBx基因的方法建立细胞模型，分别使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot技术检... 观察乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)对肝癌多药耐药基因(MDR1，MRP1)和促血管生长因子(VEGF)的作用，探讨HBx影响肝癌生物学特性的分子机制。利用瞬时转染HBx基因的方法建立细胞模型，分别使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot技术检测转染前后HepG2细胞的多药耐药相关基因和VEGF的表达情况；使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测阿霉素诱导后两种细胞的存活率和凋亡率，了解HBx转染后细胞耐药性的变化。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 肝癌 生物学特性 促血管生长因子 分子机制

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乙型肝炎病毒X蛋白对血管内皮生长因子的调节通路研究

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作者 刘利平 陈孝平 张万广 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期700-700,共1页

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 血管内皮生长因子 信号转导通路 调节 实时荧光定量PCR NF-κB HBx基因 L02细胞

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乙型肝炎病毒C蛋白和X蛋白的修饰及其意义 被引量：2

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作者 钱冠华 段昌柱 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期30-33,37,共5页

乙型肝炎病毒(HBV)作为一个外来入侵的病毒可以激发人体的免疫反应,导致人体一系列与HBV感染有关的病理变化与临床表现。HBC和HBX是由HBV基因编码的两种重要蛋白。HBC对病毒基因组的复制和成熟是必不可少的,其蛋白修饰后的产物对病毒在... 乙型肝炎病毒(HBV)作为一个外来入侵的病毒可以激发人体的免疫反应,导致人体一系列与HBV感染有关的病理变化与临床表现。HBC和HBX是由HBV基因编码的两种重要蛋白。HBC对病毒基因组的复制和成熟是必不可少的,其蛋白修饰后的产物对病毒在宿主细胞内的组装、成熟和对外分泌中发挥着作用。HBX能与多种蛋白发生相互作用,在HBV的复制中起着不可或缺的作用,也影响着肝细胞癌的形成。现有的对HBC和HBX的磷酸化和泛素化过程的研究,为进一步揭示HBV的致病机制提供了依据,希望最终为乙型肝炎的临床治疗寻找一条新的途径。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒核心蛋白 乙型肝炎病毒x蛋白 磷酸化 泛素化

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乙型肝炎病毒X基因克隆及其表达

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作者 唐世刚 杨兵厂 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期525-528,共4页

目的:构建乙型肝炎病毒X基因原核表达载体,并诱导其表达。方法:从乙肝病人血清中提取HBVDNA;以带有EcoRI和HindⅢ酶切位点的引物,用PCR方法扩增X基因;而后定向克隆到原核表达载体pMAL-C2X上,经酶切鉴定和序列分析;以IPTG诱导X融合蛋白... 目的:构建乙型肝炎病毒X基因原核表达载体,并诱导其表达。方法:从乙肝病人血清中提取HBVDNA;以带有EcoRI和HindⅢ酶切位点的引物,用PCR方法扩增X基因;而后定向克隆到原核表达载体pMAL-C2X上,经酶切鉴定和序列分析;以IPTG诱导X融合蛋白的表达。结果:PCR扩增显示有类似HBVX基因片断大小的条带;构建的原核表达重组体PMAL-C2X-HBV-X经酶切有相应大小的的基因插入片断,序列分析证实为正确的有完整读码框的X基因;这一重组体在IPTG诱导下有相应大小的X融合蛋白表达。结论:成功构建了HBVX基因原核表达重组体pMAL-C2X-HBVX;在IPTG的诱导下,该重组体在大肠杆菌中可表达X融合蛋白,为进一步纯化HBVX蛋白和研究其生物学作用奠定了基础。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 克隆 乙型肝炎病毒x蛋白 表达

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乙型肝炎病毒相关性肝癌患者癌组织中HBx和CEACAM1的表达及其意义 被引量：3

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作者 马莉 张蔚 +3 位作者 许刚柱 姚杨 徐利 刘凯歌 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期779-783,823,共5页

目的:检测乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)在乙型肝炎病毒相关性肝癌(乙肝相关性肝癌)组织中的表达,探讨二者在肝癌发生、发展及转移中的关系及意义。方法:采用免疫组织化学方法(SP法)检测81例乙肝相关性... 目的:检测乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)在乙型肝炎病毒相关性肝癌(乙肝相关性肝癌)组织中的表达,探讨二者在肝癌发生、发展及转移中的关系及意义。方法:采用免疫组织化学方法(SP法)检测81例乙肝相关性肝癌组织中HBx和CEACAM1的表达,分析HBx和CEACAM1与乙肝相关性肝癌临床病理特征的关系。Western blotting检测人正常肝细胞系QZG、肝癌细胞HepG2及稳定转染HBx的肝癌细胞HepG2(HepG2-X)中CEACAM1的表达。结果:81例乙肝相关性肝癌组织中HBx表达阳性率为74.07%(60/81),CEACAM1表达阳性率为71.60%(58/81),二者与门静脉侵袭、淋巴结转移和TNM分期有关联(P<0.05,P<0.01)。HBx与CEACAM1的表达呈负相关(rs=-0.310,P<0.05);稳定转染HBx的肝癌细胞HepG2(HepG2-X)中,CEACAM1蛋白表达水平与肝癌细胞HepG2及人正常肝细胞系QZG比较显著降低。结论:HBx的高表达和CEACAM1的低表达与乙肝相关性肝癌的侵袭、转移有关联,HBx可能通过抑制CEACAM1表达促进肿瘤的发生与发展。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒x蛋白 癌胚抗原相关细胞黏附分子1 乙型肝炎病毒相关性肝癌 肿瘤转移

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