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小鼠肝炎病毒核酸恒温扩增CRISPR-Cas12a检测方法的建立
1
作者 刘建利 宋志平 +3 位作者 朱崧琪 黄超华 阮周曦 曹琛福 《中国动物检疫》 2025年第9期77-83,共7页
为建立一种快速、灵敏、特异的小鼠肝炎病毒(MHV)核酸检测新方法,通过分析27条MHV M基因序列,选择保守性区域设计具有强特异性的RT-RAA引物和CRISPR RNA(crRNA)序列,建立了可快速检测MHV核酸的基于RT-RAA的CRISPR-Cas12a方法。采用系列... 为建立一种快速、灵敏、特异的小鼠肝炎病毒(MHV)核酸检测新方法,通过分析27条MHV M基因序列,选择保守性区域设计具有强特异性的RT-RAA引物和CRISPR RNA(crRNA)序列,建立了可快速检测MHV核酸的基于RT-RAA的CRISPR-Cas12a方法。采用系列稀释的阳性核酸标准品及其他相关小鼠疫病病毒核酸,对该方法的灵敏度和特异性进行验证和评价。结果显示:本研究建立的基于RT-RAA的CRISPR-Cas12a方法检测灵敏度可达10^(1) copies/μL,与RT-PCR方法相当,且与仙台病毒(SV)、鼠肺炎病毒(PVM)、汉坦病毒(HV)、小鼠细小病毒(MVM)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、鼠痘病毒(EV)和呼肠弧病毒Ⅲ型(Reo3)无交叉反应。使用本研究建立的方法和荧光RT-PCR方法对66份临床样品进行检测,两种方法的检测结果符合率达100%。此外,本研究建立方法的检测时长可控制在1 h 15 min以内。结果表明,本研究建立的基于RT-RAA的CRISPR-Cas12a技术耗时短、特异性强、灵敏度高,为MHV感染的快速检测提供了新的技术手段,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 小鼠肝炎病毒 CRISPR 等温扩增 核酸检测
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乙肝病毒核酸检测方法研究进展 被引量：1
2
作者 李亚兰 马圆艳 +1 位作者 汪德强 蔡雪飞 《重庆医科大学学报》 北大核心 2025年第2期152-157,共6页
乙型肝炎病毒感染是一个重大公共卫生问题,为了避免发展成为肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌,患者通常需要长期服药治疗,检测血清中乙肝病毒核酸的动态变化水平可以作为临床安全停药的重要指标。对于乙肝患者的“精准治疗”,提高乙肝病毒... 乙型肝炎病毒感染是一个重大公共卫生问题,为了避免发展成为肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌,患者通常需要长期服药治疗,检测血清中乙肝病毒核酸的动态变化水平可以作为临床安全停药的重要指标。对于乙肝患者的“精准治疗”,提高乙肝病毒核酸检测的特异度和灵敏度以及对结果的科学解读都十分重要。本文简要对目前已有检测方法的运用场景及其优缺点进行总结,为将来在临床中针对不同情况选择不同方法提供参考。 展开更多
关键词 核酸检测 乙肝病毒 研究进展
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基于核酸适体功能化纳米磁珠的石斑鱼虹彩病毒检测
3
作者 夏悦婷 余庆 +10 位作者 黄琳 黄静 覃向谋 赵明明 韦冬冬 王浩 凌飞 常彦磊 许伟江 刘明珠 李鹏飞 《广东海洋大学学报》 北大核心 2025年第3期21-27,共7页
【目的】开发一种基于核酸适体功能化纳米磁珠的石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)快速检测新方法,以解决传统病毒检测技术操作繁琐、耗时长、设备依赖性强等问题。【方法】将前期筛选获得的可特异性识别SGIV的核酸适... 【目的】开发一种基于核酸适体功能化纳米磁珠的石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)快速检测新方法,以解决传统病毒检测技术操作繁琐、耗时长、设备依赖性强等问题。【方法】将前期筛选获得的可特异性识别SGIV的核酸适配体进行优化及修饰,获得核酸适配体Q5c,并将其与纳米磁珠进行偶联,构建核酸适配体偶联磁性纳米探针(Aptamer magnetic nanobeads,Q5c-MNPs)。利用多病原交叉实验验证Q5c-MNPs对SGIV感染细胞的特异性靶向识别,采用流式细胞术、荧光定量PCR等技术系统评价探针的稳定性、灵敏度等关键性能指标。【结果】Q5c-MNPs可特异性识别SGIV感染的细胞,并在500 nmol/L浓度下孵育时间短至1 min,在4~37℃温度范围内检测性能稳定。检测灵敏度达1×10^(3)个/mL,与RT-qPCR检测灵敏度相当。而本方法检测周期仅需2h,较常规分子检测方法效率显著提升。【结论】成功构建Q5c-MNPs检测体系,该体系兼具高特异性、高灵敏度和快速响应等优势,为开发水产病害现场快速检测试剂盒奠定重要技术基础。 展开更多
关键词 石斑鱼虹彩病毒 核酸适配体Q5c 纳米磁珠 快速检测
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成人乙型肝炎病毒感染筛查、检测及管理专家建议 被引量：10
4
作者 中华预防医学会感染性疾病防控分会 中华预防医学会促进消除病毒性肝炎工作委员会 +16 位作者 林炳亮 崔富强 高志良 陈恩富 党双锁 黄燕 雷学忠 李成忠 刘静 彭劼 石荔 王晖 吴彪 张绍全 张勇 赵鸿 朱月永 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2024年第8期1543-1550,共8页
乙型肝炎(乙肝)流行是重要的公共卫生问题,其疾病负担重。在我国,乙型肝炎的诊断率和治疗率与世界卫生组织(World Health Organization,WHO)提出的2030年消除病毒性肝炎公共卫生危害的目标仍有较大差距。为实现WHO和“2030健康中国”规... 乙型肝炎(乙肝)流行是重要的公共卫生问题,其疾病负担重。在我国,乙型肝炎的诊断率和治疗率与世界卫生组织(World Health Organization,WHO)提出的2030年消除病毒性肝炎公共卫生危害的目标仍有较大差距。为实现WHO和“2030健康中国”规划纲要目标,中华预防医学会组织国内临床、公共卫生和检验等领域专家,在全面回顾国内外相关文献的基础上,经过多轮讨论形成本建议,以实现对成人进行普遍筛查,对乙型肝炎病毒感染者进行评估、治疗和长期随访管理,对未感染者进行乙肝疫苗接种,消除乙型肝炎危害的目标。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 筛查 检测 管理
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激活式核酸适配体LYGV1c对石斑鱼虹彩病毒的特异性识别与检测 被引量：1
5
作者 刘明珠 谢瑾琨 +7 位作者 余庆 黄静 王一兵 徐继卫 常彦磊 黄广杰 韩书煜 李鹏飞 《南方农业学报》 北大核心 2025年第6期1704-1714,F0002,共12页
【目的】构建能特异性识别石斑鱼虹彩病毒(SGIV)的激活式核酸适配体探针,为开发特异性识别SGIV的快速检测试剂盒提供技术支持,实现对SGIV感染的早期诊断及精准防控。【方法】基于可特异性识别SGIV感染宿主细胞的核酸适配体LYGV1,通过加... 【目的】构建能特异性识别石斑鱼虹彩病毒(SGIV)的激活式核酸适配体探针,为开发特异性识别SGIV的快速检测试剂盒提供技术支持,实现对SGIV感染的早期诊断及精准防控。【方法】基于可特异性识别SGIV感染宿主细胞的核酸适配体LYGV1,通过加入T链、C链、荧光基团及淬灭基团等功能化修饰,成功构建获得靶标激活式核酸适配体TAA-LYGV1c;然后通过流式细胞仪分析、激光共聚焦显微镜观察及实时荧光定量PCR等技术系统验证TAALYGV1c对SGIV的特异性识别能力,并对其最适工作浓度、孵育时间、孵育温度及识别靶细胞检测限等条件进行优化,以评估TAA-LYGV1c的可操作性;最后构建SGIV感染模型,通过流式细胞仪检测分析和实时荧光定量PCR进一步探究TAA-LYGV1c在实际生产中的应用价值。【结果】加入TAA-LYGV1c后SGIV感染组石斑鱼脾脏(GS)细胞的荧光值极显著高于未加入TAA-LYGV1c的SGIV感染组(P<0.01,下同),同时极显著高于空白对照组和神经坏死病毒(NNV)感染组,说明TAA-LYGV1c可特异性识别SGIV感染。TAA-LYGV1c的最适工作浓度为500 nmol/L,最适孵育温度为28℃,最短孵育1 min即可检测到荧光。不同检测方法的最低检测限存在一定差异,其中,流式细胞仪检测分析TAA-LYGV1c识别靶细胞的检测限为5×10^(3)个/mL,荧光酶标仪检测分析的最低检测限与实时荧光定量PCR检测的最低检测限均为500个/mL,即检测灵敏度与仪器的检测原理存在一定关联。在活体检测中,基于TAA-LYGV1c的流式细胞仪检测分析结果与实时荧光定量PCR检测结果一致,进一步证实TAA-LYGV1c能特异性识别SGIV感染,也说明核酸适配体在水产养殖病原检测方面具有潜在的应用价值。【结论】开发的激活式核酸适配体TAA-LYGV1c具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优势,可实现对SGIV感染的早期快速诊断,为开发特异性识别SGIV的快速检测试剂盒提供技术支持。 展开更多
关键词 石斑鱼虹彩病毒(SGIV) 核酸适配体 TAA-LYGV1c 快速检测
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鸡星状病毒实时荧光逆转录重组酶介导核酸等温扩增检测方法的建立
6
作者 赵俊柯 余丹 +4 位作者 喻华英 尹文巧 张艳芳 谢志勤 谢芝勋 《动物医学进展》 北大核心 2025年第9期22-27,共6页
为建立针对鸡星状病毒(CAstV)的实时荧光逆转录重组酶介导核酸等温扩增(RT-RAA)检测方法,基于CAstV的ORF1b基因序列设计引物和探针。通过试验筛选,确定最优的引物和探针组合,并对反应条件进行优化。利用优化好的反应条件进行特异性、敏... 为建立针对鸡星状病毒(CAstV)的实时荧光逆转录重组酶介导核酸等温扩增(RT-RAA)检测方法,基于CAstV的ORF1b基因序列设计引物和探针。通过试验筛选,确定最优的引物和探针组合,并对反应条件进行优化。利用优化好的反应条件进行特异性、敏感性和重复性测试。针对从广西南宁不同地区采集的200份临床样品进行检测,并将结果与RT-PCR和RT-qPCR进行对比。结果显示,建立的实时荧光RT-RAA方法能在20 min内完成反应,最佳反应温度为41℃,显示出极高的灵敏度,最低检测限达到1.4×10^(1)copies/μL,比普通RT-PCR高100倍。所设计的引物特异性高,仅能扩增出CAstV病毒,而对其他病原体无交叉反应。重复性试验结果表明该方法具有良好的稳定性。与RT-qPCR相比,实时荧光RT-RAA的检测结果符合率高达98.27%,而普通RT-PCR与RT-RAA相比符合率仅为82.45%。建立了一种高效、快速、准确、灵敏且特异性强的实时荧光RT-RAA方法,适用于CAstV的临床大规模鉴别检测,为CAstV感染的监控提供了技术支持。 展开更多
关键词 鸡星状病毒 逆转录重组酶介导核酸等温扩增 快速检测 ORF1b基因
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犬瘟热病毒核酸检测技术在临床诊断中的应用研究
7
作者 阿曼吐尔·阿黑哈提 《现代畜牧科技》 2025年第2期104-106,共3页
犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的一种高度接触性传染病,临床诊断准确性直接关系到患犬预后。该文从定义和原理等方面概述了犬瘟热病毒核酸检测技术,分析该技术在临床诊断中存在的样本采集处理不当导致漏检、引物探针设计不合理影响特异性、... 犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的一种高度接触性传染病,临床诊断准确性直接关系到患犬预后。该文从定义和原理等方面概述了犬瘟热病毒核酸检测技术,分析该技术在临床诊断中存在的样本采集处理不当导致漏检、引物探针设计不合理影响特异性、检测方法选择不当降低灵敏度、联合检测和综合诊断意识不足等缺点,并提出了规范样本采集处理流程、优化引物探针设计、合理选择检测方法、加强联合检测和综合诊断等优化策略建议,以期为犬瘟热诊断和防控提供参考。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 核酸检测 临床诊断 优化策略
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等温核酸扩增技术在禾本科作物病毒检测中的应用
8
作者 孙萌 董荟慧 于莹 《农村科学实验》 2025年第17期78-80,共3页
等温核酸扩增技术因快速、简便和高灵敏度的特点,在禾本科作物病毒检测中展现出明显优势。该文总结了环介导等温扩增技术、重组酶聚合酶扩增技术、滚环扩增技术等主要等温扩增技术的原理与特点,重点分析了其在小麦、玉米、水稻病毒检测... 等温核酸扩增技术因快速、简便和高灵敏度的特点,在禾本科作物病毒检测中展现出明显优势。该文总结了环介导等温扩增技术、重组酶聚合酶扩增技术、滚环扩增技术等主要等温扩增技术的原理与特点,重点分析了其在小麦、玉米、水稻病毒检测中的具体应用与成效,评估了其检测效果与性能,并指出当前技术仍面临引物设计复杂度高、抑制物质干扰及标准化程度不足等挑战。最后,该文对该技术未来发展方向进行了展望,以期为禾本科作物病毒快速检测技术的选择与应用提供参考。 展开更多
关键词 等温核酸扩增技术 禾本科作物 病毒检测
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碱性磷酸酶直接标记核酸探针检测血清中鸭乙型肝炎病毒DNA方法的建立及应用 被引量：5
9
作者 陈压西 齐珍元 黄爱龙 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第2期140-143,共4页
目的 :建立碱性磷酸酶直接 (AlkPhosDirec)标记核酸探针检测血清中鸭乙型肝炎病毒核酸 (DHBVDNA)方法。方法 :应用AlkPhosDirec[TM] 将碱性磷酸酶直接标记纯化的DHBVDNA全基因制备探针 ,与目标核酸杂交后加入CDP -Star化学发光试剂 ,用... 目的 :建立碱性磷酸酶直接 (AlkPhosDirec)标记核酸探针检测血清中鸭乙型肝炎病毒核酸 (DHBVDNA)方法。方法 :应用AlkPhosDirec[TM] 将碱性磷酸酶直接标记纯化的DHBVDNA全基因制备探针 ,与目标核酸杂交后加入CDP -Star化学发光试剂 ,用胶片放射自显影检测DHBVDNA。同时检测了探针的灵敏度和特异性。比较了AlkPhosDirec标记DHBVDNA探针与地高辛标记的DHBVDNA探针检测鸭血清标本 10 0份结果。并用AlkPhosDirec标记探针检测血清中鸭乙型肝炎病毒核酸的方法考核了活性肽类物质保尔佳 (Polyerga)及其 8种单体体内抗鸭乙型肝炎病毒作用。 结果 :探针灵敏度为10 pg ,无非特异性的结果出现 ,与地高辛探针比较 ,用AlkPhosDirect标记探针检测方法的敏感性为 10 0 % ,特异性为 10 0 % ,符合率为 10 0 % ;抗鸭乙型肝炎病毒作用动物实验表明 ,保尔佳 0 0 1号单体 (CMS0 0 1)能使血清中DHBVDNA明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 :AlkPhosDirec标记DHBVDNA探针检测血清中鸭乙型肝炎病毒核酸方法灵敏、特异 ,与地高辛标记的DHBVDNA探针检测结果完全相符合 ,可作为药物抗鸭乙型肝炎病毒作用动物实验疗效评价的手段。 展开更多
关键词 碱性磷酸酶 标记 鸭乙型肝炎病毒 核酸
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国产磁珠法试剂在荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸中的应用 被引量：3
10
作者 王瑞莲 张婷 +4 位作者 龙军 陈晓娇 林丽娟 方艳平 彭永正 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第21期3594-3596,共3页
目的:评价国产磁珠法试剂在荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸的临床应用价值。方法:首先,用国产磁珠法试剂B与进口磁珠法试剂A(罗氏试剂)对78例标本进行乙型肝炎病毒核酸的平行测定,比较其相关性。然后,对8个梯度浓度的结果重复检测3次... 目的:评价国产磁珠法试剂在荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸的临床应用价值。方法:首先,用国产磁珠法试剂B与进口磁珠法试剂A(罗氏试剂)对78例标本进行乙型肝炎病毒核酸的平行测定,比较其相关性。然后,对8个梯度浓度的结果重复检测3次,评价其精密度。最后,用试剂B与煮沸裂解法试剂C对58例标本进行比较,评价其阳性检出率。结果:在相关性方面,试剂A与试剂B显著相关(r=0.987,P<0.05)。在精密度方面,3次重复检测结果之间差异无显著性(F=0.999,P>0.05)。在阳性检出率方面,试剂B阳性检出率(60.34%)高于试剂C(39.77%)。结论:国产磁珠法试剂与进口磁珠法试剂相关性强,精密度和阳性检出率高,且价格较低廉,适合临床推广使用。 展开更多
关键词 国产磁珠法 荧光定量PCR 乙型肝炎病毒 核酸
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多参数在实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA室内质控中的应用 被引量：2
11
作者 夏吉荣 杨双双 罗志鑫 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期123-124,共2页
目的:探讨多参数室内质控方法在实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的意义。方法:以实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA,统计分析我院2012年10月至12月阳性质控品检测结果的对数值、标准曲线的斜率、截距、相关系数(r),以及系列... 目的:探讨多参数室内质控方法在实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的意义。方法:以实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA,统计分析我院2012年10月至12月阳性质控品检测结果的对数值、标准曲线的斜率、截距、相关系数(r),以及系列标准品扩增Ct值的均值(X)、标准差(s)和变异系数(cv);并以各参数结果在±3s内作为室内质控在控判断。结果:当只用阳性质控品检测结果对数值超过±3s作为质控失控判断时,本文观察时间段有两次结果失控;如以斜率、截距、相关系数和标准品扩增Ct值超过±3s作为室内质控失控判断时,这两次结果都未失控。按阳性质控品失控规则对失控的两次标本进行重新检测后前后结果都一致,说明阳性质控品结果失控是偶然误差造成,当斜率、截距、相关系数和标准品扩增Ct值都未失控时,仅有某个水平阳性质控品失控可考虑是偶然原因。结论:实时荧光定量PCR检测HBV-DNA的室内质控中,用阳性质控品检测结果的对数值,结合标准曲线的斜率、截距和相关系数,以及标准品扩增的Ct值作为室内质控的监测手段,可为HBV-DNA检测提供更可靠的结果保证。 展开更多
关键词 多参数 聚合酶链反应 乙型肝炎病毒核酸检测 室内质控
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肽核酸钳制PCR早期检测乙型肝炎病毒YMDD耐药变异 被引量：3
12
作者 张迎迎 何海棠 +1 位作者 杨洁 侯金林 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期853-856,共4页
目的建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制PCR(PNA-PCR)耐药监测方法,以提前监测乙型肝炎病毒YMDD耐药株的产生。方法选取rtM204(IATT)、rtM204V(GTG)突变型质粒与野生型质粒rtM204(ATG)按照不同比例混合后,用PNA-PCR法及直接测序法对耐药位点进... 目的建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制PCR(PNA-PCR)耐药监测方法,以提前监测乙型肝炎病毒YMDD耐药株的产生。方法选取rtM204(IATT)、rtM204V(GTG)突变型质粒与野生型质粒rtM204(ATG)按照不同比例混合后,用PNA-PCR法及直接测序法对耐药位点进行检测,评价两种方法的灵敏度及特异性;选取临床耐药检测患者血清标本85例,采用PNA-PCR法及直接测序法进行耐药检测,比较两种方法的耐药检出率。结果 PNA-PCR法可在105倍野生型YMDD基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001%,可检测到最低限为101拷贝。而直接测序法可检测的基因突变的最低极限为104拷贝,检测灵敏度为10%。85例临床耐药检测患者中,PNA-PCR法YMDD检测阳性率为85.9%(73/85∶YIDD∶40,YVDD∶23,YIDD+YVDD∶10),而PCR产物直接测序法检阳性率仅为40%(34/85∶YIDD∶21,YVDD∶11,YIDD+YVDD∶2)。阴性对照,两种方法均未测出HBV病毒,两种方法的特异性均较好。结论 PNA-PCR方法在灵敏度及特异性上均优于直接测序法,而且操作简便,快捷,在科研和临床上都有很好的应用前景。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 肽核酸钳制PCR 直接测序法
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鸭乙型肝炎病毒核酸荧光定量PCR方法的建立及应用 被引量：7
13
作者 陈压西 黄爱龙 +1 位作者 齐珍元 郭树华 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期36-38,52,共4页
目的:建立鸭乙型肝炎病毒核酸(DHBV DNA)荧光定量的方法。方法:根据DHBV DNA S基因区的序列设计扩增所需3条引物,通过偶联反应用AmpliSensor荧光信号标记半巢式引物,经过前期不对称扩增、半巢式扩增及在线检测建立DHBV DNA阳性标准品QPC... 目的:建立鸭乙型肝炎病毒核酸(DHBV DNA)荧光定量的方法。方法:根据DHBV DNA S基因区的序列设计扩增所需3条引物,通过偶联反应用AmpliSensor荧光信号标记半巢式引物,经过前期不对称扩增、半巢式扩增及在线检测建立DHBV DNA阳性标准品QPCR的标准曲线,并将70份鸭血清分别用荧光定量PCR方法和地高辛标记的DHBV DNA探针斑点杂交的方法检测,比较结果的相关性。结果:DHBV DNA阳性标准品经过30次循环后,扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测,可以看出有180bp、70bp两个片段,与设计的片段大小相符,扩增产物的浓度与标准品的起始浓度成正比,扩增指数的数值大小与该循环时已合成的扩增产物的量成正比,起始浓度的大小与要合成的一定扩增产物的量所需的循环次数成反比。用荧定量PCR方法和斑点杂交的方法检测血清中DHBV DNA的结果有良好的相关性(r=0.97,P<0.01,v=58)。结论:荧光定量PCR方法可作为检测DHBV DNA含量的一个重要手段。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 核酸 荧光定量 PCR DHBV DNA
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乙型肝炎病毒前S_1抗原及抗体的检测及临床意义 被引量：34
14
作者 刘惠珍 闵福援 +3 位作者 王健 李秀惠 黄己实 骆抗先 《首都医科大学学报》 CAS 1997年第3期246-248,共3页
用合成乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｓ１肽及其免疫抗体制备的试剂，检测１９例急性、１０３例慢性乙型肝炎患者血清中的前Ｓ１抗原和抗体。结果：前Ｓ１抗原及抗体的阳性率在急性乙型肝炎患者分别为８４．２％和８９．５％，在慢性乙型肝... 用合成乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｓ１肽及其免疫抗体制备的试剂，检测１９例急性、１０３例慢性乙型肝炎患者血清中的前Ｓ１抗原和抗体。结果：前Ｓ１抗原及抗体的阳性率在急性乙型肝炎患者分别为８４．２％和８９．５％，在慢性乙型肝炎患者分别为２５．０％和８４．２％。前Ｓ１抗原在血清学表达上与ＨＢＶＤＮＡ、ＨＢｅＡｇ的阳性符合率分别高达８９．３％和８７．５％。前Ｓ１抗体与抗ＨＢｓ在体内有明显相伴随关系。提示：前Ｓ１蛋白是ＨＢＶ在体内复制的可靠标志，而前Ｓ１抗体反映疾病的恢复和病毒的清除。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 前S1抗原 抗体 检测
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计算机辅助乙型肝炎病毒标志物检测系统的建立 被引量：5
15
作者 吴淑梅 雷长海 +6 位作者 张乐平 朱志年 张乐之 孙巍巍 郭品娥 徐玉莲 沈茜 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期594-594,共1页
关键词 乙型肝炎病毒标志物检测系统 计算机系统 免疫酶技术 乙型肝炎病毒 检测
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基于核酸适体LYGV1c的酶联吸附法检测石斑鱼虹彩病毒感染 被引量：2
16
作者 刘明珠 黄静 +9 位作者 程远 韦云依 牟容丽 黄琳 竺利波 陆兰天 柯珂 陈嘉 余庆 李鹏飞 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1-8,共8页
【目的】利用核酸适体LYGV1c构建可快速、准确识别石斑鱼虹彩病毒(Grouper iridovirus Guangxi strain,SGIV-Gx)感染的酶联吸附法(Aptamer LYGV1c-based enzyme-linked apta-sorbent assay,LYGV1c-ELASA),为提高水产疫病检测及防控效率... 【目的】利用核酸适体LYGV1c构建可快速、准确识别石斑鱼虹彩病毒(Grouper iridovirus Guangxi strain,SGIV-Gx)感染的酶联吸附法(Aptamer LYGV1c-based enzyme-linked apta-sorbent assay,LYGV1c-ELASA),为提高水产疫病检测及防控效率提供理论支持。【方法】基于生物素标记的LYGV1c(Bio-LYGV1c)开发核酸适体酶联吸附法(LYGV1c-ELASA)检测SGIV-Gx,通过对Bio-LYGV1c特异性、灵敏性、稳定性等实验评估其检测性能。通过珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂)SGIV-Gx感染试验进行活体验证,同时用荧光定量PCR(qPCR)测定衣壳蛋白基因(MCP)的表达,与LYGV1c-ELASA进行比较,验证该酶联吸附法检测的可信度。【结果】LYGV1c-ELASA的方法可特异性地识别SGIV的感染,Bio-LYGV1c识别SGIV感染的最适工作浓度为500 nmol/L,最适孵育时间为20 min,最适结合温度为4~28℃,LYGV1c-ELASA最低检测限为5×103 mL-1。活体验证结果表明,随着注射的SGIV-Gx浓度的升高,LYGV1c-ELASA检测出的石斑鱼体内病毒450 nm处的光密度(OD450)的值升高;qPCR结果表明,SGIV-Gx的MCP的表达量升高,与LYGV1c-ELASA检测结果相一致。【结论】建立的LYGV1c-ELASA技术不仅可用于体外检测,同时也适用于活体检测。LYGV1c-ELASA技术可实现对石斑鱼养殖过程中石斑鱼虹彩病毒病的快速诊断、实时监控。 展开更多
关键词 石斑鱼虹彩病毒 检测 核酸适体 酶联吸附法
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PCR产物直接测序检测乙型肝炎病毒耐药变异位点 被引量：9
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作者 孔令和 高素香 +3 位作者 柯云霞 杨剑 雷桂萍 史国香 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期277-279,共3页
目的研究采用PCR产物直接测序技术在乙型肝炎病毒(HBV)耐药变异位点检测的特异性和实用性。方法 166例经过核苷类似物治疗至少2年以上的慢性乙肝患者,提取血清HBVDNA,采用巢式PCR扩增,将所得的PCR产物进行琼脂糖电泳检测,阳性PCR产物直... 目的研究采用PCR产物直接测序技术在乙型肝炎病毒(HBV)耐药变异位点检测的特异性和实用性。方法 166例经过核苷类似物治疗至少2年以上的慢性乙肝患者,提取血清HBVDNA,采用巢式PCR扩增,将所得的PCR产物进行琼脂糖电泳检测,阳性PCR产物直接测序。对测序成功的样本进行耐药变异分析。结果 166例中有120例HBV DNA扩增电泳产物阳性,测序确定基因耐药变异位点有40例(24.1%,40/166);其具体分布为:L180M和M204V/I均变异17例(42.5%,17/40)、M204V/I变异lO例(25%,10/40)、N236T变异8例(20%,8/40)、L180M变异3例(7.5%,3/40)、A181V/T变异1例(2.5%,1/40)、A181V/T和N236T变异1例(2.5%,1/40)。120例患者测序确定基因耐药未测出变异位点有80例(66.66%,60/120)例。结论本院核苷类似物治疗2年以上患者,控制病毒疗效并不佳,有24%患者出现基因耐药。PCR产物直接测序法是目前检测HBV耐药变异的一种较好的方法,可用于专科医院临床检测。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 耐药突变 测序检测
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乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中HBVDNA的原位检测 被引量：21
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作者 王素霞 邹万忠 张波 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期132-135,共4页
目的 :检测HBVDNA在乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中的分布 ,探讨乙型肝炎病毒相关肾炎的发病机制。方法 :应用针对HBV全基因组的DNA探针进行原位杂交及原位PCR研究 ,对 45例肾炎病人肾组织中的HBVDNA进行检测。结果 :肾组织HBV抗原阳性... 目的 :检测HBVDNA在乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中的分布 ,探讨乙型肝炎病毒相关肾炎的发病机制。方法 :应用针对HBV全基因组的DNA探针进行原位杂交及原位PCR研究 ,对 45例肾炎病人肾组织中的HBVDNA进行检测。结果 :肾组织HBV抗原阳性的 38例标本中 ,肾组织HBVDNA的检出率为 71% (2 7/38) ;其中 ,HBV相关肾炎HBVDNA的阳性率为 73% (19/2 6 ) ,IgA肾病及狼疮肾炎伴HBV抗原沉积病例HBVDNA的阳性率为 6 7% (8/12 )。原位杂交显示HBVDNA以肾小管上皮细胞胞浆分布为主 ;原位PCR方法可使阳性信号增强 ,并可见HBVDNA在部分肾小管细胞胞核、肾小球上皮细胞及系膜细胞的胞核和胞浆以及肾小球基底膜内均有分布。结论 :HBV在肾组织内存在感染及复制 ,其在乙型肝炎病毒相关性肾炎的发病机制中具有重要作用。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒相关性肾炎 肾组织 HBV-DNA 原位检测
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乙型肝炎病毒核心抗原核酸疫苗对猕猴的体液免疫原性观察 被引量：5
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作者 黄祖瑚 庄辉 +4 位作者 卢山 朱万孚 蔡洁 郭人花 朱永红 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第1期69-69,共1页
关键词 乙型肝炎病毒 核酸疫苗 体液免疫原理
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基于闭合哑铃介导等温扩增可视化检测大豆花叶病毒SC15方法的建立及应用
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作者 殷丛丛 李睿琦 +5 位作者 岳霈尧 李晨 牛景萍 赵晋忠 杜维俊 岳爱琴 《作物学报》 北大核心 2025年第5期1248-1260,共13页
大豆花叶病是一种由大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)引起的最为普遍和严重的全球性大豆病害,可导致大豆产量和种子品质大幅降低,我国大豆产区均受其影响。在我国, SMV被划分为22个株系(SC1~SC22),其中SMV-SC15毒性最强。但是,... 大豆花叶病是一种由大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)引起的最为普遍和严重的全球性大豆病害,可导致大豆产量和种子品质大幅降低,我国大豆产区均受其影响。在我国, SMV被划分为22个株系(SC1~SC22),其中SMV-SC15毒性最强。但是,目前尚无有效的早期诊断方法,本研究基于闭合哑铃介导等温扩增(closeddumbbell mediated isothermal amplification, CDA),建立了一种可视化快速检测SMV-SC15的方法,实现了对SC15的高效特异检测与鉴定。根据SMV不同株系CP基因组序列的多态性设计了CDA方法的引物对(MF/MR),建立并优化了检测SMV-SC15的反应体系,确定了最佳反应条件:反应温度63℃、Bst DNA聚合酶用量4.8 U以及引物浓度0.6μmol L^(-1)。以溴百里酚蓝(BTB)和SYBR Green Ⅰ为指示剂实现了检测结果的可视化。对比分析CDA体系和加环引物CDA体系(L-CDA)检测SMV-SC15的稳定性、特异性和灵敏度发现, L-CDA体系实时荧光扩增曲线达到阈值的时间比CDA缩短5~6 min,其最低检出浓度低至1×10^(–4) ngμL^(-1),灵敏度为CDA体系的10倍。本研究通过L-CDA体系检测了200份不同品种的田间大豆叶片样本,显色结果对应于RT-qPCR检测的Ct值约为32,其灵敏度和特异性分别为100%和96.3%。 展开更多
关键词 大豆花叶病毒 可视化检测 闭合哑铃介导等温扩增 核酸检测 体系优化
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