基于乙型肝炎病毒核心蛋白的颗粒性肽展示载体的构建 被引量：2

1

作者 杨海杰 陈敏 +5 位作者 何水珍 程通 顾颖 管保全 张军 夏宁邵 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期436-440,共5页

为提高HBVpreS1aa21 47的免疫原性,将1～6拷贝的preS1(21 47)片段以串联方式插入HBcAg的aa78和aa82之间,在大肠杆菌中进行表达和纯化.携带1～3拷贝的重组抗原CI、CII和CIII的表达产量约占菌体总蛋白的20%,而携带4～6拷贝的重组抗原则未... 为提高HBVpreS1aa21 47的免疫原性,将1～6拷贝的preS1(21 47)片段以串联方式插入HBcAg的aa78和aa82之间,在大肠杆菌中进行表达和纯化.携带1～3拷贝的重组抗原CI、CII和CIII的表达产量约占菌体总蛋白的20%,而携带4～6拷贝的重组抗原则未见明显表达.电镜检测显示重组抗原CI、CII和CIII可以形成形态与HBcAg类似的类病毒颗粒,颗粒直径在30～34nm之间.ELISA分析显示这3种VLP抗原具有很强的preS1抗原的免疫反应性,而对HBc单克隆抗体则基本失去反应性.提示外源多肽pre(21 47)可被有效地递呈至类HBc颗粒的表面,且外源多肽的插入使HBc主要的免疫优势表位遭到了破坏.这些证据表明利用HBcAg的专一性呈递能力来构建多价抗原可作为免疫原设计时的一种策略. 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 核心蛋白 颗粒性肽 展示载体 preSl 免疫原性 类病毒颗粒 原核表达

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截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白原核表达、多克隆抗体的制备和鉴定 被引量：2

2

作者 王超 田拥军 +5 位作者 张娥娟 吴洪坤 刘嘉 王宝菊 赵西平 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期467-470,共4页

目的：构建截短型鸭乙型肝炎病毒（DHBV）核心蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，制备多克隆抗体。方法：应用基因工程技术将编码截短型DHBV核心蛋白（DH-BcAg 1～214aa）的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内，在宿主菌Rosetta（... 目的：构建截短型鸭乙型肝炎病毒（DHBV）核心蛋白的原核表达质粒并在大肠杆菌中表达，制备多克隆抗体。方法：应用基因工程技术将编码截短型DHBV核心蛋白（DH-BcAg 1～214aa）的基因片段装入原核表达载体pRSET-B内，在宿主菌Rosetta（DE3）pLacI内进行诱导表达，运用Ni-NTA方法纯化目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BALB／c小鼠制备多克隆抗体，并采用酶联免疫吸附实验（ELISA），Western blot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性。结果：成功地构建了含截短型DHBV核心区基因的质粒，并纯化得到了相对分子质量（Mr）约为28000的目的蛋白，用之免疫BALB／c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论：获得的重组截短型DHBV核心抗原纯度高，免疫反应性强；获得的多克隆抗体有较高的效价和较好的特异性，为DHBV的检测和研究奠定了实验基础。 展开更多

关键词 鸭乙型肝炎病毒 核心蛋白 原核表达载体 多克隆抗体

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乙型肝炎病毒核心蛋白变构调节剂的作用机理及临床研发和应用前景 被引量：2

3

作者 刘慧 鲁凤民 郭巨涛 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2022年第8期1726-1732,共7页

HBV感染是导致慢性肝炎的主要致病因素,若不及时、有效地规范治疗,将有进一步发展为肝硬化、肝细胞癌等终末期肝病的风险。临床现有的两类抗病毒药物皆无法彻底抑制病毒复制和清除病毒转录模板,即感染肝细胞内长期存在的共价闭合环状DNA... HBV感染是导致慢性肝炎的主要致病因素,若不及时、有效地规范治疗,将有进一步发展为肝硬化、肝细胞癌等终末期肝病的风险。临床现有的两类抗病毒药物皆无法彻底抑制病毒复制和清除病毒转录模板,即感染肝细胞内长期存在的共价闭合环状DNA(cccDNA),因而,慢性乙型肝炎患者需长期甚至终身服药。因此,研发新型抗HBV药物显得尤为重要。核心蛋白变构调节剂(CpAM)是一类新型抗HBV药物,其干扰HBV核衣壳装配过程,并对成熟核衣壳解聚、cccDNA形成和HBeAg的产生及分泌发挥抑制作用。因其广泛作用于病毒复制的多个环节,具备较大的应用潜力。本文主要阐述CpAM靶蛋白-核心蛋白的功能、CpAM分类、作用靶点及抗HBV机理、CpAM临床试验现状及进一步研发和应用前景。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 核心蛋白变构调节剂 临床试验

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截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

4

作者 王超 田拥军 +5 位作者 龚劲松 张娥娟 刘嘉 王宝菊 赵西平 杨东亮 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期740-742,共3页

目的:制备能与鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHB-cAg)特异性结合的单克隆抗体(mAb),使之能特异性地对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)进行检测。方法:以原核表达的截短型鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg1-214)免疫BALB/c小鼠后常规杂交瘤技术进行细胞融... 目的:制备能与鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHB-cAg)特异性结合的单克隆抗体(mAb),使之能特异性地对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)进行检测。方法:以原核表达的截短型鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg1-214)免疫BALB/c小鼠后常规杂交瘤技术进行细胞融合,有限稀释法克隆化,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组织化学(IHC)筛选、鉴定。结果:筛选出3株(3H4、4A11、5A12)能有效分泌抗鸭乙肝病毒核心抗原的杂交瘤细胞株。该mAb可用于ELISA、IHC和Westernblot研究。结论:获得了3株有效分泌抗核心抗原的mAb,可用于鸭乙肝病毒相关肝病组织与血清的检测。 展开更多

关键词 鸭乙型肝炎病毒 核心蛋白 单克隆抗体

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基因表达谱芯片技术筛选乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白基因C1反式调节基因

5

作者 蔺淑梅 成军 +3 位作者 杨媛 刘敏 张黎颖 郭江 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期126-129,共4页

目的对未知功能基因C1转染人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)后的基因表达谱进行分析,探索该基因的表达对肝细胞基因表达谱的影响及其可能的调节功能线索。方法以分子生物学技术构建C1的真核表达载体pcDNA3.1(-)-C1,以表达质粒pcDNA3.1(-)-C1转... 目的对未知功能基因C1转染人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)后的基因表达谱进行分析,探索该基因的表达对肝细胞基因表达谱的影响及其可能的调节功能线索。方法以分子生物学技术构建C1的真核表达载体pcDNA3.1(-)-C1,以表达质粒pcDNA3.1(-)-C1转染HepG2细胞,空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA,逆转录为cDNA。应用基因表达谱芯片技术对差异表达的mRNA进行检测和分析。结果HepG2细胞经转染C1表达质粒后,有26条差异表达基因,其中24条基因表达水平下调,2条基因表达水平上调。这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、细胞增生分化及肿瘤的发生密切相关。结论应用基因表达谱芯片成功筛选了C1转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明C1蛋白可能的生物学功能及乙型肝炎病毒核心蛋白的致病机制提供了理论依据。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 核心蛋白 反式激活基因 基因表达谱芯片

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利用杆状病毒表达载体系统表达重组乙型肝炎病毒核心蛋白 被引量：2

6

作者 高琳琳 王晓燕 +4 位作者 张颖慧 李岩 邓菲 张艳芳 林菊生 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期787-790,共4页

目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白。方法构建含有HBV C基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual-HBV core,转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9,获得含有HBV C基因的重组杆状病毒... 目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白。方法构建含有HBV C基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual-HBV core,转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9,获得含有HBV C基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染Sf9细胞进行乙型肝炎病毒核心蛋白表达,然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达情况。结果成功构建了含HBV C基因的重组杆状病毒,而且在昆虫细胞Sf9中表达了乙型肝炎病毒核心蛋白。结论利用Bac to Bac杆状病毒表达系统,成功地表达了乙型肝炎病毒核心蛋白,为进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒核心蛋白 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞

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乙型肝炎病毒蛋白对纤维介素基因的激活作用 被引量：6

7

作者 韩梅芳 习东 +1 位作者 罗小平 宁琴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期49-54,共6页

纤维介素基因(fgl2)在人和小鼠的重型肝炎的发病机制中发挥重要作用.为探讨乙型肝炎病毒(HBV)编码蛋白对人纤维介素基因(hfgl2)的激活作用,构建了HBV编码蛋白C、S和X的真核表达质粒pcDNA-HBc、pcDNA-HBs和pcDNA-HBx,分别与hfgl2启动子... 纤维介素基因(fgl2)在人和小鼠的重型肝炎的发病机制中发挥重要作用.为探讨乙型肝炎病毒(HBV)编码蛋白对人纤维介素基因(hfgl2)的激活作用,构建了HBV编码蛋白C、S和X的真核表达质粒pcDNA-HBc、pcDNA-HBs和pcDNA-HBx,分别与hfgl2启动子荧光素酶报告基因质粒及β半乳糖苷酶基因质粒(-βGal)共转染到CHO细胞和HepG2细胞,采用免疫组织化学和免疫印记方法(Western blotting)鉴定病毒蛋白的表达.通过检测报告基因荧光素酶(LUC)及β半乳糖苷酶的表达活性,反映病毒蛋白对hfgl2启动子的转录激活作用.结果显示,转染了真核表达质粒的细胞均能瞬时表达相应的肝炎病毒蛋白,在CHO细胞,转染pcDNA-HBc组和pcDNA-HBx组相对荧光素酶的活性是对照组的5.4和6倍,在hepG2细胞,转染pcDNA-HBc组和pcDNA-HBx组相对荧光素酶的活性是对照组的8.7和11倍.研究表明,CHO和HepG2细胞中表达的HBV C蛋白和X蛋白均具有激活hfgl2的功能,而S蛋白则不能激活.进一步揭示了HBV病毒蛋白与宿主基因的相互作用机制. 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 核心(C)蛋白 X蛋白 人纤维介素基因(hfgl2) 基因调控

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乙型肝炎病毒C蛋白和X蛋白的修饰及其意义 被引量：2

8

作者 钱冠华 段昌柱 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期30-33,37,共5页

乙型肝炎病毒(HBV)作为一个外来入侵的病毒可以激发人体的免疫反应,导致人体一系列与HBV感染有关的病理变化与临床表现。HBC和HBX是由HBV基因编码的两种重要蛋白。HBC对病毒基因组的复制和成熟是必不可少的,其蛋白修饰后的产物对病毒在... 乙型肝炎病毒(HBV)作为一个外来入侵的病毒可以激发人体的免疫反应,导致人体一系列与HBV感染有关的病理变化与临床表现。HBC和HBX是由HBV基因编码的两种重要蛋白。HBC对病毒基因组的复制和成熟是必不可少的,其蛋白修饰后的产物对病毒在宿主细胞内的组装、成熟和对外分泌中发挥着作用。HBX能与多种蛋白发生相互作用,在HBV的复制中起着不可或缺的作用,也影响着肝细胞癌的形成。现有的对HBC和HBX的磷酸化和泛素化过程的研究,为进一步揭示HBV的致病机制提供了依据,希望最终为乙型肝炎的临床治疗寻找一条新的途径。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒核心蛋白 乙型肝炎病毒X蛋白 磷酸化 泛素化

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中度病毒载量的慢性乙型肝炎患者高水平乙型肝炎核心相关抗原与肝细胞癌风险增加相关 被引量：2

9

作者 马苓 牛俊奇 +2 位作者 TSENG TC LIU CJ HSU CY 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2020年第2期376-376,共1页

【据《Gastroenterology》2019 年8 月报道】题:在中度病毒载量的慢性乙型肝炎患者中,高水平的乙型肝炎核心相关抗原与肝细胞癌风险增加相关(作者Tseng TC 等)慢性HBV 感染是肝细胞癌(HCC)的危险因素。血清乙型肝炎核心相关抗原(HBcrAg... 【据《Gastroenterology》2019 年8 月报道】题:在中度病毒载量的慢性乙型肝炎患者中,高水平的乙型肝炎核心相关抗原与肝细胞癌风险增加相关(作者Tseng TC 等)慢性HBV 感染是肝细胞癌(HCC)的危险因素。血清乙型肝炎核心相关抗原(HBcrAg)水平与HBV 复制有关。来自国立台湾大学医院的Tseng 等调查了HBcrAg 水平是否与HCC 进展有关,特别是在不需要抗病毒治疗的患者中。 展开更多

关键词 乙型肝炎核心相关抗原 慢性乙型肝炎患者 病毒载量 台湾大学 危险因素 抗病毒治疗 hbc

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HBV病毒复制机制及慢性乙型肝炎药物靶点 被引量：31

10

作者 赫晓林 黄建炜 +1 位作者 许瑞安 崔秀灵 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期152-156,共5页

乙型肝炎病毒(HBV)感染是一种严重影响公共卫生与人体健康的全球性流行性疾病,尽管乙肝防治已有很大提高,但仍缺乏高效的药物与手段。研究表明,肝损伤、肝衰竭程度与HBV及宿主免疫系统相互作用存在复杂关系。因而详细地探明HBV生命周期... 乙型肝炎病毒(HBV)感染是一种严重影响公共卫生与人体健康的全球性流行性疾病,尽管乙肝防治已有很大提高,但仍缺乏高效的药物与手段。研究表明,肝损伤、肝衰竭程度与HBV及宿主免疫系统相互作用存在复杂关系。因而详细地探明HBV生命周期和感染过程,为研究HBV药物靶点和制定新的抗病毒策略提供前期坚实的基础,意义重大。该文详细介绍HBV病毒复制机制,并系统地阐述近年来新发现的和潜在的药物靶点,为制备新型的抗HBV药物提供参考。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 病毒复制 作用靶点 装配 NTPC 核心蛋白

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HBV核心蛋白突变体L60V重组质粒的构建及其应用于IFN-α抗病毒机制 被引量：3

11

作者 孙蓓蓓 管世鹤 +3 位作者 王爱华 杨凯 潘颖 吴园园 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第2期181-185,共5页

目的构建乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)突变体L60V重组质粒,并探讨L60V拮抗α干扰素(IFN-α)抗病毒活性的机制。方法构建HBc突变体融合表达载体pEGFPL60V,转染人肝胚瘤细胞株HepG2细胞,荧光显微镜及Western blot法检测其在细胞中的表达;并... 目的构建乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)突变体L60V重组质粒,并探讨L60V拮抗α干扰素(IFN-α)抗病毒活性的机制。方法构建HBc突变体融合表达载体pEGFPL60V,转染人肝胚瘤细胞株HepG2细胞,荧光显微镜及Western blot法检测其在细胞中的表达;并以RT-PCR及Western blot法检测JAK-STAT信号转导途径分子及抗病毒蛋白表达。结果经酶切和测序分析,成功构建HBc突变体L60V重组质粒;将L60V和HBc野生株表达质粒(pEGFP-WT)分别转染HepG2细胞后,以1 000 IU/ml IFN-α处理,转染L60V和HBc野生株表达质粒的细胞内抗黏液病毒A(MxA)及JAK-STAT信号转导途径分子STAT1、STAT2、IRF9表达减少,其中在转染pEGFP-L60V细胞内的MxA、STAT1、STAT2和IRF9表达显著减少。结论 HBc突变体L60V可能通过JAK-STAT信号转导途径抑制抗病毒蛋白MxA的表达来拮抗IFN-α的抗病毒作用;其拮抗IFN-α抗病毒作用比HBc更显著。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 核心蛋白 HEPG2细胞 IFN-Α IFN-Α

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乙肝病毒核心蛋白的结构及其去功能化在乙肝抗病毒治疗中的应用

12

作者 刘雪妮 潘庆春 +1 位作者 臧国庆 余永胜 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2010年第10期1170-1173,共4页

核心蛋白由乙型肝炎病毒(HBV)c基因编码,可包被前基因组mRNA形成核衣壳,在HBV复制中发挥着关键作用。通过如RNA干扰、抗核心蛋白抗体及构建核心蛋白突变体等方式实现其去功能化,可阻断核衣壳形成,达到抑制HBV复制的目的,可作为乙肝抗病... 核心蛋白由乙型肝炎病毒(HBV)c基因编码,可包被前基因组mRNA形成核衣壳,在HBV复制中发挥着关键作用。通过如RNA干扰、抗核心蛋白抗体及构建核心蛋白突变体等方式实现其去功能化,可阻断核衣壳形成,达到抑制HBV复制的目的,可作为乙肝抗病毒治疗的一个新靶点。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 核心蛋白 核壳体 去功能化

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从FDA批准药物库中筛选影响乙型肝炎病毒核衣壳形成的药物的初步研究

13

作者 袁怡 李治颖 +2 位作者 魏霞飞 沈静 胡接力 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1059-1064,共6页

目的从FDA已批准的药物库中,筛选可以干扰乙肝病毒核衣壳形成的药物。方法利用细胞模型SRluc-HBc6,通过分段荧光素酶互补实验来指示二聚体的形成,筛选靶向HBV核心蛋白二聚体形成的药物;对初筛出来的候选化合物,用颗粒凝胶电泳分析法鉴... 目的从FDA已批准的药物库中,筛选可以干扰乙肝病毒核衣壳形成的药物。方法利用细胞模型SRluc-HBc6,通过分段荧光素酶互补实验来指示二聚体的形成,筛选靶向HBV核心蛋白二聚体形成的药物;对初筛出来的候选化合物,用颗粒凝胶电泳分析法鉴定其对HBV核衣壳形成的影响;用Southern blot方法鉴定候选药物对HBV DNA复制的影响。结果利用SRluc-HBc6细胞模型筛选了FDA批准的1 434种药物,第1轮筛选鉴定到5种药物:苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、克拉屈滨(Cladribine)、亚甲蓝(Methylene Blue)、索拉菲尼(Sorafenib)、瑞格菲尼(Regorafenib);进一步测试发现,苯丁酸氮芥可以减少HBV核心蛋白和核衣壳的形成,抑制HepAD38细胞中HBV DNA的复制。结论苯丁酸氮芥通过减少HBV核心二聚体和衣壳的形成来抑制HBV DNA的复制。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 核心蛋白 二聚体 苯丁酸氮芥

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乙型肝炎表面抗原阳性供肝肝移植的临床疗效分析 被引量：2

14

作者 刘荣强 张英才 +7 位作者 姚嘉 邓宜南 朱曙光 杨卿 唐晖 汪国营 杨扬 陈规划 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第6期450-454,471,共6页

目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)阳性供肝在成人肝移植应用的临床疗效。方法回顾性分析2012年7月至2015年10月28例接受HBs Ag阳性供肝肝移植的乙型病毒性肝炎(乙肝)相关性肝病受者的临床疗效,总结受者预后、并发症发生情况,了解血清HB... 目的探讨乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)阳性供肝在成人肝移植应用的临床疗效。方法回顾性分析2012年7月至2015年10月28例接受HBs Ag阳性供肝肝移植的乙型病毒性肝炎(乙肝)相关性肝病受者的临床疗效,总结受者预后、并发症发生情况,了解血清HBs Ag及乙型肝炎病毒(HBV)DNA变化特点。结果 28例受者术后单药口服恩替卡韦预防乙肝复发。围手术期死亡2例,分别死于脓毒症和急性心力衰竭,2例随访期内因肝细胞癌(肝癌)复发死亡。另24例受者随访12~26个月,随访期间血清HBs Ag持续阳性,经治疗HBV DNA滴度逐月下降,至术后12个月受者HBV DNA<1×102 copies/m L。24例存活受者均未发生因乙肝复发导致的移植物失功。结论作为边缘供肝,HBs Ag阳性供肝可安全用于乙肝相关性肝病的肝移植受者,术后需加强抗HBV治疗并密切随访。 展开更多

关键词 肝移植 乙型肝炎表面抗原 阳性 边缘供肝 终末期肝病 乙型肝炎核心抗体 乙型肝炎病毒 核苷类似物 乙型肝炎人免疫球蛋白

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金黄色葡萄球菌IsdB表位蛋白与HBc蛋白融合表达 被引量：2

15

作者 白靓 成岩 +3 位作者 徐芳菲 刘燕 张树军 曹瑞珍 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期269-274,共6页

目的:采用大肠杆菌表达HBc-IsdB50-285融合蛋白,探讨其在原核表达系统中的表达效果。方法:设计并克隆HBc-IsdB50-285融合基因片段,构建表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285,并转化入E.coli BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。SDS-P... 目的:采用大肠杆菌表达HBc-IsdB50-285融合蛋白,探讨其在原核表达系统中的表达效果。方法:设计并克隆HBc-IsdB50-285融合基因片段,构建表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285,并转化入E.coli BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。SDS-PAGE分析蛋白可溶性及相对分子质量;BCA法测蛋白浓度;采用免疫接种法检测重组蛋白的免疫活性。40只小鼠随机分为rIsdB+adjuvant组、HBc-IsdB50-285+adjuvant组、HBcIsdB50-285组和PBS组,每组10只,间接ELISA法检测小鼠特异性IgG效价值,采用金黄色葡萄球菌Newman株对免疫后小鼠攻毒,检测各组小鼠重组蛋白免疫保护效果。结果:表达质粒pET-28-HBc-IsdB50-285经测序及酶切鉴定证明构建正确;SDS-PAGE分析,重组蛋白以部分可溶形式存在于培养上清中,相对分子质量约为44 000,亲和纯化后蛋白质水平为1.0g·L-1。ELISA检测,使用rIsdB蛋白包被酶标板,HBc-IsdB50-285+adjuvan组小鼠血清特异性抗体滴度的效价值低于rIsdB+adjuvant组(P<0.01);使用HBc-IsdB50-285蛋白包被酶标板,HBc-IsdB50-285+adjuvant组的小鼠血清特异性抗体滴度的效价值高于rIsdB+adjuvant和HBc-IsdB50-285组。攻毒实验,HBc-IsdB50-285+adjuvant组小鼠对金黄色葡萄球菌免疫保护率低于rIsdB+adjuvant组,但差异无统计学意义(P>0.05);且其与HBc-IsdB50-285未添加佐剂组比较差异也无统计学意义(P>0.05);与PBS组比较,HBc-IsdB50-285+adjuvant组小鼠对金黄色葡萄球免疫保护率升高(P<0.01),HBc-IsdB50-285组小鼠对金黄色葡萄球菌攻毒保护率亦升高(P<0.05)。结论:HBc-IsdB50-285原核表达载体构建成功;在大肠杆菌中成功表达具有较好生物活性的HBc-IsdB50-285融合蛋白。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 乙型肝炎病毒核心蛋白 铁调节表面决定因子B 表位

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TGFβ1-(78-109)-HBc融合蛋白的原核表达 被引量：2

16

作者 郝志明 罗金燕 +1 位作者 王全颖 杨广笑 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期105-108,共4页

目的　应用基因工程技术制备TGFβ1 (78- 10 9) HBc融合蛋白 ,作为TGFβ1疫苗 ,用于抗纤维化研究。方法　合成TGFβ1 (78- 10 9)编码区DNA ,连接于质粒载体 ,再在其下游连接HBc编码区 ,测序证实后 ,进行原核表达 ,表达产物以SDS PAGE、... 目的　应用基因工程技术制备TGFβ1 (78- 10 9) HBc融合蛋白 ,作为TGFβ1疫苗 ,用于抗纤维化研究。方法　合成TGFβ1 (78- 10 9)编码区DNA ,连接于质粒载体 ,再在其下游连接HBc编码区 ,测序证实后 ,进行原核表达 ,表达产物以SDS PAGE、ELISA等方法鉴定。结果　经DNA序列分析证实融合基因序列完全正确 ,SDS PAGE证实原核表达产物相对分子质量为 2 5kD ,ELISA检测证实TGFβ1 (78- 10 9)和HBc的抗原表位均可正确暴露。结论　本研究成功构建了TGFβ1 (78- 10 9) HBc融合基因 ,进行了原核表达 ,并初步证实了表达产物的抗原性 。 展开更多

关键词 TGFΒ1 hbc 融合蛋白 原核表达 转化生长因子Β1 乙型肝炎病毒核心抗原

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慢性乙肝患者HBV核心蛋白启动子变异的初步研究

17

作者 邓红 成军 +1 位作者 董菁 皇甫竞坤 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期199-201,214,共4页

目的　通过对乙型肝炎病毒 (HBV)基本核心基因启动子 (BCP)变异的研究 ,阐明HBV准种在慢性感染者中存在的意义。方法　以中国株HBV基因序列为依据 ,设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 4 0例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV的BCP基因 ... 目的　通过对乙型肝炎病毒 (HBV)基本核心基因启动子 (BCP)变异的研究 ,阐明HBV准种在慢性感染者中存在的意义。方法　以中国株HBV基因序列为依据 ,设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 4 0例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV的BCP基因 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)技术展示缺失突变 ,DNA测序确定病毒的变异程度。结果　聚丙烯酰胺凝胶电泳结果发现 ,6 0 % (2 4 / 4 0 )患者血清中可见 2～ 3条扩增条带 ;测序结果发现BCP区存在多种突变形式 :点突变中以 14 0nt(T→C)最为常见 ,缺失突变多见于TA1,TA2及TA3,多表现为 8bp和 2 0bp的缺失。 结论　HBVBCP区内有一缺失高变区 ,并在患者体内存有多种变异形式 ;TA1,TA2和TA3的变异可能影响e抗原的表达。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎病毒 基本核心蛋白启动子 聚丙烯酰胺凝胶电泳 基因突变 基因序列

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APOBEC3A-HBc融合蛋白的表达及活性鉴定

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作者 杜娟 成珊 +2 位作者 白换换 纪奇峰 郭晏海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1521-1528,共8页

目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)与不同长度和序列的乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)的融合蛋白真核表达载体,研究其表达能力及融合蛋白的细胞内定位及胞嘧啶脱氨基活性。方法采用In-Fusion重组克隆方法,将含有APOBEC3A的... 目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)与不同长度和序列的乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)的融合蛋白真核表达载体,研究其表达能力及融合蛋白的细胞内定位及胞嘧啶脱氨基活性。方法采用In-Fusion重组克隆方法,将含有APOBEC3A的PCR产物分别和含有全长HBc、四种C端截短体HBc的PCR扩增片段连接克隆入真核表达载体pc DNA3.0。将重组载体分别转染HEK293 T细胞,用免疫荧光细胞化学染色法检测融合蛋白在HEK293 T细胞中的定位,Western blot法检测融合蛋白的表达水平;尿素变性PAGE法分析融合蛋白的胞嘧啶脱氨基活性。结果构建的五种融合蛋白表达载体,可在HEK293T细胞中表达五种融合蛋白,4种含HBc截短体编码的融合蛋白表达载体比含全长HBc编码的融合蛋白载体的表达能力强;含全长HBc的融合蛋白APOBEC3A-HBc主要定位于细胞质,而含HBc截短体的融合蛋白APOBEC3AHBc144 S、APOBEC3 A-HBc144 E、APOBEC3 A-HBc144 AAA和APOBEC3 A-HBc144 A均主要定位于细胞核中;HBc截短体融合蛋白的胞嘧啶脱氨基活性高于全长HBc融合蛋白。结论成功构建APOBEC3A与不同长度和序列HBc的融合蛋白真核表达载体,APOBEC3A与全长HBc及截短体HBc的融合蛋白在表达能力、细胞内定位以及胞嘧啶脱氨基活性具有明显差异。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒核心蛋白(hbc) 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A) 脱氨基活性

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丙型肝炎病毒的结构

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作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第3期15-15,共1页

Chiron公司发表的是相当于"丙型肝炎病毒"的10kb的全基因中的3/4的部分,而且是专利申请的变则.在没有发表的残留的1/4中包括用于研制疫苗和中和抗体的核心蛋白和外壳蛋白区段.从上述角度引起世界研究者的注目.自治医科大学预... Chiron公司发表的是相当于"丙型肝炎病毒"的10kb的全基因中的3/4的部分,而且是专利申请的变则.在没有发表的残留的1/4中包括用于研制疫苗和中和抗体的核心蛋白和外壳蛋白区段.从上述角度引起世界研究者的注目.自治医科大学预防生态学讲师冈本宏明从Chiron公司发表的基因中制备出24个以上引物片段,以通过各种标记确认存在非甲非乙型肝炎病毒的血清样品(命名为HCJ1、HCJ4) 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 自治医科大学 聚合酶链反应 中和抗体 外壳蛋白 专利申请 非甲非乙型肝炎 核心蛋白 血清样品 免疫试剂

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重组HBcAg激活p38MAPK信号通路增加髓源性树突状细胞IL-15的分泌 被引量：4

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作者 张鑫 周振华 +3 位作者 李曼 高亚婷 孙学华 高月求 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期289-294,共6页

目的探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制。方法采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF... 目的探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制。方法采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导分化为mDC,10μg/m L rhHBcAg刺激mDC 1~6 d;分别用25μmol/L磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002、1μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂SB203580、100 nmol/L c-Jun N末端激酶(JNK)信号通路抑制剂SP600125和150 nmol/L胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制剂U0126预处理1 h,再给予10μg/m L rhHBcAg刺激48 h。之后收集细胞和细胞培养上清,实时定量PCR检测IL-15 mRNA水平,ELISA检测IL-15蛋白水平,Western blot法检测PI3K/Akt和MAPK信号通路分子磷酸化水平。结果与rhHBcAg未刺激组比较,rhHBcAg刺激组IL-15 mRNA和蛋白水平显著升高;与rhHBcAg刺激组比较,p38抑制剂预处理组IL-15水平明显降低,但PI3K/Akt、JNK和ERK抑制剂预处理组IL-15水平未见显著性改变。结论 rhHBcAg通过p38MAPK信号通路上调外周血mDC IL-15的分泌。 展开更多

关键词 慢性乙型肝炎病毒感染 树突状细胞 乙型肝炎病毒核心抗原(hbcAg) 白细胞介素15(IL-15) p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)

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