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利用乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA构建慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型
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作者 严磊 赵婷婷 +4 位作者 王会娟 李小松 黄爱龙 谭毅 赖国旗 《四川动物》 北大核心 2015年第2期200-207,共8页
目的通过水动力法注射乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)构建C57BL/6小鼠慢性乙型肝炎病毒感染的模型。方法取29只C57BL/6小鼠,分为实验组、对照组和空白组,应用水动力法分别注射HBV cccDNA、pAAV-HBV1.2及等渗盐水,于注射后收... 目的通过水动力法注射乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)构建C57BL/6小鼠慢性乙型肝炎病毒感染的模型。方法取29只C57BL/6小鼠,分为实验组、对照组和空白组,应用水动力法分别注射HBV cccDNA、pAAV-HBV1.2及等渗盐水,于注射后收集不同时间点的血清和肝组织。利用放射免疫法检测血清样本中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg);荧光定量PCR检测血清和肝组织中HBV DNA拷贝数;免疫组织化学法检测肝组织中HBsAg和乙型肝炎病毒核心抗原(HBc Ag)的表达;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;使用SPSS 17.0对数据进行统计学分析。结果实验组HBsAg和HBeAg表达均呈现4个上升-下降曲线:HBsAg峰值分别出现在第3天、第3周、第7周和第9周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第1周、第4周和第10周。对照组HBsAg和HBeAg表达分别呈现2个或3个明显的峰:HBsAg峰值分别出现在第3天和第8周;HBeAg峰值分别出现在第1天、第3周和第10周。空白组未检测出HBsAg和HBeAg。实验组HBV DNA拷贝数高于对照组的拷贝数(P<0.01);肝组织中HBV DNA拷贝数高于同期血清中的拷贝数(P<0.01);实验组和对照组的肝组织中均有HBsAg和HBc Ag的表达;实验组与对照组出现肝脏细胞炎症、肝细胞纤维化、肝细胞坏死等病理变化,而空白组正常。结论利用水动力法向C57BL/6小鼠体内转入HBV cccDNA,成功建立了慢性乙型肝炎病毒感染的小鼠模型,与对照组比较,新建立的小鼠乙肝模型具有更高的HBV表达,动物模型为研究乙型肝炎病毒HBV cccDNA的感染及其引起肝损伤的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 HBV共价闭合环状dna 水动力法 小鼠模型
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乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究现状及进展 被引量:6
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作者 刘艳瑾 冯丽英 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第22期2084-2087,共4页
目前,乙型病毒性肝炎(乙肝)是一种不能被治愈的疾病。乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV前基因组复制的原始模板,是导致HBV持续感染的关键因素。本文参考近几年的临床与动物实验结果,就HBV cccDNA的研究现状及进展做一综述。
关键词 肝炎病毒 乙型 共价闭合环状dna 肝炎 慢性
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环介导等温扩增(LAMP)试剂盒检测石蜡包埋肝组织中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA) 被引量:1
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作者 周冬青 刘成永 +7 位作者 王骥 王春颖 张克球 刘加彬 黄海滨 候远沛 成松 王鑫 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期245-249,共5页
目的建立一种检测石蜡包埋的肝组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的新方法,并探讨其应用价值和临床意义。方法提取30例慢性HBV感染患者的石蜡包埋肝组织中的DNA,采用... 目的建立一种检测石蜡包埋的肝组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的新方法,并探讨其应用价值和临床意义。方法提取30例慢性HBV感染患者的石蜡包埋肝组织中的DNA,采用质粒安全ATP依赖性DNA酶(plasmid-safe ATP-dependent DNase,PSAD)消化,去除非cccDNA后,加入引物及Bst DNA酶进行环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),将检测结果与临床实验室资料结合并进行分析,以判断其临床应用价值。结果 30例HBV感染患者中,有17例HBV cccDNA阳性,阳性检测率56.67%。其中肝癌5例、肝硬化4例、重型乙型肝炎5例、慢性乙型肝炎(轻-中度)3例。提示肝组织HBV cccDNA阳性可能与疾病进展密切相关,与血清HBV cccDNA阳性有一定的相关性,与乙型肝炎病毒血清免疫标志物以及肝功能状况无明显相关。结论 LAMP法能检测到石蜡包埋肝组织中的HBV cccDNA,结合临床实验室资料,对判断抗病毒药物疗效及研究乙型肝炎致病机制具有一定的意义。 展开更多
关键词 环介导等温扩增(LAMP) 乙型肝炎病毒(HBV) 共价闭合环状dna(cccdna)
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肝癌患者肝组织中乙肝病毒共价闭合环状DNA表达水平及与e抗原相关性研究 被引量:3
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作者 黄瑶 罗璇 +2 位作者 陈彦猛 黄爱龙 胡源 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1430-1433,共4页
目的:定量分析乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的肝癌患者肝内共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)、DNA和血清中DNA的表达水平,并分析其与乙肝病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)状态的相互关系。方法:... 目的:定量分析乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的肝癌患者肝内共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)、DNA和血清中DNA的表达水平,并分析其与乙肝病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)状态的相互关系。方法:运用特异性荧光定量探针法检测了26例HBV感染的肝癌患者中HBV cccDNA和HBV DNA的表达水平,进一步分析这两种病毒因子在HBeAg阳性和HBeAg阴性样本中的表达差别以及与HBeAg状态的关系。结果:HBV cccDNA和HBV DNA在HBeAg阴性组的表达水平均显著低于HBeAg阳性组(P值分别为0.044和0.0214),同时,在HBeAg阴性组中,cccDNA的表达水平与DNA是显著正相关的(r=0.918,P=0.000);HBeAg阳性组中cccDNA与DNA是较弱的正相关关系,且不具有显著性(r=0.591,P=0.072)。结论:肝内cccDNA与DNA表达水平与HBeAg的状态是密切相关的,HBeAg阴性的HCC患者中病毒复制水平下降的原因主要是cccDNA水平的下降。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 肝癌 共价闭合环状dna 乙肝病毒E抗原
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体外培养细胞内乙肝病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立 被引量:2
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作者 黄荣 陈江燕 +2 位作者 胡接力 罗英英 黄爱龙 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1393-1397,共5页
目的:建立一种体外培养细胞内乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的检测方法。方法:Southern blot检测HBV复制中间体,以确认HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞是否支持HBV复制;用Hir... 目的:建立一种体外培养细胞内乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的检测方法。方法:Southern blot检测HBV复制中间体,以确认HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞是否支持HBV复制;用Hirt法分别提取细胞内的去蛋白DNA(protein-free DNA,PF DNA),经加热变性处理,EcoRⅠ酶切,然后用Southern blot检测HBV cccDNA;用同样方法检测不同培养时间的HepAD38细胞内cccDNA,观察培养时间对cccDNA积累量的影响。结果:用Southern blot可在HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞中检测到HBV复制中间体;Hirt法提取物经变性和酶切处理,可有效地将cccDNA与其他形式HBV DNA区分开;HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞内均可检测到HBV cccDNA;HepAD38细胞在铺满后继续培养的时间较长时,其细胞内cccDNA的量较多。结论:成功建立了体外培养细胞内HBV cccDNA检测方法,该方法结合Hirt提取法和地高辛探针Southern blot方法,能可靠、准确地检测HBV cccDNA。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 共价闭合环状dna SOUTHERN BLOT
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乙型肝炎病毒感染相关性肝癌中HBV cccDNA水平与突变关系的研究 被引量:15
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作者 罗璇 黄瑶 +2 位作者 陈彦猛 黄爱龙 胡源 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期552-556,共5页
目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,ccc DNA)水平与突变关系。方法:运用特异性荧光定量PCR定量分析了12例肝癌组织和癌... 目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,ccc DNA)水平与突变关系。方法:运用特异性荧光定量PCR定量分析了12例肝癌组织和癌旁组织中乙肝病毒复制水平的表征因子HBV ccc DNA,HBV total DNA及前基因组RNA(pregenome RNA,pg RNA)的表达水平,再用滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)特异性扩增癌组织中HBV ccc DNA,测序分析了病毒基因组4个编码调控区域pre C/C、RT、X、pre S中ccc DNA序列的突变。最后检测了肿瘤组织ccc DNA的AP位点。结果:HBV ccc DNA在癌组织的表达水平明显低于癌旁组织(3.32 copies/cell vs.9.64 copies/cell,P=0.029),但是HBV总DNA和pg RNA的表达没有明显差异(16.94 copies/cell vs.12.18 copies/cell,P=0.325,75.54 copies/cell vs.22.46 copies/cell,P=0.128);在肝癌组织中,HBV ccc DNA pre C/C和X区间,G-A突变是主要的突变类型;其次,pre C/C和X区域发生G-A突变的位置上,均更倾向于GA二联核苷酸组合方式,在肝癌中所占比例为37.1%和40%。最后,肿瘤组织中APE1酶处理后,HBV ccc DNA水平明显下降(1 011 copies/μl vs.501.8 copies/μl,P=0.058)。结论:HBV ccc DNA水平在癌组织中明显低于癌旁组织,可能与癌组织中HBV ccc DNA发生大量GA突变及形成的AP位点有关。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 肝癌 HBV共价闭合环状dna 序列突变
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滚环扩增在乙型肝炎病毒cccDNA检测中的应用 被引量:15
7
作者 任晓强 苏何玲 +6 位作者 邹正升 高峰 刘立明 刘妍 李保森 徐东平 钟彦伟 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期675-678,共4页
目的建立慢性乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的滚环扩增(RCA)方法。方法以27例慢性乙型肝炎患者的肝组织cccDNA和血清松弛环状DNA(rcDNA)为研究对象。根据中国患者HBV基因序列特点设计4对引物,分别可与HBVcccDNA的正、负链... 目的建立慢性乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的滚环扩增(RCA)方法。方法以27例慢性乙型肝炎患者的肝组织cccDNA和血清松弛环状DNA(rcDNA)为研究对象。根据中国患者HBV基因序列特点设计4对引物,分别可与HBVcccDNA的正、负链结合。在Phi29DNA聚合酶的作用下,获得线性多拷贝cccDNA扩增产物,以该产物为模板获得cccDNA全序列;通过对模板的系列稀释鉴定RCA方法的灵敏度;以RCA产物为模板扩增肝组织cccDNA的反转录酶区基因,并与同时扩增的同时间采集的同一患者血清中的rcDNA序列进行比较。结果成功建立了HBVcccDNA全序列的RCA方法,最低可检测到10个拷贝的cccDNA分子,并获得了所有扩增cccDNA的全基因序列。27例患者中,18例患者的肝组织cccDNA和血清rcDNA反转录酶区的序列完全一致,9例患者中共检出84个不同的核苷酸位点,平均每个患者9.3个,84个不同核苷酸中只有5个引起了氨基酸的改变。结论滚环扩增方法对肝组织HBVcccDNA的检测具有较好的灵敏度。该方法的建立对深入了解cccDNA在HBV致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效有重要意义。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 滚环扩增 共价闭合环状dna
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重组HBV共价闭合环状DNA在小鼠模型中长期持留并诱导慢性肝炎
8
作者 邓强 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2018年第2期345-345,共1页
【据《Hepatology》2018年1月报道】题:重组HBV共价闭合环状DNA在小鼠模型中长期持留并诱导慢性肝炎(作者Li G等) HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)是病毒持续感染的分子基础。研究者早先发展了一种基于位点特异性重组,诱导HBV重组ccc... 【据《Hepatology》2018年1月报道】题:重组HBV共价闭合环状DNA在小鼠模型中长期持留并诱导慢性肝炎(作者Li G等) HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)是病毒持续感染的分子基础。研究者早先发展了一种基于位点特异性重组,诱导HBV重组cccDNA(rcccDNA)产生的策略。通过尾静脉高压注射,rcccDNA能够诱导免疫机能正常小鼠模型中短暂延长的病毒抗原血症,类似于HBV急性感染的疾病过程。 展开更多
关键词 共价闭合环状dna 特异性重组 小鼠模型 慢性肝炎 HBV HEPATOLOGY 病毒持续感染 病毒抗原血症
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乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎患儿血清中HBV-cccDNA水平检测及其临床意义 被引量:3
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作者 雷晓燕 孙永红 +5 位作者 陈星星 高霞 宋元春 赛依帕 刘璟 袁宏 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1256-1262,共7页
目的:分析血清中乙肝病毒共价闭合环状双链DNA (HBV-cccDNA)水平对乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎(HBV-GN)患儿肝肾功能、肾组织中HBV抗原的检出、肝组织病理分级和分期的影响,评价HBVcccDNA水平检测对HBV-GN患儿诊断的临床应用价值。方... 目的:分析血清中乙肝病毒共价闭合环状双链DNA (HBV-cccDNA)水平对乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎(HBV-GN)患儿肝肾功能、肾组织中HBV抗原的检出、肝组织病理分级和分期的影响,评价HBVcccDNA水平检测对HBV-GN患儿诊断的临床应用价值。方法:选取39例HBV-GN初治患儿作为研究对象(观察组),所有患儿均接受肝脏和肾脏穿刺;选取肝功能正常HBV携带患儿40例作为对照组。检测2组患儿丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,采用PCR荧光分子信标技术检测患儿血清中HBV-cccDNA水平,HE染色检测患儿肝脏和肾脏组织的形态表现,免疫荧光法检测患儿肾组织中HBsAg、HBeAg和HBcAg检出率,采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)评价HBV-cccDNA水平检测在HBV-GN诊断中的价值。以HBV-cccDNA的Ax荧光值>21判定为阳性,反之判定为阴性,将HBV-GN患儿分为HBV-cccDNA阳性组(n=24)和HBV-cccDNA阴性组(n=15)。在抗病毒治疗后第2、4、8和12周时检测患儿血清中HBV DNA及HBV-cccDNA水平。结果:HBV-cccDNA阳性组患儿ALT和AST水平异常率、HBeAg和尿蛋白阳性率均高于HBV-cccDNA阴性组(χ~2=4.454,P=0.035;χ~2=5.912,P=0.022;χ~2=8.770,P=0.007)。HBV-cccDNA阳性和阴性组HBV-GN患儿肝组织炎症和纤维化程度比较差异无统计学意义(P>0.05),HBV-GN患儿肾脏活检病理类型以膜性肾病(MN)为主,HBV抗原成分以HBeAg及HBcAg为主,HBV-cccDNA阳性组患儿HBeAg及HBcAg检出率明显高于HBV-cccDNA阴性组(χ~2=5.652,P=0.027;χ~2=12.523,P=0.001)。ROC曲线评价,HBV-cccDNA水平检测能有效鉴别观察组HBV-GN患儿和对照组患儿,AUC=0.804 (95%CI:0.709~0.883)。10例规范治疗且有完整追踪治疗资料的HBV-GN患儿在治疗第2周时其HBV-cccDNA水平明显降低,治疗至第12周时其中7例患儿HBeAg转阴,无蛋白尿、血尿症状,ALT和AST水平均正常;治疗无效的3例患儿血清中HBV-cccDNA水平均高于其余7例标本。结论:HBV-cccDNA高表达与HBV-GN患儿肝功能、蛋白尿及肾脏HBV抗原检出有密切关联,检测HBVcccDNA水平对儿童HBV-GN患儿的辅助诊断及疗效评估具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎 乙肝病毒共价闭合环状双链dna 儿童 乙型肝炎病毒
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靶向共价闭合环状DNA抗HBV治疗的研究进展 被引量:1
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作者 王艺颖 刘熙称 +1 位作者 朴荣利 秦俊杰 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2021年第5期1189-1192,共4页
HBV引起尚未治愈的慢性感染,是世界范围内的主要健康负担。共价闭合环状DNA作为稳定的微染色体存在于受感染细胞的细胞核中,当新型治疗手段实现灭活或消除感染肝细胞中持久存在的共价闭合环状DNA,慢性感染自然过程和长期抗病毒治疗将不... HBV引起尚未治愈的慢性感染,是世界范围内的主要健康负担。共价闭合环状DNA作为稳定的微染色体存在于受感染细胞的细胞核中,当新型治疗手段实现灭活或消除感染肝细胞中持久存在的共价闭合环状DNA,慢性感染自然过程和长期抗病毒治疗将不复存在。介绍了通过基因编辑、表观遗传修饰等方法靶向共价闭合环状DNA,以期完全性治愈HBV感染。 展开更多
关键词 共价闭合环状dna 乙型肝炎病毒 基因编辑
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基于微滴数字PCR技术建立HBV共价闭合环状DNA的检测方法 被引量:1
11
作者 田原 徐玲 +5 位作者 范子豪 曹亚玲 张向颖 陈煜 段钟平 任锋 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期1806-1810,共5页
目的建立一种用于检测HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的微滴数字PCR(ddPCR)方法。方法构建HBV cccDNA标准品,利用HBV cccDNA和松弛环状DNA(rcDNA)在结构上存在的差异,设计HBV cccDNA引物和探针,通过扩增HBV质粒得到HBV cccDNA标准品,把梯... 目的建立一种用于检测HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的微滴数字PCR(ddPCR)方法。方法构建HBV cccDNA标准品,利用HBV cccDNA和松弛环状DNA(rcDNA)在结构上存在的差异,设计HBV cccDNA引物和探针,通过扩增HBV质粒得到HBV cccDNA标准品,把梯度稀释后的标准品作为HBV cccDNA检测的模板,建立ddPCR检测方法,并分析此方法的检出限和重复性;收集2017年6月—2020年10月在首都医科大学附属北京佑安医院就诊的20例临床患者的肝组织样本,均诊断为HBV感染,提取样本的DNA,利用质粒安全性ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切,得到HBV cccDNA模板,对ddPCR检测方法进行临床样本的评价,并与实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法作对比。计数资料两组间比较采用χ^(2)检验。结果建立了基于ddPCR的HBV cccDNA检测方法,梯度稀释的HBV cccDNA标准品均能准确检出,检出限为1拷贝/μl,其中1×10^(3)、1×10^(2)、1×10^(1)拷贝/μl标准品的变异系数分别为4.41%、3.98%、5.09%;检测20例临床HBV患者样本的HBV cccDNA,ddPCR检测方法能检出17例,阳性率为85%,qPCR检测方法能检出11例,阳性率为55%,两组比较差异有统计学意义(χ^(2)=4.286,P=0.038)。结论建立的ddPCR检测HBV cccDNA方法具有较低的检出限和较好的重复性,为进一步的临床检测提供了有效的工具。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 dna 环状 微滴数字PCR
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HBV核心相关抗原替代共价闭合环状DNA成为一种新的标志物 被引量:1
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作者 汝琳 《临床肝胆病杂志》 CAS 2017年第3期587-587,共1页
【据《Liver Int》2016年12月报道】题:HBV核心相关抗原替代共价闭合环状DNA成为一种新的标志物(作者Wong DK等)HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)是慢性HBV持续感染的重要标志。血清HBV核心相关抗原(HBcrAg)是一种乙型肝炎的新型标志... 【据《Liver Int》2016年12月报道】题:HBV核心相关抗原替代共价闭合环状DNA成为一种新的标志物(作者Wong DK等)HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)是慢性HBV持续感染的重要标志。血清HBV核心相关抗原(HBcrAg)是一种乙型肝炎的新型标志物。来自香港大学的Wong等旨在研究HBcrAg是否能成为肝内cccDNA的替代标志物。分析138例接受核苷类药物治疗乙型肝炎患者的305份肝活组织检查标本及相应的血清。124例患者有2份标本,分别为基线和治疗1年后,43例患者还有第3份标本,即接受治疗6~12年后的肝穿刺标本。 展开更多
关键词 闭合环状 HBV dna 肝穿刺标本 乙型肝炎 核苷类药物 相关抗原 活组织检查 持续状态 正相关性
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一种新的同时定量检测乙型肝炎病毒前基因组RNA和DNA的检测方法
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作者 徐博文 李楠 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期564-569,共6页
目的设计并建立一种新的能够同时测定核酸提取物中乙型肝炎病毒(HBV)前基因组RNA(pgRNA)和DNA的检测方法。方法建立检测HBV pgRNA和DNA的探针法双重荧光定量PCR体系,通过DNA凝胶电泳、定量PCR等实验考察该检测体系的特异性和灵敏度,验... 目的设计并建立一种新的能够同时测定核酸提取物中乙型肝炎病毒(HBV)前基因组RNA(pgRNA)和DNA的检测方法。方法建立检测HBV pgRNA和DNA的探针法双重荧光定量PCR体系,通过DNA凝胶电泳、定量PCR等实验考察该检测体系的特异性和灵敏度,验证以该方法测定HepG2.2.15细胞及其培养上清中HBV pgRNA和DNA的可行性及准确度。结果建立的探针法双重荧光定量PCR体系具有较好的特异性和灵敏度,测定不同稀释倍数的细胞培养上清时,在稀释倍数和测定结果间具有较好的相关性。但该方法更适用于测定细胞培养上清中的HBV pgRNA和DNA,而不适用于测定细胞样本。结论本实验建立的方法能够避免核酸提取物中由于HBV DNA污染造成HBV RNA定量不准的问题,并且在一管PCR反应中同时实现了HBV pgRNA和DNA的双重检测,极大提高了检测效率,具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 慢性乙型病毒肝炎 定量聚合酶链反应 双重聚合酶链反应 前基因组RNA dna 共价闭合环状dna
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人工肝支持系统对重型乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA影响的初步研究 被引量:7
14
作者 杨培 秦波 +1 位作者 单幼兰 刘杞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第12期1463-1466,共4页
目的:建立HBV cccDNA荧光定量PCR方法并检测重型乙型肝炎患者人工肝血浆置换治疗前后血清中HBVcccDNA含量。初步探索人工肝支持系统对重型乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA的影响。方法:以50例重型乙型肝炎患者人工肝血浆置换治疗前后血清... 目的:建立HBV cccDNA荧光定量PCR方法并检测重型乙型肝炎患者人工肝血浆置换治疗前后血清中HBVcccDNA含量。初步探索人工肝支持系统对重型乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA的影响。方法:以50例重型乙型肝炎患者人工肝血浆置换治疗前后血清作为检测标本,对血清中总HBV DNA、HBV cccDNA含量进行定量检测。用SAS8.0统计软件对结果进行统计学分析。结果:成功建立定量检测HBV cccDNA方法并证实在重型乙型肝炎患者血清中存在HBV cccDNA。在人工肝血浆置换前后总HBV DNA及HBV cccDNA含量明显降低(P<0.05)。总HBV DNA与HBV cccDNA之间有较好的相关性(r=0.78,P<0.01)。总HBV DNA水平与PT(r=0.37,P<0.01)、ALT(r=0.29,P<0.05)、AST(r=0.39,P<0.01)水平有一定的相关性;HBV cccDNA水平与PT(r=0.34,P<0.05)、ALT(r=0.34,P<0.05)、AST(r=0.40,P<0.01)水平有一定的相关性。结论:总HBV DNA及HBV cccDNA在一定程度上能够反映肝细胞坏死程度;血浆置换术后病毒含量明显降低,为进一步研究重型乙型肝炎治疗途径及发病机制打下基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 共价闭合环状dna 荧光定量PCR 重型乙型肝炎 人工肝支持系统
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干扰素和核苷(酸)类似物治疗对HBV cccDNA的影响与慢性乙型肝炎的功能性治愈 被引量:17
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作者 陈捷亮 袁正宏 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期1181-1187,共7页
目前临床治疗慢性乙型肝炎的药物主要包括干扰素和核苷(酸)类似物两大类,但均无法有效清除病毒和治愈乙型肝炎。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)作为HBV转录复制的模板,以微小染色体形式持续存在于细胞核内,被认为是HBV慢性感染和难以治愈... 目前临床治疗慢性乙型肝炎的药物主要包括干扰素和核苷(酸)类似物两大类,但均无法有效清除病毒和治愈乙型肝炎。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)作为HBV转录复制的模板,以微小染色体形式持续存在于细胞核内,被认为是HBV慢性感染和难以治愈的关键核心。鉴于cccDNA很难被彻底清除,近年来以cccDNA持续沉默为基础的慢性乙型肝炎功能性治愈已成为临床和基础研究的主要目标。从现有治疗手段对cccDNA的影响切入,介绍当前对cccDNA含量和活性受控因素的认知,探讨cccDNA池难以清除的关键特性环节,在此基础上展望功能性治愈慢性乙型肝炎目标下研究cccDNA的重点。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 病毒 共价闭合环状dna
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CRISPR/Cas9技术用于清除乙型肝炎病毒的研究进展 被引量:6
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作者 唐慧娴 王长军 张琪 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2017年第8期865-868,共4页
乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染作为中国乃至全球的重大健康问题,使乙肝患者长期处于肝硬化及肝癌的巨大威胁中。乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(ccc DNA)是HBV在肝细胞内复制中必不可少的一环,是乙肝彻底治愈的关键。然而,目前针对乙肝的治... 乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染作为中国乃至全球的重大健康问题,使乙肝患者长期处于肝硬化及肝癌的巨大威胁中。乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(ccc DNA)是HBV在肝细胞内复制中必不可少的一环,是乙肝彻底治愈的关键。然而,目前针对乙肝的治疗药物尚无法彻底清除肝细胞内的ccc DNA,且服药周期长、副作用大。利用新兴的基因编辑技术CRISPR/Cas9,人工设计靶向HBV系统可高效清除潜藏在胞内的ccc DNA,为乙肝的彻底治愈带来希望。文章就CRISPR/Cas9技术用于清除HBV的研究进行综述。 展开更多
关键词 乙肝病毒 共价闭合环状dna CRISPR/Cas9
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乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA和HBVcccDNA定量检测 被引量:3
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作者 钟艳丹 谭德明 +3 位作者 李涛 刘国珍 徐旭雯 刘菲 《中国感染控制杂志》 CAS 2007年第5期292-296,共5页
目的通过对外周血单个核细胞(PBMCs)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA和HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测,证实不同临床类型乙型肝炎患者PBMCs被HBV感染的事实。方法提取PGM-HBV质粒,用双蒸水连续10倍梯度稀释,建立浓度为3×10^2~... 目的通过对外周血单个核细胞(PBMCs)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA和HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测,证实不同临床类型乙型肝炎患者PBMCs被HBV感染的事实。方法提取PGM-HBV质粒,用双蒸水连续10倍梯度稀释,建立浓度为3×10^2~3×10^5拷贝/mL PGM-HBV标准系列;常规分离全血中的PB-MCs,提取DNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测PBMCs中HBV DNA和HBVcccDNA。结果78例慢性乙型肝炎患者,PBMCs中HBVcccDNA阳性31例(39.74%)。HBVcccDNA与血清和PBMCs中HBV DNA阳性率和滴度有良好的一致性。但在不同临床类型的乙型肝炎患者之间,PBMCs中HBVcccDNA的检出率无差别(P〉0.05)。结论根据HBVcccDNA检测结果阳性,进一步证实HBV能感染PBMCs,并在其中复制;PBMCs中HBVcccDNA阳性与疾病的炎症活动和疾病的严重性无关。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 共价闭合环状dna 外周血单个核细胞 肝炎 乙型 慢性
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肝移植术后乙型肝炎病毒再激活的分子机制研究进展 被引量:2
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作者 杨健 谢炎 +3 位作者 田大治 张骊 张洋铭 蒋文涛 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期298-303,共6页
肝移植是治疗乙型病毒性肝炎(乙肝)相关性肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌(肝癌)的最有效方法。然而,肝移植术后乙型肝炎病毒(HBV)再激活不利于移植肝功能恢复且导致预后不良,其防治问题是当前内、外科医师研究的焦点。目前的病毒抑制策略不... 肝移植是治疗乙型病毒性肝炎(乙肝)相关性肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌(肝癌)的最有效方法。然而,肝移植术后乙型肝炎病毒(HBV)再激活不利于移植肝功能恢复且导致预后不良,其防治问题是当前内、外科医师研究的焦点。目前的病毒抑制策略不能完全根除HBV,也不能完全预防HBV在未来复发感染。本文旨在探讨肝移植术后HBV再激活的分子机制,以期更有效预防肝移植术后乙肝复发。 展开更多
关键词 肝移植 乙型肝炎病毒 超螺旋共价闭环dna(cccdna) 基因整合 肝外复制 乙型病毒肝炎复发 丁型肝炎病毒 基因型
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CRISPR/Cas9基因剪辑技术在乙型肝炎病毒感染治疗中的应用
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作者 罗英英 黄爱龙 胡接力 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期905-909,共5页
CRISPR/Cas9基因剪辑技术源于细菌及古细菌CRISPR介导的后天获得性免疫系统,通过引导RNA与靶DNA PAM序列特异性识别,引发Cas9核酸酶定点切割互补双链DNA,在基因剪辑方面具有制备简单、剪辑位点特异性高及易于同时剪辑多个基因位点等优势... CRISPR/Cas9基因剪辑技术源于细菌及古细菌CRISPR介导的后天获得性免疫系统,通过引导RNA与靶DNA PAM序列特异性识别,引发Cas9核酸酶定点切割互补双链DNA,在基因剪辑方面具有制备简单、剪辑位点特异性高及易于同时剪辑多个基因位点等优势,已被广泛应用于哺乳动物细胞基因剪辑。本文主要从CRISPR/Cas9技术作用原理和其抗乙型肝炎病毒感染作用及机制等方面进行综述。 展开更多
关键词 CRISPR 基因剪辑 乙型肝炎病毒 共价闭合环状dna
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HBV相关慢加急性肝衰竭恢复期患者肝组织HBV cccDNA水平及其临床意义
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作者 蔡哲凯 徐龙 +4 位作者 刘文丽 肖影群 钟青梅 张伟 吴敏 《临床肝胆病杂志》 北大核心 2025年第1期57-62,共6页
目的观察HBV cccDNA在HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)恢复期患者肝组织中的表达水平,并探讨其与HBV标志物、肝组织病理改变的关系。方法选取2015年1月—2023年10月在南昌市第九医院住院的HBV-ACLF恢复期患者30例为肝衰竭组,另选取同期... 目的观察HBV cccDNA在HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)恢复期患者肝组织中的表达水平,并探讨其与HBV标志物、肝组织病理改变的关系。方法选取2015年1月—2023年10月在南昌市第九医院住院的HBV-ACLF恢复期患者30例为肝衰竭组,另选取同期9例性别及年龄匹配的慢性乙型肝炎患者(CHB)作为对照组,检测肝组织HBV cccDNA水平,并分析其与临床资料、实验室检查指标的关联性。计量资料两组间比较采用成组t检验或Mann-Whitney U检验;多组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验。计数资料组间比较采用Fisher精确检验。相关性分析采用Spearman相关分析。结果肝衰竭组肝组织HBV cccDNA水平显著低于对照组[(−0.92±0.70)log10 copies/cell vs(−0.13±0.91)log10 copies/cell,t=2.761,P=0.009]。肝衰竭组中,血清HBeAg阳性与阴性患者肝组织HBV cccDNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);肝组织炎症活动度G0~G2级、G3级、G4级患者的肝组织HBV cccDNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);肝组织纤维化程度S0~S2期、S3期、S4期患者的肝组织HBV cccDNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);血清HBV DNA阴性与血清HBV DNA阳性患者肝组织HBV cccDNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肝衰竭组肝组织HBV cccDNA水平与肝组织HBV DNA水平呈正相关(r=0.426,P=0.043),与血清HBV DNA水平无明显相关性(P>0.05)。结论肝组织HBV cccDNA水平在HBV-ACLF恢复期明显降低,肝组织HBV cccDNA持续稳定存在,较血清及肝组织HBV DNA更能反映HBV的持续感染与复制。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 慢加急性肝功能衰竭 恢复期 共价闭合环状dna
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