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弓形虫pVAX1-SAG2真核表达质粒的构建及其诱导的小鼠免疫应答
被引量：
17
1
作者
高世同
吴少庭
+3 位作者
龙彩虹
张仁利
袁仕善
黄达娜
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第8期658-661,共4页
目的 构建弓形虫主要速殖子表面抗原 2 (SAG2 )编码基因真核表达质粒pVAX1-SAG2 ,并接种小鼠 ,分析其所诱导的免疫应答。方法 以限制性内切酶EcoRⅠ与KpnⅠ双酶切从重组质粒 pGEM/SAG2中获得SAG2目的基因片段 ,约5 92个bp ,将其插入...
目的 构建弓形虫主要速殖子表面抗原 2 (SAG2 )编码基因真核表达质粒pVAX1-SAG2 ,并接种小鼠 ,分析其所诱导的免疫应答。方法 以限制性内切酶EcoRⅠ与KpnⅠ双酶切从重组质粒 pGEM/SAG2中获得SAG2目的基因片段 ,约5 92个bp ,将其插入真核表达载体 pVAX1多克隆位点 ,构建重组质粒 pVAX1-SAG2 ,并转化大肠杆菌JM 10 9,阳性克隆以双酶切与PCR法鉴定。大量提取纯化重组质粒 pVAX1-SAG2 ,5 0 μg肌肉注射小鼠左后腿内侧肌肉 ,3周后加强免疫一次 ;RT-PCR检测SAG2在小鼠肌肉中的转录表达 ,流式细胞仪测定T细胞亚群 ,以速殖子虫体抗原作ELISA测定小鼠血清IgG抗体。结果 真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2双酶切鉴定及PCR扩增结果与预期结果相符合。RT -PCR从注射部位肌肉组织总RNA中扩增出SAG2目的基因条带 ;重组质粒 pVAX1-SAG2免疫组CD+ 4 细胞数为 32 .35± 5 .38,显著高于空质粒pVAX1及生理盐水 (NS)二对照组 (P <0 .0 1) ,后二者CD+ 4 细胞数分别为 19.6 5± 4 .2 1与 17.84± 1.5 9;免疫组CD+ 8细胞数为 18.6 7± 2 .37,但与空质粒及NS对照组相比 ,差别不显著 (P >0 .0 5 )。ELISA测定结果显示 pVAX1/SAG2免疫组小鼠血清中出现抗弓形虫特异性IgG抗体。结论 构建成功SAG2真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2 。
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关键词
弓形虫
速殖子
主要表面抗原
2基因
DNA接种
免疫应答
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职称材料
弓形虫P^(30)的克隆表达及其对巨噬细胞凋亡的影响
2
作者
郑大利
黄清玲
+1 位作者
章涛
林建银
《中国人兽共患病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第8期670-674,共5页
目的 获得能表达弓形虫P3 0 蛋白的小鼠巨噬细胞克隆并观察内源性表达的P3 0 蛋白对小鼠巨噬细胞凋亡的影响。方法 通过PCR扩增获得P3 0 基因片段 ,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1/Hygro(- )中 ,利用酶切、DNA序列分析鉴定阳性克隆 ...
目的 获得能表达弓形虫P3 0 蛋白的小鼠巨噬细胞克隆并观察内源性表达的P3 0 蛋白对小鼠巨噬细胞凋亡的影响。方法 通过PCR扩增获得P3 0 基因片段 ,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1/Hygro(- )中 ,利用酶切、DNA序列分析鉴定阳性克隆 ,采用脂质体将重组质粒转染到RAW 2 6 4 .7巨噬细胞中 ,通过Hygromycin筛选和PCR、免疫组化鉴定 ,用流式细胞术DNA倍体分析计算稳定转染和瞬时转染P3 0 基因的巨噬细胞的凋亡率。结果 1.PCR、酶切、连接的产物经电泳鉴定 ,均与预期设计相符合 ,DNA序列分析发现重组质粒中的目的基因序列与文献报道相符。2 .PCR和免疫组化鉴定发现转染P3 0 重组质粒的巨噬细胞能稳定地复制质粒并表达弓形虫P3 0 蛋白。 3.P3 0 稳定转染的细胞凋亡率均在 2 %左右 ,不同细胞之间没有区别。 4 .瞬时转染空载体和P3 0 重组质粒的巨噬细胞其凋亡率均在 6 %左右 ,没有区别。结论 1.获得了含P3 0 基因的重组质粒以及能稳定表达弓形虫P3 0 蛋白的小鼠巨噬细胞克隆。2 .无论是稳定转染还是瞬时转染 ,均不能引起巨噬细胞的凋亡 ,说明内源性表达的弓形虫P3 0 蛋白对小鼠巨噬细胞的凋亡没有影响。
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关键词
弓形虫
主要表面抗原
P^30
基因克隆
巨噬细胞
凋亡
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职称材料
试制牛小型梨浆虫病肽疫苗
3
作者
孙国凤
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1996年第2期16-16,共1页
农林水产省家畜卫生试验场原虫第一研究室主任神尾次彦,该研究室河津信一郎、化学及血清疗法研究所(化血研)的小组宣布试制小型梨浆虫病疫苗,给牛接种时对发病有预防效果。如果能开发出这种疫苗,将成为日本第一个牛肽疫苗,但是,要实用化...
农林水产省家畜卫生试验场原虫第一研究室主任神尾次彦,该研究室河津信一郎、化学及血清疗法研究所(化血研)的小组宣布试制小型梨浆虫病疫苗,给牛接种时对发病有预防效果。如果能开发出这种疫苗,将成为日本第一个牛肽疫苗,但是,要实用化,必须探讨佐剂的种类和肽的长度等。
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关键词
红细胞数
种疫苗
血清疗法
家畜卫生
肽疫苗
预防效果
寄生率
研究室主任
主要表面抗原
cDNA文库
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职称材料
题名
弓形虫pVAX1-SAG2真核表达质粒的构建及其诱导的小鼠免疫应答
被引量：
17
1
作者
高世同
吴少庭
龙彩虹
张仁利
袁仕善
黄达娜
机构
深圳市疾病预防控制中心
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004年第8期658-661,共4页
文摘
目的 构建弓形虫主要速殖子表面抗原 2 (SAG2 )编码基因真核表达质粒pVAX1-SAG2 ,并接种小鼠 ,分析其所诱导的免疫应答。方法 以限制性内切酶EcoRⅠ与KpnⅠ双酶切从重组质粒 pGEM/SAG2中获得SAG2目的基因片段 ,约5 92个bp ,将其插入真核表达载体 pVAX1多克隆位点 ,构建重组质粒 pVAX1-SAG2 ,并转化大肠杆菌JM 10 9,阳性克隆以双酶切与PCR法鉴定。大量提取纯化重组质粒 pVAX1-SAG2 ,5 0 μg肌肉注射小鼠左后腿内侧肌肉 ,3周后加强免疫一次 ;RT-PCR检测SAG2在小鼠肌肉中的转录表达 ,流式细胞仪测定T细胞亚群 ,以速殖子虫体抗原作ELISA测定小鼠血清IgG抗体。结果 真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2双酶切鉴定及PCR扩增结果与预期结果相符合。RT -PCR从注射部位肌肉组织总RNA中扩增出SAG2目的基因条带 ;重组质粒 pVAX1-SAG2免疫组CD+ 4 细胞数为 32 .35± 5 .38,显著高于空质粒pVAX1及生理盐水 (NS)二对照组 (P <0 .0 1) ,后二者CD+ 4 细胞数分别为 19.6 5± 4 .2 1与 17.84± 1.5 9;免疫组CD+ 8细胞数为 18.6 7± 2 .37,但与空质粒及NS对照组相比 ,差别不显著 (P >0 .0 5 )。ELISA测定结果显示 pVAX1/SAG2免疫组小鼠血清中出现抗弓形虫特异性IgG抗体。结论 构建成功SAG2真核表达重组质粒 pVAX1-SAG2 。
关键词
弓形虫
速殖子
主要表面抗原
2基因
DNA接种
免疫应答
Keywords
Toxoplasma gondii
SAG2 encoding gene
DNA vaccination
Immune response.
分类号
R382.5 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
弓形虫P^(30)的克隆表达及其对巨噬细胞凋亡的影响
2
作者
郑大利
黄清玲
章涛
林建银
机构
福建医科大学分子医学研究中心
出处
《中国人兽共患病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第8期670-674,共5页
基金
福建省自然科学基金 (C9810 0 2 9)
福建医科大学苗圃基金( 2 0 0 2M 0 11)
文摘
目的 获得能表达弓形虫P3 0 蛋白的小鼠巨噬细胞克隆并观察内源性表达的P3 0 蛋白对小鼠巨噬细胞凋亡的影响。方法 通过PCR扩增获得P3 0 基因片段 ,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1/Hygro(- )中 ,利用酶切、DNA序列分析鉴定阳性克隆 ,采用脂质体将重组质粒转染到RAW 2 6 4 .7巨噬细胞中 ,通过Hygromycin筛选和PCR、免疫组化鉴定 ,用流式细胞术DNA倍体分析计算稳定转染和瞬时转染P3 0 基因的巨噬细胞的凋亡率。结果 1.PCR、酶切、连接的产物经电泳鉴定 ,均与预期设计相符合 ,DNA序列分析发现重组质粒中的目的基因序列与文献报道相符。2 .PCR和免疫组化鉴定发现转染P3 0 重组质粒的巨噬细胞能稳定地复制质粒并表达弓形虫P3 0 蛋白。 3.P3 0 稳定转染的细胞凋亡率均在 2 %左右 ,不同细胞之间没有区别。 4 .瞬时转染空载体和P3 0 重组质粒的巨噬细胞其凋亡率均在 6 %左右 ,没有区别。结论 1.获得了含P3 0 基因的重组质粒以及能稳定表达弓形虫P3 0 蛋白的小鼠巨噬细胞克隆。2 .无论是稳定转染还是瞬时转染 ,均不能引起巨噬细胞的凋亡 ,说明内源性表达的弓形虫P3 0 蛋白对小鼠巨噬细胞的凋亡没有影响。
关键词
弓形虫
主要表面抗原
P^30
基因克隆
巨噬细胞
凋亡
Keywords
Toxoplasma gondii
major surface antigen P30
clone
macrophage
apoptosis
分类号
R382.5 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
试制牛小型梨浆虫病肽疫苗
3
作者
孙国凤
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1996年第2期16-16,共1页
文摘
农林水产省家畜卫生试验场原虫第一研究室主任神尾次彦,该研究室河津信一郎、化学及血清疗法研究所(化血研)的小组宣布试制小型梨浆虫病疫苗,给牛接种时对发病有预防效果。如果能开发出这种疫苗,将成为日本第一个牛肽疫苗,但是,要实用化,必须探讨佐剂的种类和肽的长度等。
关键词
红细胞数
种疫苗
血清疗法
家畜卫生
肽疫苗
预防效果
寄生率
研究室主任
主要表面抗原
cDNA文库
分类号
S852.52 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
弓形虫pVAX1-SAG2真核表达质粒的构建及其诱导的小鼠免疫应答
高世同
吴少庭
龙彩虹
张仁利
袁仕善
黄达娜
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2004
17
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
弓形虫P^(30)的克隆表达及其对巨噬细胞凋亡的影响
郑大利
黄清玲
章涛
林建银
《中国人兽共患病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
试制牛小型梨浆虫病肽疫苗
孙国凤
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1996
0
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职称材料
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