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NS1基因主要抗原区的可溶性表达及其DotELISA检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
赵朴
苏红辽
+5 位作者
刘兴友
赵坤
胡建和
王三虎
姚四新
郑玉姝
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2015年第6期35-40,共6页
【目的】可溶性表达猪流感病毒(SIV)NS1基因主要抗原区(NS1′)蛋白,获得具有良好抗原性的NS1′蛋白,并初步建立检测NS1抗体的斑点酶联吸附试验(Dot-ELISA)方法,为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪奠定基础。【方法】以质粒pET28a-...
【目的】可溶性表达猪流感病毒(SIV)NS1基因主要抗原区(NS1′)蛋白,获得具有良好抗原性的NS1′蛋白,并初步建立检测NS1抗体的斑点酶联吸附试验(Dot-ELISA)方法,为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪奠定基础。【方法】以质粒pET28a-NS1为模板,PCR扩增NS1基因抗原性较好的区段NS1′,用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pET-32a(+),构建pET32a-NS1′,经PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定后,转化大肠杆菌Rosetta,用IPTG诱导表达,纯化NS1′并免疫家兔制备多克隆血清,对其进行SDS-PAGE、Western blotting检测和免疫荧光分析,并以纯化的NS1′作为包被抗原初步建立Dot-ELISA检测方法。【结果】PCR扩增获得了长约250bp的H3N2SIV NS1′片段;成功构建了重组载体pET32a-NS1′;SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,融合蛋白NS1′大小约34ku,该蛋白可溶,能与感染SIV的猪血清特异性反应,并且用纯化蛋白NS1′制备的多克隆血清能识别293T细胞中表达的NS1,建立的Dot-ELISA检测方法可鉴别猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪。【结论】实现了H3N2SIV NS1′蛋白的可溶性表达,表达产物具有良好的抗原性,以NS1′作为包被抗原,建立了检测NS1抗体的Dot-ELISA方法。
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关键词
猪流感病毒
非结构蛋白1
主要抗原区域
可溶性表达
斑点酶联免疫吸附试验
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职称材料
题名
NS1基因主要抗原区的可溶性表达及其DotELISA检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
赵朴
苏红辽
刘兴友
赵坤
胡建和
王三虎
姚四新
郑玉姝
机构
河南科技学院动物科学学院
动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心
滑县动物卫生监督所
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2015年第6期35-40,共6页
基金
河南省基础与前沿技术项目(122300410135)
河南省教育厅自然科学研究项目(2011A230008)
文摘
【目的】可溶性表达猪流感病毒(SIV)NS1基因主要抗原区(NS1′)蛋白,获得具有良好抗原性的NS1′蛋白,并初步建立检测NS1抗体的斑点酶联吸附试验(Dot-ELISA)方法,为鉴别诊断猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪奠定基础。【方法】以质粒pET28a-NS1为模板,PCR扩增NS1基因抗原性较好的区段NS1′,用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pET-32a(+),构建pET32a-NS1′,经PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定后,转化大肠杆菌Rosetta,用IPTG诱导表达,纯化NS1′并免疫家兔制备多克隆血清,对其进行SDS-PAGE、Western blotting检测和免疫荧光分析,并以纯化的NS1′作为包被抗原初步建立Dot-ELISA检测方法。【结果】PCR扩增获得了长约250bp的H3N2SIV NS1′片段;成功构建了重组载体pET32a-NS1′;SDS-PAGE和Western blotting检测结果显示,融合蛋白NS1′大小约34ku,该蛋白可溶,能与感染SIV的猪血清特异性反应,并且用纯化蛋白NS1′制备的多克隆血清能识别293T细胞中表达的NS1,建立的Dot-ELISA检测方法可鉴别猪流感病毒感染猪与疫苗免疫猪。【结论】实现了H3N2SIV NS1′蛋白的可溶性表达,表达产物具有良好的抗原性,以NS1′作为包被抗原,建立了检测NS1抗体的Dot-ELISA方法。
关键词
猪流感病毒
非结构蛋白1
主要抗原区域
可溶性表达
斑点酶联免疫吸附试验
Keywords
swine influenza virus
nonstructural protein 1
major antigen region
soluble expression
Dot-ELISA
分类号
S [农业科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
NS1基因主要抗原区的可溶性表达及其DotELISA检测方法的建立
赵朴
苏红辽
刘兴友
赵坤
胡建和
王三虎
姚四新
郑玉姝
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2015
2
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参考文献
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