文摘为建立精准的蜂王浆新鲜度检测方法,利用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem quadrupole-time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF/MS)对经胰蛋白酶酶解的蜂王浆中王浆主蛋白(major royal jelly proteins,MRJPs)进行定性分析,并通过蛋白质组学分析平台比对,鉴定出8种王浆主蛋白(MRJP1~7和MRJP9)的一级序列数据,然后按同时具备高易酶解性与酶解后高稳定性的标准筛选得到3个特异性标志多肽,包括MRJP1多肽YNGVPSSLNVISK、MRJP2多肽TLQMIAGMK、MRJP3多肽LTVAGESFTVK。分别合成MRJP1~3的3条特异性标志多肽标准品及其同位素标志肽,建立蜂王浆中MRJP1~3的超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱(ultra-high performance liquid chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry,UPLC-TQMS)定量检测方法。采用UPLC-TQMS分别检测蜂王浆样品中MRJP1~3含量发现,MRJP1多肽在10~1 600 ng/mL范围内具有良好的线性关系,MRJP2和MRJP3多肽在10~600 ng/mL范围内均具有良好的线性关系,决定系数(R~2)均大于0.99。最后,通过分析蜂王浆中MRJP1~3随加温老化时间的降解程度,证实MRJP1~3的降解率均与老化时间(40℃)呈正相关(R~2>0.9)。说明本研究所建立的MRJP1~3检测方法具有高度特异性,可为蜂王浆质量评价提供技术支撑。
