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红斑丹毒丝菌蛋白间相互作用网络的构建与分析
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作者 吴雪军 董琦 +2 位作者 周彩琴 章晓炜 刘威 《湖北农业科学》 2025年第7期137-141,共5页
病原菌编码蛋白间的相互作用研究是理解其各项生命活动、揭示信号转导机制、预测潜在药物靶标的重要途径。旨在利用DIP蛋白互作数据库和同源蛋白映射方法,构建红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)编码蛋白间的相互作用网络。结... 病原菌编码蛋白间的相互作用研究是理解其各项生命活动、揭示信号转导机制、预测潜在药物靶标的重要途径。旨在利用DIP蛋白互作数据库和同源蛋白映射方法,构建红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)编码蛋白间的相互作用网络。结果表明,所构建的互作网络共包含2113对非冗余的相互作用关系,涉及330个蛋白,并绘制了互作网络的拓扑结构图。通过全基因组内蛋白之间的互作频率分析,确定了在红斑丹毒丝菌中互作频率最高的40个蛋白,这些蛋白主要与翻译、转录、分子伴侣等功能相关。伴侣蛋白DnaK、DnaJ、GroEL以及DEAD/DEAH解旋酶的互作频率较高,能与核糖体蛋白、代谢相关、伴侣蛋白、细胞分裂蛋白等多种功能蛋白发生相互作用。若DnaK、DnaJ、GroEL、DEAD/DEAH解旋酶的功能受到抑制,则会对红斑丹毒丝菌的正常生命活动造成较大的影响。 展开更多
关键词 红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae) 蛋白间相互作用 互作网络
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红斑丹毒丝菌nfliC-SpaA重组蛋白的制备及其免疫效果研究
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作者 雷妍丽 严晨光 +6 位作者 金云云 关洋 王孟月 王彦伟 黄玉欣 逄文强 田克恭 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期22-27,共6页
红斑丹毒丝菌血清型较多,目前商品化疫苗主要为活疫苗和灭活疫苗,血清型为1型和2型,尚无商品化亚单位疫苗。该研究旨在研究一种具有广谱免疫效果的重组蛋白。从临床分离株SerF5中获得的spaA基因,经密码子优化和截短后在spaA N端融合鼠... 红斑丹毒丝菌血清型较多,目前商品化疫苗主要为活疫苗和灭活疫苗,血清型为1型和2型,尚无商品化亚单位疫苗。该研究旨在研究一种具有广谱免疫效果的重组蛋白。从临床分离株SerF5中获得的spaA基因,经密码子优化和截短后在spaA N端融合鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛蛋白(nfliC),构建大肠埃希氏菌BL21(DE3)重组表达质粒,通过诱导nfliC-SpaA重组蛋白表达和镍柱亲和层析纯化后,分别在小鼠和仔猪上进行免疫效果试验。结果显示,获得的nfliC-SpaA重组蛋白在大肠埃希氏菌中呈可溶性表达,纯化后重组蛋白具有良好的免疫原性,可在小鼠和仔猪体内产生较高的体液免疫抗体水平,且对1型和2型红斑丹毒丝菌菌株混合攻毒的小鼠和仔猪均可提供完全保护。说明获得的nfliC-SpaA重组蛋白具有良好的免疫效果,为猪丹毒亚单位疫苗的开发提供了技术支持。 展开更多
关键词 红斑丹毒丝菌 重组蛋白 免疫保护 佐剂 亚单位疫苗
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连花清瘟方剂对巴氏杆菌和猪丹毒丝菌的抗菌作用
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作者 刘晓瑜 王彤 +2 位作者 周帮会 姜国均 朱伟峰 《养殖与饲料》 2025年第2期51-55,共5页
[目的]分析中药连花清瘟方剂对2种常见畜禽病原菌(巴氏杆菌、猪丹毒丝菌)的抗菌作用,为其在兽医临床中的应用提供参考。[方法]首先,通过微量肉汤稀释法测定连花清瘟方剂对巴氏杆菌3株不同菌株(巴氏杆菌X7株、巴氏杆菌YU株、巴氏杆菌SD株... [目的]分析中药连花清瘟方剂对2种常见畜禽病原菌(巴氏杆菌、猪丹毒丝菌)的抗菌作用,为其在兽医临床中的应用提供参考。[方法]首先,通过微量肉汤稀释法测定连花清瘟方剂对巴氏杆菌3株不同菌株(巴氏杆菌X7株、巴氏杆菌YU株、巴氏杆菌SD株)的最小杀菌浓度(MBC)和最小抑菌浓度(MIC)。然后,进行药物治疗试验。取4~6周龄小鼠50只,分为5组,巴氏杆菌攻毒后给予各组不同的治疗方案(连花清瘟方剂、无菌水、阿莫西林、头孢克洛)治疗3 d,通过治疗有效率评价连花清瘟方剂对巴氏杆菌感染的治疗效果;参照连花清瘟方剂抗巴氏杆菌的试验方法,测定连花清瘟方剂对猪丹毒丝菌的MIC、MBC和治疗有效率。[结果]连花清瘟方剂对巴氏杆菌不同菌株的MIC和MBC分别为4~8、8~16 mg/mL,对巴氏杆菌感染的治疗有效率为60%,显著高于对照组,与抗生素灌服组治疗无显著差异。连花清瘟方剂对猪丹毒丝菌SE38株的MIC值为64 mg/mL,MBC值为128mg/mL,小鼠感染模型中无显著治疗效果。[结论]连花清瘟方剂对巴氏杆菌具有较好的抗菌效果,可作为抗菌药替代品进一步研究。 展开更多
关键词 连花清瘟方剂 巴氏杆 丹毒丝菌 减抗 替抗 治疗有效率
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猪丹毒丝菌的分离鉴定和耐药性分析
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作者 刘淑华 王岚 +5 位作者 张家浩 杨睿智 刘祥杰 李虎 邢潇月 李莲瑞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第8期62-68,共7页
新疆维吾尔自治区阿克苏地区某规模化猪场猪只发生急性死亡,临床症状为关节炎和败血症等。为了解引起猪发病的致病菌及其耐药性,本试验通过实验室常规纯培养方法对采集自该猪场的病猪脏器进行细菌的分离纯化;通过革兰染色镜检和电子显... 新疆维吾尔自治区阿克苏地区某规模化猪场猪只发生急性死亡,临床症状为关节炎和败血症等。为了解引起猪发病的致病菌及其耐药性,本试验通过实验室常规纯培养方法对采集自该猪场的病猪脏器进行细菌的分离纯化;通过革兰染色镜检和电子显微镜观察进行形态学鉴定,生化试验进行生化鉴定,并进行16S rDNA基因PCR扩增和序列分析;通过药敏试验检测分离菌株的耐药性。结果显示,分离菌株为革兰阳性菌,形态为长直、微弯曲状;生化鉴定结果显示,触酶反应、尿素、氧化酶和吲哚呈阴性,乳糖、果糖、硫化氢和葡萄糖呈阳性;结合16S rDNA基因序列比对确定分离菌株为猪丹毒丝菌。药敏试验结果显示,分离菌株对β-内酰胺类、硝基呋喃类、磺胺类和2种氨基糖苷类药物敏感。本试验结果为该规模化猪场治疗和防控猪丹毒以及进一步研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 丹毒丝菌 分离与鉴定 耐药性分析 16S rDNA
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肉仔鸡红斑丹毒丝菌感染的诊治
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作者 金璐娟 刘景霞 +1 位作者 徐松琪 王迪 《中国家禽》 北大核心 2007年第17期43-,45,共2页
  2006年8月,黑龙江省双城市刘某饲养的1000只肉仔鸡于40日龄突然发病,经临床诊断、病理剖检及实验室诊断,确诊为红斑丹毒丝菌(猪丹毒杆菌)感染,报告如下.……
关键词 红斑丹毒丝菌 阳性 丹毒丹毒丝菌 丹毒丝菌 鸡群 病理剖检 肉仔鸡 猪舍 畜禽舍 小杆
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2019—2022年我国部分地区规模化猪场猪丹毒丝菌血清学检测结果分析 被引量:2
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作者 黄婕峰 袁智 +1 位作者 王文梅 赵墩 《湖南畜牧兽医》 2024年第4期21-23,共3页
为更好地了解我国规模化猪场猪丹毒丝菌(也称猪丹毒杆菌)的感染状态,试验通过克隆表达1a型猪红斑丹毒丝菌ML101的SpaA基因,建立了猪红斑丹毒丝菌的ELISA诊断方法,并利用此诊断方法对2019—2022年我国15个省份22个规模化猪场的851份猪血... 为更好地了解我国规模化猪场猪丹毒丝菌(也称猪丹毒杆菌)的感染状态,试验通过克隆表达1a型猪红斑丹毒丝菌ML101的SpaA基因,建立了猪红斑丹毒丝菌的ELISA诊断方法,并利用此诊断方法对2019—2022年我国15个省份22个规模化猪场的851份猪血清样品进行抗体检测。结果显示:22个猪场中有15个阳性猪场,占比68.2%,样品中检出104份阳性,阳性率为12.2%;上述猪场均未接种疫苗,也未曾暴发过猪丹毒。结果表明:不同猪场检测结果差异较大,我国部分规模猪场猪丹毒丝菌感染率高,这些猪场存在弱毒力的猪丹毒丝菌感染。 展开更多
关键词 丹毒丝菌 抗体检测 猪场阳性比例 感染
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猪丹毒丝菌C43150株表面保护性抗原A的免疫功能区分析 被引量:7
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作者 晏鹏飞 苏幼红 +2 位作者 赵银霞 庆格乐图 李江伟 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1224-1230,共7页
【目的】确定丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性抗原A(SpaA)中起免疫保护作用的主要区段。【方法】PCR扩增SpaA氨基端(spaA-N)和羧基端(spaA-C)基因片段,测序鉴定正确后,克隆至pGEX4T-1原核表达载体,以IPTG诱导表达重组蛋白r-SpaA-N及... 【目的】确定丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性抗原A(SpaA)中起免疫保护作用的主要区段。【方法】PCR扩增SpaA氨基端(spaA-N)和羧基端(spaA-C)基因片段,测序鉴定正确后,克隆至pGEX4T-1原核表达载体,以IPTG诱导表达重组蛋白r-SpaA-N及r-SpaA-C,表达产物经亲和层析柱纯化后,免疫小鼠制备抗血清,Western Blot及ELISA检测重组蛋白的免疫反应性,最后分别从主动和被动免疫两方面分析r-SpaA-N及r-SpaA-C对小鼠的免疫保护活性。【结果】Western Blot结果表明抗r-SpaA-N及r-SpaA-C小鼠血清均能与天然的SpaA在64 kDa处特异性结合,ELISA检测也表明重组表达和纯化的融合蛋白都具有免疫原性,但小鼠免疫保护实验显示只有r-SpaA-N对攻毒小鼠保护作用显著(P<0.01)。【结论】丹毒丝菌新疆分离株C43150表面保护性蛋白A起主要保护功能的核心区段为氨基端,且是由抗体介导的免疫保护。 展开更多
关键词 丹毒丝菌 表面抗原A(SpaA) 免疫保护 核心区段
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关节炎患猪中猪丹毒丝菌的分离与鉴定 被引量:8
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作者 梁跃 徐引弟 +2 位作者 杨志昆 朱文豪 郭成留 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第11期136-138,共3页
为给猪丹毒的防制提供依据,分离并鉴定了猪丹毒丝菌。将发生关节炎的猪关节液接种TSA培养基,挑取透明小菌落,染色,对G+小长丝杆菌进一步用猪丹毒丝菌16SrRNA基因的引物进行PCR鉴定。对鉴定为阳性的菌株进行药敏试验,结果显示,分离菌株... 为给猪丹毒的防制提供依据,分离并鉴定了猪丹毒丝菌。将发生关节炎的猪关节液接种TSA培养基,挑取透明小菌落,染色,对G+小长丝杆菌进一步用猪丹毒丝菌16SrRNA基因的引物进行PCR鉴定。对鉴定为阳性的菌株进行药敏试验,结果显示,分离菌株对青霉素、头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松、头孢哌酮、头孢唑啉、氨苄西林、阿莫西林、克林霉素、四环素、强力霉素、环丙沙星等敏感,对新霉素、复方新诺明、庆大霉素、阿米卡星、万古霉素、痢特灵等完全耐药,临床上应根据上述结果指导用药。 展开更多
关键词 关节炎 丹毒丝菌 分离 鉴定 药敏试验
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丹毒丝菌spaA基因免疫保护区的克隆与功能研究 被引量:5
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作者 曹文尧 李江伟 +2 位作者 吕芳 侯秋莲 张富春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期496-500,共5页
本研究以丹毒丝菌XJ1249基因组DNA为模板,根据GenBank已发表的丹毒丝菌表面保护性抗原A (SpaA)的序列设计引物进行PCR扩增,得到大小约1 029 bp的spaA基因N端免疫保护片段(spaA-N)。将spaA-N连接到载体pGEX-4T-1上构建重组原核表达质粒pG... 本研究以丹毒丝菌XJ1249基因组DNA为模板,根据GenBank已发表的丹毒丝菌表面保护性抗原A (SpaA)的序列设计引物进行PCR扩增,得到大小约1 029 bp的spaA基因N端免疫保护片段(spaA-N)。将spaA-N连接到载体pGEX-4T-1上构建重组原核表达质粒pGEX-spaA-N,对重组质粒进行序列验证后,在IPTG的诱导下,表达和纯化重组蛋白r-SpaA-N,并研究其对小鼠的免疫保护作用。结果显示:分离纯化的重组蛋白具有免疫原性,并对小鼠具有免疫保护性,能够有效防止丹毒丝菌对小鼠的侵染。研究结果为进一步研究丹毒丝菌致病机理,开发新的猪丹毒诊断试剂盒和亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 丹毒丝菌 spaA基因 克隆
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肾移植术后肺部感染检出猪红斑丹毒丝菌 被引量:5
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作者 郭君其 吴守法 +3 位作者 谭建明 柳德灵 吴卫真 欧良明 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期F003-F004,共2页
关键词 肾移植 术后 肺部感染 猪红斑丹毒丝菌
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上海地区屠宰场猪红斑丹毒丝菌的分离鉴定 被引量:6
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作者 徐锋 王晓旭 +3 位作者 张维谊 宁昆 齐新永 沈莉萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第1期227-235,共9页
为了解上海地区猪红斑丹毒丝菌在健康猪群中的带菌状况,本试验选择上海地区标准化屠宰场的上市猪为研究对象,采集鼻拭子、肺脏、扁桃体和下颌淋巴结等样本,进行猪红斑丹毒丝菌的分离,采用VITEK 2Compact系统和VITEK MS快速鉴定系统进行... 为了解上海地区猪红斑丹毒丝菌在健康猪群中的带菌状况,本试验选择上海地区标准化屠宰场的上市猪为研究对象,采集鼻拭子、肺脏、扁桃体和下颌淋巴结等样本,进行猪红斑丹毒丝菌的分离,采用VITEK 2Compact系统和VITEK MS快速鉴定系统进行鉴定,并设计1对16SrRNA基因引物,对分离菌株进行PCR扩增,随机选取16株分离菌进行测序及16SrRNA同源性分析。结果显示,49.07%(105/214)的样本中分离到猪红斑丹毒丝菌,分离菌株同参考菌株及疫苗株之间16SrRNA同源性为99.6%~100.0%。本试验结果表明上海地区猪群中确实存在猪红斑丹毒丝菌的健康带菌状况。 展开更多
关键词 屠宰场 猪红斑丹毒丝菌 分离鉴定
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猪红斑丹毒丝菌GZ株的分离鉴定及序列分析 被引量:4
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作者 张乐宜 蔡汝健 +1 位作者 蒋智勇 宋长绪 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期31-38,共8页
2013年11月从广州某猪场发生急性败血症死亡的母猪心脏、肺脏、脾脏分离到1株病原菌,经形态学观察、培养特性、生化特性及16SrRNA、spaA基因测序,确定为猪红斑丹毒丝菌,命名为GZ株。结果表明,该菌株对阿莫西林、利福平、庆大霉素、... 2013年11月从广州某猪场发生急性败血症死亡的母猪心脏、肺脏、脾脏分离到1株病原菌,经形态学观察、培养特性、生化特性及16SrRNA、spaA基因测序,确定为猪红斑丹毒丝菌,命名为GZ株。结果表明,该菌株对阿莫西林、利福平、庆大霉素、头孢类抗生素高度敏感,对其他药物广泛耐药,对BALB/c小鼠的致死剂量为1.5×10^8cfu/mL。测序结果与NCBI收录的猪红斑丹毒丝菌进行Blast比对分析,16SrRNA基因与不同地区分离自人、蛋鸡、猪、白海雕、野猪、野兔、鼠等动物的同源性为95.9%~99.8%。spaA基因与NCBI收录的分离菌株核苷酸同源性为98.9%~99.9%,氨基酸同源性为99.5%,3处发生突变,其中,第36位缬氨酸突变为亮氨酸,第203位异亮氨酸突变为蛋氨酸,第257位亮氨酸突变为异亮氨酸;与1998年和2006年日本1a型Fujisawa株的核苷酸同源性最高,为99.8%,因此确定分离的GZ株为1a血清型。 展开更多
关键词 猪红斑丹毒丝菌 16S RRNA spaA
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丹毒丝菌SpaA基因免疫保护区的克隆及其在毕赤酵母中的表达 被引量:3
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作者 蒋志琼 钟泽民 +2 位作者 谭博敏 余希尧 黄毓茂 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期20-25,共6页
【目的】以毕赤酵母Pichia pastoris X-33为宿主表达猪丹毒丝菌Erysipelothrix rhusiopathiae Spa A基因氨基端的免疫保护区蛋白.【方法】以采集于广东某猪场的猪丹毒丝菌为模板,根据NCBI中已发表的Spa基因c DNA序列设计1对引物,通过PC... 【目的】以毕赤酵母Pichia pastoris X-33为宿主表达猪丹毒丝菌Erysipelothrix rhusiopathiae Spa A基因氨基端的免疫保护区蛋白.【方法】以采集于广东某猪场的猪丹毒丝菌为模板,根据NCBI中已发表的Spa基因c DNA序列设计1对引物,通过PCR扩增得到Spa A-N,并将其连接到表达载体p PICZαC上,得到重组表达质粒p PICZαC-Spa A-N;用Sac I酶将重组表达质粒p PICZαC-Spa A-N线性化后电转化入毕赤酵母X-33,经含博来霉素ZencinTM抗性的YPDS平板筛选和PCR鉴定的阳性转化子,用含不同浓度博来霉素抗性的YPDS平板筛选出高拷贝子并进行甲醇诱导培养,分别于诱导48、72、96 h后离心收集上清液,立即做SDS-PAGE,并进行SDS-PAGE及Western-blot试验.【结果和结论】成功克隆并表达了Spa A-N基因,构建了重组表达质粒p PICZαC-Spa A-N,并以毕赤酵母X-33为宿主成功表达了猪丹毒丝菌Spa A基因氨基端的免疫保护区蛋白.丹毒丝菌Spa A-N作为免疫保护区在酵母宿主中得以成功表达. 展开更多
关键词 丹毒丝菌 Spa A基因 毕赤酵母 克隆和表达 亚单位疫苗
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从阴道炎患者的阴道分泌物中检出红斑丹毒丝菌 被引量:3
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作者 原灵 陈亮 +2 位作者 董新平 谢一俊 郑礼宝 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第8期724-725,共2页
关键词 阴道炎 阴道分泌物 红斑丹毒丝菌 病原
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从耳道分泌物中分离出1株猪红斑丹毒丝菌 被引量:1
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作者 付宝庆 刘青华 +2 位作者 常纪 杜静 王成英 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2008年第5期397-397,共1页
关键词 猪红斑丹毒丝菌 外伤性鼓膜穿孔 中耳炎
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猪丹毒丝菌河南株的分离鉴定 被引量:1
16
作者 徐引弟 王治方 +5 位作者 张青娴 朱文豪 焦文强 李海利 郎利敏 王克领 《上海畜牧兽医通讯》 2020年第1期14-17,共4页
为了探明河南省原阳县某大型规模化养猪场育肥猪发生急性死亡的病因,采集病死猪的肺、心血、关节液、脑等组织进行了细菌的分离鉴定、血清型鉴定、药敏试验以及动物试验。结果从该猪场病死猪心血中分离到猪丹毒丝菌,血清型为1a型,分离... 为了探明河南省原阳县某大型规模化养猪场育肥猪发生急性死亡的病因,采集病死猪的肺、心血、关节液、脑等组织进行了细菌的分离鉴定、血清型鉴定、药敏试验以及动物试验。结果从该猪场病死猪心血中分离到猪丹毒丝菌,血清型为1a型,分离的猪丹毒丝菌对阿莫西林、头孢哌酮、青霉素最为敏感,其次对头孢唑林、头孢拉啶、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松等药物敏感。该分离菌对仔猪具有强毒力,采用敏感药物治疗和疫苗免疫结合的方法使疫情得到了有效控制。 展开更多
关键词 丹毒丝菌 分离 鉴定 血清型 药敏试验 动物试验
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人乳头瘤病毒L1基因与丹毒丝菌SpaA-N优势抗原表位序列的嵌合重组质粒构建及活性鉴定
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作者 庆格乐图 杨薇薇 +2 位作者 晏鹏飞 苏幼红 李江伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期145-150,共6页
为确定丹毒丝菌表面保护性抗原A的N-末端(SpaA-N)优势抗原表位,研发新型表位DNA嵌合疫苗,利用生物信息学软件对丹毒丝菌SpaA-N的优势B细胞抗原表位进行预测,以重叠PCR将优势表位插入人乳头瘤病毒16型的主要衣壳蛋白(HPV-16 L1)HI环结构... 为确定丹毒丝菌表面保护性抗原A的N-末端(SpaA-N)优势抗原表位,研发新型表位DNA嵌合疫苗,利用生物信息学软件对丹毒丝菌SpaA-N的优势B细胞抗原表位进行预测,以重叠PCR将优势表位插入人乳头瘤病毒16型的主要衣壳蛋白(HPV-16 L1)HI环结构的编码序列中,构建获得重组嵌合质粒pcDNA3-HPV-L1-ΔspaA。该重组质粒经体内、外瞬时转染后,RT-PCR均扩增获得了1 500 bp左右的目的片段。免疫印迹试验显示,体外转染嵌合质粒的细胞总蛋白能够与GST-SpaA-N重组蛋白免疫血清在56 kD处产生特异性结合。ELISA分析显示嵌合质粒可在小鼠体内产生差异显著的特异性抗体(P<0.01),抗体滴度为1∶1 000。此外,pcDNA3-HPV-L1-ΔspaA制备的抗血清至少可在1∶10稀释度条件下,介导外源补体对半数以上的菌体进行杀伤。该研究表明,获得的SpaA-N表位DNA嵌合疫苗具有免疫活性,为研发安全有效的丹毒丝菌新型DNA疫苗提供了一个新思路。 展开更多
关键词 丹毒丝菌 SpaA-N 表位预测 HPV-16 L1嵌合质粒 瞬时表达 活性
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抗红斑丹毒丝菌的rSpaA蛋白猪源单链抗体库构建及单链抗体淘选
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作者 王锐 葛猛 +4 位作者 陈一苇 方超 柴强强 李润成 余兴龙 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期647-653,共7页
从免疫过rSpaA的猪的脾淋巴细胞中提取总RNA,采用RT–PCR技术反转录合成cDNA。设计兼并引物扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸PCR方法,将VH和VL通过Linker连接成重组单链抗体(以下简写为sc Fv)的基因片段。... 从免疫过rSpaA的猪的脾淋巴细胞中提取总RNA,采用RT–PCR技术反转录合成cDNA。设计兼并引物扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸PCR方法,将VH和VL通过Linker连接成重组单链抗体(以下简写为sc Fv)的基因片段。将sc Fv的基因连接至噬菌粒载体p Comb3Xss,将重组载体电转化至宿主菌XL1-Blue,并经辅助噬菌体M13KO7拯救,获得猪源噬菌体单链抗体库,库容约为2.5×106。以rSpaA为靶抗原,经免疫亲和筛选,获得8株特异性较好的阳性克隆。本研究结果可为制备抗红斑丹毒丝菌的重组sc Fv提供新途径,并为猪丹毒的免疫检测和综合防制提供材料基础。 展开更多
关键词 猪源抗体库 单链抗体 红斑丹毒丝菌 体展示技术
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猪丹毒丝菌C43-5株菌种毒力检定标准再评价
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作者 李旭妮 李建 +5 位作者 王秀丽 刘元杰 张一帜 徐磊 冯妍 张媛 《中国动物检疫》 CAS 2023年第1期134-139,共6页
为进一步完善猪丹毒疫苗毒力检定标准,对猪丹毒丝菌C43-5株在肉肝胃消化汤中的生长规律进行了分析,测定了菌株对猪的最小致死剂量,并对1986、1996、2006、2015年4个冻干代次菌种进行了毒力和免疫原性测定。结果显示:C43-5株在肉肝胃消... 为进一步完善猪丹毒疫苗毒力检定标准,对猪丹毒丝菌C43-5株在肉肝胃消化汤中的生长规律进行了分析,测定了菌株对猪的最小致死剂量,并对1986、1996、2006、2015年4个冻干代次菌种进行了毒力和免疫原性测定。结果显示:C43-5株在肉肝胃消化汤中培养16 h时活菌数最高,而后进入稳定期,培养19 h后活菌数迅速下降,菌体大量死亡;以3.5×10^(10) CFU活菌静脉注射56~63日龄健康易感猪,2只试验猪在4 d内全部死亡;1986、1996、2006、2015年4个冻干代次的C43-5株菌种毒力和免疫原性检定结果均符合要求。同时提出了猪丹毒丝菌C43-5株毒力检定标准的修改建议,为延长菌种的保存期限提供了数据支撑。 展开更多
关键词 丹毒丝菌 毒力检定 标准 评价
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种鸭源猪丹毒丝菌分离及血清学调查
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作者 王腾 靳换 +7 位作者 纪丽丽 张清水 韩相敏 孙海港 白如念 杨秀环 何伟勇 苏敬良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第8期13-16,共4页
从发生生产性能异常的2个种鸭群中分离到2株革兰阳性丝状菌,经16S rRNA基因序列分析鉴定为猪丹毒丝菌。采用多重PCR对分离株编码表面保护性抗原(spa)基因进行扩增,分别获得大小约1 000 bp和900 bp的片段,判定为spaC型和spaB型。毒力检... 从发生生产性能异常的2个种鸭群中分离到2株革兰阳性丝状菌,经16S rRNA基因序列分析鉴定为猪丹毒丝菌。采用多重PCR对分离株编码表面保护性抗原(spa)基因进行扩增,分别获得大小约1 000 bp和900 bp的片段,判定为spaC型和spaB型。毒力检测结果表明,2个分离株对小鼠的半数致死量(LD50)分别为103CFU/0.2 mL和≤102CFU/0.2 mL。药敏试验结果表明,分离株对青霉素类和大部分头孢菌素类抗生素敏感,对氨基糖苷类等药物具有明显的抗性。为进一步了解猪丹毒丝菌对鸭群的感染情况,本研究采用生长凝集试验对来源于3个不同鸭场的种鸭群进行血清学调查,结果,抗丹毒丝菌抗体阳性率(抗体效价≥16)分别为82%、35%和20%,表明鸭群中广泛存在猪丹毒丝菌感染。 展开更多
关键词 种鸭 丹毒丝菌 spa型 血清流行病学
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