目的基质硬度参与调控中性粒细胞黏附、迁移和极化状态等多个生物学过程。本项目旨在研究基质硬度影响中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成的具体机制。方法构建生理病理条件下不同硬度(5~128 k Pa)的聚丙烯酰胺(PAA)凝胶。在PAA凝胶和玻璃...目的基质硬度参与调控中性粒细胞黏附、迁移和极化状态等多个生物学过程。本项目旨在研究基质硬度影响中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成的具体机制。方法构建生理病理条件下不同硬度(5~128 k Pa)的聚丙烯酰胺(PAA)凝胶。在PAA凝胶和玻璃底板上铺纤维蛋白原,黏附并培养人中性粒细胞4 h,对照组用GSK484抑制肽精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)的酶活性,观察并量化形成的NETs。结果纤维蛋白原结合的人中性粒细胞产生的NETs含量与基底硬度有关。随着PAA凝胶硬度的增加,中性粒细胞产生的胞外DNA先增加后减少。其中,34 k Pa硬度的PAA凝胶上,中性粒细胞产生的胞外DNA显著高于其他组。同样地,在不同硬度的PAA凝胶上,瓜氨酸化组蛋白的含量也呈现相同趋势。而抑制PAD4能有效消除硬度依赖的NETs形成。重要的是,这一硬度依赖的NETs形成与水凝胶的种类和边缘效应无关。此外,不同水凝胶上纤维蛋白原的密度无显著差异。结论纤维蛋白原介导的NETs形成是硬度依赖的。随着PAA凝胶硬度的增加,中性粒细胞产生的NETs先增加后减少,且PAD4参与这一过程。展开更多
目的通过研究中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)及相关因子在分泌性中耳炎(otitis media with effusion,OME)患者中耳渗液中随病程的变化,探讨NETs在OME中的病理机制。方法纳入2021年1月至2021年12月兰州大学...目的通过研究中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)及相关因子在分泌性中耳炎(otitis media with effusion,OME)患者中耳渗液中随病程的变化,探讨NETs在OME中的病理机制。方法纳入2021年1月至2021年12月兰州大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科收治的行鼓膜穿刺或鼓室切开置管OME患者30例(40耳),伴腺样体肥大27例,伴鼻窦炎11例。根据病程分为短病程组(<3月)14耳、中病程组(3~6月)8耳,长病程组(>6月)18耳。通过免疫荧光、Pico Green DNA试剂盒测定DNA含量、Western Blot等方法对各组中耳积液中中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、游离DNA、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)及黏蛋白5B(mucin 5B,MUC5B)进行定性及定量分析。结果OME患者中耳积液中NE、MPO与游离DNA共定位,形成网状结构。中耳积液中游离DNA、NE、MPO、IL-8和MUC5B的含量随病程延长而增加,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。MPO与NE表达呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05),MPO、NE与IL-8表达呈正相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NETs参与慢性OME的病理过程,含量水平受IL-8调控,其水平随病程延长而增加。OME患者中耳积液中MUC5B水平随病程延长而增多。展开更多
文摘目的基质硬度参与调控中性粒细胞黏附、迁移和极化状态等多个生物学过程。本项目旨在研究基质硬度影响中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成的具体机制。方法构建生理病理条件下不同硬度(5~128 k Pa)的聚丙烯酰胺(PAA)凝胶。在PAA凝胶和玻璃底板上铺纤维蛋白原,黏附并培养人中性粒细胞4 h,对照组用GSK484抑制肽精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)的酶活性,观察并量化形成的NETs。结果纤维蛋白原结合的人中性粒细胞产生的NETs含量与基底硬度有关。随着PAA凝胶硬度的增加,中性粒细胞产生的胞外DNA先增加后减少。其中,34 k Pa硬度的PAA凝胶上,中性粒细胞产生的胞外DNA显著高于其他组。同样地,在不同硬度的PAA凝胶上,瓜氨酸化组蛋白的含量也呈现相同趋势。而抑制PAD4能有效消除硬度依赖的NETs形成。重要的是,这一硬度依赖的NETs形成与水凝胶的种类和边缘效应无关。此外,不同水凝胶上纤维蛋白原的密度无显著差异。结论纤维蛋白原介导的NETs形成是硬度依赖的。随着PAA凝胶硬度的增加,中性粒细胞产生的NETs先增加后减少,且PAD4参与这一过程。
文摘目的通过研究中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)及相关因子在分泌性中耳炎(otitis media with effusion,OME)患者中耳渗液中随病程的变化,探讨NETs在OME中的病理机制。方法纳入2021年1月至2021年12月兰州大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科收治的行鼓膜穿刺或鼓室切开置管OME患者30例(40耳),伴腺样体肥大27例,伴鼻窦炎11例。根据病程分为短病程组(<3月)14耳、中病程组(3~6月)8耳,长病程组(>6月)18耳。通过免疫荧光、Pico Green DNA试剂盒测定DNA含量、Western Blot等方法对各组中耳积液中中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、游离DNA、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)及黏蛋白5B(mucin 5B,MUC5B)进行定性及定量分析。结果OME患者中耳积液中NE、MPO与游离DNA共定位,形成网状结构。中耳积液中游离DNA、NE、MPO、IL-8和MUC5B的含量随病程延长而增加,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。MPO与NE表达呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05),MPO、NE与IL-8表达呈正相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NETs参与慢性OME的病理过程,含量水平受IL-8调控,其水平随病程延长而增加。OME患者中耳积液中MUC5B水平随病程延长而增多。
