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幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白DNA疫苗的构建及其免疫保护作用 被引量:4
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作者 孙波 杨骅 +3 位作者 满晓华 李兆申 屠振兴 龚燕芳 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期842-845,共4页
目的:构建携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(Hp neutrophil-activating protein,Hp-NAP)基因(napA)活减毒鼠伤寒沙门菌重组DNA疫苗,初步观察其对慢性Hp感染的免疫保护作用。方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并经同源性分析后,... 目的:构建携带幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(Hp neutrophil-activating protein,Hp-NAP)基因(napA)活减毒鼠伤寒沙门菌重组DNA疫苗,初步观察其对慢性Hp感染的免疫保护作用。方法:应用基因工程技术扩增全长napA,测序并经同源性分析后,将其亚克隆入真核表达载体pIRES,鉴定正确后将重组质粒转化活减毒鼠伤寒沙门菌构建Hp-NAP口服DNA疫苗。口服Hp-SS1建立SS1长期感染小鼠模型,30周后随机均分为3组,每组各5只。治疗组予10 9 cfu/0.4 ml疫苗菌灌胃,1次/周×3周;2个对照组分别予等体积生理盐水或空白质粒。末次免疫4周后行快速尿素酶检测,ELISA测定血清抗体效价。结果:重组真核表达质粒pIRES-napA成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌SL7207;所克隆napA与GenBank中SS1-napA核苷酸和蛋白质的同源性均>98%。免疫后4周治疗组75%(3/4)小鼠快速尿素酶检测阴性,对照组均阳性,差异显著(P<0.05);治疗组血清抗Hp-NAP抗体效价明显升高。结论:成功构建了具有较好免疫保护作用的Hp-NAP口服重组DNA疫苗,为进一步研制多价抗Hp核酸疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门 中性粒细胞激活蛋白 疫苗 DNA
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中性粒细胞激活蛋白-2在大鼠哮喘中性粒细胞中的表达及意义 被引量:2
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作者 周华斐 罗冬娇 +3 位作者 童夏生 郭海渊 阮正英 叶辉 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2009年第8期883-887,共5页
目的:观察大鼠哮喘中性粒细胞激活蛋白-2(NAP-2)蛋白在中性粒细胞(NEU)上的表达及地塞米松对其的影响,探讨NEU参与哮喘发病的可能作用机制。方法:采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组、地塞米松治疗组,分离纯化血NEU,免疫组织化学... 目的:观察大鼠哮喘中性粒细胞激活蛋白-2(NAP-2)蛋白在中性粒细胞(NEU)上的表达及地塞米松对其的影响,探讨NEU参与哮喘发病的可能作用机制。方法:采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组、地塞米松治疗组,分离纯化血NEU,免疫组织化学法测定支气管和血NEU中NAP-2蛋白的表达水平。结果:哮喘组NEUNAP-2蛋白的平均光密度值(0.198±0.016)显著高于对照组值(0.079±0.015)(P<0.01);地塞米松治疗组的NEUNAP-2蛋白的平均光密度值(0.135±0.021)显著低于哮喘组且高于对照组(P<0.01)。哮喘组支气管NAP-2蛋白的平均光密度值(0.226±0.050)显著高于对照组值(0.140±0.012)(P<0.01);地塞米松治疗组的支气管NAP-2蛋白的平均光密度值(0.175±0.028)显著低于哮喘组且高于对照组(P<0.01或P<0.05)。NEUNAP-2蛋白的表达水平与支气管肺泡灌洗液NEU计数呈显著正相关(n=29,r=0.334,P<0.05)。结论:哮喘大鼠NEUNAP-2蛋白的表达水平增加,NEU可能通过NAP-2参与哮喘发病的炎症过程;地塞米松部分通过抑制NEUNAP-2的表达从而减轻气道炎症,NAP-2可能与NEU在肺组织中聚集有关。 展开更多
关键词 哮喘 中性粒细胞激活蛋白-2 免疫组织化学 中性粒细胞 地塞米松
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幽门螺杆菌UreB-NAP-HpaA三价DNA疫苗的构建及免疫原性初步研究 被引量:3
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作者 孙波 杨骅 +3 位作者 李兆申 屠振兴 龚燕芳 杜奕奇 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期636-638,共3页
目的:构建幽门螺杆菌(Hp)尿素酶亚单位B(UreB)、中性粒细胞激活蛋白(NAP)及黏附素A(HpaA)三价重组DNA疫苗并研究其抗原性,为Hp疫苗的开发奠定基础。方法:PCR扩增UreB、NAP、HpaA全长序列,分别克隆入pMD18T载体,测序并鉴定方向后依次连接... 目的:构建幽门螺杆菌(Hp)尿素酶亚单位B(UreB)、中性粒细胞激活蛋白(NAP)及黏附素A(HpaA)三价重组DNA疫苗并研究其抗原性,为Hp疫苗的开发奠定基础。方法:PCR扩增UreB、NAP、HpaA全长序列,分别克隆入pMD18T载体,测序并鉴定方向后依次连接,构建融合基因UNH,然后将其亚克隆入真核表达载体pIRES,以此转染COS7细胞,Western印迹检测表达蛋白的抗原性。结果:PCR分别获得约1707、432和750bp产物,与GenBank中相关序列具有高度同源性,三者融合后获得一约2901bp目的基因。重组质粒pIRES-UNH转染COS7细胞后表达相对分子质量约107000的蛋白质,Western印迹显示该重组蛋白可为UreB、NAP、HpaA抗血清特异识别,具有良好的抗原性。结论:成功构建了具有良好免疫原性的UreB-NAP-HpaA三价重组DNA疫苗,为进一步探讨其免疫保护性及Hp疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 尿素酶 中性粒细胞激活蛋白 黏附素 疫苗 DNA
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幽门螺杆菌napA基因克隆及高效表达与鉴定 被引量:1
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作者 高原 邹全明 吴超 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期882-883,887,共3页
关键词 幽门螺杆菌 高效表达 基因克隆 中性粒细胞激活蛋白 胃及十二指肠溃疡 慢性浅表性胃炎 慢性活动性胃炎 胃黏膜炎症
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幽门螺杆菌粘附素的研究进展 被引量:1
5
作者 洪愉 邹全明 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期59-61,共3页
关键词 幽门螺杆菌 粘附素 研究进展 神经氨酰乳糖 纤维血凝素 中性粒细胞激活蛋白
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HP-NAP对肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用 被引量:1
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作者 王晓东 康巧珍 +4 位作者 王小龙 李树芳 王婷 刘鑫 汲振余 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2016年第5期595-598,共4页
目的:研究幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(HP-NAP)对肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤的生长抑制作用及可能机制。方法:构建p ET28a-NAP重组质粒,转入E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG诱导HP-NAP的表达,Ni柱亲和层析法对其进行分离纯化。取BALB/c小鼠,皮下... 目的:研究幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(HP-NAP)对肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤的生长抑制作用及可能机制。方法:构建p ET28a-NAP重组质粒,转入E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG诱导HP-NAP的表达,Ni柱亲和层析法对其进行分离纯化。取BALB/c小鼠,皮下注射H22细胞(2×106个/只)构建荷瘤模型,随机分为PBS组和HP-NAP组,以皮下瘤旁注射的方式给予PBS或HP-NAP,监测肿瘤体积和小鼠体重变化。1周后牺牲小鼠,取瘤体及各脏器称重,以ELISA法检测脾细胞IFN-γ分泌水平,实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中IFN-γmRNA的表达水平。结果:利用大肠杆菌原核表达系统成功制备了HP-NAP。HP-NAP可显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,对小鼠体重和脏器指数无明显影响。与PBS组相比,HP-NAP组小鼠脾细胞IFN-γ的分泌水平及肿瘤组织中IFN-γmRNA的表达水平均升高(P<0.05)。结论:HP-NAP可能通过上调IFN-γ的表达抑制肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤的生长。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白 肝癌 H22细胞 IFN-Γ 小鼠
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