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蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法的建立
被引量：
5
1
作者
王红坤
王艺桦
+2 位作者
周丹银
董坤
张炫
《河南农业科学》
北大核心
2022年第3期154-161,共8页
为了建立一种灵敏度更高的蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法,根据残翅病毒保守基因片段设计引物,采取反转录过程与荧光定量PCR过程分步进行的方式,建立基于SYBR染料法检测残翅病毒的两步法实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性...
为了建立一种灵敏度更高的蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法,根据残翅病毒保守基因片段设计引物,采取反转录过程与荧光定量PCR过程分步进行的方式,建立基于SYBR染料法检测残翅病毒的两步法实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、稳定性和可行性进行验证。结果显示,建立的两步法荧光定量PCR检测方法采用的引物特异性良好,在6.58×10^(1)~6.58×10^(8)拷贝/μL质粒标准品间具有良好线性关系,R^(2)为0.9997,扩增效率为100.8%。该方法的灵敏度为6.58拷贝/μL,与蜜蜂黑蜂王台病毒和以色列急性麻痹病毒不发生交叉反应,组内变异系数为0.20%~0.66%,组间变异系数为0.08%~0.98%,对蜜蜂样品残翅病毒的阳性检出率明显高于普通PCR,具有良好的特异性、重复性和实用性。综上,成功建立了一种灵敏度高、适用性好的残翅病毒两步法实时荧光定量PCR检测方法,为我国蜜蜂残翅病的流行病学调查、疫情监测和预警机制的构建提供新的技术支持。
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关键词
西方蜜蜂
东方蜜蜂
残翅病毒
两步法荧光定量pcr
SYBR染料法
灵敏度
在线阅读
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职称材料
TaqMan荧光定量PCR快速检测锦鲤疱疹病毒方法的建立与应用
被引量：
2
2
作者
李涛
万译文
刘登望
《山东农业科学》
2016年第7期125-128,共4页
本研究采用一步DNA提取法快速提取锦鲤组织样品中的DNA,利用针对锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)TK基因保守区设计的一对特异性引物、一条特异荧光探针,经反应体系优化,应用实时荧光定量PCR检测技术,通过对荧光信号的实时监测实现对...
本研究采用一步DNA提取法快速提取锦鲤组织样品中的DNA,利用针对锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)TK基因保守区设计的一对特异性引物、一条特异荧光探针,经反应体系优化,应用实时荧光定量PCR检测技术,通过对荧光信号的实时监测实现对KHV的定量检测。整个过程快速、简捷,操作简单,可对KHV进行快速有效的诊断,具有一定的应用价值。
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关键词
锦鲤疱疹病毒
荧光
定量
pcr
TAQMAN
一
步法
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职称材料
两种一步法RNA提取试剂的比较
被引量：
4
3
作者
孙映雪
孙承英
+3 位作者
赵永刚
陈继明
宋翠平
王志亮
《中国动物检疫》
CAS
2004年第12期22-24,共3页
RNA的提取在生物医学研究和临床检测上应用广泛。本文分别用进口Invitrogen公司生产的以及我们自己研制的一步法RNA提取试剂,提取大肠杆菌RNA、鸡肌肉组织RNA和尿裳液RNA,通过核酸电泳和荧光定量RT-PCR进行比较。结果表明用我们自己研...
RNA的提取在生物医学研究和临床检测上应用广泛。本文分别用进口Invitrogen公司生产的以及我们自己研制的一步法RNA提取试剂,提取大肠杆菌RNA、鸡肌肉组织RNA和尿裳液RNA,通过核酸电泳和荧光定量RT-PCR进行比较。结果表明用我们自己研制的和进口的试剂提取的RNA都不含有DNA;这些RNA都可以作为模板进行RT-PCR检测,并且在数量上相互之间没有明显差异。说明我们自己研制的一步法RNA提取试剂可以取代进口试剂。此外,本文还讨论了此类试剂一些评定方法。
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关键词
一
步法
RNA
提取
试剂
荧光
定量
RT—
pcr
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职称材料
题名
蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法的建立
被引量：
5
1
作者
王红坤
王艺桦
周丹银
董坤
张炫
机构
云南农业大学动物科学技术学院
出处
《河南农业科学》
北大核心
2022年第3期154-161,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31560667)
国家现代蜂产业技术体系项目(CARS-44-kxj13)。
文摘
为了建立一种灵敏度更高的蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法,根据残翅病毒保守基因片段设计引物,采取反转录过程与荧光定量PCR过程分步进行的方式,建立基于SYBR染料法检测残翅病毒的两步法实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、稳定性和可行性进行验证。结果显示,建立的两步法荧光定量PCR检测方法采用的引物特异性良好,在6.58×10^(1)~6.58×10^(8)拷贝/μL质粒标准品间具有良好线性关系,R^(2)为0.9997,扩增效率为100.8%。该方法的灵敏度为6.58拷贝/μL,与蜜蜂黑蜂王台病毒和以色列急性麻痹病毒不发生交叉反应,组内变异系数为0.20%~0.66%,组间变异系数为0.08%~0.98%,对蜜蜂样品残翅病毒的阳性检出率明显高于普通PCR,具有良好的特异性、重复性和实用性。综上,成功建立了一种灵敏度高、适用性好的残翅病毒两步法实时荧光定量PCR检测方法,为我国蜜蜂残翅病的流行病学调查、疫情监测和预警机制的构建提供新的技术支持。
关键词
西方蜜蜂
东方蜜蜂
残翅病毒
两步法荧光定量pcr
SYBR染料法
灵敏度
Keywords
Apis mellifera
Apis cerena
Deformed wing virus
Two-step fluorescence quantitative
pcr
SYBR dye method
Sensitivity
分类号
S895.9 [农业科学—特种经济动物饲养]
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职称材料
题名
TaqMan荧光定量PCR快速检测锦鲤疱疹病毒方法的建立与应用
被引量：
2
2
作者
李涛
万译文
刘登望
机构
湖南农业大学生物科学技术学院
湖南省水产科学研究所
湖南农业大学农学院
出处
《山东农业科学》
2016年第7期125-128,共4页
基金
长沙市基础性研究与软科学资金专项(K1308009-31)
文摘
本研究采用一步DNA提取法快速提取锦鲤组织样品中的DNA,利用针对锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)TK基因保守区设计的一对特异性引物、一条特异荧光探针,经反应体系优化,应用实时荧光定量PCR检测技术,通过对荧光信号的实时监测实现对KHV的定量检测。整个过程快速、简捷,操作简单,可对KHV进行快速有效的诊断,具有一定的应用价值。
关键词
锦鲤疱疹病毒
荧光
定量
pcr
TAQMAN
一
步法
Keywords
Koi herpesvirus
Fluorescence quantitative
pcr
TaqMan
One-step method
分类号
S941.419 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
两种一步法RNA提取试剂的比较
被引量：
4
3
作者
孙映雪
孙承英
赵永刚
陈继明
宋翠平
王志亮
机构
农业部动物检疫所国家外来动物疫病诊断中心
出处
《中国动物检疫》
CAS
2004年第12期22-24,共3页
基金
国家十五攻关项目(2003BA712A04-04)资助
文摘
RNA的提取在生物医学研究和临床检测上应用广泛。本文分别用进口Invitrogen公司生产的以及我们自己研制的一步法RNA提取试剂,提取大肠杆菌RNA、鸡肌肉组织RNA和尿裳液RNA,通过核酸电泳和荧光定量RT-PCR进行比较。结果表明用我们自己研制的和进口的试剂提取的RNA都不含有DNA;这些RNA都可以作为模板进行RT-PCR检测,并且在数量上相互之间没有明显差异。说明我们自己研制的一步法RNA提取试剂可以取代进口试剂。此外,本文还讨论了此类试剂一些评定方法。
关键词
一
步法
RNA
提取
试剂
荧光
定量
RT—
pcr
Keywords
RNA, isolation, reagent, real-time RT-
pcr
分类号
Q522 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
蜜蜂残翅病毒两步法荧光定量PCR检测方法的建立
王红坤
王艺桦
周丹银
董坤
张炫
《河南农业科学》
北大核心
2022
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
TaqMan荧光定量PCR快速检测锦鲤疱疹病毒方法的建立与应用
李涛
万译文
刘登望
《山东农业科学》
2016
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
两种一步法RNA提取试剂的比较
孙映雪
孙承英
赵永刚
陈继明
宋翠平
王志亮
《中国动物检疫》
CAS
2004
4
在线阅读
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职称材料
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