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芪术颗粒对肝纤维化形成过程中磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸蛋白激酶信号传导通路的影响 被引量:6
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作者 刘绍能 杨清高 +2 位作者 潘澎 陶夏平 刘慧敏 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2014年第7期58-61,共4页
目的观察芪术颗粒在肝纤维化形成过程中对磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号传导通路的影响,进一步阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、实验对照组和芪术颗粒组,采用四氯化碳复制肝纤... 目的观察芪术颗粒在肝纤维化形成过程中对磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号传导通路的影响,进一步阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、实验对照组和芪术颗粒组,采用四氯化碳复制肝纤维化模型,造模同日即给予相应治疗,芪术颗粒组2 g/(kg?d)灌胃,体积为1.0 mL/100 g体质量,实验对照组、模型组给予等体积无菌水,正常组正常喂养。分别于造模后第1、2、4周处理、取材,Western blot免疫印迹法检测p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)、Bad(Ser136)、Caspase9蛋白表达。结果与正常组比较,模型组、芪术颗粒组各时间点p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)、Bad(Ser136)、Caspase9蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,第1、2、4周时芪术颗粒组p-Akt(Ser473)表达显著降低,第1、4周Caspase9表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);p-Akt(Thr308)、Bad(Ser136)表达低于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论芪术颗粒对PI3K/Akt信号传导通路的激活有调控作用,从而抑制肝纤维化的发生和发展。 展开更多
关键词 芪术颗粒 磷脂酰肌醇-3-激酶 蛋白激酶 信号传导通路 大鼠
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磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶B在小鼠过敏性气道反应肺组织炎性细胞中的差异表达 被引量:2
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作者 刘玉丽 杨畅 +5 位作者 卞镝 田辉 隋月皎 王列 王旭 方秀斌 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期309-311,共3页
目的:探讨丝/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)在过敏性小鼠肺组织不同炎性细胞中的活化状况。方法:应用卵蛋白致敏激发BALB/c小鼠制备过敏性气道炎症反应模型,抽取肺泡灌洗液(BALF)进行细胞总数计数和不同炎性细胞分类计数,应用免疫组... 目的:探讨丝/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)在过敏性小鼠肺组织不同炎性细胞中的活化状况。方法:应用卵蛋白致敏激发BALB/c小鼠制备过敏性气道炎症反应模型,抽取肺泡灌洗液(BALF)进行细胞总数计数和不同炎性细胞分类计数,应用免疫组织化学检测磷酸化Akt(p-Akt)在过敏性小鼠肺组织中不同炎性细胞的表达。结果:过敏性小鼠BALF中总细胞数明显高于正常鼠;分类细胞计数中,正常组以巨噬细胞为主,而过敏性小鼠的嗜酸性粒细胞、淋巴细胞百分比明显升高;免疫组织化学显示p-Akt在过敏性小鼠气道中嗜酸性粒细胞中表达明显高于淋巴细胞和巨噬细胞,而在淋巴细胞中表达明显高于巨噬细胞。结论:Akt在过敏性小鼠的气道炎症中的作用与炎性细胞的种类密切相关,发挥不同的诱导嗜酸性粒细胞和巨噬细胞增多、趋化、释放炎性细胞因子和对抗淋巴细胞凋亡等重要的作用。 展开更多
关键词 过敏性小鼠 肺组织 炎性细胞 蛋白激酶B
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草菇丝/苏氨酸蛋白激酶同源基因的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 汪虹 陈明杰 鲍大鹏 《食用菌学报》 北大核心 2011年第2期1-4,共4页
根据担子菌丝/苏氨酸蛋白激酶同源基因编码的氨基酸序列设计两对简并引物,通过巢式简并PCR方法获得草菇(Volvariella volvacea)丝/苏氨酸蛋白激酶同源基因(vv-stpk1)的保守片段,然后通过基因组步行的方法获得了vv-stpk1全长序列。vv-st... 根据担子菌丝/苏氨酸蛋白激酶同源基因编码的氨基酸序列设计两对简并引物,通过巢式简并PCR方法获得草菇(Volvariella volvacea)丝/苏氨酸蛋白激酶同源基因(vv-stpk1)的保守片段,然后通过基因组步行的方法获得了vv-stpk1全长序列。vv-stpk1全长为2 003 bp,含有8个内含子,长度分别为72、57、53、54、45、50、55和48 bp,可编码522个氨基酸残基的多肽。推定的氨基酸序列与玉米黑粉菌(Ustilagomaydis)、木糖发酵酵母(Pichia stipitis)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)中与细胞形态发生相关的丝/苏氨酸蛋白激酶Orb6的相似性分别为81%、77%和76%,对VV-STPK1蛋白的系统发生学分析的结果表明,VV-STPK1与Orb6同源蛋白聚在同一进化枝上,这些数据都支持VV-STPK1蛋白为与细胞形态发生相关同源蛋白的推定。 展开更多
关键词 草菇 /蛋白激酶 克隆 序列分析
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肺腺癌转移相关转录本-1沉默对喉癌细胞增殖、凋亡及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响 被引量:2
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作者 谭建成 刘鑫国 邢金燕 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 CSCD 2019年第9期476-480,共5页
目的 探讨RNA干扰技术(RNAi)沉默肺腺癌转移相关转录本-1(MALAT-1)基因对喉癌细胞增殖、凋亡及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路影响。方法体外培养人喉癌细胞Hep-2、正常永生化表皮细胞Hacat,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中... 目的 探讨RNA干扰技术(RNAi)沉默肺腺癌转移相关转录本-1(MALAT-1)基因对喉癌细胞增殖、凋亡及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路影响。方法体外培养人喉癌细胞Hep-2、正常永生化表皮细胞Hacat,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中MALAT-1mRNA表达水平。采用RNAi技术将MALAT-1阴性对照质粒、si-MALAT1分别转染至Hep-2细胞,命名为si-NC组、si-MALAT1组,未处理组作为空白对照组,分别检测三组Hep-2细胞中MALAT-1及B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bax、caspase-3mRNA表达水平、Bcl-2、Bax、caspase-3、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)及其磷酸化蛋白(p-PI3K)、Akt及其磷酸化蛋白(p-Akt)蛋白表达情况以及细胞增殖及凋亡情况。结果 与正常细胞相比,喉癌Hep-2细胞中MALAT-1mRNA表达水平(3.24±1.02)升高(P<0.05);与空白对照组、si-NC组相比,si-MALAT-1组Hep-2细胞中MALAT-1mRNA表达水平(0.47±0.08)及Bcl-2mRNA(0.56±0.09)及蛋白(0.31±0.05)表达降低,细胞增殖抑制率及凋亡率[(20.48±3.41)%]均升高,Bax、caspase-3mRNA(3.02±0.50、2.58±0.43)及蛋白表达(0.86±0.14、0.94±0.16)均升高,p-PI3K、p-Akt蛋白表达(0.57±0.10、0.51±0.08)均降低(P均<0.05)。结论 MALAT-1沉默可抑制人喉癌细胞系Hep-2细胞增殖并提高其凋亡率,推测可能通过影响Akt信号通路诱导癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 喉肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡 肺腺癌转移相关转录本-1 蛋白激酶
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粤蓝链霉菌中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因gra-orf7的功能初探
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作者 李超 胡建伟 +1 位作者 邓名荣 朱红惠 《陕西科技大学学报(自然科学版)》 2012年第2期28-34,共7页
粤蓝链霉菌是塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室近期发现的能够产生榴菌素的链霉菌新种.在榴菌素生物合成基因簇的左翼存在一个可能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因gra-orf7.为了解该基因的生理功能,通过PCR-targeting方法构建了粤蓝... 粤蓝链霉菌是塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室近期发现的能够产生榴菌素的链霉菌新种.在榴菌素生物合成基因簇的左翼存在一个可能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因gra-orf7.为了解该基因的生理功能,通过PCR-targeting方法构建了粤蓝链霉菌gra-orf7缺失突变株.表型分析结果显示,gra-orf7缺失突变株在菌落形态、产孢能力、孢子形态以及色素(榴菌素)最终产率等方面与野生株均无显著差异,但产色(榴菌素)时间延迟约1h.结果暗示gra-orf7基因编码的STPK在粤蓝链霉菌中可能参与了与榴菌素生物合成有关的上游调控信号的传导,但其具体生理功能和作用机制仍有待进一步研究. 展开更多
关键词 粤蓝链霉菌 /蛋白激酶 榴菌素
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磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶/核转录因子κB信号通路对细胞凋亡影响的研究进展 被引量:6
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作者 李冬冬 张红 《中国医药导报》 CAS 2014年第33期166-168,共3页
磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路是有核细胞内重要的传导通路之一,在调节细胞增殖、凋亡中起着重要作用。大量研究证明PI3K/Akt/NF-κB信号通路的激活可以影响细胞凋亡。本文就PI3K/A... 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路是有核细胞内重要的传导通路之一,在调节细胞增殖、凋亡中起着重要作用。大量研究证明PI3K/Akt/NF-κB信号通路的激活可以影响细胞凋亡。本文就PI3K/Akt/NF-κB信号通路对细胞凋亡影响作用进行综述。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶 核转录因子ΚB 细胞凋亡
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猪精氨酸-丝氨酸蛋白激酶1(SRPK1)克隆表达及功能初步分析 被引量:3
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作者 俄广鑫 刘娣 +6 位作者 张冬杰 杨秀琴 崔羽 祝继原 杨少成 王嘉博 谢宇彤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1379-1386,共8页
本研究旨在阐明猪SRPK1基因的分子特点和表达谱。以大白猪为研究对象,利用RT-PCR技术克隆SRPK1基因CDS区域,同时利用反向PCR(inverse PCR,I-PCR)技术得到猪部分SRPK1的5′UTR序列;利用生物信息学方法分析SRPK1基因核苷酸序列及编码蛋白... 本研究旨在阐明猪SRPK1基因的分子特点和表达谱。以大白猪为研究对象,利用RT-PCR技术克隆SRPK1基因CDS区域,同时利用反向PCR(inverse PCR,I-PCR)技术得到猪部分SRPK1的5′UTR序列;利用生物信息学方法分析SRPK1基因核苷酸序列及编码蛋白序列的结构特点;利用荧光定量PCR(real-time PCR)检测SRPK1在1和30日龄大白猪及杜洛克的心脏、肌肉、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、小肠、大肠、脑的表达情况;构建猪骨骼肌损伤模型,研究在骨骼肌发育过程中SRPK1基因的表达特性。结果,将克隆片段拼接得到长2499bp的大白猪SRPK1基因序列,包含了1968bp完整CDS区域,分析表明其编码含656个氨基酸的蛋白质;包括2个P_Kc结构域,猪SRPK1蛋白序列与人和黑猩猩的相似性较高。通过生物信息学方法预测所得5′UTR含有多个转录结合位点:HSF1、HSF2、Ik-1、IK-2、SRY、SP1MyoD、USF、E47、p300、CP2、RREB-1、E2F和AP-1。利用荧光定量PCR研究发现,表达结果显示猪该基因表达具有组织和种间特异性,主要都是在胃、大肠和小肠中表达。SR-PK1基因在整个损伤修复过程中的表达反复出现升高和降低。5′UTR处有多个和肌肉生长相关蛋白的转录结合位点,主要在消化系统组织表达,在骨骼肌修复中表达上调,推测其可能与骨骼肌细胞发育或其他肌肉生长相关因子的表达有关。 展开更多
关键词 /蛋白激酶1 实时荧光定量PCR 反向PCR 骨骼肌损伤模型 生物信息学分析
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促红细胞生成素类似结构对大鼠心肌缺血损伤的保护作用及对心肌蛋白激酶丝氨酸/苏氨酸激酶表达的影响
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作者 王媛媛 曹建 +2 位作者 邓莉 陈勤 欧阳先国 《中国医药导报》 CAS 2014年第27期17-20,共4页
目的研究促红细胞生成素类似结构[促红细胞生成素B螺旋结构表面缩氨酸(pHBP)]对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的影响及蛋白激酶丝氨酸/苏氨酸激酶(p44/p42 MAPK)表达。方法 80只大鼠随机分为四组:假手术组(n=20)、I/R组(n=20)、I/R+促红... 目的研究促红细胞生成素类似结构[促红细胞生成素B螺旋结构表面缩氨酸(pHBP)]对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的影响及蛋白激酶丝氨酸/苏氨酸激酶(p44/p42 MAPK)表达。方法 80只大鼠随机分为四组:假手术组(n=20)、I/R组(n=20)、I/R+促红细胞生成素(rhEPO)组(n=20)和I/R+pHBP组(n=20)。采用垫扎球囊结扎冠状动脉方法制作心肌缺血再灌注动物模型,I/R+rhEPO组和I/R+pHBP组分别于缺血再灌注后5 min经尾静脉注射rhEPO(3000 U/kg)、pHBP(1μg/kg),I/R组及假手术组给予等体积生理盐水,检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,采用TTC染色确定梗死面积。术后3、24 h,Western blot法检测细胞外信号调节的p44/p42 MAPK表达。结果与I/R组心肌梗死面积[(18.45±1.24)%]比较,I/R+rhEPO组[(12.32±1.27)%]、I/R+pHBP组[(11.64±2.32)%]心肌梗死面积下降,差异有统计学意义(P<0.05);与I/R组血清LDH[(3012.24±175.21)U/L]及CK-MB[(216.02±15.24)U/L]比较,I/R+rhEPO组和I/R+pHBP组的血清LDH及CK-MB[(2433.24±116.32)、(2511.12±98.72)、(128.16±17.52)、(121.31±21.43)U/L]均下降,差异有统计学意义(P<0.05);制模3 h,与I/R组比较,I/R+pHBP组p44/42 MAPK蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);制模24 h,与I/R组比较,I/R+rhEPO组p44/42 MAPK蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P>0.05)。结论 pHBP在大鼠心肌缺血损伤中具有心脏保护作用,其保护机制可能与其抑制心肌细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 促红细胞生成素类似结构 缺血再灌注 激酶
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2型猪链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶重组蛋白的制备及鉴定 被引量:3
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作者 杜骁杰 郭静静 +4 位作者 王晶 李敏 王玲 王长军 潘秀珍 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第2期120-123,共4页
目的链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(serine/threonine phosphotase,STP)是重要的磷酸化信号调控系统成员之一。文中对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)STP编码基因stp进行原核表达并对纯化蛋白进行酶活测定。方法对S.s... 目的链球菌丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(serine/threonine phosphotase,STP)是重要的磷酸化信号调控系统成员之一。文中对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)STP编码基因stp进行原核表达并对纯化蛋白进行酶活测定。方法对S.suis 2 stp进行生物信息学分析,PCR扩增stp基因片段,构建重组表达载体pET28a::stp。将载体转入E.coli BL21中,经IPTG诱导,Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定,利用磷酸对硝基苯酯(p-nitrophenyl phosphate,pNPP)为底物测定其水解量进而鉴定磷酸酶活性。结果从05ZYH33基因组中PCR扩增到810 bp的片段,经连接获得重组表达载体pET28a::stp;经诱导表达及纯化获得相对分子质量为32000的重组蛋白,该蛋白在Mn2+存在下能够水解pNpp。结论获得纯度较高的STP重组蛋白,该蛋白具有Mn2+依赖的磷酸酶活性,为后续阐明STK/STP磷酸化系统的调控机制打下基础。 展开更多
关键词 2型猪链球菌 链球菌 原核表达 酶活鉴定
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基于丝氨酸/苏氨酸激酶信号观察芬太尼对鼻咽癌细胞增殖侵袭的作用机制 被引量:1
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作者 张宇帆 郭俊 乐新会 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 CSCD 2019年第12期674-677,共4页
目的基于丝氨酸/苏氨酸激酶(RhoA/Rho)信号通路观察芬太尼(简称芬太尼)对鼻咽癌细胞增殖侵袭的影响。方法传代培养高侵袭性鼻咽癌细胞系CNE2,分为空白对照组(加入无血清培养基)、抑制剂组(加入RhoA激酶抑制剂C3转化酶)、芬太尼组(加入... 目的基于丝氨酸/苏氨酸激酶(RhoA/Rho)信号通路观察芬太尼(简称芬太尼)对鼻咽癌细胞增殖侵袭的影响。方法传代培养高侵袭性鼻咽癌细胞系CNE2,分为空白对照组(加入无血清培养基)、抑制剂组(加入RhoA激酶抑制剂C3转化酶)、芬太尼组(加入药物芬太尼)。MTT实验、划痕实验及Transwell检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,采用qRT-PCR法、Western blot法检测 RhoA、Rho的mRNA和蛋白表达。采用Western blot法检测RhoA/Rho激活后的下游效应产物MYPT1蛋白。结果与空白对照组比较,芬太尼组与抑制剂组细胞克隆数、细胞增殖率、细胞迁移率均显著降低(t=24.947、22.329、5.361、4.789、9.262、8.968,P均<0.05);抑制剂组与芬太尼组RhoA以及Rho的mRNA转录水平显著低于空白对照组(t=7.712、8.261、7.983、7.905,P均<0.05);与空白对照组相比,芬太尼组与抑制剂组的RhoA、Rho以及MYPT1蛋白表达明显降低(t=2.661、3.105、3.862、3.429、4.656、4.648,P均<0.05)。结论芬太尼可抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭,该作用可能与其抑制Roha/Rho激酶信号密切相关。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 芬太尼 细胞增殖 细胞侵袭 /激酶信号通路
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磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂LY294002对小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用 被引量:1
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作者 底煜 陈晓隆 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第3期210-213,共4页
目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(Serine/threonine kinase,AKT)信号转导通路抑制剂LY294002对小鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)的视网膜新生血管(retinal neov... 目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(Serine/threonine kinase,AKT)信号转导通路抑制剂LY294002对小鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)的视网膜新生血管(retinal neovascularization,RNV)形成的影响。方法取C57BL/6J小鼠60只,随机分为实验组和对照组,每组各30只,均制备OIR模型。小鼠出氧箱前1 d即鼠龄11 d时实验组玻璃体内注射0.5μL的LY294002,对照组玻璃体内注射等体积的PBS。病理切片计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数,免疫组织化学和RT-PCR法检测p AKT、VEGF蛋白及m RNA的表达情况。结果实验组小鼠新生血管内皮细胞核数为(12.53±1.71)个,较对照组(25.31±1.42)个明显减少(P<0.05);实验组小鼠p AKT、VEGF的蛋白表达呈弱阳性,阳性细胞的吸光度值(9.12±1.35、13.91±1.49)均较对照组(15.11±2.17、19.72±2.61)明显下降(均为P<0.05);实验组小鼠AKT、VEGF m RNA相对表达量均较对照组明显下降(均为P<0.05)。结论 LY294002通过抑制PI3K/AKT信号转导通路,可有效抑制小鼠OIR的RNV形成,LY294002有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效方法。 展开更多
关键词 LY294002 磷脂酰肌醇3激酶激酶 氧诱导视网膜病变 早产儿视网膜病变 视网膜新生血管
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磷酸化的p44/42丝裂原激活的蛋白激酶分子在正常家猫脑干内的分布
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作者 金亮 李改丽 +2 位作者 王百忍 段晓莉 鞠躬 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期348-351,共4页
用ABC法免疫组化技术研究了正常家猫脑干中磷酸化的P44/ 42MAPK的分布。实验发现 :磷酸化的P44/42MAPK分子主要分布在家猫脑干中的中缝核群 ,与小脑功能有关的下橄榄核、外侧网状核 ,与内脏功能相关的迷走神经背核、孤束核和臂旁外侧核... 用ABC法免疫组化技术研究了正常家猫脑干中磷酸化的P44/ 42MAPK的分布。实验发现 :磷酸化的P44/42MAPK分子主要分布在家猫脑干中的中缝核群 ,与小脑功能有关的下橄榄核、外侧网状核 ,与内脏功能相关的迷走神经背核、孤束核和臂旁外侧核及前庭核群等部位的神经元 ,此外还分布在脑干尾侧端和颈髓吻侧端灰质的胶质细胞中。结果提示磷酸化的P44/ 42MAPK分子可能和这些细胞的功能相关。 展开更多
关键词 脑干 蛋白激酶 神经细胞 /激酶
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丝氨酸羟甲基转移酶2对人皮肤黑色素瘤细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 夏艳 曹远均 +1 位作者 李俊葓 张妮 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第5期537-543,共7页
目的研究丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)对人皮肤黑色素瘤细胞增殖的影响及作用机制。方法通过GEPIA在线数据库分析人皮肤黑色素瘤中SHMT2的表达情况及其与β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达的相关性。通过嘌呤霉素进行压力筛选获取稳定表... 目的研究丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)对人皮肤黑色素瘤细胞增殖的影响及作用机制。方法通过GEPIA在线数据库分析人皮肤黑色素瘤中SHMT2的表达情况及其与β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达的相关性。通过嘌呤霉素进行压力筛选获取稳定表达SHMT2的人皮肤黑色素瘤A-375-SHMT2细胞株,采用细胞计数、CCK-8法、流式细胞术分别检测SHMT2对细胞增殖和细胞周期的影响,Western blot检测β-catenin及其下游分子Cyclin D1和c-Myc蛋白的表达。萤火虫荧光素酶报告系统实验(TOP/FOP-Flash luciferase reporter assay)检测wnt/β-catenin信号通路的活性。在稳定表达SHMT2的A-375-SHMT2细胞中使用XAV-939抑制wnt/β-catenin信号通路活性后,观察细胞增殖的变化。结果GEPIA在线数据库分析的结果显示,SHMT2在人皮肤黑色素瘤患者肿瘤组织中高表达(P<0.05),SHMT2表达与β-catenin、c-Myc和Cyclin D1呈正相关(P<0.05)。成功筛选获得稳定表达SHMT2的A-375-SHMT2细胞系及对照细胞系A-375-GFP。与A-375-GFP组相比,A-375-SHMT2组细胞的增殖能力更强(P<0.05),处于细胞周期G0/G1期的细胞比例降低(P<0.05),S期和G2/M期的细胞比例增高(P<0.05)。Western blot和双荧光素酶TOP/FOP实验的结果显示SHMT2增强wnt/β-catenin信号通路活性(P<0.05),并上调β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达(P<0.05)。在A-375-SHMT2细胞中使用XAV-939抑制wnt信号通路后可以逆转SHMT2对细胞增殖的促进作用及对Cyclin D1和c-Myc的上调效应(P<0.05)。结论SHMT2通过激活wnt/β-catenin信号转导通路活性促进人皮肤黑色素瘤细胞的体外增殖。 展开更多
关键词 羟甲基转移酶2 WNT/Β-CATENIN信号通路 细胞增殖 皮肤黑色素瘤 细胞周期
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丝/精氨酸蛋白特异性激酶生理功能及其在肿瘤中的研究进展
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作者 伍倩倩 黄飞 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期118-120,共3页
丝氨酸/精氨酸(serine/arginine,SR或RS)蛋白激酶是一类能与SR或RS二肽模体特异性结合的酶,而SR蛋白是细胞生长发育过程中的关键因子。
关键词 特异性结合 蛋白激酶 生理功能 肿瘤 发育过程 细胞生长
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腰椎间盘突出症患者髓核组织中受体相互作用的丝氨酸苏氨酸激酶1表达和临床意义 被引量:1
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作者 吴茂聪 王令玲 邓信昌 《中国骨伤》 CAS CSCD 2021年第4期363-367,共5页
目的:探讨腰椎间盘突出症(lumbar disc herniation,LDH)患者髓核组织中受体相互作用的丝氨酸苏氨酸激酶1(receptor-interacting protein serine-threonine kinases 1,RIPK1)表达和临床意义。方法:选取2016年1月至2018年1月治疗40例LDH... 目的:探讨腰椎间盘突出症(lumbar disc herniation,LDH)患者髓核组织中受体相互作用的丝氨酸苏氨酸激酶1(receptor-interacting protein serine-threonine kinases 1,RIPK1)表达和临床意义。方法:选取2016年1月至2018年1月治疗40例LDH患者的髓核组织标本为病例组,另选取同期行手术治疗30例腰椎骨折患者的髓核组织为对照组,分别采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR),Western blot法检测两组患者髓核组织中RIPK1 mRNA和蛋白的表达,采用免疫组织化学染色法检测两组患者髓核组织中RIPK1蛋白表达,采用ELISA法检测两组患者髓核组织中RIPK1和TNF-α浓度,采用单因素方差分析髓核组织中RIPK1和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度与LDH患者Pearce分级间的关系,采用Pearson分析RIPK1与TNF-α浓度间的相关性。结果:RIPK1在对照组髓核组织中呈弱阳性表达,RIPK1蛋白在病例组中呈阳性或强阳性表达。病例组髓核组织RIPK1 mRNA表达量高于对照组(P<0.05)。病例组髓核组织中RIPK1蛋白表达量高于对照组(P<0.05)。病例组髓核组织RIPK1浓度高于对照组(P=0.012)。病例组髓核组织TNF-α浓度显著高于对照组(P=0.009)。不同Pearce分级的LDH患者髓核组织中RIPK1和TNF-α浓度存在显著性差异(P>0.05),髓核组织中RIPK1和TNF-α浓度随着Pearce分级增加而显著升高。Pearson相关分析示LDH患者髓核组织中RIPK1和TNF-α浓度间存在显著正相关(r=0.781,P<0.001)。结论:LDH患者椎间盘组织中RIPK1 mRNA和蛋白表达水平高于正常的椎间盘组织,随着Pearce分级增高而升高,其可能是参与LDH炎性病变的重要因子。 展开更多
关键词 蛋白激酶 腰椎间盘突出症 临床意义
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大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析
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作者 章志涛 李祥龙 +2 位作者 孔令丽 罗雨昕 王冬英 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1107-1117,共11页
【目的】克隆大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A(Ser/Thr protein phosphatases 2A,PP2A)基因并构建原核表达载体,获得原核表达蛋白,为探究PP 2 A基因功能及其在大片形吸虫的发育中的作用奠定基础。【方法】提取大片形吸虫成虫虫体... 【目的】克隆大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A(Ser/Thr protein phosphatases 2A,PP2A)基因并构建原核表达载体,获得原核表达蛋白,为探究PP 2 A基因功能及其在大片形吸虫的发育中的作用奠定基础。【方法】提取大片形吸虫成虫虫体组织总RNA,应用RT-PCR方法扩增PP 2 A基因的完整编码区序列,并以双酶切的方式连接pET-28a(+)载体;经酶切、测序鉴定后获得阳性质粒pET-28a-PP2A,将pET-28a-PP2A重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,并对重组蛋白的诱导条件进行优化;通过SDS-PAGE及Western blotting检测大片形吸虫PP 2 A基因的表达效果;应用实时荧光定量PCR检测PP 2 A基因在大片形吸虫虫卵、囊蚴、6周龄童虫和成虫阶段中的表达情况。【结果】克隆的大片形吸虫PP 2 A基因编码区序列长1161 bp,编码386个氨基酸,分子式为C_(1980)H_(3105)N_(535)O_(566)S_(24),分子质量为44.23 ku。生物信息学分析结果显示,大片形吸虫PP 2 A基因编码的蛋白为PP2Ac,分子功能为信号转导(GO:0004871),生物学过程为蛋白去磷酸化(GO:0006470),细胞组分为细胞质(GO:0005829)。PP2A蛋白无信号肽,不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白,共含有37个磷酸位点。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,大片形吸虫PP2A在30℃、0.8 mmol/L IPTG诱导6 h时表达量最大,表达产物主要以包涵体的形式存在,且Western blotting检测结果显示,重组蛋白可被抗His标签识别;实时荧光定量PCR结果显示,PP 2 A基因在大片形吸虫6周龄童虫阶段表达量最高,极显著高于其他阶段(P<0.01);在囊蚴阶段的表达量最低,与虫卵阶段差异不显著(P>0.05)。【结论】本研究成功构建了大片形吸虫PP2A原核表达载体并获得相应蛋白,为研究PP 2 A基因在大片形吸虫生长发育中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 大片形吸虫 /蛋白酶2A(PP2A) 原核表达
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钆在柠檬酸(L-天冬氨酸)、L-丝氨酸(L-苏氨酸)三元水相体系中的化学形态 被引量:2
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作者 韩景芬 王悦 +4 位作者 许红云 柳艳敏 杨魁跃 牛春吉 倪嘉缵 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期77-79,共3页
The stability constants of ternary complexes of Gd(Ⅲ) with citric( L aspartic) acid and L serine( L threonine) under the synthetic biological conditions of temperature and background electrolyte (37 ℃, 0.15 mol/L Na... The stability constants of ternary complexes of Gd(Ⅲ) with citric( L aspartic) acid and L serine( L threonine) under the synthetic biological conditions of temperature and background electrolyte (37 ℃, 0.15 mol/L NaCl) were obtained by potentiometric titration. The distributions of Gd(Ⅲ) species in these systems have been discussed. 展开更多
关键词 化学形态 柠檬 天冬
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咪唑催化磷酰化丝、苏氨酸及其酯的活化反应 被引量:2
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作者 阎庆金 尹应武 +2 位作者 王倩 毛庆群 赵玉芬 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1995年第10期1563-1566,共4页
咪唑对磷酰化氨基酸的活化反应具有较强的催化作用,磷酰化丝、苏氨酸在咪唑催化下不仅能发生溶剂解反应,如磷上酯交换、羧基活化成酯、成肽及磷酰基的N→O迁移等,而且还会发生分子内环化反应;对于化学性质非常稳定的磷酰化丝、苏... 咪唑对磷酰化氨基酸的活化反应具有较强的催化作用,磷酰化丝、苏氨酸在咪唑催化下不仅能发生溶剂解反应,如磷上酯交换、羧基活化成酯、成肽及磷酰基的N→O迁移等,而且还会发生分子内环化反应;对于化学性质非常稳定的磷酰化丝、苏氨酸酯在咪唑催化下也会发生上述反应;反应机理推测为丝、苏氨酸的侧链基团羟基在咪唑的存在下亲核进攻磷原子形成五配位中间体。 展开更多
关键词 咪唑 磷酰化 催化 磷酰化
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丝氨酸蛋白酶抑制剂vaspin与炎症反应关系的研究进展 被引量:4
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作者 程应湘 马晓冬 +2 位作者 刘晓田 郑永锋 邵东华 《山东医药》 CAS 2021年第2期103-106,共4页
丝氨酸蛋白酶抑制剂vaspin是近年发现的一种脂肪因子,主要由脂肪组织产生,能够调控机体的炎症反应、糖脂代谢和胰岛素抵抗等。vaspin通过调节多种信号通路参与炎症反应并调控炎症因子的表达,并与动脉粥样硬化、2型糖尿病、银屑病等疾病... 丝氨酸蛋白酶抑制剂vaspin是近年发现的一种脂肪因子,主要由脂肪组织产生,能够调控机体的炎症反应、糖脂代谢和胰岛素抵抗等。vaspin通过调节多种信号通路参与炎症反应并调控炎症因子的表达,并与动脉粥样硬化、2型糖尿病、银屑病等疾病的发生发展密切相关。当机体患有动脉粥样硬化或糖尿病心肌病等疾病时,外源性vaspin减少炎症因子释放,减轻炎症反应,延缓疾病的进展。深入了解vaspin及其介导的与炎症相关通路,分析vaspin与炎症反应的关系,有助于为临床治疗提供新的方向。 展开更多
关键词 VASPIN 蛋白酶抑制剂 炎症反应 信号通路 动脉粥样硬化 2型糖尿病 银屑病
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丝裂酶原活化蛋白激酶与血管平滑肌增殖的信号转导 被引量:1
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作者 程扬 《湖北民族学院学报(医学版)》 2001年第2期41-43,共3页
关键词 裂酶原蛋白激酶 激酶 G蛋白偶连受体 血管平滑肌 MAPK 激活 VSMC
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