Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展

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作者 张红燕 金参 罗文 《浙江农业科学》 2025年第7期1770-1778,共9页

Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂广泛存在于自然界,其包含1个或多个Kunitz结构域,该结构域通常是由2段α螺旋,一对反向平行的β折叠,β转角和2个环以及2~3对保守的二硫键组成。这些含Kunitz结构域的蛋白通过与丝氨酸蛋白酶以一种类似底物的... Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂广泛存在于自然界,其包含1个或多个Kunitz结构域,该结构域通常是由2段α螺旋,一对反向平行的β折叠,β转角和2个环以及2~3对保守的二硫键组成。这些含Kunitz结构域的蛋白通过与丝氨酸蛋白酶以一种类似底物的方式紧密结合,阻断了丝氨酸蛋白酶的活性位点,从而抑制了酶的活性。本文综述了这类抑制剂在抗肿瘤、抗凝血、抗炎、抗微生物等方面发挥的重要作用。 展开更多

关键词 Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂 结构 功能

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家蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因BmSPI3的克隆与表达特征分析 被引量：5

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作者 郑青亮 须苏菊 +2 位作者 周方平 吕正兵 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期496-502,共7页

Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用。从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(C... Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用。从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(CⅠ-X3-CⅡ-X8-CⅢ-X14-CⅣ-X6-CⅤ-X13-CⅥ),且P1活性位点为赖氨酸(K),因此将该基因命名为BmSPI3(Gen-Bank登录号:DN237641)。通过PCR扩增BmSPI3基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-BmSPI3,并转化到E.coliBL21(DE3)表达,经SDS-PAGE电泳检测在约36kD处有明显的蛋白表达条带。提取各发育时期蚕体和5龄幼虫各个组织的总RNA进行荧光定量PCR,检测结果表明:BmSPI3在5龄幼虫期表达量最高,卵期最低;在5龄幼虫表皮中的表达量最高,在马氏管的表达量最低。推测BmSPI3对胰蛋白酶和类胰蛋白酶具有抑制作用。 展开更多

关键词 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂 家蚕 基因克隆 原核表达 荧光定量PCR

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草鱼丝氨酸蛋白粗酶的提取、酶学特性及大豆胰蛋白酶抑制剂对其活性的影响

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作者 周佳怡 洪惠 +1 位作者 罗永康 谭雨青 《广东海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期112-118,共7页

【目的】探究草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)粗酶的提取方法、酶学特性,以及大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对草鱼鱼糜凝胶品质的影响,为改善传统草鱼鱼糜制品品质提供理论基础。【方法】从草鱼背肌中提取M... 【目的】探究草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)粗酶的提取方法、酶学特性,以及大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)对草鱼鱼糜凝胶品质的影响,为改善传统草鱼鱼糜制品品质提供理论基础。【方法】从草鱼背肌中提取MBSP粗酶液,探究提取过程中漂洗次数(1~5次)、热处理温度(35、40、45、50、55℃)、酸洗脱pH值(pH 4.0、pH 5.5)对提取液酶活性的影响,获得最佳提取条件;设置梯度实验探究所得酶的最适温度、pH、稳定性等酶学特性,最后探究大豆胰蛋白酶抑制剂对粗酶酶活性的影响及其对草鱼鱼糜凝胶性能的调控。【结果及结论】经3次漂洗、45℃热处理、pH 4.0酸洗脱后得到的草鱼MBSP粗酶液酶活性最高(P<0.05);所得MBSP最适pH值在9.0附近,最适温度为45℃,具有较好的温度稳定性(P<0.05),其活性可被Na^(+)在一定程度上抑制且被K+、Ca^(2+)激活(P<0.05);STI添加可以显著改善草鱼鱼糜质构,其对草鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶有可逆竞争性抑制作用,半抑制质量浓度为10.85μg/mL,抑制常数Ki=0.24μmol/L。 展开更多

关键词 草鱼 肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 分离提取 酶学特性 大豆胰蛋白酶抑制剂

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青蛤Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆及其在组织间的表达分析 被引量：2

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作者 张皞 赵婷 +1 位作者 任毅鹏 潘宝平 《四川动物》 CSCD 北大核心 2014年第4期563-567,共5页

利用构建的SMART-cDNA文库及高通量测序方法，获得了青蛤Kazal家族丝氨酸蛋白酶抑制剂基因（Serine Protease Inhibitor，SPI）的全长序列，采用荧光定量PCR方法分析了SPI在青蛤各组织的表达情况，并在鳗弧菌胁迫下分析了SPI在青蛤血液... 利用构建的SMART-cDNA文库及高通量测序方法，获得了青蛤Kazal家族丝氨酸蛋白酶抑制剂基因（Serine Protease Inhibitor，SPI）的全长序列，采用荧光定量PCR方法分析了SPI在青蛤各组织的表达情况，并在鳗弧菌胁迫下分析了SPI在青蛤血液中的时序表达关系。结果表明，青蛤SPI基因全长587 bp，CDS为67-520 bp，编码151个氨基酸，具有19个氨基酸的信号肽序列；荧光定量PCR结果显示，该基因在血液、肝脏、外套膜、鳃和闭壳肌等组织中表达差异明显，其中血液中表达水平最高，在闭壳肌中表达水平较低，其他组织表达量极少；在鳗弧菌刺激后3 h和48 h青蛤血液中SPI的表达量出现明显上调的趋势且与对照组有极显著性差异（P〈0.01）,说明SPI基因在青蛤的免疫反应中具有重要的作用。 展开更多

关键词 青蛤 鳗弧菌 丝氨酸蛋白酶抑制剂 kazal 实时定量PCR

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神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂在大鼠小胶质细胞缺氧／复氧模型上的作用 被引量：5

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作者 杨雪莲 董强 +1 位作者 刘玲 王亮 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期226-232,共7页

目的探讨神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(neuroserpin,NSP)是否可以改变组织型纤溶酶原激活物(tissueplasminogen activator,tPA)对于小胶质细胞(microglia,MG)活化的影响。方法体外原代培养的大鼠皮层MG并鉴定。建立缺氧-复氧模型并鉴定... 目的探讨神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(neuroserpin,NSP)是否可以改变组织型纤溶酶原激活物(tissueplasminogen activator,tPA)对于小胶质细胞(microglia,MG)活化的影响。方法体外原代培养的大鼠皮层MG并鉴定。建立缺氧-复氧模型并鉴定。首先,使用ELISA试剂盒测定MG在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)状态下自身释放tPA的含量,细胞被分为正常组、PBS对照组和OGD3h复氧不同时间组(1、3、5、7、24 h)。其次,研究NSP在MG缺氧/复氧时的作用,本部分实验分3组,分别为缺氧/复氧干预组、tPA干预组及tPA+NSP干预组。以上各组均设3个复孔,实验重复3次。采用倒置相差显微镜直接观察盖玻片上细胞形态学变化,CCK-8法检测各组间细胞增殖率,ELISA试剂盒测定IL-1β和NO含量。结果 MG在H/R时合成tPA,OGD3h复氧3h时释放量最多。H/R时MG激活,炎性因子IL-1β和NO的释放增多。tPA干预MG后,细胞活化并增殖、IL-1β和NO的释放增多。各NSP预处理组细胞活化、增殖和炎性因子的释放增多均没有tPA或H/R干预组明显。结论 MG在H/R时合成tPA。H/R早期即诱发了MG的活化。tPA可以进一步诱发MG的增殖和活化。H/R和tPA的干预均引起IL-1β和NO的释放。NSP可减轻H/R和tPA干预引起的MG活化和增殖,减少MG中IL-1β和NO的释放。 展开更多

关键词 小胶质细胞 组织型纤溶酶原激活剂 神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂 缺氧 大鼠

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丝氨酸蛋白酶及其抑制剂研究新进展 被引量：5

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作者 陈立云 王拥军 《中国卒中杂志》 2006年第9期673-676,共4页

该文综述了丝氨酸蛋白酶组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活剂((u-PA)和凝血酶及其同源性抑制剂PAI-1、Neuroserpin和PN-1的表达以及在神经系统疾病中的作用,讨论了t-PA及其抑制剂Neuroserpin在神经系统中的作用,旨在为... 该文综述了丝氨酸蛋白酶组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活剂((u-PA)和凝血酶及其同源性抑制剂PAI-1、Neuroserpin和PN-1的表达以及在神经系统疾病中的作用,讨论了t-PA及其抑制剂Neuroserpin在神经系统中的作用,旨在为人类急性脑损伤的治疗提供新的思路。 展开更多

关键词 丝氨酸蛋白酶 丝氨酸蛋白酶抑制剂 组织型纤溶酶原激活剂 神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂

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Kunitz抑制剂家族成员抑肽酶对纤溶酶原活化的抑制作用(英文)

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作者 王莹 孙自勇 刘建宁 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期478-488,共11页

抑肽酶属Kunitz抑制剂家族成员,能够抑制激肽释放酶、纤溶酶及胰蛋白酶的蛋白水解活性.研究表明,抑肽酶能够抑制尿激酶型-纤溶酶原激活剂(u_PA)和组织型-纤溶酶原激活剂(t_PA)对纤溶酶原的激活,但不影响u_PA和t_PA对小分子底物的酰胺水... 抑肽酶属Kunitz抑制剂家族成员,能够抑制激肽释放酶、纤溶酶及胰蛋白酶的蛋白水解活性.研究表明,抑肽酶能够抑制尿激酶型-纤溶酶原激活剂(u_PA)和组织型-纤溶酶原激活剂(t_PA)对纤溶酶原的激活,但不影响u_PA和t_PA对小分子底物的酰胺水解活性.用u_PA研究了上述作用的机制,发现抑肽酶与u_PA的丝氨酸蛋白酶功能区特异性结合,而与纤溶酶原没有相互作用.抑肽酶与u_PA的结合并不阻断u_PA的活性位点,因为u_PA对小分子底物的水解活性仍然保持.上述发现提示抑肽酶可能存在另一种抑制作用模式,该模式不同于以前报道的关于Kunitz抑制剂或纤溶酶原激活酶抑制剂的作用.由于人体内的Kunitz抑制剂与抑肽酶在结构上非常相似,根据研究结果,推测体内纤溶酶原的激活作用并非仅受丝氨酸蛋白酶抑制剂的控制. 展开更多

关键词 抑肽酶 丝氨酸蛋白酶 Kunitz抑制剂 抑制作用 尿激酶型纤溶酶原激活利 组织型纤溶酶原激活剂

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Vaspin与2型糖尿病肾病的相关性研究 被引量：6

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作者 刘平 刘波 +4 位作者 门晓彦 王迪 李莉 刘博伟 杨艳玲 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第35期4306-4309,共4页

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清中脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂Vaspin与糖尿病肾病(DN)的关系。方法选取2013年11月—2014年2月秦皇岛市第三医院内分泌科住院的T2DM患者94例,根据24 h尿清蛋白排泄率(UAER)分为糖尿病(DM)组(UAER≤20... 目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清中脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂Vaspin与糖尿病肾病(DN)的关系。方法选取2013年11月—2014年2月秦皇岛市第三医院内分泌科住院的T2DM患者94例,根据24 h尿清蛋白排泄率(UAER)分为糖尿病(DM)组(UAER≤20μg/min)和DN组(UAER>20μg/min)。选取同期该院50例健康体检者为对照组。测定血清Vaspin及空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、血脂、糖化血红蛋白(Hb A1c)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平,采用稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分析血清Vaspin与各指标之间的相关性,并对T2DM发生DN的影响因素进行Logistic回归分析。结果 DN组血清Vaspin水平低于DM组、高于对照组,DM组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.001)。DM组Vaspin水平与三酰甘油(TG)、FBG、Hb A1c、ln FINS、ln HOMA-IR、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)相关(r=0.239、0.521、0.593、0.320、0.225、-0.357,P<0.05),DN组Vaspin水平与FBG、ln FINS、ln HOMA-IR相关(r=-0.532、-0.276、-0.239,P<0.05)。Logistic回归分析显示Vaspin〔OR=0.59,95%CI(0.48,0.92)〕、Hb A1c〔OR=1.75,95%CI(1.33,2.31)〕、BMI〔OR=4.83,95%CI(1.17,19.95)〕、ln HOMA-IR〔OR=1.36,95%CI(1.08,1.73)〕为DN的危险因素。结论胰岛素抵抗与低Vaspin水平是DN的危险因素,低Vaspin水平可作为DN的预测指标。 展开更多

关键词 糖尿病 2型 糖尿病肾病 丝氨酸蛋白酶抑制剂

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Vaspin通过AMPK/mTOR自噬信号通路影响2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能 被引量：4

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作者 魏姣姣 刘师伟 +2 位作者 段瑞雪 李楠 王江娜 《协和医学杂志》 CSCD 2023年第3期543-552,共10页

目的 探究内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serpin, Vaspin)改善2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)大鼠胰岛β细胞功能的作用机制。方法 采用高脂高糖喂养联合腹腔注射链脲佐菌素的方式建立... 目的 探究内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceral adipose tissue-derived serpin, Vaspin)改善2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)大鼠胰岛β细胞功能的作用机制。方法 采用高脂高糖喂养联合腹腔注射链脲佐菌素的方式建立T2DM大鼠模型,并随机分为T2DM组(n=10)、Vaspin组(n=10),以同周龄正常饲料喂养的SD大鼠为正常对照组(n=10)。记录造模前及Vaspin干预前、干预4周和干预8周时3组大鼠体质量和空腹血糖(fasting blood-glucose, FBG)。Vaspin干预8周时,测定3组大鼠空腹胰岛素(fasting insulin, FINS)、糖耐量与胰岛素敏感性、胰岛β细胞功能及自噬相关蛋白表达水平,观察胰腺组织病理学形态。结果 与正常对照组比较,T2DM组与Vaspin组干预前、干预4周、干预8周时体质量均下降,FBG均升高(P均<0.05);与T2DM组比较,Vaspin组干预8周时大鼠体质量增高,FBG下降(P均<0.05)。组织病理示,正常对照组大鼠胰腺组织正常,胰岛细胞排列均匀、整齐,形态规则;T2DM组大鼠胰岛结构明显破坏,细胞分布不均匀、形状不规则;Vaspin组大鼠胰岛结构损伤、胰岛细胞形态破坏均较T2DM组减轻。干预8周时,与正常对照组比较,T2DM组及Vaspin组FINS降低,腹腔葡萄糖耐量试验(intraperitoneal glucose tolerance test, IPGTT)及腹腔胰岛素耐量试验(intraperitoneal insulin tolerance test, IPITT)血糖曲线下面积均升高(P均<0.05);与T2DM组比较,Vaspin组FINS升高,IPGTT与IPITT血糖曲线下面积均降低(P均<0.05)。高葡萄糖钳夹试验示,干预8周时,Vaspin组葡萄糖输注速率、第一时相及第二时相胰岛素分泌量虽低于正常对照组,但各指标均较T2DM组升高(P均<0.05)。免疫组化及Western blot结果示,干预8周时,与正常对照组比较,T2DM组大鼠胰腺组织中胰岛素表达水平及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin, p-mTOR)/mTOR比值均降低,P62、微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein1 light chain3, LC3)蛋白水平、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase, p-AMPK)/AMPK比值、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均升高(P均<0.05);与T2DM组比较,Vaspin组大鼠胰腺组织中胰岛素、LC3蛋白水平、p-AMPK/AMPK比值及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均升高,p-mTOR/mTOR比值及P62蛋白表达水平均降低(P均<0.05)。结论 Vaspin可通过AMPK/mTOR自噬信号通路增强T2DM大鼠胰岛β细胞自噬能力,进而改善胰岛β细胞功能。 展开更多

关键词 内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂 2型糖尿病 腺苷酸活化蛋白激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 自噬 胰岛Β细胞功能

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雌激素及其受体在非侵袭性真菌性鼻-鼻窦炎发病过程中的作用及其机制

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作者 杨传梅 苏雅妃 +4 位作者 沈潞华 张虹 王腾 季思宇 肖志勇 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1017-1025,共9页

【目的】探索雌激素及雌激素受体(ER)对非侵袭性真菌性鼻-鼻窦炎(NIFS)发病过程及其调控机制。【方法】选取2020年11月至2023年11月期间福州市第二总医院符合纳入标准的60例NIFS患者标本归为NIFS组,30位健康志愿者的样本归为空白对照组... 【目的】探索雌激素及雌激素受体(ER)对非侵袭性真菌性鼻-鼻窦炎(NIFS)发病过程及其调控机制。【方法】选取2020年11月至2023年11月期间福州市第二总医院符合纳入标准的60例NIFS患者标本归为NIFS组,30位健康志愿者的样本归为空白对照组。分别收集各组标本,HE染色分别检测各组中嗜酸性粒细胞,和肥大细胞数量,免疫组化和免疫荧光检测ER表达情况,qPCR测定NF-κB、IKK和MASPIN的mRNA表达水平,免疫组化和免疫印迹检测NF-κB、IKK和MASPIN的蛋白表达水平。【结果】NIFS组中嗜酸性粒细胞和肥大细胞数量分别较对照组增加,组间差异有统计学意义(分别为P<0.01和P<0.05)。NIFS组中ER评分较对照组增加,组间差异有统计学意义(P<0.05),且NIFS组中平均高密度值较对照组增加,组间差异有统计学意义(P<0.01)。NIFS组的NF-κB、核因子κB抑制因子激酶(IKK)和乳腺丝氨酸蛋白酶抑制(MASPIN)较对照组增加,组间差异有统计学意义(分别为P<0.01、P<0.05和P<0.05),NIFS组的NF-κB、IKK和MASPIN mRNA的表达水平分别较对照组增加(P<0.01),且NIFS组中NF-κB、IKK和MASPIN蛋白的表达水平增加,组间差异有统计学意义(P<0.01、P<0.01和P<0.05)。【结论】我们的研究结果显示,ER、NF-κB、IKK和MASPIN表达水平显著升高,可能表明ER阳性患者嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润显著增加,提示雌激素及其受体参与了NIFS的发病机制。 展开更多

关键词 非侵袭型真菌性鼻-鼻窦炎 雌激素受体 嗜酸性粒细胞 肥大细胞 核因子ΚB 核因子κB抑制因子激酶 乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂

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SPINK3促进体外培养的原代大鼠肝细胞增殖

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作者 常翠芳 罗亚茹 +7 位作者 郗玲玲 杨婧 郭建林 王改平 李青青 王雪 郭萃 徐存拴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1280-1288,共9页

肝病是威胁人类健康的主要疾病之一,而肝具有强大的再生能力,因此开发肝再生的药物靶标对肝病防治具有重大意义。本室前期采用大鼠全基因组芯片检测发现,丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型Ⅲ(serine protease inhibitor Kazal typeⅢ,SPINK3)... 肝病是威胁人类健康的主要疾病之一,而肝具有强大的再生能力,因此开发肝再生的药物靶标对肝病防治具有重大意义。本室前期采用大鼠全基因组芯片检测发现,丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型Ⅲ(serine protease inhibitor Kazal typeⅢ,SPINK3)在大鼠肝再生中表达显著改变。研究表明,SPINK3是一类结构与表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)相似的生长因子,能够与表皮生长因子受体(EGFR)结合促进细胞增殖。本文通过基因过表达和干涉的方法处理原代大鼠肝细胞,通过CCK8法、Ki67免疫荧光法、PI单染法和Annexin V/PI双染法检测SPINK3表达变化对原代大鼠肝细胞活力、增殖、周期和凋亡的影响。结果显示SPINK3过表达时能够显著提高原代大鼠肝细胞的细胞活力,促进其细胞周期和增殖,并抑制其细胞凋亡,而干涉SPINK3表达则显著降低原代大鼠肝细胞的细胞活力,抑制其细胞周期和增殖,并促进其细胞凋亡。以上结果表明,SPINK3能够促进体外培养的原代大鼠肝细胞的增殖,并抑制其凋亡。 展开更多

关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂kazal型ⅲ 原代大鼠肝细胞 细胞周期 细胞凋亡

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SPINK7对IL-22介导的角质细胞异常增殖及炎症应答的影响 被引量：5

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作者 张鼎伟 张燕飞 +4 位作者 汪炜 霍佳 杨珮雯 张钰汇 王媛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期26-30,共5页

目的:探讨SPINK7对IL-22刺激后角质形成细胞HaCaT的过度增殖及炎症应答的影响及其可能的机制。方法:采用IL-22刺激体外培养的HaCaT细胞。采用RT-PCR检测SPINK7和细胞炎症因子的mRNA表达;Western blot检测SPINK7,cyclin D1、survivin和W... 目的:探讨SPINK7对IL-22刺激后角质形成细胞HaCaT的过度增殖及炎症应答的影响及其可能的机制。方法:采用IL-22刺激体外培养的HaCaT细胞。采用RT-PCR检测SPINK7和细胞炎症因子的mRNA表达;Western blot检测SPINK7,cyclin D1、survivin和Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖能力的变化;ELISA法检测上清液中IL-23、TNF-α和IL-17A的表达水平。结果:IL-22处理的HaCaT细胞中,SPINK7的mRNA和蛋白表达量均显著升高。此外,沉默SPINK7明显抑制IL-22诱导的细胞增殖,同时抑制凋亡相关蛋白cyclin D1及survivin的表达水平。SPINK7沉默显著降低IL-22刺激诱导的促炎性细胞因子IL-23、TNF-α和IL-17A的mRNA表达水平和分泌量。机制研究发现SPINK7沉默能够抑制IL-22激活的Wnt/β-catenin信号通路。结论:沉默SPINK7能够抑制IL-22诱导的细胞增殖和炎症应答反应,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关,这为银屑病的诊断提供了新的标志物和治疗靶点。 展开更多

关键词 银屑病 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子7(SPINK7) 异常增殖 炎症应答

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rt-PA应用后MMP-2、MMP-9表达的改变及Neuroserpin的影响 被引量：8

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作者 陈立云 曾进胜 +4 位作者 李常新 温红梅 解龙昌 Nigel P.Birch 黄如训 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期258-261,T001,共5页

目的 观察重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)对血管再通后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9表达的影响以及神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(neuroserpin,NSP)的干预作用。方法 应用易卒中型肾血管性高血压大鼠复制大脑中动脉缺血模型,缺血3 h... 目的 观察重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)对血管再通后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9表达的影响以及神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(neuroserpin,NSP)的干预作用。方法 应用易卒中型肾血管性高血压大鼠复制大脑中动脉缺血模型,缺血3 h后再灌注并静脉注射rt-PA,于预组在应用rt-PA前脑内注射NSP,1天后处死,常规病理检查,并应用免疫组织化学和原位杂交的方法观察MMP-2、MMP-9在脑组织的表达。结果 缺血再灌注后MMP-2、MMP-9表达均升高;应用rt-PA后可见缺血再灌注区有灶性出血及红细胞漏出,同时使MMP-9进一步升高,但对MMP-2影响不大;应用rt-PA的同时使用NSP可以减轻缺血损伤,减少出血的发生,并使升高的MMP-9减少至接近正常水平,但NSP可以使MMP-2表达略有升高。结论 rt-PA溶栓后出血转化的发生可能与MMP-9表达增加有关,溶栓时联合应用NSP可能通过降低rt-PA所致的MMP-9表达上调而减轻溶栓治疗的出血并发症。 展开更多

关键词 RT-PA MMP-2 MMP-9 重组组织型纤溶酶原激活剂 基质金属蛋白酶-2 神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂 脑缺血

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三角帆蚌KSPI cDNA的分子特征及表达分析

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作者 徐龙威 王芹 +1 位作者 汪桂玲 李家乐 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第4期10-14,共5页

Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子(KSPI)在生物体的免疫应答过程中发挥着重要作用,但在三角帆蚌中尚未进行其相关研究与报道,为研究KSPI对三角帆蚌免疫过程的影响,采用RACE法克隆了三角帆蚌KSPI c DNA全序列(登录号:KT901291),获得了1029 b... Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子(KSPI)在生物体的免疫应答过程中发挥着重要作用,但在三角帆蚌中尚未进行其相关研究与报道,为研究KSPI对三角帆蚌免疫过程的影响,采用RACE法克隆了三角帆蚌KSPI c DNA全序列(登录号:KT901291),获得了1029 bp的全长,其中包含5'、3'端非翻译区分别为61 bp、206 bp,开放阅读框762bp,共编码氨基酸253个,分子质量为27 397.5 u,氨基酸序列包含5个Kazal结构域,与一些已知物种的KSPI编码的氨基酸序列进行同源性分析后发现,与各种物种间具有相似的结构域,属于典型的KSPI。实时荧光定量PCR分析结果表明KSPI在外套膜、血液、肝、腮、闭壳肌、性腺、斧足7个组织中均存在一定的表达量,表达量最高的是外套膜,表达量最低的是肝脏。利用嗜水气单胞菌诱导后检测发现,各个组织呈现出先升高再降低的趋势,在12或24 h达到最大值,之后开始逐渐下降并趋于稳定,推测出KSPI对三角帆蚌的免疫反应发挥重要作用。 展开更多

关键词 三角帆蚌 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制子基因 RACE克隆 荧光定量

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