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东方马脑脊髓炎病毒TaqMan MGB荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：2
1
作者 郑小龙 王群 +2 位作者 张晓文 孙明君 朱来华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第11期2850-2855,共6页
本试验通过RT-PCR从东方马脑脊髓炎病毒（EEEV）中扩增得到128bp的特异性保守序列,将其克隆到pMD20-T载体中,并进行体外转录,制备标准品cRNA。以10倍系列稀释的cRNA为模板,进行TaqMan MGB荧光定量RT-PCR扩增并制作标准曲线,建立了EEEV T... 本试验通过RT-PCR从东方马脑脊髓炎病毒（EEEV）中扩增得到128bp的特异性保守序列,将其克隆到pMD20-T载体中,并进行体外转录,制备标准品cRNA。以10倍系列稀释的cRNA为模板,进行TaqMan MGB荧光定量RT-PCR扩增并制作标准曲线,建立了EEEV TaqMan MGB荧光定量RT-PCR的检测方法。进一步对建立的方法进行了特异性和敏感性试验。结果表明,建立的TaqMan MGB荧光定量RT-PCR最低可检测10拷贝/μL的cRNA;且与阴性对照及马鼻肺炎病毒（EHV-1）、马动脉炎病毒（EAV）、马流感病毒（EIV,H3N8）、西尼罗病毒（WNV）、西方马脑脊髓炎病毒（WEEV）和日本马脑炎病毒（JEV）均不发生交叉反应。所制作的标准曲线在1.0×10^1~1.0×10^6拷贝/μL浓度范围内有极好的线性关系,相关系数为0.998,标准曲线方程式为y=40-3.35logx;与常规RT-PCR相比,该方法更加快速,特异性和敏感性更高,灵敏度为常规RT-PCR方法的100倍。试验结果表明,建立了一种快速、高效、特异、敏感的EEEV TaqMan MGB荧光定量RT-PCR检测方法。 展开更多
关键词 东方马脑脊髓炎病毒 TAQMAN MGB 荧光定量RT-PCR
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