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HBsAg/截短型HCV核心蛋白融合基因植物表达载体的构建及对番茄的遗传转化
被引量:
1
1
作者
何秀霞
于源华
+2 位作者
于鹏
张晓
张振明
《长江蔬菜》
北大核心
2008年第07X期41-44,共4页
探索乙肝病毒表面抗原/截短型HCV核心蛋白融合基因在植物中表达乙肝丙肝双价抗原的可能性.以期为进一步研制植物乙肝丙肝双价口服疫苗打下基础。利用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在丙肝病毒(HCV)截短型核心蛋白序列的5′端,二...
探索乙肝病毒表面抗原/截短型HCV核心蛋白融合基因在植物中表达乙肝丙肝双价抗原的可能性.以期为进一步研制植物乙肝丙肝双价口服疫苗打下基础。利用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在丙肝病毒(HCV)截短型核心蛋白序列的5′端,二者通过柔性肽(Gly4Ser)2序列相连,构建成-融合基因BC,测序结果正确。将融合基因BC克降到植物表达载体pBin438上,获得pBin438BC,然后用冻融法将其转入根癌农杆菌EHA105中,采用叶盘法转化番茄。获得了15株抗卡那霉素的番茄植株。对抗性植株进行PCR及Southern检测,8株获得阳性信号,表明目的基因已整合到了番茄基因组中。提取阳性植株的总蛋白.经透析后.将适当浓度蛋白质点在PVDF膜上,用Dot-ELISA方法验证番茄中表达蛋白的活性。结果表明,转基因番茄中有重组蛋白的表达。
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关键词
乙
肝
病毒
S基因
丙肝病毒核心蛋白
融合基因
农杆菌
转基因番茄
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职称材料
基于四环素调控系统的ApoE-rtTA/TRE-HCV-C双转基因小鼠的制备
被引量:
1
2
作者
杨国柱
陈系古
+4 位作者
黄冰
单于
肖东
马芸
邓新燕
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2007年第5期321-325,共5页
目的为了丰富现有的四环素调控系统的小鼠资源库,同时也为更好地研究目的基因HCV-C的作用机制提供一个活体的动物模型,制备基于四环素调控系统原理的调控部分ApoE-rtTA的转基因小鼠,与反应部分TRE-HCV-C转基因小鼠,相互交配制作出双转...
目的为了丰富现有的四环素调控系统的小鼠资源库,同时也为更好地研究目的基因HCV-C的作用机制提供一个活体的动物模型,制备基于四环素调控系统原理的调控部分ApoE-rtTA的转基因小鼠,与反应部分TRE-HCV-C转基因小鼠,相互交配制作出双转基因小鼠。方法应用显微注射法将构建好的两种基因片段ApoE-rtTA及TRE-HCV-C分别注入超排的昆明母鼠的受精卵,再植入假母输卵管,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,将两者及阳性后代交配产生携带5只转基因鼠再经Western blot和RT-PCR在RNA和蛋白水平上进一步鉴定。结果产生了3只整合有ApoE-rtTA基因的首见鼠和125只阳性子代,以及产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首见鼠和16只阳性子代。PCR及Southern Blot证实上述阳性鼠确有转基因整合。将两者交配产生携带5只双转基因鼠。结论成功制备了携带有ApoE-rtTA及TRE-HCV-C转基因小鼠,建立了分别携带有这两种基因的鼠群,以及同时携带有两种基因的双转基因小鼠,为四环素调控系统提供了一个良好的通用型的调控动物模型,同时也可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。
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关键词
载脂
蛋白
四环素调控反式激活子
四环素反应元件
丙肝病毒核心蛋白
转基因鼠
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职称材料
题名
HBsAg/截短型HCV核心蛋白融合基因植物表达载体的构建及对番茄的遗传转化
被引量:
1
1
作者
何秀霞
于源华
于鹏
张晓
张振明
机构
长春理工大学生命科学技术学院
出处
《长江蔬菜》
北大核心
2008年第07X期41-44,共4页
基金
吉林省科技厅项目"乙肝丙肝转基因番茄植物双价口服疫苗的研究"(20050402-5)
文摘
探索乙肝病毒表面抗原/截短型HCV核心蛋白融合基因在植物中表达乙肝丙肝双价抗原的可能性.以期为进一步研制植物乙肝丙肝双价口服疫苗打下基础。利用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在丙肝病毒(HCV)截短型核心蛋白序列的5′端,二者通过柔性肽(Gly4Ser)2序列相连,构建成-融合基因BC,测序结果正确。将融合基因BC克降到植物表达载体pBin438上,获得pBin438BC,然后用冻融法将其转入根癌农杆菌EHA105中,采用叶盘法转化番茄。获得了15株抗卡那霉素的番茄植株。对抗性植株进行PCR及Southern检测,8株获得阳性信号,表明目的基因已整合到了番茄基因组中。提取阳性植株的总蛋白.经透析后.将适当浓度蛋白质点在PVDF膜上,用Dot-ELISA方法验证番茄中表达蛋白的活性。结果表明,转基因番茄中有重组蛋白的表达。
关键词
乙
肝
病毒
S基因
丙肝病毒核心蛋白
融合基因
农杆菌
转基因番茄
Keywords
Hepatitis B Virus S gene
Hepatitis C Virus core protein
Fusion gene
Agrobactrium tumefaciens
Trans- genic tomato
分类号
S641.2 [农业科学—蔬菜学]
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
基于四环素调控系统的ApoE-rtTA/TRE-HCV-C双转基因小鼠的制备
被引量:
1
2
作者
杨国柱
陈系古
黄冰
单于
肖东
马芸
邓新燕
机构
中山大学实验动物中心
中山大学中山眼科中心国家重点实验室
出处
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2007年第5期321-325,共5页
基金
国家自然科学基金资助(编号:103055)
文摘
目的为了丰富现有的四环素调控系统的小鼠资源库,同时也为更好地研究目的基因HCV-C的作用机制提供一个活体的动物模型,制备基于四环素调控系统原理的调控部分ApoE-rtTA的转基因小鼠,与反应部分TRE-HCV-C转基因小鼠,相互交配制作出双转基因小鼠。方法应用显微注射法将构建好的两种基因片段ApoE-rtTA及TRE-HCV-C分别注入超排的昆明母鼠的受精卵,再植入假母输卵管,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,将两者及阳性后代交配产生携带5只转基因鼠再经Western blot和RT-PCR在RNA和蛋白水平上进一步鉴定。结果产生了3只整合有ApoE-rtTA基因的首见鼠和125只阳性子代,以及产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首见鼠和16只阳性子代。PCR及Southern Blot证实上述阳性鼠确有转基因整合。将两者交配产生携带5只双转基因鼠。结论成功制备了携带有ApoE-rtTA及TRE-HCV-C转基因小鼠,建立了分别携带有这两种基因的鼠群,以及同时携带有两种基因的双转基因小鼠,为四环素调控系统提供了一个良好的通用型的调控动物模型,同时也可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。
关键词
载脂
蛋白
四环素调控反式激活子
四环素反应元件
丙肝病毒核心蛋白
转基因鼠
Keywords
HCV-C gene, hepatitis Cvirus core protein
Transgenic
Mice
Tetracycline regulated system
Tissue specific expression
分类号
Q953 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HBsAg/截短型HCV核心蛋白融合基因植物表达载体的构建及对番茄的遗传转化
何秀霞
于源华
于鹏
张晓
张振明
《长江蔬菜》
北大核心
2008
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于四环素调控系统的ApoE-rtTA/TRE-HCV-C双转基因小鼠的制备
杨国柱
陈系古
黄冰
单于
肖东
马芸
邓新燕
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2007
1
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