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在安全输血中应用丙型肝炎病毒核心抗原检测技术的初步探索 被引量：8
1
作者 姚仁南 张建辉 +3 位作者 黄晓静 杨钦 曹琴 江学成 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期617-618,共2页
本研究探讨用丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原酶联免疫吸附技术(HCV-cAgELISA)筛查献血员感染HCV的可行性。对我医院2003年1月-2005年12月间的8677份献血者血清标本进行抗-HCV初检和复检。将仅初检阳性的15份血清标本和仅复检阳性的14份血清... 本研究探讨用丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原酶联免疫吸附技术(HCV-cAgELISA)筛查献血员感染HCV的可行性。对我医院2003年1月-2005年12月间的8677份献血者血清标本进行抗-HCV初检和复检。将仅初检阳性的15份血清标本和仅复检阳性的14份血清标本,分别再做HCV-cAgELISA和HCVRT-PCR检测。结果表明:经HCV-cAgELISA检测,29份仅初检(15份)和仅复检(14份)抗-HCV阳性血清标本中只有5份结果为阳性,阳性率为17.24%。经HCVRT-PCR检测,29份仅初检和仅复检抗-HCV阳性血清标本中同样也只有5份阳性结果,阳性率也为17.24%。结论:HCV-cAgELISA检测技术的敏感性与HCVRT-PCR技术类似,但成本明显降低,有可能作为HCV感染的辅助确证试验,或作为抗-HCV检测技术的更新换代技术用于安全输血中献血者血液的筛查。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒核心抗原 HCV-CAG ELISA HCV RT-PCR
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抗丙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定 被引量：5
2
作者 王阁 李梦东 +3 位作者 郝飞 胡大荣 姚仲寅 崔大敷 《第三军医大学学报》 CSCD 北大核心 1995年第4期289-291,共3页
用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区合成肽作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细节与骨髓瘤细胞ＳＰ＾２／０进行融合。经有限稀释法克隆３代后获得一株抗ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株３Ｅ７，并对其分泌... 用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区合成肽作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细节与骨髓瘤细胞ＳＰ＾２／０进行融合。经有限稀释法克隆３代后获得一株抗ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株３Ｅ７，并对其分泌抗体进行初步鉴定。杂交瘤细胞培养上清的抗体滴度为１：３２０，诱生同系小鼠腹水的滴度为１：１２８００，该ＭｃＡｂ能与ＣＰ１０特异性结合，杂交瘤细胞染色体数目为１０６条。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 单克隆抗体 杂交瘤细胞株 抗原
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丙型肝炎病毒核心抗原在肝细胞癌及癌旁组织中的表达 被引量：1
3
作者 汪荣泉 周子成 +2 位作者 杨建民 门荣甫 房殿春 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期237-239,共3页
应用ＳＰ法（链霉菌抗生物素蛋白－过氧化酶连结法）对肝细胞癌（４６例）癌组织及癌旁组织（３８例）中丙型肝炎病毒核心抗原进行免疫组织化学染色，发现两者的检出率分别为２１．７％和３６．８％。阳性染色细胞呈弥漫、灶状和散在分... 应用ＳＰ法（链霉菌抗生物素蛋白－过氧化酶连结法）对肝细胞癌（４６例）癌组织及癌旁组织（３８例）中丙型肝炎病毒核心抗原进行免疫组织化学染色，发现两者的检出率分别为２１．７％和３６．８％。阳性染色细胞呈弥漫、灶状和散在分布。抗原定位于肝细胞和肝癌细胞的胞浆内，少数有围核分布的特点。阳性染色多呈细颗粒状，少数呈均质状。癌旁组织抗原表达区域中有淋巴细胞浸润聚集。结果提示丙型肝炎病毒感染在肝细胞癌的发生中可能有一定的关联。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心抗原 免疫组化 肝肿瘤
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丙型肝炎病毒核心抗原检测在临床诊断HCV感染的价值 被引量：1
4
作者 郁金红 周镇先 +3 位作者 张永臣 王亮 周见远 季晓辉 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1545-1549,共5页
目的:评估丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)诊断试剂在临床运用对HCV感染的诊断价值。方法:对临床214例确认HCV感染者、60例健康体检者、40例非HCV感染的其他肝炎患者同时检测HCVcAg、抗HCV和HCV RNA,并对78例HIV感染者进行HCV感染筛查,分... 目的:评估丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)诊断试剂在临床运用对HCV感染的诊断价值。方法:对临床214例确认HCV感染者、60例健康体检者、40例非HCV感染的其他肝炎患者同时检测HCVcAg、抗HCV和HCV RNA,并对78例HIV感染者进行HCV感染筛查,分析HCVcAg试剂的敏感性、特异性。结果:214例确认丙肝患者HCVcAg检测162例(75.7%)阳性,且HCV RNA水平越高,HCVcAg检出率也越高。当HCV RNA载量>106/ml时,HCVcAg与HCV RNA检测的符合率达98.7%;60例健康对照和40例非HCV感染的各种肝炎HCVcAg检测均为阴性,显示了HCVcAg对诊断HCV感染得高度特异性。对78份HIV感染者样本进行HCV RNA测定,有16例阳性,以HCVcAg法测定有15例阳性,以抗HCV法测定仅有9例阳性。结论:HCVcAg可作为HCV感染诊断的血清病毒标志物,也可用于使用免疫抑制剂,抗HCV产生受到抑制的患者,以及在一些不具备开展PCR的医院实验室作为HCV RNA检测的替代试验。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(HCV) 核心抗原 检测 诊断
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丙型肝炎病毒核心抗原在HBV/HCV合并感染者血清中的检测状况及影响因素分析
5
作者 曹红 张卡 +3 位作者 许镇 舒欣 陈禄彪 李刚 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期679-682,共4页
【目的】探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)在乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)合并感染者血清中的检出状况,并分析其影响因素。【方法】检测88例慢性丙型肝炎和62例HBV/HCV合并感染患者血清HCVcAg和HCVRNA,对后者血清进行HBV DNA... 【目的】探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)在乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)合并感染者血清中的检出状况,并分析其影响因素。【方法】检测88例慢性丙型肝炎和62例HBV/HCV合并感染患者血清HCVcAg和HCVRNA,对后者血清进行HBV DNA、HBeAg检测,分析HCVcAg检出率与HBeAg、HBV DNA定量检测关系。【结果】88例慢性丙型肝炎和62例HBV/HCV合并感染者血清HCVcAg的检出率分别是72.7%(64/88)和38.7%(24/62),χ2=17.358,P<0.001,HCV RNA检出率分别是81.8%(72/88)和53.2%(33/62),χ2=20.11,P<0.001;62例HBV/HCV合并感染者血清中,HBeAg阳性和HBeAg阴性感染者HCVcAg检出率分别为28.6%(12/42)和60%(12/20),χ2=5.641,P=0.011,HCV RNA阳性率分别为42.9%(18/42)和80%(16/20),χ2=15.452,P<0.001;HBV DNA阳性和阴性时HCVcAg检出率分别为39.1%(18/46)和37.5%(6/16),χ2=0.013,P=0.908;与单纯HCV感染者血清HCVcAg检出率72.7%(64/88),相比较HBeAg阴性合并感染者为60%(12/20),χ2=1.266,P=0.261,HBV DNA阴性合并感染者37.5%(6/16),χ2=7.635,P<0.01。【结论】HBV/HCV合并感染时HCVcAg检出率较低,可能是由于HBeAg抑制HCV的复制,从而减少HCVcAg的表达所致。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎病毒 丙型 合并感染 核心抗原
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应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒核心蛋白抗原模拟表位 被引量：6
6
作者 钟彦伟 成军 +5 位作者 王刚 洪源 王琳 李莉 张玲霞 陈菊梅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期34-36,共3页
为筛选丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(core)特异性噬菌体 12肽模拟表位 ,应用噬菌体表面展示技术 ,以抗 HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工化学合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,随机挑... 为筛选丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白(core)特异性噬菌体 12肽模拟表位 ,应用噬菌体表面展示技术 ,以抗 HCV核心蛋白抗原的单克隆抗体作为固相筛选分子 ,对人工化学合成的噬菌体随机 12肽库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,随机挑取 5 0个克隆 ,经噬菌体酶联免疫吸附法 (ELISA)鉴定 ,并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验 ,最后对所选克隆进行DNA序列分析 ,以确定HCV核心抗原的模拟表位。经免疫学鉴定后 ,从随机筛选的 5 0个克隆中确定 10个阳性克隆 ,进行DNA序列测定 ,确定氨基酸序列XRQXXPXXXHXX为HCV核心的模拟表位。 展开更多
关键词 噬菌体 丙型肝炎病毒 核心蛋白 模拟表位 抗原
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丙肝病毒核心抗原与丙肝抗体联合检测在丙型肝炎诊断中的应用 被引量：28
7
作者 杨清梅 黄志伟 +3 位作者 贾伟建 梁国泉 黄剑兴 温宝欣 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第9期1470-1471,共2页
目的:通过检测丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)、丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-c Ag)、丙型肝炎抗体(HCV-Ab),探讨联合检测在丙肝诊断中的价值。方法:用ELISA方法对3 000例门诊及住院患者进行HCV-c Ag与HCV-Ab的联合检测,对单项阳性或两项均阳性... 目的:通过检测丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)、丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-c Ag)、丙型肝炎抗体(HCV-Ab),探讨联合检测在丙肝诊断中的价值。方法:用ELISA方法对3 000例门诊及住院患者进行HCV-c Ag与HCV-Ab的联合检测,对单项阳性或两项均阳性者同时进行PCR法HCV-RNA检测。结果:3 000例患者中,进行HCV-c Ag与HCV-Ab联合检测,单项阳性或两项均阳性共45例,以HCV-RNA阳性作为分组标准,经HCV-RNA确证阳性39例,阴性6例,HCV-c Ag检测的阳性预测值为94.1%,HCV-Ab检测的阳性检出率为94.9%,两种方法联合检测可大大提高HCV临床检出率。结论 :HCV-c Ag检测与HCV-Ab检测能相互补充,两者联合检测更理想,能有效减少丙肝窗口期的漏检,有助于实现丙肝的早期防治,值得临床推广应用。 展开更多
关键词 肝炎 丙型 丙型肝炎病毒 丙肝病毒核心抗原 丙肝抗体
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合成肽抗原ELISA检测丙型肝炎病毒核心抗体实验条件的初步探讨 被引量：3
8
作者 郝飞 吴纯清 +2 位作者 陈国致 郑红 李梦东 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第2期174-176,共3页
自1989年获得丙型肝炎病毒(HCV)克隆并测出HCV RNA的大部分核苷酸序列以来,相继建立了HCV抗体测定和聚合酶链反应(PCR)检测HCV RNA的方法,使丙型肝炎的病原诊断取得突破性进展。目前所采用的重组抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和重... 自1989年获得丙型肝炎病毒(HCV)克隆并测出HCV RNA的大部分核苷酸序列以来,相继建立了HCV抗体测定和聚合酶链反应(PCR)检测HCV RNA的方法,使丙型肝炎的病原诊断取得突破性进展。目前所采用的重组抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和重组免疫印迹法(RIBA)检测抗HCV存在着感染早期检出率低。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心抗体 ELISA
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互补的烟草花叶病毒介导表达丙型肝炎的核心抗原
9
作者 韩爱东 刘玉乐 +2 位作者 康良仪 李冬田 田波 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第7期43-46,共4页
ＴＭＶ两种突变体ＴＳＨｃ和ＴＢＤ，共同接种于烟草叶片。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的结果表明这两种突变体由于功能上互补而产生了系统侵染。ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ的检测结果表明烟草的上部叶片表达了丙型肝炎的核心抗原和ＴＭＶ外... ＴＭＶ两种突变体ＴＳＨｃ和ＴＢＤ，共同接种于烟草叶片。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的结果表明这两种突变体由于功能上互补而产生了系统侵染。ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ的检测结果表明烟草的上部叶片表达了丙型肝炎的核心抗原和ＴＭＶ外壳蛋白质。 展开更多
关键词 病毒载体 核心抗原 互补 烟草花叶病毒 丙型肝炎
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丙型肝炎病毒核心区优势抗原表位基因的化学合成及其表达产物的抗原性分析
10
作者 王海林 金冬雁 +3 位作者 颜子颖 周园 白植生 侯云德 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第1期6-10,共5页
依据丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）多蛋白核心区Ｎ端氨基酸序列和密码子简并性，人为设计并采用半化学半酶促的方法合成了一个ＤＮＡ片段。经核酸杂交检测以及ＤＮＡ序列分析证实，该片段的核苷酸序列与设计完全一致。将合成的ＤＮＡ片段插入... 依据丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）多蛋白核心区Ｎ端氨基酸序列和密码子简并性，人为设计并采用半化学半酶促的方法合成了一个ＤＮＡ片段。经核酸杂交检测以及ＤＮＡ序列分析证实，该片段的核苷酸序列与设计完全一致。将合成的ＤＮＡ片段插入融合表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中，表达产物经亲和层析纯化后进行Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹实验和间接ＥＬＩＳＡ分析，结果表明，融合蛋白具有ＨＣＶ核心区抗原的免疫反应性，可望用于ＨＣＶ抗体的检测．此外，编码ＨＣＶ优势抗原表位的化学合成基因有可能为ＨＣＶ嵌合抗原的研究提供一条捷径。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 抗原 合成基因 抗原性 ELISA
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丙型肝炎病毒核心重组抗原C_（27）的纯化
11
作者 张庶民 祁自柏 李河民 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第6期706-710,共5页
高效表达了ＨＣＶ核心区基因抗原之后，对表达蛋白Ｃ_（２７）进行了纯化。经研究，重组蛋白是以包涵体形式存在于宿主菌内的。Ｃ_（２７）重组蛋白分别经过包涵体洗涤、ＤＥＡＥ阴离子交换层析和Ｓ－２００分子筛两步柱层析纯化之后，... 高效表达了ＨＣＶ核心区基因抗原之后，对表达蛋白Ｃ_（２７）进行了纯化。经研究，重组蛋白是以包涵体形式存在于宿主菌内的。Ｃ_（２７）重组蛋白分别经过包涵体洗涤、ＤＥＡＥ阴离子交换层析和Ｓ－２００分子筛两步柱层析纯化之后，纯度大于９５％，纯化得率为５３．２％，总回收率为１７．９％。纯化工艺流程简单、得率高，适合向规模化生产发展。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心重组抗原 C27 提纯
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乙肝核心抗原嵌合PEDV S1抗原表位病毒样颗粒疫苗的免疫原性评价
12
作者 赵淑庆 张宝太 +8 位作者 刘孟冉 薛涛 钟纯燕 周金柱 刘传敏 主性 倪艳秀 李基棕 李彬 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期36-41,共6页
为了构建以乙肝核心抗原(HBcAg)为载体呈现PEDV S1抗原表位的病毒样颗粒并评价其免疫原性。本研究以HBcAg作为免疫原载体,将PEDV S1中的B细胞表位748YSNIGVCK755插入HBcAg的主要免疫显性区域(MIR),克隆至pET-28a(+)载体,转化至大肠杆菌B... 为了构建以乙肝核心抗原(HBcAg)为载体呈现PEDV S1抗原表位的病毒样颗粒并评价其免疫原性。本研究以HBcAg作为免疫原载体,将PEDV S1中的B细胞表位748YSNIGVCK755插入HBcAg的主要免疫显性区域(MIR),克隆至pET-28a(+)载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,IPTG进行诱导表达后,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定纯化后的重组蛋白,通过透射电镜检测其形态学,制备疫苗皮下注射免疫BALB/c小鼠,对其免疫效果进行了初步评价。结果表明,成功构建重组质粒PET-28a(+)-HBcAg-PEDV S1,并在BL21(DE3)中以包涵体形式表达,纯化、复性后的重组蛋白透射电子显微镜观察到病毒样颗粒结构。制备的疫苗能诱导小鼠产生较高水平的抗体和中和抗体。上述研究表明,本研究构建的HBcAg-PEDV S1能组装成病毒样颗粒,免疫原性较强,具有成为新型候选疫苗的潜力。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 乙肝核心抗原 病毒样颗粒 免疫原性
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应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因 被引量：58
13
作者 刘妍 成军 +3 位作者 王刚 李克 段惠娟 李莉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期880-883,共4页
应用抑制性消减杂技术构建丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,克隆HCV核心蛋白反式激活相关基因。以HCV核心表达质粒 pcDNA3 1( ) core转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1( )为对照 ;制备转染后的细胞裂... 应用抑制性消减杂技术构建丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,克隆HCV核心蛋白反式激活相关基因。以HCV核心表达质粒 pcDNA3 1( ) core转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 1( )为对照 ;制备转染后的细胞裂解液 ,从中提取mRNA并逆转录为cDNA ,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成 2组 ,分别与 2种不同的接头衔接 ,再与对照组cDNA进行 2次消减杂交及 2次抑制性PCR ,将产物与T/A载体连接 ,构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果显示 ,成功构建人HCV核心蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到 2 33个白色克隆 ,进行菌落PCR分析 ,其中 2 13个均得到 10 0～ 10 0 0bp插入片段。挑取 6 3个插入片段测序分析 ,其中 6个cDNA片段为未知序列 ,通过生物信息学分析获得其全长序列 ,已被GenBank收录。提示 6个新的cDNA全长序列 ,可能是HCV核心蛋白反式激活靶基因。 展开更多
关键词 核心蛋白质类 反式激活 消减杂交 丙型肝炎病毒
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丙型肝炎病毒核心蛋白可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达 被引量：12
14
作者 成军 施双双 +5 位作者 钟彦伟 夏小兵 王刚 王琳 刘妍 陈菊梅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期394-397,共4页
利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM 10 9中表达可溶性的HCV core ScFv。以重组的HCV核心蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含... 利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM 10 9中表达可溶性的HCV core ScFv。以重组的HCV核心蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有HCV core ScFv基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒 ,经NcoI/NotI酶切鉴定 ,该ScFv基因由 75 0bp组成。将其亚克隆到 pCANTAB5E表达载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,提取质粒进行DNA序列测定 ,符合ScFv的重链可变区和轻链可变区基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM10 9,在其培养上清中获得了可溶性HCV core ScFv的表达。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV core ScFv具有重组HCV核心蛋白的反应活性和特异性。对转化的JM10 9大肠杆菌上清中表达的HCV core ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,证实表达的HCV core ScFv的分子量为 2 8kDa。为应用HCV core ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 单链可变区抗体 表达
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应用基因表达谱芯片筛选丙型肝炎病毒核心蛋白反式调节基因 被引量：13
15
作者 刘妍 成军 +2 位作者 王建军 陆荫英 杨倩 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期55-57,共3页
应用基因表达谱芯片技术对HCV核心蛋白表达质粒pcDNA3 1(- ) core转染的HepG2细胞和空载体处理的相同细胞差异表达的mRNA进行检测。基因表达谱芯片所检测的 115 2条目的基因均为GenBank中登录的基因 ,HCV核心表达质粒转染的细胞有95条... 应用基因表达谱芯片技术对HCV核心蛋白表达质粒pcDNA3 1(- ) core转染的HepG2细胞和空载体处理的相同细胞差异表达的mRNA进行检测。基因表达谱芯片所检测的 115 2条目的基因均为GenBank中登录的基因 ,HCV核心表达质粒转染的细胞有95条差异表达基因 ,其中 4 5条基因表达增强 ,5 0条基因表达降低。这些核心蛋白反式调节基因与细胞增殖、分化、凋亡、信号转导及免疫调节密切相关。本实验结果为进一步阐明HCV核心蛋白致病 (癌 )的分子生物学机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 基因表达谱芯片 筛选 丙型肝炎病毒 核心蛋白 反式调节
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丙型肝炎病毒融合抗原基因NS3CE对番茄的遗传转化 被引量：5
16
作者 李轶女 张中林 +3 位作者 苏宁 孙萌 倪丕冲 沈桂芳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期360-363,共4页
丙型肝炎病毒是危害人类健康重要的病源之一 ,研制安全、经济、有效和易于推广使用的抗病毒疫苗是预防和控制 HCV的有效手段。本实验用 PCR方法克隆了 HCV中能够产生中和性抗体、具有很好免疫原性的非结构 N S3区基因片段及核心抗原 CE... 丙型肝炎病毒是危害人类健康重要的病源之一 ,研制安全、经济、有效和易于推广使用的抗病毒疫苗是预防和控制 HCV的有效手段。本实验用 PCR方法克隆了 HCV中能够产生中和性抗体、具有很好免疫原性的非结构 N S3区基因片段及核心抗原 CE基因片段 ,并在两段基因之间加入连接肽 SPGS的密码子序列 ,构建成融合抗原基因 N S3- CE。将该融合基因连接到载体 p BI12 1上 ,构建植物表达载体 p BINS3CE。通过根癌农杆菌 EHA10 5介导获得转基因番茄。并进行了 PCR扩增、Southern杂交及 RT- PCR等分子检测 ,结果证明外源基因已整合到转基因番茄的基因组中 ,并在转录水平得到表达。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 融合抗原基因 NS3CE 番茄 遗传转化 转基因番茄
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丙型肝炎患者胃粘膜中病毒抗原的检测 被引量：4
17
作者 罗朝霞 郎振为 +2 位作者 冯觉平 袁光辉 黄其通 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 1999年第1期32-34,共3页
了解肝炎患者胃粘膜组织中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染状况。采用免疫组化Ｓ－Ｐ法以抗－ＨＣＶＮＳ３单克隆抗体及抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃ多克隆抗体对３３例慢性丙型肝炎患者胃粘膜组织中ＨＢＶ和ＨＣＶ进... 了解肝炎患者胃粘膜组织中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的感染状况。采用免疫组化Ｓ－Ｐ法以抗－ＨＣＶＮＳ３单克隆抗体及抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃ多克隆抗体对３３例慢性丙型肝炎患者胃粘膜组织中ＨＢＶ和ＨＣＶ进行了检测。同时还用双标记技术对二种抗原进行了双重染色以了解其在胃粘膜细胞中的分布。ＨＣＶＮＳ３、ＨＢｓＡｇ及ＨＢｃＡｇ的检出率分别为３３．３３％（１１／３３）、４８．４８％（１６／３３）、１２．１２％（４／３３）。ＨＢｓＡｇ、ＨＣＶＮＳ３Ａｇ主要位于腺体细胞的胞浆中，而ＨＢｃＡｇ主要在细胞核中表达。阳性细胞呈单个、片状或簇样分布。慢性肝炎患者的胃粘膜组织中存在ＨＣＶ和ＨＢＶ的感染。二种肝炎病毒与胃粘膜病变的关系值得进一步探讨。 展开更多
关键词 乙型肝炎 丙型肝炎 病毒 胃粘膜 抗原
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猪丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6同源基因的克隆化研究 被引量：5
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作者 成军 李克 +4 位作者 王琳 陆荫英 刘妍 王刚 张玲霞 《生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期10-13,33,共5页
利用不同种属动物之间重要基因序列高度同源的理论 ,应用分子生物学与生物信息学技术和方法 ,克隆猪丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合蛋白 6(HCBP6)的同源基因。首先应用酵母双杂交技术 ,以表达HCV核心蛋白的表达载体作为诱饵 ,对于百万... 利用不同种属动物之间重要基因序列高度同源的理论 ,应用分子生物学与生物信息学技术和方法 ,克隆猪丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合蛋白 6(HCBP6)的同源基因。首先应用酵母双杂交技术 ,以表达HCV核心蛋白的表达载体作为诱饵 ,对于百万级的肝细胞cDNA文库酵母进行配合、筛选 ,首先获得人HCBP6的全长编码基因 ,然后应用美国国立生物工程中心 (NCBI)建立的核苷酸序列数据库 (GenBank)的同源基因的检索 ,搜索与之同源的来源于猪的表达序列标签 (EST)。然后根据基因同源性的原则 ,确定猪HCBP6的同源基因。获得了与HCV核心蛋白结合蛋白的 3 6个基因片段 ,其中之一命名为HCBP6。根据基因同源性搜索 ,获得了来源于猪的EST基因序列片段 ,最终确立了猪HCBP6的同源基因。利用不同物种之间基因同源性的原理、NCBI数据库GenBank同源基因的搜索 ,获得了猪HCBP6同源基因。 展开更多
关键词 猪 丙型肝炎病毒 核心蛋白 结合蛋白 基因 克隆化
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牛丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6同源基因的克隆化研究 被引量：7
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作者 成军 李克 +4 位作者 王琳 陆荫英 刘妍 王刚 张玲霞 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期73-76,共4页
目的　利用不同种属动物之间重要基因序列高度同源的理论 ,应用生物信息学技术和方法 ,克隆牛丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合蛋白 6 (HCBP6 )的同源基因。方法　首先应用酵母双杂交技术 ,以表达HCV核心蛋白的表达载体为诱饵 ,对于百万... 目的　利用不同种属动物之间重要基因序列高度同源的理论 ,应用生物信息学技术和方法 ,克隆牛丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合蛋白 6 (HCBP6 )的同源基因。方法　首先应用酵母双杂交技术 ,以表达HCV核心蛋白的表达载体为诱饵 ,对于百万级的肝细胞cDNA文库酵母进行配合、筛选 ,首先获得人HCBP6的全长编码基因 ,然后应用美国国立生物信息学中心 (NCBI)建立的核苷酸序列数据库 (GenBank)的同源基因的检索 ,搜索与之同源的来源于牛的表达序列标签 (EST)。然后根据基因同源性的原则 ,确定牛HCBP6的同源基因。结果　获得了与HCV核心蛋白结合蛋白的 36个基因片段 ,其中之一命名为HCBP6。根据基因同源性搜索 ,获得了来源于牛的EST基因序列片段 ,最终确立了牛HCBP6的同源基因。结论　利用不同物种之间基因同源性的原理 ,NCBI数据库GenBank同源基因的搜索 ,获得了牛HCBP6同源基因。生物信息学技术在后基因组时代具有重要地位和作用。 展开更多
关键词 牛丙型肝炎病毒 核心蛋白 结合蛋白6 同源基因 基因克隆 基因序列
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丙型肝炎病毒核心蛋白基因重组质粒的构建及其在真核细胞中的表达 被引量：4
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作者 冯志华 周永兴 +4 位作者 汪毅 贾战生 连建奇 李谨革 李文波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期244-246,共3页
目的：构建包含丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白（Ｃ）基因片段的重组真核表达载体，并在肝细胞癌细胞株７７２１细胞中表达。方法：将从ｐＢＲＴＭＨＣＶ１－３０１１质粒切下的ＨＣＶＣ基因片段插入ｐｃＤＮＡ３质粒的ＣＭＶ启动子下... 目的：构建包含丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白（Ｃ）基因片段的重组真核表达载体，并在肝细胞癌细胞株７７２１细胞中表达。方法：将从ｐＢＲＴＭＨＣＶ１－３０１１质粒切下的ＨＣＶＣ基因片段插入ｐｃＤＮＡ３质粒的ＣＭＶ启动子下游，构建真核表达质粒ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ，然后，采用脂质体转染技术，转染７７２１细胞进行瞬时表达，转染细胞裂解煮沸后，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达的核心抗原。结果：用限制性内切酶酶切后，片段大小与计算值相符。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实，表达抗原的Ｍｒ约为２２０００。结论：ＨＣＶＣ基因能够插入ｐｃＤＮＡ３真核表达载体，并使其在真核细胞中表达，为进一步ＨＣＶ基因疫苗的研制和探讨抗ＨＣＶ感染打下了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心基因 瞬时表达 质粒 构建
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