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银胶菊丙二烯氧化物合成酶的表达纯化及其活性分析
被引量：
1
1
作者
刘云华
周秋虎
+1 位作者
张灵芝
常振战
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期76-82,共7页
植物来源细胞色素P450的表达和结晶都十分困难,成为成功解析该类蛋白晶体结构的瓶颈。探索了使用大肠杆菌表达系统表达、纯化银胶菊丙二烯氧化物合成酶(allene oxide synthase,AOS)的方法。氨基酸序列比对分析显示,银胶菊AOS缺失N-末端...
植物来源细胞色素P450的表达和结晶都十分困难,成为成功解析该类蛋白晶体结构的瓶颈。探索了使用大肠杆菌表达系统表达、纯化银胶菊丙二烯氧化物合成酶(allene oxide synthase,AOS)的方法。氨基酸序列比对分析显示,银胶菊AOS缺失N-末端的膜锚定序列和信号肽序列,推测其在大肠杆菌中应表达为水溶性蛋白质。试验中纯化得到的银胶菊AOS是一个分子量为54.5 kD的八聚体分子,均一性好,不含去垢剂,达到毫克量级,适合下一步的晶体培养研究;还原一氧化碳差示光谱显示该酶在450 nm处有特征吸收峰,酶活性测定得到该酶的米氏常数为45.3μmol/L,显示该重组AOS具有很高的酶活性。
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关键词
银胶菊(Parthenium
argentatum)
丙二烯氧化物合成酶
细胞色素P450
表达纯化
酶活性分析
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职称材料
水稻丙二烯氧化物合成酶基因OsAOS1的表达研究
被引量：
4
2
作者
韩同凯
周晋军
+2 位作者
薛彦久
陈翠霞
谢先芝
《山东农业科学》
2013年第5期1-5,共5页
茉莉酸(Jasmonate,JA)为植物病虫害抗性反应中重要的信号分子,茉莉酸类物质生物合成途径中的关键酶为丙二烯氧化物合成酶(Allene oxide synthase,AOS)。已知水稻AOS基因家族包括4个成员,Os-AOS1～OsAOS4。已有研究表明,水稻OsAOS2基因...
茉莉酸(Jasmonate,JA)为植物病虫害抗性反应中重要的信号分子,茉莉酸类物质生物合成途径中的关键酶为丙二烯氧化物合成酶(Allene oxide synthase,AOS)。已知水稻AOS基因家族包括4个成员,Os-AOS1～OsAOS4。已有研究表明,水稻OsAOS2基因的过量表达提高了内源PR1基因的表达、增强了水稻对稻瘟病的抗性。本研究分析了OsAOS1基因表达的组织和器官特异性以及外源JA处理对OsAOS1基因表达的影响,同时利用转基因技术研究了OsAOS1基因在调控内源PR1基因表达中的作用。研究结果表明:OsAOS1基因表达的组织和器官特异性不同于OsAOS2基因;外源JA处理诱导OsAOS1基因的瞬时表达,然而OsAOS2基因的诱导表达延迟;OsAOS1过量表达抑制烟草中内源PR1基因的表达。据此推测OsAOS1基因可能不参与依赖于PR1的抗病反应。
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关键词
水稻
茉莉酸
丙二烯氧化物合成酶
转基因
PR1基因
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职称材料
AOS1基因克隆及其在鲜切芋头褐变中的表达模式分析
被引量：
5
3
作者
袁晓
杨盼迪
王斌
《广东农业科学》
CAS
2023年第9期198-206,共9页
【目的】鲜切芋头即使在低温条件下贮藏,贮藏期间仍会出现变黄变褐的现象,严重影响鲜切芋头的商品性。从鲜切芋头中克隆丙二烯氧化物合成酶(Allene oxide synthase,AOS)基因AOS1,并分析其表达与鲜切芋头褐变的关系,鉴定鲜切芋头褐变过...
【目的】鲜切芋头即使在低温条件下贮藏,贮藏期间仍会出现变黄变褐的现象,严重影响鲜切芋头的商品性。从鲜切芋头中克隆丙二烯氧化物合成酶(Allene oxide synthase,AOS)基因AOS1,并分析其表达与鲜切芋头褐变的关系,鉴定鲜切芋头褐变过程中的重要功能基因,为鲜切芋头褐变机制研究提供参考。【方法】以鲜切芋头cDNA为模板,采用RT-PCR法克隆AOS1基因编码序列(Coding sequence,CDS);采用荧光定量PCR法分析鲜切芋头褐变过程中AOS1表达情况,利用转录组测序数据分析外源褐变抑制剂处理对AOS1表达的影响,并分析AOS1启动子序列。【结果】20℃条件下,鲜切芋头贮藏24 h切面出现明显的变黄变褐症状,而4℃下贮藏12 d才出现明显的褐变症状,表明贮藏温度是影响鲜切芋头褐变进程的重要因素,低温贮藏可有效抑制鲜切芋头褐变。芋头AOS1基因的CDS全长为1560 bp,编码519个氨基酸残基;AOS1基因编码蛋白质的分子量为57.63 kD,等电点为8.68,定位在叶绿体。植物AOS1蛋白序列相似性较低,芋头AOS1与番茄AOS1、拟南芥AOS1蛋白的亲缘较远,但天南星科植物AOS1蛋白的序列同源性较高。芋头AOS1启动子中含有许多植物激素和逆境响应元件,AOS1表达在鲜切处理后显著上调,表明切分处理诱导了AOS1的表达。随着鲜切芋头褐变进展,AOS1表达量逐渐增加,外源乙醇酸和香草酸处理AOS1表达显著下调,表明AOS1表达与鲜切芋头褐变有关。【结论】鲜切芋头褐变与AOS1表达具有明显正相关性,切分去皮等处理可能通过诱导AOS1表达促进鲜切芋头褐变。
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关键词
鲜切芋头
褐变
丙二烯氧化物合成酶
基因克隆
表达分析
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职称材料
题名
银胶菊丙二烯氧化物合成酶的表达纯化及其活性分析
被引量：
1
1
作者
刘云华
周秋虎
张灵芝
常振战
机构
江生态工程职业学院生物技术系
北京大学基础医学院生物物理系
北京大学药学院天然药物学系
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第8期76-82,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(31070650)
北京市自然科学基金资助项目(5102023)
文摘
植物来源细胞色素P450的表达和结晶都十分困难,成为成功解析该类蛋白晶体结构的瓶颈。探索了使用大肠杆菌表达系统表达、纯化银胶菊丙二烯氧化物合成酶(allene oxide synthase,AOS)的方法。氨基酸序列比对分析显示,银胶菊AOS缺失N-末端的膜锚定序列和信号肽序列,推测其在大肠杆菌中应表达为水溶性蛋白质。试验中纯化得到的银胶菊AOS是一个分子量为54.5 kD的八聚体分子,均一性好,不含去垢剂,达到毫克量级,适合下一步的晶体培养研究;还原一氧化碳差示光谱显示该酶在450 nm处有特征吸收峰,酶活性测定得到该酶的米氏常数为45.3μmol/L,显示该重组AOS具有很高的酶活性。
关键词
银胶菊(Parthenium
argentatum)
丙二烯氧化物合成酶
细胞色素P450
表达纯化
酶活性分析
Keywords
Guayule （ Parthenium argentatum ）
Allene oxide synthase
Cytochrome P450
Expression and purification
Enzymeactivity assay
分类号
S576 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
水稻丙二烯氧化物合成酶基因OsAOS1的表达研究
被引量：
4
2
作者
韩同凯
周晋军
薛彦久
陈翠霞
谢先芝
机构
山东省水稻研究所/山东省水稻工程技术研究中心
山东农业大学农学院
出处
《山东农业科学》
2013年第5期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金(30870192)
山东省自然科学杰出青年基金(2009JQ11)资助
文摘
茉莉酸(Jasmonate,JA)为植物病虫害抗性反应中重要的信号分子,茉莉酸类物质生物合成途径中的关键酶为丙二烯氧化物合成酶(Allene oxide synthase,AOS)。已知水稻AOS基因家族包括4个成员,Os-AOS1～OsAOS4。已有研究表明,水稻OsAOS2基因的过量表达提高了内源PR1基因的表达、增强了水稻对稻瘟病的抗性。本研究分析了OsAOS1基因表达的组织和器官特异性以及外源JA处理对OsAOS1基因表达的影响,同时利用转基因技术研究了OsAOS1基因在调控内源PR1基因表达中的作用。研究结果表明:OsAOS1基因表达的组织和器官特异性不同于OsAOS2基因;外源JA处理诱导OsAOS1基因的瞬时表达,然而OsAOS2基因的诱导表达延迟;OsAOS1过量表达抑制烟草中内源PR1基因的表达。据此推测OsAOS1基因可能不参与依赖于PR1的抗病反应。
关键词
水稻
茉莉酸
丙二烯氧化物合成酶
转基因
PR1基因
Keywords
Rice
Jasmonate
Allene oxide synthase
Transgenic
PR1 gene
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
AOS1基因克隆及其在鲜切芋头褐变中的表达模式分析
被引量：
5
3
作者
袁晓
杨盼迪
王斌
机构
广东省粤北食药资源利用与保护重点实验室/韶关学院生物与农业学院
华南农业大学园艺学院/广东省果蔬保鲜重点实验室
出处
《广东农业科学》
CAS
2023年第9期198-206,共9页
基金
广东省粤北食药资源利用与保护重点实验室开放基金(FMR2022001M)
广东大学生科技创新培育专项资金(大学生科技创新培育)项目(pdjh2023a0470)。
文摘
【目的】鲜切芋头即使在低温条件下贮藏,贮藏期间仍会出现变黄变褐的现象,严重影响鲜切芋头的商品性。从鲜切芋头中克隆丙二烯氧化物合成酶(Allene oxide synthase,AOS)基因AOS1,并分析其表达与鲜切芋头褐变的关系,鉴定鲜切芋头褐变过程中的重要功能基因,为鲜切芋头褐变机制研究提供参考。【方法】以鲜切芋头cDNA为模板,采用RT-PCR法克隆AOS1基因编码序列(Coding sequence,CDS);采用荧光定量PCR法分析鲜切芋头褐变过程中AOS1表达情况,利用转录组测序数据分析外源褐变抑制剂处理对AOS1表达的影响,并分析AOS1启动子序列。【结果】20℃条件下,鲜切芋头贮藏24 h切面出现明显的变黄变褐症状,而4℃下贮藏12 d才出现明显的褐变症状,表明贮藏温度是影响鲜切芋头褐变进程的重要因素,低温贮藏可有效抑制鲜切芋头褐变。芋头AOS1基因的CDS全长为1560 bp,编码519个氨基酸残基;AOS1基因编码蛋白质的分子量为57.63 kD,等电点为8.68,定位在叶绿体。植物AOS1蛋白序列相似性较低,芋头AOS1与番茄AOS1、拟南芥AOS1蛋白的亲缘较远,但天南星科植物AOS1蛋白的序列同源性较高。芋头AOS1启动子中含有许多植物激素和逆境响应元件,AOS1表达在鲜切处理后显著上调,表明切分处理诱导了AOS1的表达。随着鲜切芋头褐变进展,AOS1表达量逐渐增加,外源乙醇酸和香草酸处理AOS1表达显著下调,表明AOS1表达与鲜切芋头褐变有关。【结论】鲜切芋头褐变与AOS1表达具有明显正相关性,切分去皮等处理可能通过诱导AOS1表达促进鲜切芋头褐变。
关键词
鲜切芋头
褐变
丙二烯氧化物合成酶
基因克隆
表达分析
Keywords
fresh-cut taro
browning
allene oxide synthase
gene cloning
expression analysis
分类号
S632.3 [农业科学—蔬菜学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
银胶菊丙二烯氧化物合成酶的表达纯化及其活性分析
刘云华
周秋虎
张灵芝
常振战
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
水稻丙二烯氧化物合成酶基因OsAOS1的表达研究
韩同凯
周晋军
薛彦久
陈翠霞
谢先芝
《山东农业科学》
2013
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
AOS1基因克隆及其在鲜切芋头褐变中的表达模式分析
袁晓
杨盼迪
王斌
《广东农业科学》
CAS
2023
5
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