牛源产Ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及重组毒素制备 被引量：5

1

作者 袁超文 刘文鑫 +5 位作者 关玮琨 孟相秋 唐杰 李星月 赵志腾 师东方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1336-1341,共6页

产Ⅱ型不耐热肠毒素(LT-Ⅱ)大肠杆菌是一类能引起严重腹泻的人畜共患肠道致病菌。为了解LT-Ⅱ在牛源腹泻性大肠杆菌中的流行情况,本研究对2010-2012年间分离的138株大肠杆菌进行了LT-Ⅱ毒素基因的检测,对分离到的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌... 产Ⅱ型不耐热肠毒素(LT-Ⅱ)大肠杆菌是一类能引起严重腹泻的人畜共患肠道致病菌。为了解LT-Ⅱ在牛源腹泻性大肠杆菌中的流行情况,本研究对2010-2012年间分离的138株大肠杆菌进行了LT-Ⅱ毒素基因的检测,对分离到的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌进行了测序及分析。进一步将LT-Ⅱcl毒素基因双顺反子的ORF克隆入pET30a表达载体、转化Rossatta感受态并诱导表达重组LT-Ⅱcl毒素,经Y-1小鼠肾上腺皮质细胞对重组毒素进行了初步的毒性验证。结果显示,所分离的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌中,有8株表达LT-Ⅱcl毒素,1株表达LT-Ⅱc4毒素,1株表达LT-Ⅱc6毒素。SDS-PAGE和Western Blot结果表明成功地制备出LT-Ⅱcl重组毒素,该重组毒素可以使Y-1小鼠肾上腺皮质细胞发生明显的病变,其细胞最小致死量为17.8 pg。本研究为中国国内首次分离到牛源产LT-Ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌,为深入研究LT-Ⅱ毒素奠定了基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌Ⅱ型不耐热肠毒素 重组毒素 细胞毒性

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大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63毒性检测及佐剂效果研究 被引量：6

2

作者 白雪飞 郭静玉 +1 位作者 雷万军 段广才 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期69-71,共3页

目的对已构建的大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63进行表达、纯化、毒性检测,并对其佐剂活性进行研究。方法采用已知的最佳诱导表达条件进行诱导表达,诱导表达产物经亲和层析、纯化浓缩后,进行毒性检测。将纯化后的mLT63联合幽门螺... 目的对已构建的大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63进行表达、纯化、毒性检测,并对其佐剂活性进行研究。方法采用已知的最佳诱导表达条件进行诱导表达,诱导表达产物经亲和层析、纯化浓缩后,进行毒性检测。将纯化后的mLT63联合幽门螺旋杆菌(Hp)亚单位疫苗UreB、Omp11经口途径免疫BALB/c小鼠,免疫后取血清、胃组织提取液、粪便提取液进行ELISA试验,检测其中的特异性抗体水平,将结果进行统计分析。结果经家兔回肠袢毒性试验验证本室构建大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63没有毒性,mLT63联合Hp亚单位疫苗UreB、Omp11免疫小鼠实验证实mLT63具有佐剂活性。结论本室构建、表达的大肠杆菌不耐热肠毒素无毒突变体mLT63无毒,并具有免疫佐剂的活性。 展开更多

关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 突变体 佐剂

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大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的原核表达及其活性研究 被引量：6

3

作者 唐思静 刘惠莉 +1 位作者 马勋 赵艳敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期697-701,共5页

为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获... 为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获得了替换。IPTG诱导表达目的蛋白经SDS-PAGE电泳检测,表达出突变体重组蛋白为约30 ku和10 ku的两个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量相吻合。Western blot检测结果表明两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应。目的蛋白经纯化后进行ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,突变重组蛋白与野生型LT相比其酶活性和毒性均明显降低。纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡,ELISA结果显示,突变体LTR72/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高滴度的抗新城疫病毒的IgG和IgA。 展开更多

关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 免疫原性 ADP-核酸转移酶

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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的纯化及生物学活性鉴定 被引量：3

4

作者 田文标 邹全明 +4 位作者 吴超 张卫军 杨珺 冉向阳 王缚鲲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期131-134,共4页

目的　纯化rLTB并对其生物学功能进行初步研究。方法　重组基因工程菌发酵后 ,以包涵体形式表达的rLTB经过洗涤、变性溶解后 ,分别采用QSepharoseTM HighPerformance阴离子交换层析和PhenylFF(highsub)疏水层析对其进行纯化并透析复性 ... 目的　纯化rLTB并对其生物学功能进行初步研究。方法　重组基因工程菌发酵后 ,以包涵体形式表达的rLTB经过洗涤、变性溶解后 ,分别采用QSepharoseTM HighPerformance阴离子交换层析和PhenylFF(highsub)疏水层析对其进行纯化并透析复性 ,然后采用SDS PAGE和HPLC检测纯度 ,并选用ELISA、动物实验和Western blotting实验对纯化蛋白的生物学活性进行鉴定。结果　得到纯度达 97 85 %的rLTB ,复性的rLTB经检测具有良好的生物学活性。结论　得到纯度较高、生物学活性较好的rLTB 。 展开更多

关键词 大肠杆菌 不耐热肠毒素 B亚单位 纯化 生物学活性

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平板免疫溶血试验快速检测大肠杆菌不耐热肠毒素 被引量：7

5

作者 冉雪琴 王嘉福 +1 位作者 王宇波 叶在荣 《贵州农业科学》 CAS 1995年第2期7-10,共4页

琼脂糖为介质，进行固相平板免疫溶血试验测定毒素源性大肠杆菌不耐热肠毒素（ＬＴ），同时与ＥＬＩＳＡ，兔肠结扎试验测定ＬＴ进行了比较。结果表明，平板免疫溶血试验特异性强，标准的ＥＴＥＣ发生溶血，非ＥＴＥＣ不发生溶血，灵敏... 琼脂糖为介质，进行固相平板免疫溶血试验测定毒素源性大肠杆菌不耐热肠毒素（ＬＴ），同时与ＥＬＩＳＡ，兔肠结扎试验测定ＬＴ进行了比较。结果表明，平板免疫溶血试验特异性强，标准的ＥＴＥＣ发生溶血，非ＥＴＥＣ不发生溶血，灵敏度与ＥＬＩＳＡ相似，比肠结扎试验敏感８倍左右；对１５１份样品的检测说明平板免疫溶血试验与ＥＬＩＳＡ具有很高的符合性。此外对不同来源的红血球用于测定ＬＴ进行了研究。 展开更多

关键词 不耐热肠毒素 ETEC 免疫溶血 大肠杆菌

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大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的表达及活性研究 被引量：3

6

作者 赵艳敏 刘惠莉 +2 位作者 邢继兰 潘洁 曹祥荣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期30-34,52,共6页

利用重叠延伸PCR扩增技术,体外获得大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)突变体LTK63、LTR72和LTG192全基因片段,酶切和测序结果表明构建的表达载体pET30a-LT、pET30a-LTK63、pET30a-LTR72、pET30a-LTG192阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换... 利用重叠延伸PCR扩增技术,体外获得大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)突变体LTK63、LTR72和LTG192全基因片段,酶切和测序结果表明构建的表达载体pET30a-LT、pET30a-LTK63、pET30a-LTR72、pET30a-LTG192阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换。诱导表达产物用SDS-PAGE检测,野生型LT蛋白及3个突变体均表达出约33.0Ku和13.0Ku的2个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量大小相吻合;Westernblot检测,2个蛋白带均可与抗His抗体发生特异性免疫反应,而13.0Ku的蛋白带还可与抗霍乱毒素(CT)抗体发生免疫学反应。ADP-核糖转移酶活性试验分析,各突变体蛋白酶活性均低于野生型LT蛋白,但仍保留一些酶活性。Patent-mouse毒性试验检测,LTK63、LTR72和LTG192突变体蛋白的毒性均有不同程度降低,LTK63毒性降低最显著,LTG192蛋白毒性相对较大。 展开更多

关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 突变体 表达

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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因工程菌发酵工艺的研究 被引量：4

7

作者 田文标 邹全明 张卫军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期115-118,共4页

目的　研究建立大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因工程菌的发酵工艺。方法　先通过摇瓶培养初步确定工程菌的最适生长条件 ,然后以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的蛋白表达率的各种条件 ,并进一步对发酵工艺进行... 目的　研究建立大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因工程菌的发酵工艺。方法　先通过摇瓶培养初步确定工程菌的最适生长条件 ,然后以此为基础在发酵罐中比较、筛选影响菌体生长和目的蛋白表达率的各种条件 ,并进一步对发酵工艺进行改良优化。结果　经试验确定了rLTB基因工程菌发酵罐培养的各项条件的最佳组合 ,优化后工程菌菌体产量平均可达 40 5g/L ,目的蛋白的表达率平均为 3 0 6%。结论　建立了稳定、高效的工程菌发酵工艺。 展开更多

关键词 产毒素性大肠杆菌 不耐热肠毒素B亚单位 发酵

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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位融合表达载体的构建及应用 被引量：2

8

作者 鲁东水 毛旭虎 +1 位作者 吴超 邹全明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第14期1275-1277,共3页

目的　构建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的融合表达载体。方法　PCR扩增LTB基因 ,并在其 3′端去掉终止密码子 ,引入编码TAPI接头 ,通过EcoRⅠ和EcoRⅤ酶切位点重组于PinpointXa Ⅰ载体上 ,将幽门螺杆菌尿素酶B亚单位与之融合 ,转化E .c... 目的　构建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的融合表达载体。方法　PCR扩增LTB基因 ,并在其 3′端去掉终止密码子 ,引入编码TAPI接头 ,通过EcoRⅠ和EcoRⅤ酶切位点重组于PinpointXa Ⅰ载体上 ,将幽门螺杆菌尿素酶B亚单位与之融合 ,转化E .coliJM10 9,SDS PAGE及Westernblotting分析其表达。结果　成功构建了LTB融合表达质粒 ,并获得了幽门螺杆菌尿素酶B亚单位与之融合表达。结论　LTB融合表达载体的成功构建为研究分子内佐剂疫苗奠定了实验基础。 展开更多

关键词 不耐热肠毒素B亚单位 融合表达 载体 幽门螺杆菌尿素酶B亚单位

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辽宁地区腹泻患者大肠杆菌分离株Ⅱ型不耐热肠毒素的检测及测序分析 被引量：3

9

作者 袁超文 江馗语 +1 位作者 张力国 刘文鑫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期644-650,共7页

目的对辽宁地区人源性腹泻样本中致病性大肠杆菌(Pathogenic Escherichia coli)的毒力因子进行检测,掌握产Ⅱ型不耐热肠毒素(Type Ⅱ heat labile enterotoxin,LT-Ⅱ)大肠杆菌在我国北方地区的流行现状并阐明LT-Ⅱ与其他致病因子间的关... 目的对辽宁地区人源性腹泻样本中致病性大肠杆菌(Pathogenic Escherichia coli)的毒力因子进行检测,掌握产Ⅱ型不耐热肠毒素(Type Ⅱ heat labile enterotoxin,LT-Ⅱ)大肠杆菌在我国北方地区的流行现状并阐明LT-Ⅱ与其他致病因子间的关系。方法于2014年3月至2015年3月收集辽宁地区人源性腹泻粪便样品,用麦康凯培养基和生化试验的方法分离出大肠杆菌,并用多重PCR方法对毒力基因(elt-Ⅱ、elt-I、sta、stb、K88、K99等)进行检测,对分离到的LT-Ⅱ阳性大肠杆菌中elt-Ⅱ基因进行测序及分型。结果 354份腹泻样品中共分离到携带有毒力因子的大肠杆菌139株,检出率为39.2%。毒力因子阳性大肠杆菌中,有12株携带elt-Ⅱ(8.6%)基因。在12株携带elt-Ⅱ的大肠杆菌中,2株单独携带elt-Ⅱ,6株携带F1,1株携带K88,1株携带astA,2株携带irp2/astA;测序结果表明12株elt-Ⅱ阳性大肠杆菌中有10株携带elt-Ⅱc1亚型,2株携带elt-Ⅱc4亚型。结论在引起人源性腹泻的毒力因子中有大肠杆菌Ⅱ型不耐热肠毒的存在,且主要以LT-Ⅱc1为主要流行型。 展开更多

关键词 大肠杆菌Ⅱ型不耐热肠毒素 PCR检测 测序分析

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大肠埃希菌不耐热肠毒素双突变体的表达及活性研究 被引量：1

10

作者 唐思静 姜云 +3 位作者 吕转平 刘惠莉 马勋 赵艳敏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期8-13,共6页

为了使大肠埃希菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,通过PCR和重叠—延伸PCR扩增突变体LTK63/G192基因片段,IPTG诱导表达目的蛋白,经Western免疫印迹检测目的蛋白,在HPLC系统上纯化目的蛋白,经ADP-核酸转... 为了使大肠埃希菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,通过PCR和重叠—延伸PCR扩增突变体LTK63/G192基因片段,IPTG诱导表达目的蛋白,经Western免疫印迹检测目的蛋白,在HPLC系统上纯化目的蛋白,经ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡。结果表明:制备的突变体LTK63/G192的基因片段经酶切和测序发现,所构建的表达载体pLTK63/G192阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换;经SDS-PAGE电泳检测,野生型LT及双突变体均表达出约33.0ku和13.0ku的两条蛋白带,与LTA、LTB亚基分子质量相吻合;经Western bolt检测,两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应;双突变蛋白的酶活性和毒性与野生型LT相比酶活性和毒性都有所降低;突变体LTK63/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高抗新城疫病毒的IgG和IgA。说明LTK63/G192是一个良好的免疫佐剂。 展开更多

关键词 大肠埃希菌不耐热肠毒素 免疫原性 ADP-核酸转移酶

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大肠杆菌不耐热肠毒素及其分子生物学 被引量：2

11

作者 翁庆北 王嘉福 《贵州师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2001年第4期92-96,共5页

产肠毒素大肠杆菌是与腹泻相关的一类大肠杆菌 ,肠毒素可分为耐热肠毒素和不耐热肠毒素。文章从肠毒素免疫性与作用机理 ,不耐热肠毒素的基因质粒、定位、亚基因克隆及表达 。

关键词 大肠杆菌 不耐热肠毒素 基因质粒 分子生物学 免疫性 作用机理 基因克隆 腹泻

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大肠杆菌不耐热肠毒素突变体作为佐剂的研究进展 被引量：4

12

作者 唐思静 吕转平 +2 位作者 马博 王艳萍 苏晓月 《上海畜牧兽医通讯》 2013年第5期16-18,共3页

黏膜免疫是防止病原菌侵入黏膜表面引起疾病的最有效的途径,通过黏膜免疫不仅能产生全身免疫反应,还能产生局部的黏膜免疫反应,该免疫途径无痛苦且易操作,同时减少疾病传播的风险.但大多数抗原的黏膜免疫原性都很差,通过口服或滴鼻免疫... 黏膜免疫是防止病原菌侵入黏膜表面引起疾病的最有效的途径,通过黏膜免疫不仅能产生全身免疫反应,还能产生局部的黏膜免疫反应,该免疫途径无痛苦且易操作,同时减少疾病传播的风险.但大多数抗原的黏膜免疫原性都很差,通过口服或滴鼻免疫可溶性蛋白通常引起特异性免疫耐受,这些使得在黏膜免疫中使用恰当的佐剂成为必须. 不耐热肠毒素（Heat— labile enterotoxin,LT）是由肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia col i,ETEC）分泌的一种外毒素,既有较强的免疫原性又有较强的黏膜佐剂效应.但由于强的毒性,限制了它的广泛应用,因此通过构建各种突变体使之具备优良的佐剂活性且没有显著的毒性是当前研究的主要目标.本文主要从突变体的酶活性、毒性以及佐剂活性进行综述,为黏膜疫苗的研制打下一定基础. 展开更多

关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素 佐剂效应 突变体 黏膜免疫 肠毒素大肠杆菌 免疫反应 免疫原性 疾病传播

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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因表达系统构建 被引量：1

13

作者 全胜 严杰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期14-15,20,共3页

从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨... 从E .coli 4 4 815株基因组DNA中扩增不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)基因并分析了核苷酸序列 ,构建pET32a的LTB表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用SDS PAGE鉴定表达产物。克隆的LTB基因与报道的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 99.12 %～ 99.71%和 97.5 8%～ 99.19% ,pET32a LTB BL2 1DE3系统表达的rLTB量约占细菌总蛋白的 30 %。 展开更多

关键词 重组大肠杆菌不耐热肠毒素 B亚单位 基因表达系统 构建

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大肠杆菌不耐热肠毒素的分子生物学及粘膜免疫佐剂效应 被引量：7

14

作者 王星 覃宗华 刘定发 《广东畜牧兽医科技》 2005年第4期18-21,共4页

大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-Labile,LT)是由产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenicEscherichiacoli,ETEC)分泌的一种外毒素。LT既有较强的免疫原性又有较强的粘膜佐剂效应,其毒力较霍乱毒素(choleratoxin,CT)小而被认为是替代CT的最有潜力... 大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-Labile,LT)是由产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenicEscherichiacoli,ETEC)分泌的一种外毒素。LT既有较强的免疫原性又有较强的粘膜佐剂效应,其毒力较霍乱毒素(choleratoxin,CT)小而被认为是替代CT的最有潜力的粘膜免疫佐剂。本文从LT的分子结构、分子生物学特性、免疫原性、粘膜佐剂效应及其作用机制以及LT的粘膜免疫佐剂的应用等方面进行了讨论。 展开更多

关键词 大肠杆菌 不耐热肠毒素 分子生物学 粘膜免疫 佐剂效应

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酶联免疫吸附测定大肠杆菌不耐热肠毒素 被引量：4

15

作者 吴拥军 王嘉福 《贵州农学院学报》 1997年第2期24-26,共3页

应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对贵州省主要家畜大肠杆菌不耐热肠毒素（ＬＴ）进行了研究、同时与平板免疫溶血试验（ＰＩＨＡ）、基因探针（Ｇｅｎｅｐｒｏｂｅ）测定ＬＴ进行了比较。通过对贵州省主要地区的猪、鸡、牛等２３９... 应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对贵州省主要家畜大肠杆菌不耐热肠毒素（ＬＴ）进行了研究、同时与平板免疫溶血试验（ＰＩＨＡ）、基因探针（Ｇｅｎｅｐｒｏｂｅ）测定ＬＴ进行了比较。通过对贵州省主要地区的猪、鸡、牛等２３９份腹泻样品中的１２４份Ｅ．ｃｏｌｉ分离物测定，ＬＴ阳性检出率为ＥＬＩＳＡ５１．６％、Ｇｅｎｅｐｒｏｂｅ６１．３％、ＰＩＨＡ１３．５％．结果表明，肠毒素大肠杆菌是引起家畜腹泻致病的主要原因，尤其是遵义地区检出率更高。 展开更多

关键词 不耐热肠毒素 ELISA 大肠杆菌

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猪大肠杆菌不耐热肠毒素基因的PCR检测 被引量：1

16

作者 陈芳 池仕红 +5 位作者 陈汉林 杨林 刘为民 张浩吉 王政富 马春全 《广东畜牧兽医科技》 2007年第6期32-33,共2页

以产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)保守序列为靶序列,设计合成了一对可扩增336 bp目的片段的引物,建立了检测ETEC不耐热肠毒素(LT)基因的PCR方法。该方法对987p+、鼠伤寒沙门氏杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和链球菌的检测结果均... 以产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)保守序列为靶序列,设计合成了一对可扩增336 bp目的片段的引物,建立了检测ETEC不耐热肠毒素(LT)基因的PCR方法。该方法对987p+、鼠伤寒沙门氏杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和链球菌的检测结果均为阴性。对15株分离自腹泻仔猪的待检菌株进行检测,有3株LT基因阳性。结果表明:该方法的特异性和敏感性较高,可用于ETEC的临床快速诊断和流行病学调查。 展开更多

关键词 产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC) 不耐热肠毒素基因(LT) PCR

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重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在鸭体内的吸收代谢及组织分布

17

作者 周晓丽 王一成 +3 位作者 姜平 袁秀芳 李军星 杜晓莉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期104-109,共6页

研究重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)在鸭体内的吸收代谢及组织分布,为rLTB的临床应用安全性提供依据。试验鸭分别肌注1,50,100 mg/kg rLTB后,以神经节苷脂GM1酶联免疫吸附法(GM1-ELISA)测定注射后不同时间点鸭血清中的rLTB含量... 研究重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(rLTB)在鸭体内的吸收代谢及组织分布,为rLTB的临床应用安全性提供依据。试验鸭分别肌注1,50,100 mg/kg rLTB后,以神经节苷脂GM1酶联免疫吸附法(GM1-ELISA)测定注射后不同时间点鸭血清中的rLTB含量;连续3次肌注rLTB后,观察临床症状和剖检病理变化,并采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和大脑制备组织切片,HE染色观察组织病理学变化,免疫酶组织化学染色观察rLTB在各脏器内的分布及含量变化。结果表明:鸭血清中的rLTB含量变化及维持时间与rLTB注射剂量呈正相关。1 mg/kg注射组2 h达到峰值,维持至6 h开始下降,24 h后基本检测不到;50,100 mg/kg注射组分别于2 h和1 h达到峰值,并均维持至12 h才开始下降,48 h后基本检测不到。HE染色切片显示50 mg/kg注射组肝细胞轻度浊肿变性,肺脏轻微炎症;100mg/kg注射组肝细胞浊肿变性明显、肺脏重度炎症、脑组织出现局灶性坏死。免疫组化染色结果显示,在被检脏器中均检出rLTB,以大脑含量最高,脾脏和肝脏次之,心脏和肺脏检出量低。rLTB大剂量肌肉注射可引起鸭一定的组织学病变,对鸭的安全使用剂量应不超过50 mg/kg。 展开更多

关键词 大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 鸭 吸收代谢 组织分布

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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位与产气荚膜梭菌毒素融合蛋白的免疫原性

18

作者 曾瑾 马臣杰 +1 位作者 邓光存 刘晓明 《江苏农业科学》 北大核心 2014年第11期216-218,共3页

梭菌毒素作为产气荚膜梭菌的主要致病因子可引起家畜的多种疾病,其中β1毒素和β2毒素是由C型菌产生的2种引起动物坏死性肠炎的主要致病因子。基因工程重组毒素蛋白已作为潜在候选疫苗用于预防该菌所引起的多种传染性疾病,大肠杆菌不耐... 梭菌毒素作为产气荚膜梭菌的主要致病因子可引起家畜的多种疾病,其中β1毒素和β2毒素是由C型菌产生的2种引起动物坏死性肠炎的主要致病因子。基因工程重组毒素蛋白已作为潜在候选疫苗用于预防该菌所引起的多种传染性疾病,大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)是一种常用的黏膜免疫佐剂。本研究将ltb-cpb2-cpb1及ltb-cpa融合基因进行IPTG的诱导表达,制备了包涵体粗提物,并对小白鼠进行免疫攻毒试验及其免疫后抗原免疫保护期的免疫原性的研究。结果显示,经LTB-CPB2B1及LTB-CPA重组蛋白免疫后的小白鼠在第28、第56天时用产气荚膜梭菌强毒攻击,可获得很好的保护,产气荚膜梭菌毒素与LTB融合基因重组菌株能够有效刺激免疫小白鼠产生特异性抗体。说明该重组菌株可以作为预防产气荚膜梭菌所引起疾病的候选菌株。 展开更多

关键词 产气荚膜梭菌 毒素 大肠杆菌不耐热肠毒素 亚单位 免疫原性 疫苗保护周期

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大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因的原核表达

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作者 梁望旺 周丹娜 +5 位作者 刘泽文 伍锐 杨克礼 段正赢 邓均华 徐涤平 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第11期2627-2629,共3页

大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素B亚单位(LTB)不仅是重要的黏膜免疫原,而且作为佐剂在黏膜免疫中起着重要的作用。试验采用PCR方法扩增了肠毒素性大肠杆菌的LTB基因,并将其克隆到pGEX-KG原核表达载体上,构建了重组质粒pKG-LTB,... 大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素B亚单位(LTB)不仅是重要的黏膜免疫原,而且作为佐剂在黏膜免疫中起着重要的作用。试验采用PCR方法扩增了肠毒素性大肠杆菌的LTB基因,并将其克隆到pGEX-KG原核表达载体上,构建了重组质粒pKG-LTB,经酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,克隆的LTB基因与谷胱甘肽转移酶(GST)基因获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-LTB分子量约为35kDa,并具有免疫反应活性。这为进一步研究LTB蛋白黏膜免疫原性和黏膜佐剂的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 肠毒素大肠杆菌 不耐热肠毒素 克隆 原核表达

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产不耐热肠毒素大肠杆菌减毒突变菌株的毒性和免疫应答评价 被引量：4

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作者 冯启峥 侯美佳 +5 位作者 孙思萌 石博 刘嘉利 董秀梅 张萍 师东方 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期310-318,共9页

为探究表达不耐热肠毒素突变体(mLT)的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)突变菌株黏膜免疫原性以及作为口服疫苗的应用前景,本研究采用细菌平板计数法、电镜观察和药物敏感试验检测了已构建的mLT突变菌株在LB液体培养基和人工胃肠环境下的生长曲... 为探究表达不耐热肠毒素突变体(mLT)的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)突变菌株黏膜免疫原性以及作为口服疫苗的应用前景,本研究采用细菌平板计数法、电镜观察和药物敏感试验检测了已构建的mLT突变菌株在LB液体培养基和人工胃肠环境下的生长曲线、菌毛生长和对抗生素的耐药性能,结果显示E.coli mLT-S63K、E.coli mLT-A72R和E.coli mLT-R192G3突变菌株的生长曲线、菌毛生长和耐药性与亲本菌株基本一致;经PCR和细菌黏附性试验检测,3株菌的突变基因遗传稳定,并且具有和亲本菌株相当的黏附能力;采用家兔肠袢结扎试验和鼠肾上腺皮质细胞(Y1)毒性试验对突变菌株产生的mLT的毒性进行检测,结果显示,3株突变菌株所产生的mLT均具有体内肠毒性,E.coli mLT-S63K产生的mLT对Y1细胞的毒性最弱,为10^(3.476)TCID_(50)/0.1 mL,是亲本菌株E.coli C83903 LT毒性(10^(7.614)TCID_(50)/0.1 mL)的1/10000;小鼠口服突变菌后,观察小鼠临床表现,采用ELISA和中和试验检测小鼠产生的特异性抗体及其中和活性,采用MTT法测定淋巴细胞的增殖情况,结果显示,口服突变菌株对小鼠安全,能够诱导小鼠产生局部黏膜免疫应答、体液免疫应答以及细胞免疫应答,小鼠产生特异性的IgG和sIgA且对LT均具有中和活性。3株突变菌株均具有良好的免疫原性,其中E.coli mLT-S63K所产生的mLT毒性更弱,且黏膜免疫效果更好,可作为ETEC口服疫苗的候选菌株。本研究通过减毒突变构建了表达mLT的ETEC突变菌株,并筛选出毒性弱,免疫原性好,遗传稳定的ETEC口服疫苗候选菌株,为仔猪大肠杆菌性腹泻新型疫苗的研究提供了实验数据。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 不耐热肠毒素 突变菌 口服免疫

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