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针对人β-catenin基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定
1
作者
姜永光
赵佳晖
+2 位作者
吴春婷
罗勇
贺大林
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期965-967,共3页
目的:构建针对人β-catenin基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染HEK-293细胞,观察其对β-catenin的抑制效应。方法:化学合成用于产生针对β-catenin shRNA的对应DNA片段,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,克隆入pSU-PER真核表达载体,对...
目的:构建针对人β-catenin基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染HEK-293细胞,观察其对β-catenin的抑制效应。方法:化学合成用于产生针对β-catenin shRNA的对应DNA片段,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,克隆入pSU-PER真核表达载体,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定,筛选阳性克隆。通过脂质体介导,把重组质粒转染HEK-293细胞,RT-PCR、蛋白质印迹法检测其对β-catenin mRNA和蛋白的干涉效果,MTT比色法检测β-catenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示转染组β-catenin基因的表达水平下调,MTT检测显示β-catenin表达抑制的细胞光密度值下降,细胞增殖受到了抑制(P<0.01)。结论:成功构建了针对人β-catenin基因的shRNA载体,转染HEK-293细胞后可抑制β-catenin基因的表达。
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关键词
Β-连环素
RNA干扰
SHRNA
HEK
293
细胞
上皮细胞间质转化态
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题名
针对人β-catenin基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定
1
作者
姜永光
赵佳晖
吴春婷
罗勇
贺大林
机构
首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科
首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科
西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期965-967,共3页
基金
国家自然科学基金(30872934)
北京市自然科学基金(5072019)~~
文摘
目的:构建针对人β-catenin基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染HEK-293细胞,观察其对β-catenin的抑制效应。方法:化学合成用于产生针对β-catenin shRNA的对应DNA片段,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,克隆入pSU-PER真核表达载体,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定,筛选阳性克隆。通过脂质体介导,把重组质粒转染HEK-293细胞,RT-PCR、蛋白质印迹法检测其对β-catenin mRNA和蛋白的干涉效果,MTT比色法检测β-catenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示转染组β-catenin基因的表达水平下调,MTT检测显示β-catenin表达抑制的细胞光密度值下降,细胞增殖受到了抑制(P<0.01)。结论:成功构建了针对人β-catenin基因的shRNA载体,转染HEK-293细胞后可抑制β-catenin基因的表达。
关键词
Β-连环素
RNA干扰
SHRNA
HEK
293
细胞
上皮细胞间质转化态
分类号
R73-36 [医药卫生—肿瘤]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
针对人β-catenin基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定
姜永光
赵佳晖
吴春婷
罗勇
贺大林
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
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