厄贝沙坦对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中Wnt/β-catenin信号途径表达的影响 被引量：13

1

作者 闫喆 姚芳 +4 位作者 张丽萍 刘力强 郝军 傅淑霞 段惠军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1630-1634,共5页

目的探讨Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的表达及血管紧张素受体拮抗剂(ARB)厄贝沙坦对该途径活性的影响。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为正常糖组、甘露醇对照组、高糖组、高糖+厄贝沙坦干预组... 目的探讨Wnt/β-catenin信号途径在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的表达及血管紧张素受体拮抗剂(ARB)厄贝沙坦对该途径活性的影响。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为正常糖组、甘露醇对照组、高糖组、高糖+厄贝沙坦干预组。采用免疫细胞化学观察β-连环蛋白(β-catenin)表达情况;Western印迹检测Wnt4、β-catenin、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;逆转录-聚合酶链反应检测Wnt4和β-catenin mRNA表达水平。结果高糖组较正常糖及渗透浓度对照组Wnt4蛋白及mRNA、α-SMA蛋白表达增高,E-cadherin表达降低,β-catenin总蛋白及mRNA水平无明显变化,细胞质及核蛋白表达增强。Wnt4和β-catenin核蛋白表达在高糖诱导24h达高峰;厄贝沙坦下调Wnt4、α-SMA及β-catenin核蛋白表达,升高E-cadherin表达水平。结论Wnt/β-catenin信号途径可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程。厄贝沙坦可能通过调节Wnt/β-catenin信号途径活性而抑制该过程。 展开更多

关键词 Wnt4 Β-连环蛋白 E-钙粘蛋白 Α-平滑肌肌动蛋白 上皮细胞转分化 厄贝沙坦

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整合素连接激酶在梗阻性肾病肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其表达调节的研究 被引量：6

2

作者 何凤 喻陆 +4 位作者 童俊容 罗正茂 朱起之 王寅 张建林 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期909-913,共5页

目的研究整合素连接激酶(ILK)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其的影响。方法将雄性CD-1小鼠随机分为假手术对照组(Sham,n=20)、UUO组(UUO,n=28)和尿激酶治疗组(uPA,n=28),分别于术后1、3、7和14d处... 目的研究整合素连接激酶(ILK)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其的影响。方法将雄性CD-1小鼠随机分为假手术对照组(Sham,n=20)、UUO组(UUO,n=28)和尿激酶治疗组(uPA,n=28),分别于术后1、3、7和14d处死小鼠。Masson染色观察肾间质纤维化。免疫荧光和Western印迹检测小鼠肾组织ILK的分布及表达。免疫组化检测肾组织上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)的表达。RT-PCR检测ILK、E-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达。结果与Sham组相比,UUO组术后1d ILK mRNA及蛋白表达均增高,7d达到高峰;E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少,α-SMA mRNA表达显著上调。与UUO组同时间点相比,uPA治疗组ILK、α-SMA表达均被显著抑制(P<0.05);E-cadherin表达则增高(P<0.05)。结论ILK通过介导肾小管上皮细胞转分化而参与肾间质纤维化的发生发展。uPA能减轻肾小管间质纤维化,这可能与其抑制肾小管细胞ILK表达有关。 展开更多

关键词 整合素连接激酶 尿激酶 梗阻性肾病 上皮细胞转分化 肾间质纤维化

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厄贝沙坦对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中GSK-3β表达的影响 被引量：7

3

作者 闫喆 姚芳 +4 位作者 史永红 郝军 傅淑霞 李绍梅 段惠军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期225-229,共5页

目的探讨糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase ki-nase-3β,GSK-3β)在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的表达及血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂(AT1Ra)厄贝沙坦对其活性的影响。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为正常糖组、甘露... 目的探讨糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase ki-nase-3β,GSK-3β)在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的表达及血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂(AT1Ra)厄贝沙坦对其活性的影响。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为正常糖组、甘露醇对照组、高糖组、高糖+厄贝沙坦干预组。采用免疫细胞化学观察磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)在肾小管细胞表达情况;Western blot检测GSK-3β、p-GSK-3β、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GSK-3β和TGF-β1mRNA表达。结果高糖组较正常糖及甘露醇对照组p-GSK-3β、α-SMA蛋白及TGF-β1mRNA表达增高,E-cadherin表达降低。高糖刺激细胞12hp-GSK-3β表达增强,24h达到高峰。厄贝沙坦能够下调高糖诱导的p-GSK-3β、α-SMA蛋白及TGF-β1mRNA表达,同时逆转E-cadherin下降水平。结论GSK-3β可能参与了高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化过程,厄贝沙坦抑制该过程可能是通过调节GSK-3β的活性而实现的。 展开更多

关键词 糖原合成酶激酶-3Β E-钙粘蛋白 Α-平滑肌肌动蛋白 上皮细胞转分化

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人肾小管上皮细胞转分化过程中血管内皮细胞生长因子及其受体表达的变化 被引量：8

4

作者 周秋根 郑法雷 +3 位作者 文煜冰 谭小月 段林 李艳 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期325-331,i001,共8页

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化过程中,血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体表达的变化。方法用不同浓度的TGFβ1诱导HK-2转分化,细胞免疫化学方法检测血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA),反转录-聚合酶链反... 目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化过程中,血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体表达的变化。方法用不同浓度的TGFβ1诱导HK-2转分化,细胞免疫化学方法检测血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和VEGFmRNA表达,酶联免疫分析(ELISA)检测上清中的VEGF,免疫印迹检测细胞裂解物中的VEGF及其受体。结果(1)HK-2细胞在TGFβ1(5、8ng/ml)刺激后,α-SMA免疫染色均为阳性,以8ng/ml时最强;TGFβ1呈剂量和时间依赖诱导α-SMAmRNA表达(P<0.001)。(2)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF从基因到蛋白水平呈双相改变:0.1和1ng/mlTGFβ1刺激后VEGFmRNA和蛋白表达强度均高于对照组(P<0.001);而3、5和8ng/mlTGFβ1刺激后表达强度则低于对照组(P<0.001)。8ng/mlTGFβ1刺激较短时间(12和24h),VEGFmRNA和蛋白表达强度高于对照组(P<0.001);而刺激较长时间(36、48和72h),mRNA和蛋白表达强度均低于对照组(P<0.001)。(3)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,以浓度和时间依赖性方式诱导VEGF受体表达增强(P<0.001)。结论TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF受体表达增强,而VEGF表达出现双相变化,高浓度的TGFβ1刺激可引起VEGF表达下调。 展开更多

关键词 肾小管上皮细胞转分化 转化生长因子Β1 血管内皮细胞生长因子

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醛固酮及其拮抗剂安体舒通对高糖刺激下肾小管上皮细胞转分化的影响 被引量：5

5

作者 刘抗寒 周巧玲 +4 位作者 敖翔 Veeraragoo Pouranan 洪学敏 肖舟 袁明霞 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期222-229,共8页

目的:通过观察高糖环境下,醛固酮(aldosterone,Aldo)及其拮抗剂安体舒通(spironolac-tone,SP)对大鼠肾小管上皮细胞(normal rat kidney epithelial cell,NRK-52E)转分化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的影响,探讨Aldo及SP在糖... 目的:通过观察高糖环境下,醛固酮(aldosterone,Aldo)及其拮抗剂安体舒通(spironolac-tone,SP)对大鼠肾小管上皮细胞(normal rat kidney epithelial cell,NRK-52E)转分化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)的影响,探讨Aldo及SP在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾保护作用中的机制。方法:用无血清DMEM(Dulbecco's modification of Eagle's medium Dulbecco)同步化培养NRK-52E细胞系12h后分为6组。LG组:采用低糖(1000mg/L)DMEM;HG组:采用高糖(4500mg/L)DMEM培养;10nmol/L Aldo组、50nmol/L Aldo组、100nmol/L Aldo组:分别采用高糖DMEM加10,50,100nmol/L Al-do培养;SP组采用高糖(4500mg/L)DMEM加10-7mol/L SP培养。采用细胞免疫化学、RT-PCR和Western免疫印迹方法检测各组细胞E-cadherin和α-SMA mRNA的表达情况。结果:RT-PCR结果表明,与LG组比较,HG组E-cadherinmRNA表达明显降低(P<0.01),α-SMAmRNA表达明显升高(P<0.05);50nmol/L Aldo组、100nmol/L Aldo组E-cadherinmRNA表达明显低于高糖组,而α-SMAmRNA表达明显高于高糖组(P<0.05),两者与Aldo呈浓度依赖关系(r=-0.70,P<0.05;r=0.67,P<0.05);SP组E-cadherinmRNA明显高于HG组,而α-SMAmRNA表达低于HG组(P<0.01)。细胞免疫化学和West-ern免疫印迹检测表明,与低糖组比较,HG组E-cadherin蛋白表达明显减低,而α-SMA表达明显升高(P<0.01);10nmol/L Aldo组、50nmol/L Aldo组、100nmol/L Aldo组E-cadherin蛋白表达明显低于HG组,而α-SMA蛋白表达明显高于HG组(P<0.05),与Aldo呈浓度依赖关系(r=-0.83,P<0.05;r=0.81,P<0.05);而SP组E-cadherin蛋白表达明显高于高糖组,α-SMA蛋白则明显低于HG组(P<0.05)。结论:Aldo能促进高糖环境下肾小管上皮细胞EMT的发生,致DN肾间质纤维化,而使用SP可抑制高糖诱导肾小管上皮细胞的EMT,这可能是其阻遏肾间质纤维化的重要机制。 展开更多

关键词 高糖 醛固酮 安体舒通 肾小管上皮细胞转分化

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温莪术通过ILK信号通路干预TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化 被引量：4

6

作者 吴睿轩 胡振奋 +3 位作者 程锦国 王文文 吴芊葭 胡冬和 《中华中医药学刊》 CAS 2013年第8期1708-1711,I0009,共5页

目的:探讨温莪术对转化生长因子(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用及机制。方法:通过体外培养肾小管上皮细胞(NRK-52E)及体外药物血清技术,运用MTT法检测不同浓度温莪术含药血清对细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态学改变... 目的:探讨温莪术对转化生长因子(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用及机制。方法:通过体外培养肾小管上皮细胞(NRK-52E)及体外药物血清技术,运用MTT法检测不同浓度温莪术含药血清对细胞增殖的影响,倒置显微镜观察细胞形态学改变,细胞免疫荧光法检测各组肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达的变化,实时荧光定量PCR法检测细胞整合素连接激酶(ILK)mRNA表达的变化,ELISA法检测细胞上清液中胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)的分泌水平。结果:TGF-β1可诱导NRK-52E向成纤维细胞转化,出现肥大、拉长,显现梭形,胞浆内α-SMA表达明显增多(P<0.05),ILKmRNA的表达、Col-Ⅰ的分泌水平升高(P<0.05)。温莪术呈浓度依赖性抑制转分化发生,减少形态变化,下调α-SMA、ILK、Col-Ⅰ表达(P<0.05)。结论:TGF-β1可诱导转分化发生,伴有α-SMA、ILK、Col-Ⅰ等表达升高,而温莪术可抑制TGF-β1诱导的转分化,减少α-SMA、ILK、Col-Ⅰ的表达水平,并且有浓度依赖性。 展开更多

关键词 温莪术 转化生长因子-β1 肾小管上皮细胞转分化 Α-平滑肌肌动蛋白 整合素连接激酶 胶原Ⅰ

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Smurf2在梗阻性肾病小鼠肾小管上皮细胞转分化形成中的作用 被引量：3

7

作者 谭若芸 王晓华 +3 位作者 苏卫芳 杨俊伟 张炜 顾民 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1566-1572,共7页

目的:探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在小鼠单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化进展中的作用机制。方法:采用结扎雄性CD-1小鼠单侧输尿管(UUO)的方法建立肾间质纤维化动物模型,设假手术为对照组(Sham组)。术后3、7、14 d处死小鼠。用常... 目的:探讨Smad泛素化调节因子2(Smurf2)在小鼠单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化进展中的作用机制。方法:采用结扎雄性CD-1小鼠单侧输尿管(UUO)的方法建立肾间质纤维化动物模型,设假手术为对照组(Sham组)。术后3、7、14 d处死小鼠。用常规病理染色法观察两组小鼠肾组织形态和肾间质纤维化程度;以免疫蛋白印迹及免疫组织化学染色法检测两组小鼠肾组织中Smurf2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接素(FN)的表达和分布。结果:与Sham组相比,UUO术后7 d小鼠出现部分肾小管扩张、萎缩和肾间质纤维化。同时,UUO术后肾组织中Smurf2、α-SMA和FN表达呈时间依赖性升高,E-cadherin表达则明显下降。并且,Smurf2蛋白主要分布于肾小管上皮细胞核内;α-SMA分布于肾小管上皮细胞和肾间质中;FN则分布于肾间质中。相关回归分析表明:UUO术后小鼠肾组织内Smurf2表达与α-SMA(r=0.765,P<0.001)和FN蛋白水平呈正相关(r=0.773,P<0.001);与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.656,P<0.001)。结论:梗阻性肾病小鼠肾组织中Smurf2可能通过诱导肾小管EMT形成促进肾间质纤维化的进展。 展开更多

关键词 SMURF2 梗阻性肾病 肾间质纤维化 肾小管上皮细胞转分化

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血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响 被引量：2

8

作者 袁波 贺红焰 +1 位作者 王明勇 刘建 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期962-964,968,共4页

目的:探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)表型转化及细胞外基质分泌的影响。方法:体外培养NRK52E细胞,经Ang-(1-7)和AngⅡ(终浓度均为1×10-6mol/L)干预24、48、72、96 h后,应... 目的:探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)表型转化及细胞外基质分泌的影响。方法:体外培养NRK52E细胞,经Ang-(1-7)和AngⅡ(终浓度均为1×10-6mol/L)干预24、48、72、96 h后,应用细胞免疫化学法检测E-cadherin,α-SMA的表达;应用ELISA法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(ColⅠ)和纤维黏连蛋白(FN)的表达;采用实时荧光定量PCR(Real-tim e PCR)检测细胞中E-cadherin、α-SMA、ColⅠ和FN mRNA表达水平的变化。结果:AngⅡ作用96 h后,E-cadherin蛋白及mRNA表达显著减弱(P<0.05),α-SMA、ColⅠ、FN蛋白及mRNA表达显著增强(P<0.05);同时加入Ang-(1-7)后,与AngⅡ组比较,E-cadherin蛋白及mRNA的表达增强(P<0.05),α-SMA、ColⅠ、FN蛋白及mRNA表达减弱(P<0.05)。结论:Ang-(1-7)能够抑制AngⅡ诱导的大鼠肾小管上皮细胞表型转化及细胞外基质的分泌。 展开更多

关键词 血管紧张素-(1-7) 血管紧张素Ⅱ 肾小管上皮细胞转分化

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EGCG对梗阻性肾病大鼠肾小管上皮细胞转分化的干预作用及机制 被引量：2

9

作者 赵成广 张慧 吴玉斌 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期516-519,共4页

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠肾间质纤维化和肾小管上皮细胞转分化的作用及其机制。方法雄性Wistar大鼠56只随机分为正常对照组(n=8)、单侧输尿管梗阻(UUO)模型组(n=24,以单侧输尿管结扎制作肾间质纤维化模型)和EGCG... 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠肾间质纤维化和肾小管上皮细胞转分化的作用及其机制。方法雄性Wistar大鼠56只随机分为正常对照组(n=8)、单侧输尿管梗阻(UUO)模型组(n=24,以单侧输尿管结扎制作肾间质纤维化模型)和EGCG治疗组(n=24,单侧输尿管结扎术后每日给予腹腔注射EGCG 5 mg/kg)。于3,7,14 d分别处死UUO模型组和EGCG治疗组中各8只大鼠,进行HE染色和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞角蛋白18(CK-18)、转化生长因子β(1TGF-β1),Western blot法测定肾组织胞核内核转录因子κB(NF-κB)蛋白表达。结果 UUO组出现肾小管损伤和肾间质纤维化,肾组织中CK-18表达减少,α-SMA和TGF-β1表达增多,肾组织胞核内NF-κB表达增多,而EGCG治疗组较UUO模型组上述改变减轻。结论 EGCG能维持肾小管上皮细胞表型,减轻UUO大鼠模型中肾小管上皮细胞转分化和肾间质纤维化。在体内,EGCG能通过减少TGF-β1的表达和减少NF-κB的活化而减轻肾小管上皮细胞转分化和肾间质纤维化。 展开更多

关键词 肾间质纤维化 上皮细胞转分化 表没食子儿茶素没食子酸酯 转化生长因子 核转录因子

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中药复方糖耐康对KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响 被引量：2

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作者 吴丽丽 刘铜华 +6 位作者 孙文 周静鑫 秦灵灵 李佳 郭璇 穆晓红 杨丽霞 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2014年第5期1035-1041,共7页

目的:探讨中药复方糖耐康对KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制。方法:12周龄雄性KKAy小鼠50只,按血糖随机分为模型组、缬沙坦组、糖耐康高、中、低剂量组,每组10只,另设10只C57BL/6J小鼠为正常组,正常组和模型组给予0.9%... 目的:探讨中药复方糖耐康对KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制。方法:12周龄雄性KKAy小鼠50只,按血糖随机分为模型组、缬沙坦组、糖耐康高、中、低剂量组,每组10只,另设10只C57BL/6J小鼠为正常组,正常组和模型组给予0.9%氯化钠溶液,其余组给予对应浓度的药液灌胃,用药8周后处死,取肾脏组织,进行Mosson、PAS染色,免疫组化染色观察平滑肌肌动蛋白(α-SMA),E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达分布;Western Blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。结果:与正常组相比较,模型组小鼠肾纤维化面积显著增大(P<0.01),α-SMA蛋白表达呈现较强阳性,E-cadherin蛋白表达弱阳性。与模型组比较,缬沙坦组、糖耐康各剂量组肾纤维化面积显著减小(P<0.01),α-SMA蛋白表达显著减少(P<0.01),而E-cadherin蛋白表达明显增加(P<0.05)。KKAy小鼠肾脏组织TGF-β1蛋白表达较正常小鼠显著升高(P<0.01);与模型组比较,缬沙坦组、糖耐康低、中和高剂量组TGF-β1蛋白表达含量都显著降低(P<0.01),其中糖耐康高剂量组与缬沙坦组相比较TGF-β1显著降低。结论:中药复方糖耐康可抑制肾小管上皮细胞EMT的发生,减轻肾小管间质纤维化而发挥肾脏保护作用。 展开更多

关键词 糖耐康 KKAY小鼠 肾小管上皮细胞转分化 肾脏保护

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水蛭提取液诱导视网膜色素上皮细胞转分化的初步研究 被引量：1

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作者 郑燕林 殷莉 +1 位作者 王宜燕 左渝霞 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期926-927,共2页

关键词 上皮细胞转分化 视网膜色素上皮 水蛭提取液 细胞分子生物学 诱导分化剂 细胞分化 药物诱导

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miR-155对肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制研究 被引量：1

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作者 宁雅娴 王俭勤 王晓元 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1575-1580,共6页

目的·研究miR-155在慢性肾脏疾病(CKD)患者血清中的表达情况,探讨miR-155是否通过下调Kriippel样因子4(KLF4)影响肾小管上皮细胞转分化(EMT)。方法·收集126例CKDⅠ期患者、163例CKDⅢ期患者以及130例正常体检人员的血清,通过... 目的·研究miR-155在慢性肾脏疾病(CKD)患者血清中的表达情况,探讨miR-155是否通过下调Kriippel样因子4(KLF4)影响肾小管上皮细胞转分化(EMT)。方法·收集126例CKDⅠ期患者、163例CKDⅢ期患者以及130例正常体检人员的血清,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组患者血清中miR-155的表达情况。在细胞实验中,用10μg/L TGF-β诱导肾小管上皮细胞EMT,通过转染miR-155 mimic和miR-NC至离体培养的肾小管上皮细胞中,光学显微镜下观察细胞形态变化。Transwell试验检测细胞的迁移侵袭能力,免疫印迹试验(Westernblotting)检测细胞中平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)、胶原蛋白Ⅳ(collagenⅣ)、钙黏着蛋白-E(E-cadherin)的表达情况。生物信息学预测miR-155潜在靶基因为KLF4,利用荧光素酶试验验证KLF4是miR-155的靶基因;再通过转染过表达KLF4的质粒至肾小管上皮细胞,检测细胞中SMα-actin、collagenⅠ、collagenⅣ、E-cadherin、KLF4的表达情况。结果·相比于正常人群组和CKDⅠ期患者,miR-155在CKDⅢ期患者血清中的表达降低。在细胞实验中,相比于空质粒组,转染miR-155 mimic后,肾小管上皮细胞中SMα-actin、collagenⅠ、collagenⅣ、KLF4的表达减少,E-cadherin表达增加;荧光素酶试验结果显示,miR-155能够显著降低含KLF4-3'-UTR序列质粒的荧光素酶活性;转染过表达KLF4质粒后,肾小管上皮细胞中SMα-actin、collagenⅠ、collagenⅣ表达增加,E-cadherin表达减少。结论·在CKD患者血清中,miR-155低表达;miR-155可以通过下调KLF4从而抑制肾小管上皮细胞EMT。 展开更多

关键词 慢性肾功能不全 MIR-155 Krüppel样因子4 肾小管上皮细胞转分化

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迷迭香酸对醛固酮诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及机制研究 被引量：1

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作者 蔡闫闫 黄松明 +6 位作者 丁巍 张爱华 冯泉城 费莉 郭梅 潘晓勤 陈荣华 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期356-361,共6页

目的:探讨迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)对醛固酮(aldosterone,ALD)诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2),分为5组:正常对照组、ALD(100nmol/L)诱导组、ALD(100nmol/L)+RA(5μg/ml... 目的:探讨迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)对醛固酮(aldosterone,ALD)诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2),分为5组:正常对照组、ALD(100nmol/L)诱导组、ALD(100nmol/L)+RA(5μg/ml)干预组、ALD(100nmol/L)+RA(25μg/ml)干预组、ALD(100nmol/L)+线粒体呼吸链酶抑制剂rotenone(ROT,10μmol/L)干预组。应用倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;应用RT-PCR、Western blot检测波形蛋白(Vimentin)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及钙粘蛋白(E-cadherin)的表达水平;采用Western blot检测细胞胞外信号调节激酶(ERK1/2)的磷酸化水平;DCFDA荧光法定量检测活性氧(ROS)表达情况。结果:①与对照组相比,醛固酮诱导肾小管上皮细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态;Vimentin和α-SMA表达显著上调,E-cadherin表达下降;ERK1/2磷酸化水平增高;活性氧族(ROS)释放显著增高。②不同浓度的RA(5μg/ml,25μg/ml)及ROT(10μmol/L)干预组与ALD(100nmol/L)诱导组相比,Vimentin mRNA和α-SMA蛋白表达下调,E-cadherin mRNA及蛋白表达均上调;ERK1/2磷酸化水平下降;活性氧族(ROS)表达显著下降。结论:RA能够抑制醛固酮诱导的肾小管上皮细胞-间充质转分化(EMT),RA对EMT的负性调节作用可能是通过抑制ROS引起的ERK1/2信号转导途径实现的。 展开更多

关键词 迷迭香酸 人肾小管上皮细胞 上皮细胞转分化 醛固酮 活性氧

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镰形棘豆总黄酮对糖尿病KKay小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响 被引量：1

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作者 高博 魏瑞贤 +3 位作者 杨丽霞 刘铜华 薛建军 陈世海 《辽宁中医杂志》 CAS 2022年第3期206-210,227-228,共7页

目的观察镰形棘豆总黄酮对糖尿病KKay小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响。方法选择糖尿病KKay小鼠模型,分别以低、中、高剂量(0.1、0.2、0.4 g/kg)的镰形棘豆总黄酮每日灌胃1次,连续4周。每天给药前观察动物一般状况;造模的第0、2、4周分... 目的观察镰形棘豆总黄酮对糖尿病KKay小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响。方法选择糖尿病KKay小鼠模型,分别以低、中、高剂量(0.1、0.2、0.4 g/kg)的镰形棘豆总黄酮每日灌胃1次,连续4周。每天给药前观察动物一般状况;造模的第0、2、4周分别检测记录一般状况、体质量和空腹血糖;第5周时,取肾脏组织进行HE染色,采集的血清中肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(urea nitrogen,BUN)、尿酸(uric acid,UA)含量变化用于评价肾功能以及检测肾间质中的基因、蛋白表达。结果与模型组比较,镰形棘豆总黄酮可以剂量相关性地减轻糖尿病KKay小鼠的体质量、血糖显著下降(P<0.05);24 h尿微量白蛋白(UAlb)显著下降,血清中Cr、BUN以及UA均显著降低(P<0.05);肾脏组织形态学观察肾组织中肾小球数量明显增多,肾小球细胞数目以及肾小球系膜区细胞外基质(extracelluar matrix,ECM)明显减少;抗体E-钙黏连蛋白(E-cadherin)的表达水平有所提高,而α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达显著下降(P<0.05);肾间质中的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、血清纤维连接蛋白(FN)表达下降(P<0.05)。结论镰形棘豆总黄酮能够提升体质量,降低血糖,显著降低Cr、BUN以及UA,抑制肾组织中肾小球凋亡,降低肾小球细胞数目以及ECM,一定程度上提高E-cadherin的表达水平,抑制α-SMA的表达,提示镰形棘豆总黄酮具有抑制肾小管上皮细胞转分化的作用。 展开更多

关键词 镰形棘豆总黄酮 KKAY小鼠 肾小管上皮细胞转分化

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TGF-β1/ILK/FSP1信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用 被引量：4

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作者 白志勋 陆静 杨亦彬 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期804-809,共6页

目的通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1(TGF-β1/ILK/FSP1)信号通路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA。将NRK52E细胞培养分为5组... 目的通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1(TGF-β1/ILK/FSP1)信号通路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA。将NRK52E细胞培养分为5组,分别为空白对照组;环孢素诱导组:细胞培养液加环孢素A 1 mg/L;TGF-β1干预组:阻断剂(SB431542)10μmol/L加环孢素A 1 mg/L;ILK干预组:阳性转染ILKshRNA后加入环孢素A 1 mg/L;阴性对照组:阴性转染ILKshRNA后加入环孢素A 1 mg/L。实时荧光定量PCR检测TGF-β1、ILK和FSP-1 mRNA的表达,Western blot检测TGF-β1、ILK、FSP-1的蛋白表达。免疫组化检测细胞爬片α-SMA阳性表达细胞数。结果与空白对照组比较,环孢素诱导组细胞TGF-β1、ILK、FSP-1基因及蛋白表达量均显著增加(P<0.05);TGF-β1干预组经SB431542处理后,TGF-β1、ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低(P<0.05);经ILKshRNA沉默后,ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低(P<0.05)。α-SMA阳性细胞数经SB431542和ILKshRNA处理后较环孢素诱导组降低(P<0.05)。结论 TGF-β1/ILK/FSP1信号通路激活是环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的重要机制之一,ILK参与环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化过程。 展开更多

关键词 环孢素肾病 上皮细胞转分化 转化生长因子-Β1 整合素连接激酶 成纤维细胞特异蛋白1

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白细胞介素-10对肾小管上皮细胞转分化的影响

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作者 常颖 甘华 +2 位作者 吕智美 杜晓刚 王喜超 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第18期1756-1758,共3页

目的研究白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的影响。方法将培养的HK-2细胞通过完全随机设计分为5组:①对照组:5.5 mmol/L的D-葡萄糖组... 目的研究白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的影响。方法将培养的HK-2细胞通过完全随机设计分为5组:①对照组:5.5 mmol/L的D-葡萄糖组;②高糖组:30 mmol/L的D-葡萄糖组;③30 mmol/L的D-葡萄糖+1 ng/ml IL-10组;④30mmol/L的D-葡萄糖+5 ng/ml IL-10组;⑤30 mmol/L的D-葡萄糖+25 ng/ml IL-10组。培养48 h后,RT-PCR法检测各组细胞CTGF mRNA的表达;免疫细胞化学法和Western blot法检测各组细胞α-SMA的表达;ELISA法检测各组细胞FN的分泌。结果在高糖中加入1、5、25 ng/ml的IL-10作用后,与高糖组相比HK-2细胞CTGF、α-SMA和FN表达减少,且均有统计学差异(P<0.05)。结论IL-10可以抑制高糖环境下的肾小管EMT。 展开更多

关键词 白细胞介素-10 肾小管 上皮细胞转分化 结缔组织生长因子

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Wnt阻滞剂Dickkopf-1对肾小管上皮细胞转分化的抑制作用 被引量：4

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作者 周宝尚 张璟 陶光利 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期288-292,共5页

目的研究Wnt阻滞剂Dickkopf-1(Dkk-1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),收集后分3组:对照组细胞以含10%胎牛血清的培养基常规培养,TGF-β1组在常规培养基中... 目的研究Wnt阻滞剂Dickkopf-1(Dkk-1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HKC),收集后分3组:对照组细胞以含10%胎牛血清的培养基常规培养,TGF-β1组在常规培养基中加入TGF-β1(终浓度20ng/ml),TGF-β1+Dkk-1组同时加入TGF-β1(终浓度20ng/ml)和Dkk-1(终浓度100ng/ml)。培养48h后在倒置相差显微镜下进行形态观察,分别采用RT-PCR和Western blotting检测Wnt4、β-catenin、E-cadherin、α-SMA mRNA及蛋白表达情况,细胞免疫荧光染色观察E-cadherin和α-SMA的表达。结果与对照组比较,TGF-β1组和TGF-β1+Dkk-1组Wnt4 mRNA和蛋白表达水平均显著增高(P<0.05),后两组间差异无统计学意义(P>0.05)。β-catenin mRNA表达在各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。β-catenin蛋白在对照组呈低表达,TGF-β1组表达明显上调,TGF-β1+Dkk-1组较TGF-β1组表达下调(P<0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。E-cadherin mRNA和蛋白在对照组呈高表达,TGF-β1组表达明显降低,TGF-β1+Dkk-1组较TGF-β1组表达显著增高(P<0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。α-SMA mRNA和蛋白表达在对照组和TGF-β1+Dkk-1组的表达均较TGF-β1组明显降低(P<0.05)。细胞免疫荧光染色显示E-cadherin和α-SMA表达与RT-PCR和Western blotting检测结果一致。结论 Wnt阻滞剂Dickkopf-1能抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化。 展开更多

关键词 WNT信号通路 dickkopf-1蛋白 上皮细胞-间充质转分化

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TGF-β1/Smad信号通路在大黄素干预人肾小管上皮细胞转分化中的作用 被引量：6

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作者 金国华 秦晓华 +2 位作者 秦艳东 房向东 涂卫平 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第1期36-38,共3页

目的:探讨大黄素干预白蛋白诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)发生转分化过程中是否涉及对TGF-β1/Smad信号通路的调控。方法:用5mg/mL人白蛋白刺激体外培养的HK-2细胞,观察细胞形态变化,RT-PCR法检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β1、Smad2 mRN... 目的:探讨大黄素干预白蛋白诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)发生转分化过程中是否涉及对TGF-β1/Smad信号通路的调控。方法:用5mg/mL人白蛋白刺激体外培养的HK-2细胞,观察细胞形态变化,RT-PCR法检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β1、Smad2 mRNA的表达水平。结果:白蛋白呈时间依赖性诱导α-SMA、TGF-β1、Smad2 mRNA的表达上调,E-cadherin mRNA的表达下调。使用一定浓度的大黄素干预后,明显抑制了白蛋白诱导的上述效应。相关性分析显示:TGF-β1、Smad2 mRNA的表达与α-SMAmRNA的表达呈正相关,与E-cadherin mRNA的表达呈负相关。结论:大黄素抑制人白蛋白诱导的HK-2细胞转分化过程中,TGF-β1/Smad信号通路发挥了重要作用。 展开更多

关键词 大黄素 白蛋白 肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化 转化生长因子Β1

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CTGF反义寡核苷酸对人肾小管上皮细胞转分化的影响 被引量：1

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作者 廖晓莉 陈超 +3 位作者 陈涛 严玉霞 林春兰 蒋建伟 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期535-539,共5页

目的研究结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响。方法用巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)和马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)联合诱导HKC转分化模型。实验设空白对照组、模型对照组、PEI组、CTGFASODN10ng/mL组和CT... 目的研究结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响。方法用巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)和马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)联合诱导HKC转分化模型。实验设空白对照组、模型对照组、PEI组、CTGFASODN10ng/mL组和CTGF ASODN100ng/mL组,分别采用WST-8法、流式细胞术、RT-PCR法、细胞免疫组织化学法检测不同浓度的CTGF ASODN对HKC转分化模型细胞增殖和细胞周期的影响,以及α-SMA mRNA表达和α-SMA、TGF-β1、Fibronectin(FN)蛋白表达的变化。结果 100ng/mL的CTGF ASODN对MCP-1和AAⅠ联合诱导HKC转分化细胞具有促进细胞增殖的作用,并可减少实验模型导致的细胞S期阻滞,降低α-SMA mRNA表达,减少α-SMA、TGF-β1和FN蛋白的表达。结论 CTGFASODN能够抑制MCP-1和AAⅠ导致的人HKC转分化。 展开更多

关键词 结缔组织生长因子 反义寡核苷酸 上皮-间质细胞转分化 肾小管上皮细胞

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MicroRNA在丹酚酸B逆转肾小管上皮细胞转分化时的表达变化 被引量：1

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作者 潘荣华 芮国华 柏小辉 《辽宁中医杂志》 CAS 2012年第11期2284-2286,共3页

目的:研究丹酚酸B逆转转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化时microRNA(miRNA)表达谱的变化。方法:将体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞分为3组:①对照组:未加入丹酚酸B或者TGF-β1;②TGF-β1组:在细... 目的:研究丹酚酸B逆转转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化时microRNA(miRNA)表达谱的变化。方法:将体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞分为3组:①对照组:未加入丹酚酸B或者TGF-β1;②TGF-β1组:在细胞培养基中加入TGF-β1(浓度为5ng/mL);③丹酚酸B逆转组:在细胞培养基中先TGF-β1(浓度为5ng/mL),48h后HK-2细胞成功诱导EMT后形成的间充质细胞,再更换为TGF-β1(浓度为5ng/mL)和丹酚酸B(50μmol/L)继续培养72h,采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;免疫细胞化学染色检测细胞E-cadherin的表达情况;基因芯片检测各组细胞miRNA的表达变化。结果:①丹酚酸B具有逆转HK-2细胞EMT的作用;②与正常HK-2细胞比较,TGF-β1组有25种miRNA的表达出现显著改变,其中15种表达下调2倍以上,10种表达上调2倍以上。③与TGF-β1组比较,丹酚酸B逆转组,有44种miRNA的表达出现显著改变,其中24种表达下调2倍以上,20种表达上调2倍以上。④有10种miRNA表达在两组同时出现显著改变,其中8种在TGF-β1组明显下调,而在丹酚酸B逆转组明显上调,1种在TGF-β1组明显上调,而在丹酚酸B逆转组则明显下调。结论:丹酚酸B具有阻止慢性肾脏疾病进行性发展的潜能,而这一作用与其能有效调控miRNA的表达有关。 展开更多

关键词 丹酚酸B MICRORNA 上皮细胞-间充质细胞转分化

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