去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株凋亡的影响 被引量：3

1

作者 张鸿侃 谭少健 +2 位作者 梁皓 李霞 陈迎迎 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2009年第9期667-670,共4页

目的探讨去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04的细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的人晶状体上皮细胞株SRA01/04用于实验。分别用含有不同浓度(80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1)kistrin的完全培养基孵育8h、16h、32h,然后... 目的探讨去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04的细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的人晶状体上皮细胞株SRA01/04用于实验。分别用含有不同浓度(80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1)kistrin的完全培养基孵育8h、16h、32h,然后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并与阴性对照组(kistrin浓度为0μg.L-1)比较。用含kistrin的终浓度为160μg.L-1的培养基孵育细胞,于24h、32h后进行吖啶橙染色,倒置相差荧光显微镜观察细胞凋亡形态学变化,并与对照组(kistrin浓度为0μg.L-1)比较。结果kistrin作用8h时,阴性对照组与80μg.L-1、160μg.L-1、320μg.L-1kistrin孵育细胞组细胞凋亡率分别为(1.29±0.43)%、(5.48±0.66)%、(11.23±1.16)%、(20.77±1.46)%,kistrin作用16h时不同组别细胞凋亡率分别为(3.04±0.12)%、(7.68±0.23)%、(19.76±2.22)%、(32.36±3.29)%,kistrin作用32h时不同组别细胞凋亡率分别为(4.75±0.08)%、(72.15±7.04)%、(54.09±3.77)%、(43.27±3.32)%;在每个时间点各浓度的细胞凋亡率与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.01)。与对照组相比,浓度为160μg.L-1的kistrin作用24h后,细胞形态可见改变,kistrin作用32h后细胞出现明显的各种凋亡形态学改变。结论去整合素kistrin对人晶状体上皮细胞株SRA01/04有诱导凋亡的作用,为药物防治后发性白内障提供了新思路。 展开更多

关键词 去整合素 人晶状体上皮细胞株 凋亡 流式细胞仪 吖啶橙染色

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瑞巴匹特抑制脂多糖诱导肺上皮细胞株A549表达TLR4和释放TNF-α 被引量：1

2

作者 文秀芳 陈霞 周向东 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期457-460,共4页

目的:研究瑞巴匹特对肺上皮细胞株A549细胞TLR4表达及分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。方法:用脂多糖(LPS)建立体外A549细胞体外炎症损伤模型,实验分为对照组(无干预无刺激)、模型组(LPS刺激)、干预组1(LPS和10mg/L瑞巴匹特)、干预组2(... 目的:研究瑞巴匹特对肺上皮细胞株A549细胞TLR4表达及分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响。方法:用脂多糖(LPS)建立体外A549细胞体外炎症损伤模型,实验分为对照组(无干预无刺激)、模型组(LPS刺激)、干预组1(LPS和10mg/L瑞巴匹特)、干预组2(LPS和30mg/L瑞巴匹特)、用ELISA观察A549细胞分泌TNF-α和RT-PCR及蛋白免疫印迹观察A549细胞TLR4的表达。结果:LPS诱导A549细胞分泌TNF-α(与对照组比较,P<0.01),在第6h达高峰;LPS诱导A549细胞表达TLR4(与对照组比较,P<0.01);瑞巴匹特可抑制LPS诱导A549细胞分泌TNF-α和表达TLR4(与模型组比较,P<0.05),但2组干预组间无统计学差异(P>0.05)。结论:瑞巴匹特的抗炎机制可能是通过抑制TLR4的表达,从而减少炎性细胞因子的释放;瑞巴匹特有可能作为一种有价值的抗感染治疗的辅助药物。 展开更多

关键词 瑞巴匹特 TLR4 肿瘤坏死因子Α 脂多糖 肺上皮细胞株

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小鼠胸腺上皮细胞株MTEC_1细胞自发分泌CSF样生物活性因子 被引量：2

3

作者 张平夏 曹良弦 +1 位作者 陈慰峰 吴江声 《北京医科大学学报》 CSCD 1992年第1期11-14,83,共4页

用~3H-TdR参入法及半固体琼脂培养法,检测出本室自建小鼠胸腺基质细胞林中的M TEC_1能自发分泌集落刺激因子(CSF)样生物活性因子。用抗IL-6单抗不能封闭MTEC_1-SN的支持骨髓细胞增殖的作用。根据细胞形态学分析,MTEC_1-SN主要促进CFU-GM... 用~3H-TdR参入法及半固体琼脂培养法,检测出本室自建小鼠胸腺基质细胞林中的M TEC_1能自发分泌集落刺激因子(CSF)样生物活性因子。用抗IL-6单抗不能封闭MTEC_1-SN的支持骨髓细胞增殖的作用。根据细胞形态学分析,MTEC_1-SN主要促进CFU-GMM和CFU-GM形成。表明MTEC_1细胞除能自发分泌IL-1及IL-6外,尚能自发分泌CSF样活性因子,其主要成份可能为GM-CSF。 展开更多

关键词 胸腺 上皮细胞株 骨髓干细胞

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葡萄糖、胰岛素和尿酸对猪近端肾小管上皮细胞株血红素氧合酶-1的影响

4

作者 孙珲 李晓苗 +3 位作者 宋白利 刘新平 药立波 姬秋和 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期566-568,589,共4页

目的观察不同浓度葡萄糖、胰岛素和尿酸的培养条件下猪近端肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)血红素氧合酶(HO-1)活性的改变,以探讨代谢相关因素在细胞水平对肾小管上皮细胞的影响。方法以LLC-PK1为研究对象,观察葡萄糖浓度为5、10、22、33 mmo... 目的观察不同浓度葡萄糖、胰岛素和尿酸的培养条件下猪近端肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)血红素氧合酶(HO-1)活性的改变,以探讨代谢相关因素在细胞水平对肾小管上皮细胞的影响。方法以LLC-PK1为研究对象,观察葡萄糖浓度为5、10、22、33 mmol/L,胰岛素浓度为0、10-9、10-8、10-7mol/L,尿酸浓度为0、0.1、0.2、0.4 mmol/L培养48 h条件下,LLC-PK1细胞HO-1活性的改变。结果0.1 mmol/L0、.2 mmol/L和0.4 mmol/L尿酸刺激48 h后,LLC-PK1的HO-1活性增加,并呈剂量依赖关系,而上述浓度的葡萄糖和胰岛素刺激48 h对LLC-PK1的HO-1活性无影响。结论一定浓度的尿酸可使LLC-PK1的HO-1活性升高,提示尿酸在细胞水平对肾小管上皮细胞的氧化应激过程产生影响。 展开更多

关键词 尿酸 葡萄糖 胰岛素 血红素氧合酶 猪近端肾小管上皮细胞株

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3D培养体系中不同肠上皮细胞株形成肠类器官潜能的比较及应用 被引量：8

5

作者 欧静 徐珍妮 +4 位作者 刘登群 王涛 王锋超 王军平 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期31-38,共8页

目的比较不同肠上皮细胞株在3D培养条件下形成肠类器官的潜能及特点,为利用肠上皮细胞株培养肠类器官提供实验研究基础。方法使用IEC-6、CT26.WT、Caco-2三种肠上皮细胞株进行3D培养,分析不同细胞株形成肠类器官的潜能。流式分选获取Cac... 目的比较不同肠上皮细胞株在3D培养条件下形成肠类器官的潜能及特点,为利用肠上皮细胞株培养肠类器官提供实验研究基础。方法使用IEC-6、CT26.WT、Caco-2三种肠上皮细胞株进行3D培养,分析不同细胞株形成肠类器官的潜能。流式分选获取Caco-2单细胞后使用Matrigel进行培养并测定其生长速度。比较2D和3D培养条件下Caco-2细胞中肠道干细胞标志物Lgr5、Olfm4及增殖标志物Ki67的mRNA表达差异。免疫荧光染色分析2D和3D培养时Caco-2细胞内Ki67阳性细胞及lamp1阳性溶酶体的分布特点。比较5 Gy和15 Gy照射后Caco-2来源肠类器官中TUNEL阳性细胞分布特点。结果 3D培养时,Caco-2细胞可形成肠类器官,而IEC-6和CT26.WT细胞不能形成肠类器官,且单个Caco-2细胞也可形成肠类器官。Caco-2来源肠类器官中肠道干细胞标志物Lgr5、Olfm4和细胞增殖标志物Ki67的mRNA表达水平较2D培养时显著降低(P<0.05),Ki67阳性增殖细胞较2D培养显著减少。Caco-2来源肠类器官中细胞内溶酶体呈极性分布,与小肠组织切片中溶酶体在肠上皮细胞内的分布一致。电离辐射可引起Caco-2来源肠类器官内细胞发生凋亡,且凋亡细胞比例与照射剂量密切相关。结论 Caco-2在3D培养时可形成与在体肠道结构和功能类似的肠类器官,为下一步进行胃肠道电离辐射研究和药物评价研究提供了更加稳定可靠的体外研究模型。 展开更多

关键词 肠上皮细胞株 CACO-2细胞 肠类器官 干细胞 电离辐射

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不同热处理方式的α-乳白蛋白对正常人肠道上皮细胞株增殖、周期及凋亡的影响 被引量：2

6

作者 盛雪 张居典 +3 位作者 李梦寒 崔东影 席恩泽 许晓曦 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第1期139-146,共8页

以经过巴氏杀菌方式(63℃加热30 min、72℃加热15 s、85℃加热15 s、95℃加热10 min)处理的α-乳白蛋白(α-lactalbumin,α-LA)为对象,研究其对正常人肠道上皮细胞株(human intestinal epithelial cells,HIEC)增殖、周期及凋亡的影响,... 以经过巴氏杀菌方式(63℃加热30 min、72℃加热15 s、85℃加热15 s、95℃加热10 min)处理的α-乳白蛋白(α-lactalbumin,α-LA)为对象,研究其对正常人肠道上皮细胞株(human intestinal epithelial cells,HIEC)增殖、周期及凋亡的影响,并比较不同热处理对HIEC作用效果的差异性。在通过圆二色光谱测定α-LA二级结构、分析不同热处理方式对α-LA二级结构影响的基础上,模拟婴儿肠道条件对α-LA进行体外消化,采用CCK-8法和流式细胞术检测热处理消化后α-LA作用HIEC 48 h后,对细胞增殖、细胞周期以及细胞凋亡的影响。结果显示:经不同加热处理及未经热处理的消化后α-LA均对HIEC增殖具有促进作用,且在一定范围内促进效果随α-LA质量浓度升高而加强,在α-LA质量浓度为0.10 mg/mL、72℃加热15 s时促进效果最为显著(P<0.05);经不同加热处理及未经热处理的消化后α-LA在质量浓度为0.10 mg/mL、作用HIEC 48 h后,G0/G1期细胞比例显著降低(P<0.05),S期和G2/M期细胞比例显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。综上,热处理α-LA可以明显促进HIEC增殖,其作用机制可能与分裂细胞的比例增加从而抑制细胞凋亡有关。α-LA应用于婴儿配方产品中或可提高婴儿免疫能力,推荐添加量为0.10 mg/m L,推荐热处理方式为72℃加热15 s,但仍需进一步研究。 展开更多

关键词 Α-乳白蛋白 正常人肠道上皮细胞株 二级结构 肠道免疫

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Janus激酶抑制剂对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用 被引量：5

7

作者 张勉之 张敏英 +5 位作者 赵松 段建召 张艳秋 左春霞 程项阳 段惠军 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期364-369,共6页

目的评估Janus激酶抑制剂AG490对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),分别给予高糖和高糖+AG490干预,Western blot检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘素(E-C... 目的评估Janus激酶抑制剂AG490对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),分别给予高糖和高糖+AG490干预,Western blot检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘素(E-Cadherin)及信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化STAT1(p-STAT1)和p-STAT3的表达,酶联免疫吸附法测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌,逆转录聚合酶链反应检测TGF-β1 mRNA表达。结果与低糖对照组比较,高糖培养的HKC中α-SMA、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,E-Cadherin表达明显下调,TGF-β1 mRNA表达增加,细胞培养上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显下调p-STAT1和p-STAT3表达的同时,明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E-Cadherin表达下降程度,降低TGF-β1 mRNA表达及TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK参与了高糖诱导的HKC转分化,并刺激TGF-β1和细胞外基质分泌,JAK抑制剂AG490能有效拮抗其作用。 展开更多

关键词 人肾近曲小管上皮细胞株 细胞外基质 转化生长因子Β1

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糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路影响的实验研究 被引量：6

8

作者 王婷 赵宗江 +2 位作者 张新雪 苗永辉 杨冠男 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 2017年第6期1066-1071,共6页

目的:探讨糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及Rho A/ROCK信号通路的影响。方法:10%FBS的RPMI 1640培养细胞,培养细胞分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和糖肾宁组,按每孔3000个细胞接种于96孔板中。每组8个复孔,加入6%的... 目的:探讨糖肾宁含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及Rho A/ROCK信号通路的影响。方法:10%FBS的RPMI 1640培养细胞,培养细胞分为正常组、模型组、厄贝沙坦组和糖肾宁组,按每孔3000个细胞接种于96孔板中。每组8个复孔,加入6%的各组含药血清培养,分别于12、24、48、60 h观察细胞形态并应用MTT法检测细胞增殖情况;Western blotting检测Rho A、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达。结果:正常组细胞呈扁平不规则多角形,高糖刺激下,细胞呈梭型,加入含药血清后呈扁平不规则多角形。MTT:24、48 h,正常组与模型组比较,有极显著性差异(P<0.01),60 h,正常组与模型组比较,有显著性差异(P<0.05);24 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组比较,有显著性差异(P<0.05);48 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有极显著性差异(P<0.01);60 h,糖肾宁组与厄贝沙坦组、Y27632组比较,有显著性差异(P<0.05)。Western blotting:正常组与模型组、Y27632组比较Rho A蛋白表达减少,有极显著性差异(P<0.01);糖肾宁组与模型组比较,有极显著性差异(P<0.01);糖肾宁组与Y27632组比较,有显著性差异(P<0.05)。正常组与模型组比较ROCK1蛋白表达减少,有极显著性差异(P<0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。正常组与模型组比较α-SMA蛋白表达减少,有极显著性差异(P<0.01);Y27632组、各治疗组和模型组比较,有显著性差异(P<0.05)。正常组与模型组组比较E-Cadherin蛋白表达增加,有显著性差异(P<0.05);Y27632组与糖肾宁组比较,有显著性差异(P<0.05);模型组与Y27632组、各治疗组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论:糖肾宁可抑制高糖培养肾小管上皮细胞增殖和Rho A/ROCK信号通路相关分子的表达,逆转肾小管上皮细胞转分化、减轻肾间质纤维化、延缓DKD进程。 展开更多

关键词 糖肾宁 肾痿 肾小管上皮细胞株 KKAY小鼠 细胞增殖 MTT EMT RhoA/ROCK信号通路

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肿瘤坏死因子-α对肠黏膜上皮细胞谷氨酰胺载体功能及其表达的影响 被引量：6

9

作者 周济宏 李幼生 +3 位作者 洪志坚 胡心宝 解伟光 于泽平 《医学研究生学报》 CAS 2010年第8期795-799,共5页

目的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是感染中最重要的调节因子,谷氨酰胺需经过其载体转运至细胞内才能被利用。文中研究TNF-α对肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell line,IEC)-6细胞膜谷氨酰胺载体功能、ASCT2mRNA及蛋白表达的可能... 目的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是感染中最重要的调节因子,谷氨酰胺需经过其载体转运至细胞内才能被利用。文中研究TNF-α对肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell line,IEC)-6细胞膜谷氨酰胺载体功能、ASCT2mRNA及蛋白表达的可能影响,揭示TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的影响机制。方法体外培养IEC-6,分为对照组(不与TNF-α共孵育)和实验组(与TNF-α共孵育):实验组与不同剂量的TNF-α(2、5、8、10ng/ml)共孵育2h后,测定细胞[3H]-L-谷氨酰胺摄取率;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、5、8、10h)后,测定ASCT2载体mRNA水平;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、6h)后,检测载体ASCT2蛋白表达水平。结果不同TNF-α剂量孵育的实验组[3H]-L-谷氨酰胺摄取率显著低于对照组(P<0.01),实验组之间差异无显著性意义(P>0.05);孵育2h的实验组ASCT2载体mRNA水平显著高于对照组(P<0.01),时间延长后逐渐下降,10h则与对照组差异无显著性意义(P>0.05);不同时段实验组载体ASCT2蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.01),实验组间差异无显著性意义(P>0.05)。结论TNF-α抑制IEC-6细胞膜谷氨酰胺载体的摄取功能,抑制ASCT2蛋白表达,但不抑制IEC-6细胞ASCT2载体mRNA的表达。TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的抑制可能发生在载体蛋白的翻译或以后水平。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子-Α [3H]-L-谷氨酰胺 肠黏膜上皮细胞株 谷氨酰胺载体 ASCT2

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普罗布考对肾小管上皮细胞氧糖剥夺/复氧损伤的影响及其机制研究 被引量：3

10

作者 任广伟 龚淼 +3 位作者 李明明 牛哲莉 杨洪娟 孙利军 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2019年第18期2211-2216,2222,共7页

背景肾缺血-再灌注损伤的主要病理生理基础是肾小管上皮细胞发生脂质过氧化损伤,而肾小管上皮细胞损伤直接影响尿液的形成。普罗布考是具有很强抗氧化作用的降血脂药,其可以通过提高细胞内抗氧化酶活性降低脂质过氧化水平,具有较好的组... 背景肾缺血-再灌注损伤的主要病理生理基础是肾小管上皮细胞发生脂质过氧化损伤,而肾小管上皮细胞损伤直接影响尿液的形成。普罗布考是具有很强抗氧化作用的降血脂药,其可以通过提高细胞内抗氧化酶活性降低脂质过氧化水平,具有较好的组织或细胞保护作用。但目前尚未见关于普罗布考对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)引起的人肾小管上皮细胞株(HK-2)损伤影响的报道。目的探讨普罗布考对HK-2 OGD/R损伤的影响及其机制,为老药新用开辟新思路。方法 2017年12月-2018年9月,取HK-2,常规培养至完全贴壁后将其分为正常对照组、OGD/R组、OGD/R+25μmol/L普罗布考组、OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组。正常对照组不予处理,OGD/R组、OGD/R+25μmol/L普罗布考组、OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组进行OGD/R模型的建立,之后OGD/R组不予处理,OGD/R+25μmol/L普罗布考组、OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组分别加入25、50、100μmol/L普罗布考;分别于12、24、48 h时,计算各组细胞增殖活性,确定普罗布考最佳作用时间与浓度,用于后续实验。取HK-2,常规培养至完全贴壁后将其分为正常对照组(不予处理)、OGD/R组(建立OGD/R模型)、普罗布考组(给予最佳作用浓度的普罗布考)、OGD/R+普罗布考组(建立OGD/R模型后给予最佳作用浓度的普罗布考);于普罗布考最佳作用时间,观察各组细胞形态,检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性、谷胱甘肽(GSH)水平、GPX4水平。结果 OGD/R组、OGD/R+25μmol/L普罗布考组、OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组12、24、48 h时细胞增殖活性低于正常对照组(P<0.05);OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组24、48 h时细胞增殖活性高于OGD/R组、OGD/R+25μmol/L普罗布考组(P<0.05)。OGD/R+50μmol/L普罗布考组、OGD/R+100μmol/L普罗布考组24、48 h时细胞增殖活性高于本组12 h时(P<0.05)。由于用药原则为在相似的作用下,一般选择较低浓度及较短作用时间,因此采用50μmol/L普罗布考作用24 h进行后续实验。OGD/R组悬浮细胞增多,细胞皱缩体积减小,失去正常形态,折光性减弱;普罗布考组细胞形态结构正常,贴壁完整;OGD/R+普罗布考组悬浮细胞减少,细胞折光性较好。OGD/R组、OGD/R+普罗布考组LDH活性高于正常对照组(P<0.05);普罗布考组、OGD/R+普罗布考组LDH活性低于OGD/R组(P<0.05);OGD/R+普罗布考组LDH活性高于普罗布考组(P<0.05)。OGD/R组、OGD/R+普罗布考组MDA水平高于正常对照组(P<0.05);普罗布考组、OGD/R+普罗布考组MDA水平低于OGD/R组(P<0.05);OGD/R+普罗布考组MDA水平高于普罗布考组(P<0.05);OGD/R组GPX活性低于正常对照组(P<0.05);普罗布考组、OGD/R+普罗布考组GPX活性高于OGD/R组(P<0.05);OGD/R+普罗布考组GPX活性低于普罗布考组(P<0.05)。OGD/R组GSH水平低于正常对照组(P<0.05);普罗布考组、OGD/R+普罗布考组GSH水平高于OGD/R组(P<0.05)。OGD/R组GPX4水平低于正常对照组(P<0.05);普罗布考组、OGD/R+普罗布考组GPX4水平高于OGD/R组(P<0.05)。结论普罗布考对OGD/R引起的HK-2损伤具有保护作用,可能机制是通过激活GPX,尤其是提高GPX4水平,直接或间接抑制脂质过氧化物的过度产生。 展开更多

关键词 缺氧 再灌注损伤 普罗布考 氧糖剥夺/复氧 人肾小管上皮细胞株 药理作用分子作用机制

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糖肾平含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路影响的研究 被引量：3

11

作者 苗永辉 赵宗江 +3 位作者 杨冠男 王婷 黄雅薇 张紫嫣 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 2017年第6期1050-1056,共7页

目的:探讨糖肾平含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及Rho A/ROCK信号通路的影响。方法:制备鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:正常组,高糖组,抑制剂(Y27632)组,厄贝沙坦组,糖肾平低、中、高剂量组,3000细胞/孔种于96孔板,每组... 目的:探讨糖肾平含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及Rho A/ROCK信号通路的影响。方法:制备鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:正常组,高糖组,抑制剂(Y27632)组,厄贝沙坦组,糖肾平低、中、高剂量组,3000细胞/孔种于96孔板,每组8个复孔,12、24、48、60 h观察细胞,MTT法检测细胞增殖。Western blotting检测肾小管上皮细胞中Rho A、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达。结果:高糖诱导后细胞呈梭型或不规则三角形;含药血清干预后,细胞呈扁平不规则多角形。MTT:12 h,与正常组比,各组OD值升高;24、48、60 h,与正常组比,高糖组OD值显著升高(P<0.01);与高糖组比,各治疗组OD值有不同程度降低(P<0.05),48 h,与Y27632组、厄贝沙坦组和糖肾平高剂量组比,糖肾平低、中剂量组OD值降低(P<0.05);60 h,与Y27632组比,糖肾平中剂量组降低;与厄贝沙坦组比,糖肾平各剂量组OD值降低(P<0.05);与糖肾平高剂量组比,糖肾平低剂量组升高(P<0.05)。Western blotting,与正常组比,高糖组E-Cadherin蛋白表达减少,Rho A、ROCK1和α-SMA蛋白表达增加(P<0.01);与高糖组比,各组E-Cadherin蛋白表达增加,Rho A、ROCK1和α-SMA蛋白表达减少,高剂量组有显著差异(P<0.01);与Y27632组比,糖肾平高剂量组ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P>0.05),Rho A蛋白表达减少(P<0.01);与厄贝沙坦组比,糖肾平高剂量组Rho A、ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。结论:糖肾平通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和Rho A/ROCK信号通路相关分子的表达,从而逆转上皮-间质转分化,抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展。 展开更多

关键词 糖肾平 肾痿 肾小管上皮细胞株 KKAY小鼠 细胞增殖 MTT EMT RhoA/ROCK信号通路

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抑制Smad7的表达对肾小管上皮细胞的影响 被引量：1

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作者 朱吉莉 丁国华 +1 位作者 陈铖 尤燕舞 《实用医学杂志》 CAS 2005年第19期2119-2121,共3页

目的:本研究旨在观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小管上皮细胞Smad7表达变化,以及对其凋亡及增殖的影响。方法:大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E分别与终浓度为0(对照组)、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/LAngⅡ共培养24h。通过An... 目的:本研究旨在观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小管上皮细胞Smad7表达变化,以及对其凋亡及增殖的影响。方法:大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E分别与终浓度为0(对照组)、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/LAngⅡ共培养24h。通过AnnexinV-FITC/PIKit用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,用免疫组化的方法检测增殖性细胞核抗原(PCNA)和Smad7蛋白的表达,RT-PCR检测Smad7mRNA的表达水平。结果:随着AngⅡ浓度的增加,10-6mol/LAngⅡ组与对照组相比凋亡指数显著增加,分别为(27.06±1.14)%vs(3.09±0.73)%(P<0.001)。与对照组相比,Smad7的表达在含有AngⅡ组中均呈现出低表达水平,并在一定范围内随AngⅡ浓度的增加而逐渐受到抑制,并与细胞凋亡指数成负相关(r=-0.82,P<0.05)。结论:AngⅡ可以抑制肾小管上皮细胞Smad7的表达,同时促进细胞凋亡,二者具有密切关系。 展开更多

关键词 血管紧张素Ⅱ 细胞凋亡 肾小管 上皮细胞 SMAD7 肾小管上皮细胞株 SMAD7蛋白 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) 增殖性细胞核抗原 细胞凋亡指数

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周期性机械拉伸对人肺上皮细胞增殖及粘弹性的影响

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作者 李晓娜 曲华 +1 位作者 吴文周 陈维毅 《太原理工大学学报》 CAS 北大核心 2007年第3期268-270,共3页

采用FX-4000基底加载系统对体外培养人肺上皮细胞A549施加周期性拉伸应变,通过流式细胞仪和微管吸吮技术,研究了不同波形的周期性机械拉伸对A549细胞的增殖及粘弹性的影响。结果表明:分别采用正弦波和方波,对A549细胞施加15%拉伸应变、... 采用FX-4000基底加载系统对体外培养人肺上皮细胞A549施加周期性拉伸应变,通过流式细胞仪和微管吸吮技术,研究了不同波形的周期性机械拉伸对A549细胞的增殖及粘弹性的影响。结果表明:分别采用正弦波和方波,对A549细胞施加15%拉伸应变、频率30次/min周期性机械拉伸4 h,与对照组相比,正弦波拉伸对A549细胞增殖无显著影响,细胞的粘弹性参数k1和k2值有所减小,μ值无统计学差异。方波拉伸在显著抑制A549细胞增殖同时,细胞的粘弹性参数k1,k2和μ值均明显减小。从力学的角度证实了细胞骨架参与细胞生长的过程。 展开更多

关键词 周期性拉伸 波形 人肺上皮细胞株A549 增殖 粘弹性

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细胞角蛋白在食管永生化上皮细胞和恶性转化细胞系的表达 被引量：2

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作者 彭燕 陈海滨 +2 位作者 苏中静 张锦堃 沈忠英 《实用医学杂志》 CAS 2005年第14期1491-1493,共3页

目的:研究细胞角蛋白(cytokeratin,CK)在食管永生化上皮细胞株SHEE和由SHEE恶性转化而来的细胞株SHEEmt之间的差异表达。方法:采用免疫细胞化学染色和免疫印迹的方法,观察SHEE细胞和SHEEmt细胞中CK的表达。结果:免疫细胞化学染色显示两... 目的:研究细胞角蛋白(cytokeratin,CK)在食管永生化上皮细胞株SHEE和由SHEE恶性转化而来的细胞株SHEEmt之间的差异表达。方法:采用免疫细胞化学染色和免疫印迹的方法,观察SHEE细胞和SHEEmt细胞中CK的表达。结果:免疫细胞化学染色显示两种细胞均呈CK染色阳性,阳性反应位于胞浆;SHEE细胞染色弱阳性,SHEEmt细胞染色中等强度阳性。免疫印迹分析在两种细胞中抗角蛋白抗体均与分子量52.5ku、46ku和45ku的抗原同时发生反应;但SHEEmt细胞中的3条阳性反应带均强于SHEE细胞。结论:CK阳性表达支持两种细胞来源于非角化型或胎儿型鳞状上皮;随着永生化细胞转化为恶性细胞,某些角蛋白表达上调,可能与细胞恶性转化后的分化程度相关。 展开更多

关键词 细胞角蛋白 永生化 转化细胞系 食管 免疫细胞化学染色 抗角蛋白抗体 免疫印迹分析 细胞恶性转化 阳性反应 细胞染色 上皮细胞株 差异表达 中等强度 同时发生 鳞状上皮 细胞来源 阳性表达 恶性细胞 细胞转化 表达上调 分化程度

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抗血管生成作用的VEGFxxxb在缺氧视网膜色素上皮细胞中的表达 被引量：1

15

作者 范思均 何守志 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1014-1020,共7页

背景 缺氧可诱导视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌血管内皮生长因子A（VEGF-A）,从而促进脉络膜新生血管（CNV）形成.VEGF-A依选择性剪接方式的不同,可形成具有促血管生成作用的VEGFxxx和具有抗血管生成作用的VEGFxxxb,但后者在常氧和缺... 背景 缺氧可诱导视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌血管内皮生长因子A（VEGF-A）,从而促进脉络膜新生血管（CNV）形成.VEGF-A依选择性剪接方式的不同,可形成具有促血管生成作用的VEGFxxx和具有抗血管生成作用的VEGFxxxb,但后者在常氧和缺氧状态下在人RPE细胞中的表达变化及其作用尚不清楚.目的 从mRNA水平和蛋白水平检测模拟缺氧状态培养的RPE细胞中VEGFmb的表达,研究VEGFxxxb在常氧和缺氧培养的RPE细胞中的表达变化.方法 以人RPE细胞系ARPE-19为研究对象,将150 μmol/L化学诱导剂CoC12加入细胞培养液制备缺氧细胞模型,分别于0h（常氧培养）及缺氧培养3、6、12和24 h收获细胞或细胞上清液,采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测细胞内VEGFxxxmRNA和VEGFxxxb mRNA的表达;采用Western blot法检测细胞内总VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白的表达;采用ELISA法检测细胞上清中总VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白的含量.结果 在常氧及诱导缺氧后,ARPE-19细胞中均可检测到VEGFxxxmRNA和VEGFxxxb mRNA的表达,检测出的VEGFxxxmRNA中同时出现VEGF121、VEGF165和极微弱的VEGF189条带;检出的VEGFxxxb mRNA中可见VEGF165b条带.缺氧培养的细胞中随着缺氧时间的延长,VEGFxxxmRNA显示出表达逐渐增加的趋势,而VEGFxxxb mRNA则显示出表达逐渐减少的趋势.Western blot法可检测到细胞中VEGFxxxb蛋白的表达,尤以VEGF165b表达最强,随缺氧培养时间的延长,VEGF165b蛋白表达逐渐减少.培养的细胞上清中VEGFxxxb蛋白质量浓度由常氧培养时的（166.82±2.55） pg/ml下降至缺氧培养24 h的（125.35±2.10）pg/ml,而总VEGF-A蛋白则由（294.27±11.97） pg/ml上升至（582.26±12.98） pg/ml.细胞中VEGFxxxbb蛋白占总VEGF-A蛋白的比例随缺氧培养时间的延长,由常氧培养条件下的（56.71±1.02）％逐渐下降至缺氧培养24 h的（21.53±0.08）％.结论 ARPE-19细胞在常氧和缺氧培养条件下均可检测到VEGFxxxbb mRNA和蛋白的表达.缺氧培养后ARPE-19细胞中VEGFxxx mRNA的表达水平逐渐降低.常氧培养时细胞中总VEGF-A蛋白以VEGFxxxbb占主导,而缺氧后VEGFxxxbb占总VEGF-A比例下降. 展开更多

关键词 血管内皮生长因子A/基因 选择性剪接/生理功能 细胞株/视网膜色素上皮细胞 抗血管生成因子 蛋白亚型/代谢

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慢性阻塞性肺疾病患者C-反应蛋白的变化及LPS诱导下人肺泡型细胞(A549)C-反应蛋白的表达 被引量：7

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作者 吴尚洁 赵水平 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期207-210,共4页

目的:观察人肺上皮细胞在细菌脂多糖(LPS)诱导下CRP mRNA的表达及CRP分泌.方法:收集临床慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者同步晨痰和血浆,进行CRP ELISA检测;对培养的人肺泡上皮细胞株(A549细胞)给予不同浓度、不同时间LPS刺激,同时设立对照... 目的:观察人肺上皮细胞在细菌脂多糖(LPS)诱导下CRP mRNA的表达及CRP分泌.方法:收集临床慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者同步晨痰和血浆,进行CRP ELISA检测;对培养的人肺泡上皮细胞株(A549细胞)给予不同浓度、不同时间LPS刺激,同时设立对照组,细胞处理后提取RNA用于RT-PCR.同时,对培养上清液进行CRP ELISA检测.结果:COPD患者痰中CRP浓度明显高于同期外周血中CRP的浓度(P<0.05).培养的A549在不同浓度和不同时间的LPS诱导下有CRP mRNA表达及CRP的分泌,且呈时间依赖性,与对照组比较有统计学意义(P<0.05～0.01).结论:COPD患者呼吸道内可能存在CRP的自分泌;A549在LPS诱导下存在CRP mRNA的表达及分泌. 展开更多

关键词 LPS诱导 慢性阻塞性肺疾病患者 C-反应蛋白 慢性阻塞性肺疾病(COPD) ELISA检测 肺泡型 脂多糖(LPS) COPD患者 人肺上皮细胞 mRNA A549细胞 RT-PCR CRP 不同浓度 不同时间 上皮细胞株 培养上清液 时间依赖性 表达及 对照组

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甘遂根提取物对人上皮样肝癌BEL-7402的体外实验研究 被引量：12

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作者 陈亮 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1889-1892,共4页

通过体外培养人上皮样肝癌BEL-7402细胞,分别以加入PBS液为对照组,加入5-FU(10μg/mL)为阳性对照,加入甘遂根提取物(浓度分别为0.1、1.0、10.0、50.0、100.0μg/mL)为实验组,采用台盼蓝染色法、MTT比色法、克隆形成法以及流式细胞仪进... 通过体外培养人上皮样肝癌BEL-7402细胞,分别以加入PBS液为对照组,加入5-FU(10μg/mL)为阳性对照,加入甘遂根提取物(浓度分别为0.1、1.0、10.0、50.0、100.0μg/mL)为实验组,采用台盼蓝染色法、MTT比色法、克隆形成法以及流式细胞仪进行检测分析,以明确甘遂根提取物对BEL-7402细胞的抑制作用.结果显示,几种方法测定的结果一致,甘遂根提取物对BEL-7402细胞的生长抑制率随处理浓度的增高呈上升趋势,其中台盼蓝染色法测定的抑制率分别为71.9%、81.3%、84.4%、86.8%、100%;MTT比色法测定的抑制率分别为50.8%、52.4%、55.6%、57.1%、74.6%;克隆形成实验对克隆形成抑制率分别为44.9%、53.9%、58.1%、79.6%、86.8%.流式细胞仪测定的凋亡率分别为0、24.3%、26.5%、32.9%、100%.实验表明,甘遂根提取物对人上皮样肝癌BEL-7402细胞生长具有显著的抑制作用,而且抑制效果随提取物浓度的增加而递增. 展开更多

关键词 甘遂根提取物 人上皮样肝癌BEL-7402细胞株 MTT FCM

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中国被毛孢菌丝体提取物抗肾损伤作用体内外实验研究 被引量：7

18

作者 沈龙海 安泳潼 +3 位作者 杨庆尧 杨晓彤 沈旭 丁宏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1537-1540,共4页

目的探讨中国被毛孢菌丝体提取物(HSW)抗肾损伤的药理作用。方法采用体外培养的人肾小管上皮细胞株(HK2)模型,观察HSW对马兜铃酸(AA)造成的HK2细胞损伤的逆转作用,及对于肾衰竭相关功能指标的影响。并在庆大霉素致大鼠急性肾衰竭(ARF)... 目的探讨中国被毛孢菌丝体提取物(HSW)抗肾损伤的药理作用。方法采用体外培养的人肾小管上皮细胞株(HK2)模型,观察HSW对马兜铃酸(AA)造成的HK2细胞损伤的逆转作用,及对于肾衰竭相关功能指标的影响。并在庆大霉素致大鼠急性肾衰竭(ARF)模型上验证HSW的作用。结果 HSW可以逆转AA对HK2细胞所造成的损伤,有效地抑制AA引起的HK2细胞TGFβ1、PAI-1 mRNA表达的上调,并可保护庆大霉素造成的大鼠急性肾损伤。结论 HSW对肾损伤的体内外模型有较好的药理作用。 展开更多

关键词 中国被毛孢菌丝体提取物 体内外作用 肾小管上皮细胞株 细胞损伤 大鼠急性肾衰竭 TGFΒ1 PAI-1

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^(60)Coγ射线照射对人脆性组胺酸基因表达的影响 被引量：4

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作者 熊杰 韩玲 +1 位作者 高伟 朱丹 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期471-475,共5页

目的研究人脆性组胺酸三联体(fragilehistidinetriad,FHIT)基因在电离辐射损伤过程中的动态变化。方法以SV40病毒转染的永生化人支气管上皮细胞株BEAS2B细胞为照射对象,分为0.5、1、2、4、8、16Gy60Coγ射线照射剂量组和未照射对照组,... 目的研究人脆性组胺酸三联体(fragilehistidinetriad,FHIT)基因在电离辐射损伤过程中的动态变化。方法以SV40病毒转染的永生化人支气管上皮细胞株BEAS2B细胞为照射对象,分为0.5、1、2、4、8、16Gy60Coγ射线照射剂量组和未照射对照组,分别于照射后24h、72h和10d,采用单细胞RT PCR技术以及PCR产物直接测序法检测FHIT基因的表达情况。结果对照组各时间点均未检出异常FHIT转录本,不同剂量照射组照射后各时间点均不同程度检出异常缺失FHIT转录本,照射后24h各组突变百分比分别为52.6%、66.7%、57.9%、76.5%、64.7%和81.3%,照射后72h各组突变百分比分别为17.6%、22.2%、50.0%、47.4%、47.1%和68.4%,照射后10d各组突变百分比分别为21.1%、25.0%、60.0%、57.9%、61.1%和68.4%;突变体经测序证实为外显子缺失性突变。结论电离辐射可引起FHIT基因的缺失突变。 展开更多

关键词 ^60COΓ射线照射 基因表达 脆性组胺酸三联体 FHIT基因 电离辐射 上皮细胞株 直接测序法 PCR产物 PCR技术 动态变化 损伤过程 病毒转染 SV40 照射剂量 表达情况 不同程度 不同剂量 缺失突变 对照组 24h 72h 转录本 B细胞

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应用RNA干扰技术检测ASCT2功能 被引量：4

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作者 周济宏 胡心宝 +2 位作者 洪志坚 李幼生 黎介寿 《医学研究生学报》 CAS 2011年第11期1124-1128,共5页

目的谷氨酰胺(glutamine,GLN)是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内,其中载体ASCT2起重要作用,文中将应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell,IEC)-6细胞膜GLN... 目的谷氨酰胺(glutamine,GLN)是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内,其中载体ASCT2起重要作用,文中将应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell,IEC)-6细胞膜GLN载体ASCT2的转运功能。方法体外培养IEC-6,RNAi慢病毒颗粒进行细胞感染,3 d后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达情况,5 d后采用RT-PCR检测载体ASCT2的mRNA表达,7 d后采用Western blot检测其蛋白表达,同时测定[3 H]-L-GLN摄取率。结果病毒转染细胞中均有GFP表达,载体ASCT2的mRNA表达下降60%,蛋白表达几近消失,[3H]-L-GLN摄取率下降15%。结论通过慢病毒载体介导的RNAi这一方便有效的方法,证实了ASCT2载体在整个细胞的GLN转运中起15%以上的作用。 展开更多

关键词 肠黏膜上皮细胞株 [3H]-谷氨酰胺 谷氨酰胺载体 ASCT2

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