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FBXW7基因对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)诱导的猪肠上皮细胞铁死亡的调控
1
作者 程金花 崔乐康 +8 位作者 戴超辉 李伟宁 李辉 赵为民 李碧侠 王学敏 廖超 包文斌 付言峰 《江苏农业学报》 北大核心 2026年第1期132-141,共10页
为了明确FBXW7基因在脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)诱导的猪肠上皮细胞铁死亡过程中的调控作用,本研究用DON处理猪肠上皮细胞系(IPEC-J2)细胞,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测细胞中FBXW7基因与铁死亡相关基因的表达水平,通过基因... 为了明确FBXW7基因在脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)诱导的猪肠上皮细胞铁死亡过程中的调控作用,本研究用DON处理猪肠上皮细胞系(IPEC-J2)细胞,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测细胞中FBXW7基因与铁死亡相关基因的表达水平,通过基因干扰/过表达技术结合qPCR探究FBXW7基因在DON诱导的IPEC-J2细胞损伤过程中的调控作用。结果表明,与未用DON处理的对照(NC)相比,DON处理IPEC-J2细胞后,细胞活力下降、细胞内活性氧(ROS)水平极显著升高(P<0.01),细胞中FBXW7基因表达水平显著或极显著上调(P<0.05或P<0.01),且铁死亡相关基因表达水平也发生显著或极显著变化(P<0.05或P<0.01)。FBXW7基因过表达抑制了铁死亡激活基因的表达,促进了铁死亡抑制基因的表达,最终缓解了DON诱导的IPEC-J2细胞铁死亡。本研究结果初步揭示过表达FBXW7基因可缓解DON诱导的猪肠上皮细胞铁死亡,进而提高猪对DON的抗性,为利用抗病育种策略制订DON预防和控制新方法提供了理论依据。 展开更多
关键词 猪 FBXW7基因 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON) 肠上皮细胞 铁死亡
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益气清热消癥方调控LAMP-1/CTSB/NLRP3轴抑制糖尿病肾病肾小管上皮细胞焦亡的机制研究
2
作者 田蕾 刘伟敬 +1 位作者 赵文景 王耀献 《首都医科大学学报》 北大核心 2026年第1期126-134,共9页
目的探索益气清热消癥方对高糖(high glucose,HG)联合脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导肾小管上皮细胞焦亡的影响,揭示益气清热消癥方改善糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)状态下肾小管上皮细胞焦亡效应机制。方法以体外培... 目的探索益气清热消癥方对高糖(high glucose,HG)联合脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导肾小管上皮细胞焦亡的影响,揭示益气清热消癥方改善糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)状态下肾小管上皮细胞焦亡效应机制。方法以体外培养的人肾近曲小管上皮细胞系HK-2为研究对象,以HG联合LPS刺激,CCK-8法检测HK-2细胞活性以筛选最佳造模浓度,将细胞分为正常对照组、模型组和益气清热消癥方组,通过鬼笔环肽染色检测HK-2细胞骨架形态,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况。免疫荧光法共标溶酶体相关膜蛋白-1(lysosomal associated membrane protein-1,LAMP-1)和组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB),Western blotting法检测含吡啶结构域的NOD样受体家族成员3(NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3,NLRP3)和含CARD结构域的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)的蛋白表达水平。并以溶酶体膜透剂LLOMe为对照药,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测细胞上清中炎性细胞因子白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)蛋白表达情况,观察各组溶酶体膜通透性与细胞焦亡情况。结果30 mmol/L葡萄糖联合10μg/mL LPS刺激24 h,HK-2细胞活性受到抑制,益气清热消癥方干预使HG联合LPS刺激的肾小管上皮细胞活性提升。与正常对照组相比,HG联合LPS刺激的肾小管上皮细胞骨架褶皱呈现多边形,应力纤维破坏,细胞凋亡水平显著增加,溶酶体膜透化,CTSB释放入胞质中,焦亡相关的NLRP3、ASC蛋白表达上调,促炎细胞因子IL-18、IL-1β表达上调。与HG联合LPS模型组相比,益气清热消癥方干预后可以稳定HK-2细胞骨架,抑制肾小管上皮细胞焦亡。益气清热消癥方能够保护溶酶体膜,抑制溶酶体膜透化造成的CTSB释放入胞质,从而抑制CTSB诱导的焦亡相关NLRP3及ASC的蛋白表达,减少细胞上清中IL-1β和IL-18的释放。结论益气清热消癥方可以减轻DKD高糖状态造成的肾小管上皮细胞损伤,其效应机制可能是通过调控LAMP-1/CTSB/NLRP3轴抑制细胞焦亡实现的。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 溶酶体 细胞焦亡 炎性细胞因子 肾小管上皮细胞
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精氨酸通过GPRC6A/Akt-mTOR信号通路刺激奶牛乳腺上皮细胞增殖和乳脂脂肪酸合成
3
作者 郎姣姣 武琪 +5 位作者 薛常健 张振宇 尹文雅 夏呈强 张静 刘强 《动物营养学报》 北大核心 2026年第3期2173-2183,共11页
本试验旨在研究精氨酸(Arg)通过G蛋白偶联受体家族C第6组A亚型(GPRC6A)/蛋白激酶B(Akt)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖和乳脂脂肪酸合成的影响,系统评估其对BMECs增殖活性、凋亡水平及乳脂合成能... 本试验旨在研究精氨酸(Arg)通过G蛋白偶联受体家族C第6组A亚型(GPRC6A)/蛋白激酶B(Akt)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖和乳脂脂肪酸合成的影响,系统评估其对BMECs增殖活性、凋亡水平及乳脂合成能力的调控效应与分子机制。以BMECs为模型,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖率,Western blot检测增殖、凋亡及脂肪酸合成相关蛋白的表达。分别用Akt抑制剂1(AKT-IN-1)、mTOR抑制剂(雷帕霉素)、单磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)激活剂(EX229)及GPRC6A小干扰RNA(GPRC6A siRNA)处理细胞,验证Arg作用的信号通路依赖性。结果表明:1.00μmol/L Arg显著促进BMECs增殖(P<0.05),显著或极显著上调增殖标志蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤2(BCL2)的蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),显著或极显著下调促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。Arg激活GPRC6A及其下游Akt-mTOR信号通路,GPRC6A siRNA或Akt/mTOR抑制剂均可逆转Arg的促增殖和抗凋亡效应。此外,1.00μmol/L Arg显著或极显著上调脂肪酸合成相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、甾醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、脂肪酸合酶(FASN)和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)的蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),AMPK激活剂或GPRC6A siRNA均可阻断Arg的促脂肪酸合成作用。由此可见,Arg通过GPRC6A受体激活Akt-mTOR信号通路促进BMECs增殖并抑制凋亡,同时通过GPRC6A/AMPK轴增强乳脂脂肪酸合成,为靶向调控乳成分合成提供理论依据。 展开更多
关键词 精氨酸 奶牛乳腺上皮细胞 增殖 脂肪酸合成 Akt-mTOR信号通路
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卡格列净通过抑制TXNIP信号改善肾小管上皮细胞氧化应激损伤的机制研究
4
作者 周宇颖 王利 王浩 《海南医科大学学报》 北大核心 2026年第4期241-247,共7页
目的:观察卡格列净(canagliflozin,Cana)对高糖诱导肾小管上皮细胞HK-2氧化应激损伤的疗效,并探讨其相关机制。方法:CCK-8法检测Cana对HK-2增殖的影响以筛选实验安全浓度。将HK-2分为6组:正常组(NG组)、甘露醇组(MA组)、高糖组(HG组)及C... 目的:观察卡格列净(canagliflozin,Cana)对高糖诱导肾小管上皮细胞HK-2氧化应激损伤的疗效,并探讨其相关机制。方法:CCK-8法检测Cana对HK-2增殖的影响以筛选实验安全浓度。将HK-2分为6组:正常组(NG组)、甘露醇组(MA组)、高糖组(HG组)及Cana低、中、高(1、3、10μmol/L)剂量组。Western blot检测TXNIP、NLRP3、DRP1、MFN1和MFN2蛋白表达,试剂盒检测细胞中GSH-PX、SOD酶活性和MDA水平,ELISA法检测细胞上清中炎症因子IL-1β和IL-18的含量,mitoSOX探针检测细胞内线粒体活性氧水平,免疫荧光检测DRP1在线粒体的累积。转染shRNA沉默TXNIP,观察对NLRP3、DRP1、MFN1和MFN2蛋白表达的影响。结果:与HG组比较,Cana可抑制高糖诱导的氧化应激和炎症损伤,表现为GSH-PX和SOD酶活性升高(P<0.05),MDA含量减少(P<0.05),细胞上清中炎症因子IL-1β和IL-18的含量降低(P<0.05);还可抑制TXNIP及NLRP3蛋白表达(P<0.05);此外Cana在减少线粒体中活性氧累积同时,可下调线粒体分裂蛋白DRP1表达(P<0.05),并上调线粒体融合蛋白MFN1和MFN2表达(P<0.05)。沉默TXNIP后,Cana对NLRP3、DRP1、MFN1和MFN2的干预效应被明显削弱。结论:Cana可减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化应激损伤,其机制与TXNIP信号通路有关。 展开更多
关键词 卡格列净 TXNIP 肾小管上皮细胞 氧化应激
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枸骨叶化学成分及其人咽喉复层鳞状上皮细胞抑制活性研究
5
作者 陈璐璐 王俊杰 尉瑞 《中成药》 北大核心 2026年第2期485-492,共8页
目的研究枸骨叶的化学成分及其对咽喉复层鳞状上皮细胞的抑制活性。方法采用硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法测定化合物对咽喉复层鳞状上皮细胞的抑制活性。结果从中分离得到2... 目的研究枸骨叶的化学成分及其对咽喉复层鳞状上皮细胞的抑制活性。方法采用硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法测定化合物对咽喉复层鳞状上皮细胞的抑制活性。结果从中分离得到24个化合物,分别鉴定为hexadeca-9,13-diensaeureethylester(1)、taxodione(2)、sinalexin(3)、5,7-二羟基-2-甲基色原酮(4)、stercurensin(5)、phenylpropanoid(6)、spathulenol(7)、ursaldehyde(8)、1,3,5-三羟基咕吨酮(9)、morusin hydroperoxide(10)、3,4-dihydroxy-benzoicacid(11)、salicifoliol(12)、murradiol(13)、6-羟基脱氢松香酸(14)、羟基二氢博伏内酯(15)、5,4′-二羟基-6-甲基-7-甲氧基黄酮(16)、hydroxyhydrolapacho(17)、iasiodiploclin(18)、二氢-3-外胸膜内酯(19)、3′-甲氧基木犀草素(20)、coniferin(21)、sendanin(22)、petasitolone(23)、methoxylatifolone(24)。化合物3、5、7、10、13、18、21、22对咽喉复层鳞状上皮细胞的IC_(50)值为(82.61±9.72)~(152.48±13.81)μmol/L,其中化合物18的抑制活性与西妥昔单抗相当(P>0.05)。结论化合物1~24均为首次从枸骨叶中分离得到。化合物3、5、7、10、13、18、21、22具有咽喉复层鳞状上皮细胞抑制活性。 展开更多
关键词 枸骨叶 化学成分 分离鉴定 咽喉复层鳞状上皮细胞 抑制活性
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化瘀消癥颗粒抑制早期输卵管妊娠输卵管上皮细胞黏附
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作者 陈怡 陈慕镟 +1 位作者 邓高丕 邱嫔 《科学技术与工程》 北大核心 2026年第8期3223-3231,共9页
探讨化瘀消癥颗粒(Huayu Xiaozheng Granules,HXG)对早期输卵管妊娠输卵管上皮细胞黏附作用的影响及机制。制备HXG含药血清;采用CCK-8法筛选含药血清浓度;质粒转染构建ov-Talin1细胞系;运用细胞黏附实验检测细胞的黏附能力;分别运用QPCR... 探讨化瘀消癥颗粒(Huayu Xiaozheng Granules,HXG)对早期输卵管妊娠输卵管上皮细胞黏附作用的影响及机制。制备HXG含药血清;采用CCK-8法筛选含药血清浓度;质粒转染构建ov-Talin1细胞系;运用细胞黏附实验检测细胞的黏附能力;分别运用QPCR和Western blot检测细胞黏附相关分子E-cadherin、β-catenin、p120-catenin(p120ctn)、ICAM-1,细胞骨架蛋白β-tubulin、Paxillin、Krt,信号通路相关Rap1GAP、Talin1、Integrinβ3的mRNA及蛋白表达,免疫荧光染色检测纤毛功能相关蛋白DNAH5、RSPH9、FOXJ1、F-actin的表达。结果表明:HXG含药血清可抑制ov-Talin1输卵管上皮细胞的黏附能力,降低细胞黏附相关分子的表达,减少ov-Talin1细胞骨架蛋白和纤毛功能相关蛋白的表达,并下调Rap1/Talin1/Integrinβ3信号通路。 展开更多
关键词 化瘀消癥颗粒(HXG) 早期输卵管妊娠(TEP) 细胞黏附 输卵管上皮细胞 Rap1/Talin1/Integrinβ3信号通路
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芦丁对脂多糖诱导的瘤胃上皮细胞屏障功能、炎症损伤的影响
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作者 胡红莲 李兰柱 +5 位作者 许晓慧 赵海霞 赵濛 宋利文 王建军 孙满吉 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第2期1033-1042,共10页
【目的】探究芦丁对脂多糖(LPS)诱导的绵羊瘤胃上皮细胞屏障功能、炎症损伤的影响。【方法】体外培养绵羊瘤胃上皮细胞,用不同浓度LPS(0、1、5、10、50、100μg/mL)刺激建立瘤胃上皮细胞损伤模型,确定LPS的最佳作用浓度和作用时间。以... 【目的】探究芦丁对脂多糖(LPS)诱导的绵羊瘤胃上皮细胞屏障功能、炎症损伤的影响。【方法】体外培养绵羊瘤胃上皮细胞,用不同浓度LPS(0、1、5、10、50、100μg/mL)刺激建立瘤胃上皮细胞损伤模型,确定LPS的最佳作用浓度和作用时间。以不同浓度芦丁(0、25、50、100、150μg/mL)对瘤胃上皮细胞进行预处理,采用MTT法检测细胞活力,计算细胞相对增殖率,确定芦丁的适宜作用浓度和作用时间。基于筛选的LPS和芦丁作用浓度和时间进行细胞分组处理,分别为对照组(CON)、LPS组、芦丁组(R)以及芦丁干预组(R+LPS)。利用ELISA试剂盒测定细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10含量;通过实时荧光定量PCR检测IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α、γ-干扰素(IFN-γ)、CXC趋化因子配体8(CXCL8)、CXCL9、咬合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白-1(Claudin-1)、Claudin-4的mRNA相对表达量。【结果】通过试验筛选,最终确定1μg/mL LPS作用9 h作为建立瘤胃上皮细胞损伤模型的最佳作用条件;100µg/mL芦丁处理8 h作为芦丁在体外对瘤胃上皮细胞预保护的最佳作用条件。与CON组相比,LPS组细胞上清液中IL-1β、TNF-α含量均显著升高(P<0.05),IL-10含量显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,R+LPS组细胞上清液中IL-1β、TNF-α含量显著降低(P<0.05),IL-10含量显著升高(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与CON组相比,LPS组瘤胃上皮细胞中IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α、IFN-γ、CXCL8、CXCL9 mRNA表达量显著升高(P<0.05),IL-4、IL-10、Claudin-4、ZO-1 mRNA表达量显著降低(P<0.05)。与LPS组相比,R+LPS组瘤胃上皮细胞中IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α、INF-γ、CXCL8、CXCL9 mRNA表达量显著降低(P<0.05),IL-4、IL-10、ZO-1、Claudin-4mRNA表达量显著升高(P<0.05)。【结论】本试验条件下,100µg/mL芦丁作用8 h对LPS诱导的瘤胃上皮细胞屏障功能和炎症损伤具有明显的保护作用。 展开更多
关键词 瘤胃上皮细胞 芦丁 脂多糖 炎症因子 屏障功能
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水苏碱对高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用及机制
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作者 吴桂佳 陈曦腾 +6 位作者 寇振宇 高楠 白小妹 毛瀚 蒋元丰 东莉洁 田芳 《中华实验眼科杂志(中英文)》 北大核心 2026年第3期218-226,共9页
目的:探究水苏碱对高糖诱导的人晶状体上皮细胞(LEC)凋亡水平的影响及其机制。方法:将体外培养的人LEC细胞系HLE-B3分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖+二甲基亚砜(DMSO)组和高糖+水苏碱组,分别采用常规培养基、55 mmol/L甘露醇、55 mm... 目的:探究水苏碱对高糖诱导的人晶状体上皮细胞(LEC)凋亡水平的影响及其机制。方法:将体外培养的人LEC细胞系HLE-B3分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖+二甲基亚砜(DMSO)组和高糖+水苏碱组,分别采用常规培养基、55 mmol/L甘露醇、55 mmol/L葡萄糖、55 mmol/L葡萄糖+25μmol/L DMSO和55 mmol/L葡萄糖+25μmol/L水苏碱处理。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;采用活性氧(ROS)检测试剂盒检测各组细胞ROS水平;采用线粒体超氧化物检测试剂盒检测各组细胞线粒体超氧化物含量;采用线粒体膜电位检测试剂盒检测各组细胞线粒体膜电位水平;采用Mito-Tracker染色观察各组细胞线粒体形态。结果:正常组、甘露醇组、高糖组、高糖+DMSO组和高糖+水苏碱组细胞凋亡率分别为(4.09±0.25)%、(4.01±0.23)%、(10.54±0.69)%、(10.72±0.34)%和(6.32±0.37)%,总体比较差异有统计学意义(F=191.80,P<0.001),其中高糖组和高糖+DMSO组细胞凋亡率显著高于正常组、甘露醇组和高糖+水苏碱组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。各组细胞ROS平均荧光强度、线粒体超氧化物平均荧光强度、多聚体平均荧光强度、单聚体平均荧光强度、线粒体膜电位水平、线粒体平均形状因子数目、线粒体平均分支数目及平均面积总体比较差异均有统计学意义(F=112.50、84.63、79.20、165.90、73.14、10.67、31.65、52.19,均P<0.05),其中与正常组和甘露醇组相比,高糖组和高糖+DMSO组细胞ROS平均荧光强度、线粒体超氧化物平均荧光强度、单聚体平均荧光强度均明显升高,多聚体平均荧光强度、线粒体膜电位水平、线粒体平均形状因子数目、线粒体平均分支数目及平均面积均明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与高糖组和高糖+DMSO组相比,高糖+水苏碱组细胞ROS平均荧光强度、线粒体超氧化物平均荧光强度、单聚体平均荧光强度均明显降低,多聚体平均荧光强度、线粒体膜电位水平、线粒体平均形状因子数目、线粒体平均分支数目及平均面积均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:水苏碱可能通过恢复线粒体功能抑制高糖诱导的人LEC凋亡。 展开更多
关键词 白内障 晶状体上皮细胞 水苏碱 高糖 线粒体 凋亡
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大肠杆菌和丁酸梭菌及代谢物对猪肠道上皮细胞线粒体功能影响的研究
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作者 侯玲 吴元霞 +4 位作者 王洪 樊欣 李晓开 孙静 张进威 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第2期691-703,共13页
旨在探讨大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)和丁酸梭菌(Clostridium butyricum,C.butyricum)及代谢物对猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)线粒体功能及相关代谢途径的影响,为调控肠道健康提供理论依据。本试验首先通过筛选确定将培养至3 h时处... 旨在探讨大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)和丁酸梭菌(Clostridium butyricum,C.butyricum)及代谢物对猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)线粒体功能及相关代谢途径的影响,为调控肠道健康提供理论依据。本试验首先通过筛选确定将培养至3 h时处于对数生长期且活性最好的细菌悬液用于后续试验。然后用不同浓度的大肠杆菌、丁酸梭菌、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和短链脂肪酸(short-chain fatty acid,SCFAs)去处理IPEC-J2细胞,每组设置3个重复,分析细胞活力和细胞形态结构筛选出最佳的处理时间和浓度,测定三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位、抗氧化及线粒体功能相关基因表达。结果显示:1)筛选出大肠杆菌和丁酸梭菌处理IPEC-J2细胞的浓度分别为10^(8)CFU·mL^(-1)和10^(6)CFU·mL^(-1),处理时间为1 h,SCFAs和LPS处理时间为1 h;2)丙酸和大肠杆菌处理组显著提高了ROS含量(P<0.05);丁酸梭菌和LPS显著降低了ROS含量(P<0.05);3)丁酸梭菌显著上调了ACC1、NRF1、TFAM、HO-1、APAF-1、PIG3、p53的表达(P<0.05),大肠杆菌处理组下调了TFAM和CtyC的表达(P<0.05),上调了p53的表达(P<0.05),丙酸和乙酸处理对各基因表达均无显著性影响。以上结果表明,SCFAs促进了细胞代谢,大肠杆菌和LPS激活细胞凋亡和生物氧化应激过程,丁酸梭菌可以激活IPEC-J2细胞线粒体脂质代谢、抗氧化系统和细胞凋亡,为靶向线粒体的肠道微生态调控策略提供了新视角。 展开更多
关键词 大肠杆菌 丁酸梭菌 猪肠道上皮细胞 线粒体
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克柔念珠菌诱导奶牛乳腺上皮细胞lncRNA差异表达分析
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作者 辛杰 丁涛 +2 位作者 苗宇航 马文妍 杜军 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第3期1559-1572,共14页
【目的】长链非编码RNAs(lncRNAs)在宿主固有免疫应答中具有重要调控作用,但其在克柔念珠菌(Candida krusei)感染奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)中的表达模式尚未明确。本研究旨在解析克柔念珠菌感染MAC-T后差异表达lncRNA(DElncRNA)的特征... 【目的】长链非编码RNAs(lncRNAs)在宿主固有免疫应答中具有重要调控作用,但其在克柔念珠菌(Candida krusei)感染奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)中的表达模式尚未明确。本研究旨在解析克柔念珠菌感染MAC-T后差异表达lncRNA(DElncRNA)的特征及功能,筛选潜在生物标志物并探索其参与的免疫调控通路。【方法】将MAC-T分为空白对照组(仅用DMEM培养基常规培养)与克柔念珠菌ATCC 6258感染组(以感染复数(MOI)=1的克柔念珠菌ATCC 6258与细胞共培养),每组均设3个生物学重复;采用转录组测序(RNA-Seq)技术分析两组细胞的lncRNA表达谱,结合生物信息学方法筛选DElncRNA,通过TargetScan、miRanda软件预测靶基因,并对其进行GO功能与KEGG通路富集分析;采用ELISA法检测两组细胞上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4及IL-6的表达水平,验证炎症模型构建效果;选取10个DElncRNAs通过实时荧光定量PCR验证转录组测序结果可靠性。【结果】测序共检测到3425个lncRNAs,其中与空白对照组相比,感染组筛选出55个显著上调、79个显著下调的DElncRNAs。GO功能富集分析显示,槲皮素能在细胞外空间、胞外区等部位通过参与炎症反应的正调控、IL-6产生的正调控等生物进程发挥作用。KEGG通路富集分析预测结果显示,DElncRNA的潜在靶基因可能涉及67条信号通路,其中显著富集于PI3K-Akt、NF-κB、MAPK等炎症相关信号通路及铁死亡通路。实时荧光定量PCR检测结果与转录组测序数据中的基因表达量变化趋势一致,其中,显著上调的lncRNA MSTRG.11194通过靶向WDR74、SLC3A2基因参与调控细胞的炎症反应和铁死亡。【结论】本研究在MAC-T中鉴定出134个与克柔念珠菌感染相关的DElncRNAs,可能通过靶向调控免疫信号通路参与奶牛乳腺上皮细胞的炎症反应和铁死亡,为阐明lncRNA调控克柔念珠菌诱导奶牛乳腺炎的机制及开发新型分子标志物提供了理论依据。 展开更多
关键词 克柔念珠菌 奶牛乳腺上皮细胞 lncRNA 生物信息学分析 差异表达
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克柔念珠菌诱导奶牛乳腺上皮细胞microRNA差异表达分析
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作者 苗宇航 丁涛 +2 位作者 辛杰 马文妍 杜军 《畜牧兽医学报》 北大核心 2026年第1期486-499,共14页
非编码小RNA(microRNA)可参与奶牛乳腺固有免疫应答,可作为病原菌感染宿主细胞和奶牛乳腺炎的潜在生物标志物之一,但克柔念珠菌(Candida krusei)感染奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)后microRNA的表达模式尚不清晰。本研究旨在分析Candida kruse... 非编码小RNA(microRNA)可参与奶牛乳腺固有免疫应答,可作为病原菌感染宿主细胞和奶牛乳腺炎的潜在生物标志物之一,但克柔念珠菌(Candida krusei)感染奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)后microRNA的表达模式尚不清晰。本研究旨在分析Candida krusei诱导MAC-T中的差异表达microRNA(DEmicroRNA)及其功能,为揭示Candida krusei感染MAC-T的标志microRNA和后续研究microRNA调控宿主细胞免疫应答的调控机制提供基础。利用转录组(RNA-Seq)测序技术和生物信息学方法对克柔念珠菌感染(感染复数=1)后的MAC-T进行microRNA测序、DEmicroRNA分析及GO和KEGG功能富集分析。结果表明,在正常组和感染组MAC-T中共检测出1465个microRNA,相比于正常组,感染组筛选出16个表达显著上调和7个表达量显著下调的microRNA。应用TargetScan和miRanda软件对11个极显著性差异表达microRNA进行靶基因预测,共预测到6739个靶基因。GO和KEGG功能富集分析结果表明,上述11个极显著性差异表达microRNA可通过免疫相关信号通路而调节奶牛乳腺炎症,进一步分析发现,显著下调的bta-miR-2377,显著上调的bta-miR-2285i可能通过潜在靶基因参与MAPK、NF-κB、Toll样受体信号通路进而调控宿主细胞炎症的发生与发展过程。在Candida krusei诱导的奶牛乳腺上皮细胞中获得了23个DEmicroRNA,可能通过潜在靶基因调控奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的发生与发展过程,为揭示microRNA调控克柔念珠菌诱导奶牛乳腺炎的致病机制提供了科学基础。 展开更多
关键词 克柔念珠菌 奶牛乳腺上皮细胞 MICRORNA 生物信息学分析 差异表达microRNA
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YAP1结合SOX2启动子调控晶状体上皮细胞增殖及细胞周期的作用
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作者 陈菲 马婧宇 +2 位作者 余玟璐 罗莉霞 谈旭华 《中华实验眼科杂志(中英文)》 北大核心 2026年第3期209-217,共9页
目的:探讨Yes相关蛋白1(YAP1)对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖的调控作用,并阐明其对SRY盒转录因子2(SOX2)转录调控的可能机制。方法:选用人LECs细胞系SRA01/04,转染靶向YAP1的小干扰RNA(siRNA)及阴性对照(siNC),采用实时荧光定量PCR(qRT-... 目的:探讨Yes相关蛋白1(YAP1)对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖的调控作用,并阐明其对SRY盒转录因子2(SOX2)转录调控的可能机制。方法:选用人LECs细胞系SRA01/04,转染靶向YAP1的小干扰RNA(siRNA)及阴性对照(siNC),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与Western blot检测YAP1 mRNA及蛋白表达水平筛选有效干预序列。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法与EdU实验检测细胞增殖能力;采用Western blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1和Cyclin E1表达变化。将LECs分为空载体组和YAP1组,分别转染空载体和YAP1质粒,采用qRT-PCR检测YAP1和SOX2 mRNA表达水平;采用Cut&Tag检测YAP1在SOX2启动子区域的结合富集,并构建SOX2启动子荧光素酶报告系统验证YAP1对SOX2转录活性的影响。进一步转染siSOX2观察SOX2敲低对细胞增殖及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果:siYAP1-1组YAP1 mRNA和蛋白表达水平明显低于siNC组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。siYAP1-1组EdU阳性率为(23.2±2.7)%,显著低于siNC组的(80.2±0.9)%,差异有统计学意义(t=31.853,P<0.001)。siYAP1-1组24、48、72 h的吸光度值均低于siNC组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。siYAP1-1组Cyclin D1和Cyclin E1蛋白相对表达量明显低于siNC组,差异均有统计学意义(t=12.857,P<0.001;t=9.432,P=0.001)。Cut&Tag测序结果提示,在LECs中,YAP1在SOX2启动子区域存在明显结合富集信号。siYAP1-1组SOX2 mRNA相对表达量明显低于siNC组,YAP1组SOX2 mRNA相对表达量明显高于空载体组,差异均有统计学意义(t=9.914、11.185,均P<0.001)。YAP1组不同剂量相对荧光素酶活性均明显高于空载体组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。敲低SOX2可显著抑制细胞增殖并下调Cyclin D1和Cyclin E1表达,其表型变化与YAP1敲低一致。结论:YAP1可促进LECs增殖并推动细胞周期进程,其作用机制可能与YAP1结合并转录激活SOX2进而上调G1/S期关键细胞周期蛋白表达有关。 展开更多
关键词 Yes相关蛋白1 SRY盒转录因子2 晶状体上皮细胞 增殖 细胞周期 Cut&Tag
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白花前胡甲素调控NF-κB通路对脂多糖诱导的结肠炎结肠上皮细胞炎症损伤研究
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作者 张宁 高宗跃 +1 位作者 张雅琪 聂建新 《辽宁中医杂志》 北大核心 2026年第2期144-147,I0003,共5页
目的探究白花前胡甲素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人结肠上皮NCM-460细胞炎症损伤的保护及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的调控作用。方法体外培养人结肠上皮NCM-460细胞,将其分为对照组、脂多糖组(1... 目的探究白花前胡甲素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人结肠上皮NCM-460细胞炎症损伤的保护及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的调控作用。方法体外培养人结肠上皮NCM-460细胞,将其分为对照组、脂多糖组(1μg/mL LPS处理)和不同浓度白花前胡甲素组(1μg/mL LPS+6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL白花前胡甲素处理),药物干预处理24 h,筛选最适浓度进行后续实验。随后将NCM-460细胞分为对照组、脂多糖组、白花前胡甲素组(1μg/mL LPS+25μg/mL白花前胡甲素处理)、BAY 11-7082组(1μg/mL LPS+5μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082处理)、抑制剂组(1μg/mL LPS+25μg/mL白花前胡甲素+5μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082处理)和激活剂组(1μg/mL LPS+25μg/mL白花前胡甲素+1μmol/L NF-κB通路激活剂Prostratin处理),药物干预处理24 h。分别采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit 8,CCK-8)、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Hoechst 33258染色法、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法、蛋白免疫印迹(WB)法检测细胞活力、增殖率、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)和NF-κB信通路关键蛋白水平。结果根据细胞活力和炎症因子TNF-α水平,选25μg/mL白花前胡甲素用于后续实验。脂多糖组细胞增殖率和CyclinD1水平较对照组下降(P<0.05),凋亡率及TNF-α、IL-8、Caspase 3、磷酸化-NF-κBp65(p-NF-κBp65)蛋白表达水平显著升高(P<0.05);白花前胡甲素组和BAY 11-7082组扭转了上述LPS对NCM-460细胞的作用(P<0.05);与白花前胡甲素组相比,抑制剂组增强了白花前胡甲素组对NCM-460细胞的作用(P<0.05),激活剂组则削弱了白花前胡甲素对NCM-460细胞的作用(P<0.05)。结论白花前胡甲素可能通过阻滞NF-κB通路转导来抑制LPS诱导的NCM-460细胞炎症、凋亡和增殖抑制。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 人结肠上皮细胞 白花前胡甲素 核转录因子-κB信号通路 炎症 增殖 凋亡
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欧前胡素对脂多糖诱导肺泡上皮细胞损伤的影响及机制研究
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作者 张萍萍 肖晶 +2 位作者 陈红 陈海燕 谢丛华 《世界中医药》 北大核心 2026年第2期230-236,共7页
目的:探讨欧前胡素基于干扰素基因刺激因子/TANK结合激酶1/干扰素调节因子3(STING/TBK1/IRF3)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(A549细胞)损伤的影响。方法:将A549细胞分为空白组、LPS组、LPS+10μmol/L欧前胡素组、LPS+50μmo... 目的:探讨欧前胡素基于干扰素基因刺激因子/TANK结合激酶1/干扰素调节因子3(STING/TBK1/IRF3)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(A549细胞)损伤的影响。方法:将A549细胞分为空白组、LPS组、LPS+10μmol/L欧前胡素组、LPS+50μmol/L欧前胡素组、LPS+diABZI组、LPS+50μmol/L欧前胡素+diABZI组,空白组细胞常规培养,LPS组加入1μg/mL LPS,LPS+10μmol/L欧前胡素组、LPS+50μmol/L欧前胡素组分别同时加入1μg/mL LPS及10μmol/L欧前胡素、50μmol/L欧前胡素,LPS+diABZI组加入1μg/mL LPS及20μmol/LSTING激活剂diABZI,LPS+50μmol/L欧前胡素+diABZI组同时加入1μg/mL LPS、50μmol/L欧前胡素及20μmol/LdiABZI,培养24 h。CCK-8法检测细胞增殖率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中炎症介质[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]及氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]水平,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测凋亡因子[B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、Bcl-2、活化的胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)]mRNA表达,蛋白质印迹法(WB)检测STING/TBK1/IRF3信号通路相关蛋白[STING、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3]表达。结果:与空白组比较,LPS组IL-6、TNF-α、MDA、凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3 mRNA表达、STING蛋白表达、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3高,增殖率、SOD、Bcl-2表达低(P<0.05);与LPS组比较,LPS+10μmol/L欧前胡素组、LPS+50μmol/L欧前胡素组IL-6、TNF-α、MDA、凋亡率、Bax、Cleaved Caspase-3 mRNA表达、STING蛋白表达、p-TBK1/TBK1、p-IRF3/IRF3低,增殖率、SOD、Bcl-2表达高;不同浓度欧前胡素组以上指标比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:diABZ逆转了欧前胡素对LPS诱导后肺泡上皮细胞以上指标的影响。欧前胡素通过抑制STING/TBK1/IRF3信号通路激活改善LPS诱导的肺泡上皮细胞炎症反应、氧化应激、凋亡。 展开更多
关键词 欧前胡素 干扰素基因刺激因子/TANK结合激酶1/干扰素调节因子3信号通路 脂多糖 肺泡上皮细胞 细胞凋亡 细胞增殖 炎症反应 氧化应激
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FGFR1基因敲除牛乳腺上皮细胞系的构建及功能研究
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作者 高林娜 蒋影影 +4 位作者 黄广军 王悦 史倩倩 王慧利 陈坤琳 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第1期317-332,共16页
【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)基因敲除牛乳腺上皮细胞系(bovine mammary epithelial cells,bMECs),探究FGFR1基因缺失对细胞存活、增殖及泌乳功能的影响,以期... 【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)基因敲除牛乳腺上皮细胞系(bovine mammary epithelial cells,bMECs),探究FGFR1基因缺失对细胞存活、增殖及泌乳功能的影响,以期揭示其在乳腺发育和泌乳中的分子调控机制。【方法】针对FGFR1基因的第3、4外显子分别设计sgRNA并在体外鉴定切割效率后,构建FGFR1基因敲除质粒;电转染bMECs,利用嘌呤霉素和稻温毒素筛选7 d,收集细胞提取基因组DNA,经PCR扩增与Sanger测序鉴定FGFR1基因编辑情况;利用有限稀释法从目标编辑细胞群中挑取单克隆细胞,借助TA克隆技术进一步筛选出具有单一基因型的FGFR1基因敲除细胞株;通过Western blotting检测单克隆细胞株的敲除效率,利用CCK-8法测定细胞活力,采用实时荧光定量PCR检测单克隆细胞株中增殖和泌乳相关基因的表达情况。【结果】体外切割试验显示,2条sgRNA的切割效率分别为82.87%和27.80%,表明成功构建敲除质粒。电转染72 h后发现超过95%的bMECs带有红色荧光,且药物筛选后编辑区域出现多个双峰,证明编辑效果明显。挑取384株单克隆细胞,扩繁92株细胞,其中72株细胞FGFR1基因被编辑(78.26%),31株sgRNA1位点发生编辑(33.70%),55株sgRNA2位点(59.78%)发生编辑,最终获得8株形态饱满、长势良好的FGFR1基因敲除单克隆细胞株。测序结果显示,单克隆细胞株编辑位点呈片段缺失和碱基替换等多种编辑形式,其中KO#2细胞株的2个位点均发生编辑,且仅有1种编辑类型;Western blotting和CCK-8结果显示,与对照组相比,KO#2株细胞敲除效果极显著(P<0.01),但敲除FGFR1基因对细胞活力无显著影响(P>0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,敲除FGFR1基因后细胞增殖相关基因的表达量无显著差异(P>0.05),但泌乳合成相关基因的表达量显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01)。【结论】本研究成功构建1株FGFR1基因敲除的bMECs,且敲除FGFR1基因对细胞存活及增殖无显著影响,但可显著抑制其泌乳合成功能,这为进一步研究FGFR1基因在bMECs中的功能和作用机制提供了依据。 展开更多
关键词 FGFR1基因 牛乳腺上皮细胞系(bMECs) CRISPR/Cas9 基因编辑 泌乳调控
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Oar-miR-30a-3p促进湖羊子宫内膜上皮细胞的增殖和迁移
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作者 金慧佳 王争光 项继忠 《浙江畜牧兽医》 2026年第1期1-4,共4页
湖羊的繁殖性能与其子宫内膜的容受性密切相关。细胞外囊泡(EVs)中的microRNAs(miRNAs)在子宫内膜容受态建立过程中起着重要作用。但是miRNAs对湖羊子宫内膜容受态建立的影响尚不清楚。我们前期已证实,用胎盘滋养层细胞来源EVs处理湖羊... 湖羊的繁殖性能与其子宫内膜的容受性密切相关。细胞外囊泡(EVs)中的microRNAs(miRNAs)在子宫内膜容受态建立过程中起着重要作用。但是miRNAs对湖羊子宫内膜容受态建立的影响尚不清楚。我们前期已证实,用胎盘滋养层细胞来源EVs处理湖羊子宫内膜上皮细胞(sEECs)后,sEECs内的oar-miR-30a-3p高度表达。本研究将oar-miR-30a-3p mimics、antagomir转染sEECs,通过cck8和EdU染色检测sEECs的增殖情况,间接划痕法检测sEECs的迁移情况。结果表明oar-miR-30a-3p可以显著促进sEECs的增殖和迁移,从而进一步调控子宫内膜容受态建立。研究结果为后续探究sEECs功能调控网络和子宫内膜容受态建立机制提供理论支持,为提高湖羊繁殖效率和解决繁殖障碍提供理论依据。 展开更多
关键词 湖羊 miR-30a-3p 子宫内膜上皮细胞 细胞外囊泡
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益生菌、益生元对肉鸡生长性能、肠道上皮细胞分化及肠道健康的影响
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作者 陆政达 傅予彤 +1 位作者 张天国 赵丽红 《饲料工业》 北大核心 2026年第2期10-21,共12页
试验旨在探究益生菌、益生元对肉鸡生长性能、肠道上皮细胞分化功能及肠道健康的影响。选取1日龄平均体重为(43.56±0.11)g肉公鸡180只,随机分成3组,每组6个重复,每个重复10只鸡。试验分3个阶段,第1阶段1~10日龄、第2阶段11~21日龄... 试验旨在探究益生菌、益生元对肉鸡生长性能、肠道上皮细胞分化功能及肠道健康的影响。选取1日龄平均体重为(43.56±0.11)g肉公鸡180只,随机分成3组,每组6个重复,每个重复10只鸡。试验分3个阶段,第1阶段1~10日龄、第2阶段11~21日龄、第3阶段22~42日龄。试验第1阶段,所有组均饲喂玉米-豆粕基础饲粮;试验第2、3阶段,空白对照组饲喂玉米-豆粕基础饲粮,益生菌组在基础饲粮中添加300 mg/kg益生菌制剂(枯草芽孢杆菌,活菌数为3×10^(8) CFU/kg),益生元组在基础饲粮中添加700 mg/kg益生元制剂(6%甘露寡糖和8%β-葡聚糖)。结果表明:与对照组相比,益生菌可显著提高肉鸡21、42日龄体重(BW),显著提高11~21日龄和11~42日龄平均日采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)(P<0.05);益生元可显著提高肉鸡42日龄BW和11~42日龄ADG(P<0.05)。益生菌、益生元均可显著提高肉鸡空肠绒毛高度、绒隐比,空肠闭锁蛋白(Occludin)、空肠封闭蛋白2(Claudin-2)和空肠封闭蛋白3(Claudin-3)的mRNA相对表达量(P<0.05),显著提高肉鸡空肠干细胞标记基因(Hopx)、肠道上皮黏附分子(EPCAM)、内分泌细胞标记基因(Chga)和空肠上皮吸收细胞标记基因(SI)的mRNA相对表达量(P<0.05),显著提高肉鸡空肠杯状细胞分化调控基因Kruppel样因子(Klf4)的mRNA相对表达量(P<0.05),显著提高肉鸡空肠寡肽转运蛋白1(PepT1)、氨基酸转运载体家族(SLC6A19、SLC36A1和SLC38A4)的mRNA相对表达量(P<0.05);益生菌、益生元均可显著降低肉鸡空肠toll样受体2(TLR-2)、白细胞介素1β(IL-1β)和干扰素γ(INF-γ)的mRNA相对表达量(P<0.05),对肉鸡空肠凋亡相关基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-1(Caspase-1)、Bcl2相关X蛋白(Bax)和b细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的mRNA相对表达量均无显著影响(P>0.05)。综上所述,饲粮中添加益生菌、益生元制剂可促进空肠上皮细胞分化,增强空肠上皮分泌、吸收功能,降低空肠炎症水平,改善肉鸡的生长性能。 展开更多
关键词 益生菌 益生元 肉鸡 生长性能 肠道上皮细胞分化 肠道健康
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茶多酚激活沉默信息调节因子2相关酶3缓解奶牛乳腺上皮细胞氧化应激与炎性损伤
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作者 冀思同 马学虎 +2 位作者 安彦昊 马敏 马燕芬 《动物营养学报》 北大核心 2026年第1期682-692,共11页
本试验旨在探究茶多酚是否激活沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)缓解氧化应激引发的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎性反应。通过对SIRT3进行干扰并采用过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤BMECs后进行茶多酚(TP)干预,明确TP激活SIRT3对氧化损伤BMECs... 本试验旨在探究茶多酚是否激活沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)缓解氧化应激引发的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎性反应。通过对SIRT3进行干扰并采用过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤BMECs后进行茶多酚(TP)干预,明确TP激活SIRT3对氧化损伤BMECs炎性反应的作用。结果表明:干扰SIRT3后用H_(2)O_(2)处理导致BMECs线粒体功能障碍,极显著降低核呼吸因子1(NRF1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)、线粒体转录因子A(TFAM)等线粒体因子的mRNA相对表达量(P<0.01),进而引起细胞发生氧化应激,极显著上调BMECs中氧化应激标志物丙二醛(MDA)含量和活性氧(ROS)荧光强度(P<0.01),导致抗氧化信号通路线粒体核呼吸因子2(NRF2)、血红素氧合酶-1(HO-1)的mRNA相对表达量极显著下降(P<0.01),进而极显著降低BMECs中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量(P<0.01),极显著提高炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)的mRNA相对表达量(P<0.01),最终引起细胞凋亡因子B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(BAX)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CASP3)等因子mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01),导致BMECs凋亡。加入TP后可逆转这一反应,通过提高抗氧化因子和线粒体因子的含量,抑制炎性因子和凋亡因子的表达,缓解由H_(2)O_(2)诱导BMECs产生的氧化应激和炎性反应。而当敲除SIRT3后这种抑制作用消失,线粒体功能障碍和氧化损伤加剧。综上所述,本研究揭示了TP通过激活SIRT3缓解H_(2)O_(2)诱导的BMECs线粒体功能障碍、氧化应激及炎性反应的作用与机制,为TP在奶牛生产中的推广应用提供了坚实的理论基础和技术支撑。 展开更多
关键词 茶多酚 奶牛乳腺上皮细胞 氧化应激 炎性损伤 线粒体功能障碍
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miRNA-133调节hTim8a对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响
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作者 谭鹏 邵翔 +3 位作者 刘琳 贾丹 张志成 李玉婷 《中国免疫学杂志》 北大核心 2026年第1期41-46,共6页
目的:探讨miRNA-133调节人源线粒体内膜转位酶8a(hTim8a)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞HK-2,将HK-2细胞分为CK组、高糖组、高糖+inhibitor-NC组、高糖+miRNA-133 inhibitor组;qRT-PCR检测细胞... 目的:探讨miRNA-133调节人源线粒体内膜转位酶8a(hTim8a)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞HK-2,将HK-2细胞分为CK组、高糖组、高糖+inhibitor-NC组、高糖+miRNA-133 inhibitor组;qRT-PCR检测细胞miRNA-133和TIMMA基因表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;生化法检测ROS和ATP水平;ELISA试剂盒检测LDH、TNF-α、IL-6和IL-10水平;商品化试剂盒检测MDA、SOD、CAT水平;Western blot检测细胞中cleaved caspase-3、hTim8a、mt-COX、PGC-1、PRC蛋白表达。结果:与CK组相比,高糖组HK-2细胞miRNA-133表达、细胞凋亡率、ROS、LDH、TNF-α、IL-6水平、MDA含量、cleaved caspase-3蛋白表达显著升高,TIMMA mRNA表达、A_(490)(24 h、48 h)值、ATP、IL-10水平、SOD和CAT活性、hTim8a、mt-COX、PGC-1、PRC蛋白水平显著降低(P<0.05);与高糖+inhibitor-NC组相比,高糖+miRNA-133 inhibitor组HK-2细胞miRNA-133表达、细胞凋亡率、ROS、LDH、TNF-α、IL-6水平、MDA含量、cleaved caspase-3蛋白表达显著降低,TIMMA mRNA表达、A_(490)(24 h、48 h)值、ATP、IL-10水平、SOD和CAT活性、hTim8a、mt-COX、PGC-1、PRC蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默miRNA-133表达可上调hTim8a表达,减轻高糖诱导的HK-2细胞炎症、氧化应激和细胞凋亡,进而提高细胞活性和线粒体功能,减轻细胞损伤。 展开更多
关键词 miRNA-133 hTim8a 高糖 肾小管上皮细胞损伤
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不同热应激强度对奶牛乳腺上皮细胞脂联素及泌乳相关基因表达的影响
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作者 谷静怡 陈昱静 +4 位作者 李诗梦 计腾武 郭任昀 康帅 窦金焕 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第4期1728-1739,共12页
【目的】系统阐述不同热应激强度及热恢复过程对奶牛泌乳功能的分子调控机制,明确不同热应激强度及热恢复过程对奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)泌乳功能相关分子调控的影响规律。【方法】以37℃培养的MAC-T细胞为常温对照组,并构建热应激模型... 【目的】系统阐述不同热应激强度及热恢复过程对奶牛泌乳功能的分子调控机制,明确不同热应激强度及热恢复过程对奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)泌乳功能相关分子调控的影响规律。【方法】以37℃培养的MAC-T细胞为常温对照组,并构建热应激模型,即对MAC-T细胞进行不同温度(39、41、42和43℃)及不同时长(0.5~2.5 h)热处理,并在42℃热应激2 h后分别进行10、20、30 min及1 h的常温恢复处理。利用实时荧光定量PCR检测热应激标记基因(HSP70、HSP90)、乳脂代谢相关基因(ADIPOQ、FASN、CEBPA、ADIPOR1和ADIPOR2)及乳蛋白合成相关基因(PRL、PRLR、STAT5、CSN2)的表达水平,以评估热应激解除后其表达的恢复特征与可逆性。【结果】与常温对照组相比,随着热应激温度升高与持续时间延长,HSP70与HSP90基因表达总体上调;而乳脂代谢相关基因中除CEBPA基因表达量升高外,ADIPOQ、ADIPOR1、ADIPOR2和FASN基因以及乳蛋白合成相关基因PRL、PRLR、STAT5和CSN2的表达量均呈现不同程度的降低,其中42℃处理2 h时泌乳相关基因表达量均极显著降低(P<0.01),说明该热应激条件对泌乳性能的抑制效果最为显著。将42℃热应激2 h后的细胞转回37℃进行恢复培养,结果显示,随恢复时间延长,HSP70、HSP90基因表达量逐步降低,乳脂与乳蛋白相关基因表达量呈不同程度回升,至常温恢复1 h时,各泌乳相关基因表达量与常温对照组相比均无显著差异(P>0.05)。【结论】热应激可通过温度和时间依赖方式抑制奶牛乳腺上皮细胞中泌乳相关基因的表达,该抑制效应具有一定可逆性。本研究在细胞水平证实ADIPOQ基因参与热应激条件下乳脂代谢调控,为奶牛热应激防控及耐热性状分子育种提供了理论依据。 展开更多
关键词 热应激 奶牛乳腺上皮细胞 脂联素 泌乳相关基因
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