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双抗原夹心法检测艾滋病病毒抗体2种方法的比较
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作者 陈新瑞 蒋姣伏 +1 位作者 曾胥 秦立新 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期713-714,共2页
关键词 艾滋病病毒抗体 双抗原夹心 免疫吸附试验 诊断 初筛试验 AIDS HIV 常规方法 凝聚 特异性
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大黄鱼病原哈维氏弧菌单克隆抗体的制备及其应用 被引量:8
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作者 郝贵杰 沈锦玉 +3 位作者 徐洋 姚嘉赟 潘晓艺 尹文林 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期413-417,共5页
用甲醛灭活哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)GYC1108-1制备免疫原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经2—3次亚克隆后,共获得5株针对GYC1108-1的单克隆抗体。选取1B7... 用甲醛灭活哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)GYC1108-1制备免疫原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经2—3次亚克隆后,共获得5株针对GYC1108-1的单克隆抗体。选取1B7制备小鼠腹水抗体,其细胞上清及腹水效价分别为1∶3200和1∶32000。同样用灭活的哈维氏弧菌免疫新西兰大白兔,5次免疫后颈动脉采血,离心取血清,并用饱和硫酸铵法进行纯化,制备了兔抗哈维氏弧菌多克隆抗体,其ELISA效价为1∶51200。利用1B7单克隆抗体和兔抗哈维氏弧菌多克隆抗体以及山羊抗小鼠HRP酶标二抗,建立了检测哈维氏弧菌的三抗体夹心酶联免疫吸附试验(TAS-ELISA)方法。该方法对哈维氏弧菌的最小检出浓度为1×104个/mL。用该TAS-ELISA方法检测大黄鱼(Pseudosciaena crocea)样品,54尾患病大黄鱼中有45尾检出哈维氏弧菌,而14尾健康大黄鱼都没有检出哈维氏弧菌。由此可见,本试验建立的TAS-ELISA方法,可以用于患病大黄鱼哈维氏弧菌的快速诊断。 展开更多
关键词 大黄鱼 哈维氏弧菌 单克隆抗体 抗体夹心免疫吸附试验
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草鱼(Ctenopharyngodon idellus)出血病二价细胞灭活疫苗体液免疫效果及免疫保护率评价研究 被引量:2
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作者 郝贵杰 林锋 +7 位作者 黄爱霞 叶霆 姚嘉赟 潘晓艺 袁雪梅 徐磊 胡金春 沈锦玉 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1467-1475,共9页
草鱼出血病是由草鱼呼肠孤病毒(GCRV)引起的草鱼养殖业一种严重的病毒性出血病,给草鱼养殖产业造成重大损失。该病毒是一种双链分节段RNA病毒,根据GCRV多个病毒分离株基因序列分析及临床发病特点,共有三种基因型GCRV,其中基因Ⅰ型和Ⅱ... 草鱼出血病是由草鱼呼肠孤病毒(GCRV)引起的草鱼养殖业一种严重的病毒性出血病,给草鱼养殖产业造成重大损失。该病毒是一种双链分节段RNA病毒,根据GCRV多个病毒分离株基因序列分析及临床发病特点,共有三种基因型GCRV,其中基因Ⅰ型和Ⅱ型较为流行。通过细胞分离培养基因Ⅰ型(GCRV-ZV8909)和Ⅱ型(GCRV-HZ13)GCRV,研制出草鱼出血病二价细胞灭活疫苗,通过绝对定量的方法,测定基因Ⅰ型和Ⅱ型的病毒含量分别为2.0×109及1.5×106 copies/mL。用生理盐水将其分别进行50倍稀释和100倍稀释,包括原液及生理盐水对照共4组,分别腹腔注射免疫(20±5)g健康草鱼,剂量均为0.2 mL/尾,每组40尾,各组于免疫后3、5、7、14、21、28、42、56、70、84 d分别取3尾采集血液制备血清。分别利用经原核表达并纯化制备两种基因型GCRV的VP7蛋白以及实验室保存的草鱼IgM单抗,建立了三抗体夹心酶联免疫方法(TAS-ELISA)分析评价疫苗体液免疫效果。结果表明,草鱼经腹腔注射不同剂量的细胞灭活疫苗后,与对照组相比,各免疫组血清抗体均有不同程度的提高,且原液组与50倍稀释组基本持平,但都高于100倍稀释组,各免疫组在免疫后5 d即可检测到两种基因型GCRV抗体,且抗体水平持续到84 d,但两种基因型抗体水平达到高峰的时间不一致,抗基因Ⅰ型GCRV抗体达到高峰是在28 d,抗基因Ⅱ型GCRV抗体是在14 d达到高峰。两种基因型抗体水平达到高峰时的血清效价分别为1︰800、1︰600。免疫保护率实验结果表明,原液组保护率最高,为67%,50倍稀释组为60%,100倍稀释组只有33%。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒(GCRV) 抗体夹心免疫方法(tas-elisa) 体液免疫 免疫保护率
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葡萄球菌肠毒素DAS-ELISA检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 刘鹏翀 黄金海 +3 位作者 刘莉 刘莹 刘壮 孙盈 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第8期195-198,共4页
为筛选特异性强、亲和力高、可夹心配对单克隆抗体4A2和5C12,通过方阵试验优化工作条件,建立金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins,SEs)的双抗体夹心-酶联免疫吸附试验定量检测方法。结果表明:该方法标准曲线为y=4.074x-1.... 为筛选特异性强、亲和力高、可夹心配对单克隆抗体4A2和5C12,通过方阵试验优化工作条件,建立金黄色葡萄球菌肠毒素(staphylococcal enterotoxins,SEs)的双抗体夹心-酶联免疫吸附试验定量检测方法。结果表明:该方法标准曲线为y=4.074x-1.1888,R2=0.9892,检测下限为0.307μg/mL,批内和批间变异系数均小于10%,脱脂乳粉中SEs掺入试验测定回收率为103%~107%,特异性、重复性和稳定性良好;应用所建双抗体夹心-酶联免疫吸附试验方法,对数株葡萄球菌分离株体外培养上清中SEs产生的动态变化进行分析表明,不同菌株SEs分泌能力不同,且0~20h分泌量不断增加,对鲜牛乳和猪淋巴组织匀浆中的SEs进行检测,检出率分别为51.7%和59.1%,并与进口商品化试剂盒检测结果比对,一致率达92.5%,表明食品中SEs污染的普遍存在。所建方法灵敏高效,可为食源性污染监控提供有效手段。 展开更多
关键词 葡萄球菌 葡萄球菌肠毒素 抗体夹心-免疫吸附法 检测方法
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ELISA技术在犬病毒与抗体检测中的应用
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作者 修福晓 《山东畜牧兽医》 2010年第5期78-79,共2页
ELISA即酶联免疫吸附测定,是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性、特异性较高的试验技术。比较常用的ELISA方法有双抗体夹心法和间接法。ELISA主要用在人、猪、禽等传染病... ELISA即酶联免疫吸附测定,是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性、特异性较高的试验技术。比较常用的ELISA方法有双抗体夹心法和间接法。ELISA主要用在人、猪、禽等传染病的病原及抗体检测。 展开更多
关键词 ELISA技术 抗体检测 免疫吸附测定 犬病毒 ELISA方法 应用 抗体夹心 高效催化
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两种检测罗氏沼虾诺达病毒方法的比较
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作者 简贺君 谢俊刚 《安徽农学通报》 2014年第8期151-152,165,共3页
分别用三抗体夹心酶联免疫吸附测定、逆转录聚合酶链式反应两种方法,检测20尾采集自广东省肇庆市的典型白肉病症状罗氏沼虾肌肉中的诺达病毒。检测结果是两种方法阳性检出率均为95%。结果表明,两种方法均能有效的应用在实验室检测罗氏... 分别用三抗体夹心酶联免疫吸附测定、逆转录聚合酶链式反应两种方法,检测20尾采集自广东省肇庆市的典型白肉病症状罗氏沼虾肌肉中的诺达病毒。检测结果是两种方法阳性检出率均为95%。结果表明,两种方法均能有效的应用在实验室检测罗氏沼虾诺达病毒。 展开更多
关键词 罗氏沼虾 诺达病毒 抗体夹心免疫吸附测定 逆转录聚合链式反应
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