米村矿一_1煤底板奥灰水突水危险性分析 被引量：3

1

作者 易伟欣 刘保民 《河南理工大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第2期146-151,共6页

带压开采过程中,防止底板突水是安全生产的关键.为了解突水原因,通过对生产现场地质资料进行疏理,并运用地质理论和矿山压力理论,对拟开采的一1煤层突水危险性进行了分析,认为煤层直接底板本溪组铝土质泥岩隔水层厚度过薄,井田内小断层... 带压开采过程中,防止底板突水是安全生产的关键.为了解突水原因,通过对生产现场地质资料进行疏理,并运用地质理论和矿山压力理论,对拟开采的一1煤层突水危险性进行了分析,认为煤层直接底板本溪组铝土质泥岩隔水层厚度过薄,井田内小断层比较发育,间接底板奥陶系灰岩的富水条件是矿井突水的主要因素.分析结果可为今后预测一1煤底板突水危险性提供理论依据. 展开更多

关键词 一1煤 突水危险性 断层

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郑州矿区一_1煤开采水害防治研究 被引量：1

2

作者 牛森营 《煤炭工程》 北大核心 2007年第4期48-50,共3页

文章主要论述了郑州矿区一1煤开采的矿井水文地质问题,奥陶系灰岩的岩溶发育规律,一1煤地质构造特征及突水机理,奥灰水防治的一般方法。提出要查清水文地质条件,加强水文地质物探,选择合适的采煤方法,在郑州矿区一1煤开采中至关重要。

关键词 一1煤层 水害防治 奥陶系灰岩 郑州矿区

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米村煤矿开采一_1煤层水文地质浅析

3

作者 王芬芝 陈晓国 《中州煤炭》 2007年第6期41-42,71,共3页

分析了一1煤层的区域及矿井水文地质条件,计算确定了一1煤层开采的最低标高。通过对底板安全程度的分析,预计了开采一1煤层时的矿井涌水量。

关键词 一1煤层 水文地质 安全开采 矿井涌水量

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蓝桉油对单核细胞THP-1核因子-κB核转位活化的影响 被引量：7

4

作者 周建娅 唐法娣 +3 位作者 毛国根 邵杰 王砚 卞如濂 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2003年第4期315-318,326,共5页

目的 :探讨蓝桉油对人单核细胞 THP- 1细胞株核因子 - κB(NF- κB)核转位活化的影响。方法 :蓝桉油 (1、10、10 0 mg/L,30 min)预处理 THP- 1细胞 ,经脂多糖 (L PS,1mg/L,30 min)刺激后 ,采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚... 目的 :探讨蓝桉油对人单核细胞 THP- 1细胞株核因子 - κB(NF- κB)核转位活化的影响。方法 :蓝桉油 (1、10、10 0 mg/L,30 min)预处理 THP- 1细胞 ,经脂多糖 (L PS,1mg/L,30 min)刺激后 ,采用间接免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜 ,测定 THP- 1细胞 NF- κB p6 5亚基 (NF- κB/p6 5 )定位 ;Western- blot法分析细胞核内NF- κB/p6 5水平。结果 :免疫荧光分析显示 ,正常细胞 NF- κB/p6 5荧光标记主要分布于胞浆区 ,核区很少 ,L PS刺激后 NF- κB/p6 5荧光标记浓集于核区 ,胞浆区少见 ;但经蓝桉油 (10 0 mg/L)预处理后 ,LPS刺激的 THP- 1细胞NF- κB/p6 5荧光标记则主要位于胞浆区 ;Western- blot分析显示 ,在正常 THP- 1细胞核蛋白中有低水平的 NF- κB/p6 5表达 ,经 L PS刺激 ,核内 NF- κB/p6 5表达明显增高 ;蓝桉油预处理后 ,可以抑制 LPS诱导的核内 NF- κB/p6 5高水平表达 ,且呈剂量依赖关系。结论 :蓝桉油预处理阻止了 LPS诱导的 NF- κB/p6 5核转位 ,从而抑制了其活性功能的发挥。蓝桉油可抑制 LPS刺激引起的 NF- κB核转位活化。 展开更多

关键词 脂多糖类 核因子-ΚB 单核细胞 蓝桉油 显微镜检查 共焦 THP一1细胞株 WESTERN-BLOT法

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芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶抑制剂1表达的影响 被引量：9

5

作者 张毅 李娟 +6 位作者 王庆胜 王正平 苏韫 颜春鲁 孙少伯 刘涛 李金田 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2019年第1期63-67,共5页

目的观察芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)及金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)表达的影响,探讨其干预气道炎症及气道重塑的作用机制。方法 60只实验大鼠采用气管内滴注脂多糖联合烟熏法复制大鼠COP... 目的观察芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)及金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)表达的影响,探讨其干预气道炎症及气道重塑的作用机制。方法 60只实验大鼠采用气管内滴注脂多糖联合烟熏法复制大鼠COPD模型,第29日开始药物干预,随机分为空白组、模型组、阳性对照组和芪蛭皱肺颗粒高、中、低剂量组,每组10只。第58日,HE染色观察大鼠肺组织形态学变化,ELISA检测大鼠血清MMP-9、TIMP-1含量,Q-PCR和Western blot分别检测大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1基因和蛋白表达。结果芪蛭皱肺颗粒各剂量组均可改善COPD大鼠肺组织病理损害。ELISA显示:与空白组比较,模型组大鼠血清MMP-9、TIMP-1含量及MMP-9/TIMP-1比值均显著升高(P<0.05);与模型组比较,芪蛭皱肺颗粒高、中剂量组大鼠血清MMP-9、TIMP-1含量及MMP-9/TIMP-1比值均显著降低(P<0.05)。Q-PCR显示:与空白组比较,模型组大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1m RNA表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,芪蛭皱肺颗粒高、中剂量组大鼠肺组织MMP-9 mRNA表达显著降低(P<0.05),芪蛭皱肺颗粒各剂量组大鼠肺组织TIMP-1m RNA表达显著降低(P<0.05)。Westernblot显示,与空白组比较,模型组大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,芪蛭皱肺颗粒高、中剂量组MMP-9、TIMP-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论芪蛭皱肺颗粒可调节大鼠血清和肺组织MMP-9、TIMP-1的表达,纠正MMP-9/TIMP-1状态失衡,抑制肺组织炎症反应,从而干预气道重塑的发生,这可能是其防治COPD的机制之一。 展开更多

关键词 芪蛭皱肺颗粒 慢性阻塞性肺疾病 基质金属蛋白酶一9 基质金属蛋白酶抑制剂一1 大鼠

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恒磁场对内皮细胞分泌和表达细胞间黏附分子-1及与单核细胞黏附的抑制作用 被引量：2

6

作者 程何祥 周廉 +5 位作者 徐可为 贾国良 王海昌 张荣庆 牛金龙 李争显 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期353-355,358,共4页

目的　观察不同强度恒磁场对氧化修饰低密度脂蛋白 (OX LDL)作用下人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)分泌和表达细胞间黏附分子 1(ICAM 1)及HUVEC与人单核细胞株THP 1黏附的影响。方法　采用体外培养第 3代的HUVEC ,实验分为 6组 ,即对照组、OX ... 目的　观察不同强度恒磁场对氧化修饰低密度脂蛋白 (OX LDL)作用下人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)分泌和表达细胞间黏附分子 1(ICAM 1)及HUVEC与人单核细胞株THP 1黏附的影响。方法　采用体外培养第 3代的HUVEC ,实验分为 6组 ,即对照组、OX LDL(10 0mg·L-1)组及OX LDL +不同磁感应强度 (1、5、10、2 0Gs)的恒磁场组。各组细胞于培养及恒磁场作用 2 4h后收集标本 ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测HUVEC分泌ICAM 1的量 ,免疫细胞化学检测ICAM 1的表达 ,计数法观察HUVEC与THP 1的黏附率。结果　OX LDL 10 0mg·L-1刺激细胞 2 4h,ICAM 1的分泌和表达显著增高(P <0 .0 5vs.对照组 ) ;而 1、5、10和 2 0Gs恒磁场组细胞ICAM 1的分泌和表达显著低于OX LDL组 (P <0 .0 5 )。OX LDL10 0mg·L-1与HUVEC孵育 2 4h后 ,HUVEC与THP 1的黏附率显著增加 (P <0 .0 5vs.对照组 ) ;而 1、5、10和 2 0Gs恒磁场组HUVEC与THP 1的黏附率显著低于OX LDL组 (P <0 .0 5 )。结论　 1～ 2 0Gs的恒磁场可拮抗OX LDL的作用 ,抑制HUVEC分泌和表达ICAM 展开更多

关键词 恒磁场 内皮细胞 单核细胞 细胞间黏附分子一1 氧化修饰低密度脂蛋白

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2,4,6-三巯基-1,3,5-三嗪三钠盐的制备 被引量：6

7

作者 刘安昌 余磊 +1 位作者 邹菁 苏建宇 《武汉化工学院学报》 2005年第4期8-10,共3页

以三聚氯氰为原料,硫化钠为巯基化试剂,在温度为60～70 ℃,pH=9的条件下,制备了2,4,6-三巯基-1,3,5-三嗪(收率≥90%)及其三钠盐.并对制备的2,4,6-三巯基-1,3,5-三嗪和瑞士Fluka公司相同的产品进行了红外光谱分析.

关键词 三聚氯氰 巯基化试剂 2 4 6一三巯基一1 3 5一三嗪

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液液萃取—气相色谱法测定缓释尿素中缓释剂DL-1

8

作者 左秀锦 夏林 +7 位作者 周毅 戴小敏 郑琳 张娜 杨秋玲 马淑慧 陈惠麟 马小军 《大连大学学报》 2005年第2期110-110,共1页

关键词 液液萃取 气相色谱法 缓释尿素 缓释剂 DL一1

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PAI-1和ACE基因多态性与反复自然流产的关联性 被引量：7

9

作者 潘琳 李霞 +1 位作者 蔡永梅 霍正浩 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第8期624-627,共4页

目的分析PAI-1基因4G/5G多态性和ACE基因I/D多态性与反复自然流产(RSA)的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测反复自然流产患者(190例)及健康人对照组(193例)PAI-1 4G/5G、ACE I/D多态性位点基因型频... 目的分析PAI-1基因4G/5G多态性和ACE基因I/D多态性与反复自然流产(RSA)的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测反复自然流产患者(190例)及健康人对照组(193例)PAI-1 4G/5G、ACE I/D多态性位点基因型频率和等位基因频率的分布特征。结果以PAI-1 5G/5G基因型为参照,PAI-1 4G/4G、PAI-1 4G/5G及PAI-1 4G/4G+4G/5G基因型在病例组中的分布频率均明显高于健康人对照组(OR分别为2.919,2.160,2.365,P<0.01);以ACE II基因型为参照,ACE DD、ID基因型在病例组和健康人对照组中的分布差异无统计学意义(OR分别为1.674,1.492,P>0.05);而ACE DD+ID基因型在病例组和健康人对照组中的分布差异有统计学意义(OR=1.529,P<0.05)。结论携带PAI-1突变基因可能增加患反复自然流产的风险,ACE基因I/D多态性与反复自然流产无明显相关性。 展开更多

关键词 反复自然流产 纤溶酶原激活物抑制剂一1 血管紧张素转换酶 单核苷酸多态性

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TS-1催化剂制环氧丙烷的反应性能研究 被引量：1

10

作者 张兵 丛秀华 +2 位作者 张冰 王文清 马俊 《炼油与化工》 2011年第4期14-16,77,共3页

考察了运用不同改性方法制得的TS-1催化剂,对丙烯环氧化制环氧丙烷反应的转化率和选择性的影响。同时研究了溶剂组成、反应温度及加碱量等条件对TS-1催化剂反应性能的影响。结果表明,经0.1mol/L四丙基氢氧化胺(TPAOH)处理的催化剂,在适... 考察了运用不同改性方法制得的TS-1催化剂,对丙烯环氧化制环氧丙烷反应的转化率和选择性的影响。同时研究了溶剂组成、反应温度及加碱量等条件对TS-1催化剂反应性能的影响。结果表明,经0.1mol/L四丙基氢氧化胺(TPAOH)处理的催化剂,在适宜的反应条件下可以使H2O2转化率和环氧丙烷选择性均达到95%。 展开更多

关键词 YS一1 H:0: 环氧丙烷 转化率 选择性

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新型布酸工艺技术在磨溪雷一^1亚段气藏水平井中的应用 被引量：2

11

作者 齐天俊 《钻采工艺》 CAS 北大核心 2010年第B06期59-61,共3页

为了进一步提高磨溪雷一1亚段水平井单井产量,必须要实现水平段储层的合理布酸,以增强酸化施工效果。在气藏水平井改造上曾采用过全井筒大型笼统注酸技术、连续油管拖动酸化工艺技术、连续油管拖动酸化+全井筒大型笼统注酸工艺技术,但... 为了进一步提高磨溪雷一1亚段水平井单井产量,必须要实现水平段储层的合理布酸,以增强酸化施工效果。在气藏水平井改造上曾采用过全井筒大型笼统注酸技术、连续油管拖动酸化工艺技术、连续油管拖动酸化+全井筒大型笼统注酸工艺技术,但均不能很好地实现合理布酸的目的,因此多级裸眼封隔器进行机械封隔与转向酸液体系相结合的新型布酸酸化工艺技术的应用实现了水平段储层合理布酸,更好地解除了水平段伤害堵塞,解决了水平井酸化技术难题,并在现场应用中取得了很好的效果,增加了井口产能,并为该气藏水平井酸化施工提供了一套很好的解决方案。 展开更多

关键词 磨溪雷一1亚段 布酸 水平井 机械封隔 转向酸

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应用水平井技术高效开发低渗气藏实践——以磨溪气田雷一1气藏为例 被引量：5

12

作者 阮基富 欧家强 +3 位作者 李新玲 易劲 邓垒 刘吉伟 《石油地质与工程》 CAS 2014年第4期126-128,131,共4页

磨溪气田雷一1为受背斜圈闭控制的层状孔隙性低渗气藏。为了有效动用该区西端低渗难采储量,提高油田采收率,开展了以提高单井产能为目的的水平井先导试验并取得较好效果。通过规模应用并逐步形成了水平井井位目标优选、靶体参数优化、... 磨溪气田雷一1为受背斜圈闭控制的层状孔隙性低渗气藏。为了有效动用该区西端低渗难采储量,提高油田采收率,开展了以提高单井产能为目的的水平井先导试验并取得较好效果。通过规模应用并逐步形成了水平井井位目标优选、靶体参数优化、随钻地质导向和水平井储层改造等配套特色技术。这些技术有效提高了单井产能,并提高了气藏中部采收率,实现了雷一1气藏高效开发,为同类气藏高效开发提供了经验。 展开更多

关键词 磨溪雷一1气田 水平井 低渗气藏 储层改造

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一锅法合成四氟硼酸螺环-1,1-二吡咯烷鎓盐

13

作者 何立 袁云龙 +1 位作者 杨东 赵姗姗 《化学世界》 CAS CSCD 2018年第6期341-345,共5页

四氟硼酸螺环-1,1-二吡咯烷鎓盐(简称SBP-BF4)作为电解质应用于超级电容器,具有优异的电化学性能,且具较大市场潜力。在前期制备工艺基础上,发展了一锅法反应合成四氟硼酸螺环-1,1-二吡咯烷鎓盐,并对工艺进行了相应的研究。该制备方法... 四氟硼酸螺环-1,1-二吡咯烷鎓盐(简称SBP-BF4)作为电解质应用于超级电容器,具有优异的电化学性能,且具较大市场潜力。在前期制备工艺基础上,发展了一锅法反应合成四氟硼酸螺环-1,1-二吡咯烷鎓盐,并对工艺进行了相应的研究。该制备方法具有操作简单、反应条件温和、收率好、三废少等优点,适合工业化生产。 展开更多

关键词 四氟硼酸螺环一1 1一二吡咯烷鎓盐 制备 电解液 超级电容器

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TEMPO-NaBr-NaClO体系对细菌纤维素的氧化过程研究 被引量：4

14

作者 廖世波 奚廷斐 +3 位作者 赖琛 廖世玉 黄涛 王甩艳 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期699-707,共9页

细菌纤维素是具有天然纳米网状结构的支架材料，选择性催化氧化可改善其降解性能。以NaCIO、TEMPO和反应时间为变量，研究2，2，6，6-四甲基哌啶-1一氧化物自由基（TEMPO）／NaBr／NaClO体系对细菌纤维素的氧化。结果表明，在试验条件... 细菌纤维素是具有天然纳米网状结构的支架材料，选择性催化氧化可改善其降解性能。以NaCIO、TEMPO和反应时间为变量，研究2，2，6，6-四甲基哌啶-1一氧化物自由基（TEMPO）／NaBr／NaClO体系对细菌纤维素的氧化。结果表明，在试验条件范围内，体系初始阶段的反应速率随NaClO用量的增加而减小；体系pH值是影响此阶段反应速率的主要因素且体系最大反应速率出现在pH=10．50—11．00之间；TEMPO用量对此阶段反应速率的影响不明显。对整个反应过程而言，体系的反应速率和不溶性产物的羧基含量都随NaCl0用量的增加而增大，其中NaCl0用量在1—8mL之间时，都呈现良好的线性关系；二者都随催化剂TEMPO用量的增加而增大。不溶性产物的羧基含量随反应时间的延长先逐渐减小后保持相对稳定在0．70—0．75mol／kg。在不同反应阶段，TEMPO／NaBr／NaClO体系对BC的氧化规律存在明显差异，BC独特的结构特点可能是导致这种差异的主要原因。 展开更多

关键词 细菌纤维素 2 2 6 6-四甲基哌啶一1一氧化物自由基 选择性氧化 羧基含量

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试析资产证券化在我国的应用取向 被引量：6

15

作者 王君彩 韩永强 《中央财经大学学报》 CSSCI 北大核心 2004年第2期23-26,共4页

从投资者的角度出发 ,资产证券化为投资者提供了一种优良的投资品种 :资产支持证券 ,在投资者和融资者之间建立了一种新的资金融通渠道。开展资产证券化业务 ,必须遵循严谨的运作规范 ,如破产隔离、真实销售等。金融资产证券化具有广泛... 从投资者的角度出发 ,资产证券化为投资者提供了一种优良的投资品种 :资产支持证券 ,在投资者和融资者之间建立了一种新的资金融通渠道。开展资产证券化业务 ,必须遵循严谨的运作规范 ,如破产隔离、真实销售等。金融资产证券化具有广泛发展前景 ,但不良资产资产证券化 ,在我国当前的市场环境下 ,不宜规模化展开。 展开更多

关键词 资产证券化 运作规范 应用取向 N ·· · 、 .·一 一1一.:一

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丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肾间质纤维化的影响及机制探讨 被引量：12

16

作者 吕彦洁 孙建平 +1 位作者 高延霞 王玉琦 《山东医药》 CAS 2014年第10期30-32,共3页

目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肾间质纤维化的治疗作用及其机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组及丹参酮组;后三组制备肾间质纤维化模型。制模前依那普利组予依那普利灌胃,丹参酮组予丹参酮ⅡA磺酸钠腹腔... 目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肾间质纤维化的治疗作用及其机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组及丹参酮组;后三组制备肾间质纤维化模型。制模前依那普利组予依那普利灌胃,丹参酮组予丹参酮ⅡA磺酸钠腹腔注射。术后10 d取各组肾组织观察病理学变化;免疫组化法检测血小板源性生长因子D(PDGF-D)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达,PCR法检测PDGF-D、HO-1 mRNA表达。结果模型组肾间质纤维化程度重于依那普利组及丹参酮组,PDGF-D表达量明显高于、HO-1表达量明显低于依那普利组及丹参酮组,P均<0.05;依那普利组与丹参酮组PDGF-D、HO-1蛋白及PDGF-D、HO-1 mRNA表达无明显差异。结论丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肾间质纤维化有抑制作用,其机制可能与下调PDGF-D、上调HO-1的表达,抑制间质细胞增生、表型转化密切相关。 展开更多

关键词 丹参酮ⅡA磺酸钠 肾间质纤维化 血小板源性生长因子D 血红素加氧酶一1

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颅脑损伤患者早期应用脑保护药物的作用与前景 被引量：2

17

作者 安向阳 刘玉光 +2 位作者 吴承远 李新钢 朱树干 《山东医药》 CAS 北大核心 2003年第27期63-64,共2页

关键词 颅脑损伤 脑保护药物 临床应用 预防 治疗 尼莫地平 纳络酮 神经节苷脂一1 甲强龙 维生素C

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刀具布置对茎秆切碎还田机振动的影响分析 被引量：22

18

作者 姬江涛 李庆军 蔡苇 《农机化研究》 北大核心 2003年第4期63-64,共2页

分析了影响茎秆切碎还田机振动的主要因素,并对典型机具的刀片排列方案进行了研究,从而提出了茎秆切碎还田机刀片排列的主要理论依据。

关键词 茎秆切碎还田机 振动 刀具布置 刀片排列 刀辊 平衡 频率 4J一1 50型 受力分析 离心力

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五图-双系数法在煤矿突水评价中的应用 被引量：25

19

作者 易伟欣 《河南理工大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2013年第5期556-560,共5页

为安全开采受承压水威胁的一1煤层,分析了郑州矿区大平煤矿主要底板突水因素,并用单一突水系数公式对底板突水进行了预测分区.研究表明,用单一的突水系数公式来预测突水事故并不准确.在突水系数法的基础上,把含水层奥灰岩富水区、矿山... 为安全开采受承压水威胁的一1煤层,分析了郑州矿区大平煤矿主要底板突水因素,并用单一突水系数公式对底板突水进行了预测分区.研究表明,用单一的突水系数公式来预测突水事故并不准确.在突水系数法的基础上,把含水层奥灰岩富水区、矿山压力、大中型断层、小断层密集带等主要突水因素考虑进去,对突水系数法进行修正,用五图-双系数法对大平矿底板突水进行预测分区,其预测结果可以指导煤矿安全开采. 展开更多

关键词 一1煤层 突水因素 突水系数 五图-双系数法

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低氧诱导因子基因重组腺病毒载体的构建及其在内皮细胞中的表达

20

作者 哈小琴 姜东红 +4 位作者 邓芝云 董菊子 赵勇 彭俊华 杨志华 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期654-659,共6页

目的:构建携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的腺病毒载体(pAdxsi-GFP-HIF),观察其在内皮细胞中的表达。方法:低氧处理A549细胞后提取总RNA并逆转录为cDNA,以之作为模板,依据基因库公布的HIF-1αcDNA设计引物,分别引入KpnI和BamHI酶切... 目的:构建携带低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的腺病毒载体(pAdxsi-GFP-HIF),观察其在内皮细胞中的表达。方法:低氧处理A549细胞后提取总RNA并逆转录为cDNA,以之作为模板,依据基因库公布的HIF-1αcDNA设计引物,分别引入KpnI和BamHI酶切位点,PCR扩增后将目的基因HIF-1α连接到载体pShuttle-CMV-EGFP上,构建穿梭质粒pShuttle-GFP-HIF。采用细菌内重组方法将目的序列重组到pAdxsi病毒骨架载体上构建携带HIF-1α基因的重组腺病毒载体。检测重组腺病毒效价后,转染人脐静脉内皮细胞ECV304,检测目的基因的转染表达。结果:通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实携带HIF-lα基因的重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-HIF构建成功,且构建的重组腺病毒纯度好、效价高。以100 MOI转染ECV304细胞24 h后在荧光显微镜下可观察到细胞有较强的绿色荧光表达,转染48 h时荧光表达更强,且培养上清液中HIF-1蛋白表达水平为(48.93±3.86)ng/mL。结论:本实验构建的携带HIF-1α基因的腺病毒载体pAdxsi-GFPHIF转染效率及目的基因的蛋白表达水平均较高,有望应用于缺血缺氧组织局部。 展开更多

关键词 低氧诱导因子一1仅 遗传载体

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