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《单克隆抗体及其应用》
1
作者 汪美先 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第1期86-86,共1页
单克隆抗体问世以来，已应用于生物-医学各个领域中．精确地识别生命分子所特有的复杂结构．定量地分析所含物质．识别新的细胞群，阐明新的分化途径．而且已成为临床检验和基础医学研究的重要试剂之一，使恶性肿瘤、传染病及自身免疫... 单克隆抗体问世以来，已应用于生物-医学各个领域中．精确地识别生命分子所特有的复杂结构．定量地分析所含物质．识别新的细胞群，阐明新的分化途径．而且已成为临床检验和基础医学研究的重要试剂之一，使恶性肿瘤、传染病及自身免疫性疾病等的治疗，成为可能。 展开更多
关键词 《单克隆抗体及其应用》 临床检验 基础医学 试剂 新书介绍
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禽4型腺病毒单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用
2
作者 张宇 程凡玉 +7 位作者 俞赵荣 邵颖 魏宁波 陈芳芳 王振宇 宋祥军 涂健 祁克宗 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2364-2371,共8页
本研究旨在制备禽4型腺病毒(fowl adenovirus type 4,FAdV-4)的单克隆抗体,鉴定其特异性结合位点,并评估其在免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和免疫沉淀反应中的应用价值。使用纯化的FAdV-4-AH-F41株全病毒免疫小鼠,通过间接酶联免... 本研究旨在制备禽4型腺病毒(fowl adenovirus type 4,FAdV-4)的单克隆抗体,鉴定其特异性结合位点,并评估其在免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和免疫沉淀反应中的应用价值。使用纯化的FAdV-4-AH-F41株全病毒免疫小鼠,通过间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法筛选出一株阳性杂交瘤细胞并进行亚克隆,并对所制备的单克隆抗体进行效价检测。利用间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)与蛋白免疫印迹(Western blot)方法鉴定单克隆抗体生物学特性,构建了pCold TF-Hexon、pET-32a(+)-Fiber1、pCold TF-Penton、pCold TF-Fiber2的原核表达载体,并通过Western blot初步鉴定所得单克隆抗体的特异性结合位点,在检测出抗体的亚型后,将其初步应用于IHC和免疫沉淀试验。结果表明本试验获得1株稳定分泌抗Fiber1蛋白的单克隆抗体,并将其命名为5C7。该抗体效价为1∶102400,亚型为IgG-2b,表现出良好的生物学特性。在IHC中,能够观察到明显的病变特征;在免疫沉淀试验中,5C7可作为捕获抗体,与病毒感染细胞中的Fiber1蛋白特异性结合。结果提示,本试验通过全病毒粒子免疫小鼠所制备的单克隆抗体能够特异性识别Fiber1蛋白,并在IHC和免疫沉淀反应中显示出良好的应用前景,为FAdV-4实验室病理诊断方法的建立和Fiber1蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 单克隆抗体 抗体鉴定 Fiber1蛋白 IHC 免疫共沉淀
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猪I类白细胞抗原单克隆抗体的制备及其在非洲猪瘟病毒感染机制研究中的初步应用
3
作者 王可欣 Weldu Tesfagaber +7 位作者 王婉 尹丽 孔惠 张振江 李芳 高彩霞 步志高 赵东明 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第1期90-95,共6页
猪I类白细胞抗原(SLA I)是机体内至关重要的免疫相关蛋白,是启动特异性细胞毒性T细胞(CTL)免疫应答的核心分子。在机体内,SLA I负责将内源性抗原肽递呈至细胞膜表面,由CD8+T细胞识别,启动机体适应性免疫应答。为了制备SLA I的单克隆抗体... 猪I类白细胞抗原(SLA I)是机体内至关重要的免疫相关蛋白,是启动特异性细胞毒性T细胞(CTL)免疫应答的核心分子。在机体内,SLA I负责将内源性抗原肽递呈至细胞膜表面,由CD8+T细胞识别,启动机体适应性免疫应答。为了制备SLA I的单克隆抗体(MAb),本研究将SLA I-1*04:01等位基因胞外区序列与麦芽糖结合蛋白(MBP)序列连接,在大肠杆菌原核表达系统中表达,获得可溶性重组蛋白MBP-SLA I。经亲和层析纯化后,采用MBP-SLA I免疫BALB/c小鼠3次,采用ELISA检测小鼠血清抗体水平,对血清抗体效价在1:10 000以上的小鼠进一步冲击免疫后,分离小鼠脾脏B淋巴细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合。采用ELISA方法筛选阳性的杂交瘤细胞进行3次克隆纯化,最终筛选得到稳定分泌SLA I抗体的杂交瘤细胞株MAb-1A11。经ELISA检测纯化后的MAb-1A11效价可达1:3 200,经小鼠MAb抗体亚类鉴定试剂盒鉴定其重链为IgG2b,轻链为κ。采用western blot检测该抗体的特异性,结果显示,MAb-1A11能够识别猪肺泡巨噬细胞(PAM)表达的内源性SLA I,在42 ku处出特异性条带,而对HEK293T细胞中表达的同源物人白细胞抗原无交叉识别作用。利用MAb-1A11为一抗,采用western blot进一步检测非洲猪瘟病毒(ASFV)HLJ/18-6GD株感染的PAM中SLA I的表达水平,结果显示,随着ASFV感染时间的延长,SLA I表达水平出现轻微下降。本研究制备了SLA I的MAb,并初步将其应用于ASFV感染机制的研究中,为深入了解SLA I所受调控的机制提供了可靠工具。 展开更多
关键词 猪白细胞抗原I 单克隆抗体 WESTERNBLOT 非洲猪瘟病毒
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牛白细胞介素-8单克隆抗体制备及应用
4
作者 杨蕊 靳家鑫 +4 位作者 张泽 时文健 张广智 丁家波 鑫婷 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3830-3837,共8页
【目的】白细胞介素-8(IL-8)是重要的趋化因子,参与机体免疫反应,其水平升高与多种感染性疾病、自身免疫疾病等密切相关,也被鉴定为活动性肺结核病、结核性脑膜炎、牛结核病的检测靶标。本研究旨在制备针对牛IL-8的单克隆抗体,开发牛IL-... 【目的】白细胞介素-8(IL-8)是重要的趋化因子,参与机体免疫反应,其水平升高与多种感染性疾病、自身免疫疾病等密切相关,也被鉴定为活动性肺结核病、结核性脑膜炎、牛结核病的检测靶标。本研究旨在制备针对牛IL-8的单克隆抗体,开发牛IL-8夹心ELISA检测试剂盒,用于牛血清或血浆中IL-8的定量检测,为牛结核(bovine tuberculosis,b TB)及其他炎症相关疾病的诊断及免疫学指标检测提供工具。【方法】将牛IL-8基因分别连接至p GEX-6P-1和pc DNA3.1载体,并利用大肠杆菌与293F细胞进行表达,以GST亲和柱和镍柱纯化重组蛋白;采用真核表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对牛IL-8的单克隆抗体;通过棋盘法筛选最佳抗体对并建立夹心ELISA检测方法;定量检测排菌期结核病牛、非排菌期结核病牛和健康牛血浆中IL-8水平,评价单克隆抗体对天然牛IL-8的识别能力及其对结核病牛的检测效果。【结果】SDS-PAGE结果显示,原核和真核表达系统制备的IL-8均以可溶形式表达,且纯化的蛋白纯度高于90%;经3轮亚克隆筛选共获得2B8、2F5等5株稳定分泌牛IL-8抗体的单克隆细胞株,亚型鉴定均为Ig G1型;棋盘法筛选结果显示,4G10和3D5-HRP为最佳配对抗体;以4G10和3D5-HRP建立的ELISA方法对不同感染状态的结核病牛血浆进行定量检测,结果显示,结核病牛血浆中IL-8含量极显著高于健康牛(P<0.01)。【结论】成功制备抗牛IL-8的单克隆抗体并建立牛IL-8夹心ELISA检测方法,可实现对天然牛IL-8的定量检测,有潜力用于结核病牛的筛查和牛免疫学指标检测。 展开更多
关键词 牛 白细胞介素-8 单克隆抗体 ELISA 牛结核病
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基于施孔数法筛选抗胎儿血红蛋白单克隆抗体及其在初步诊断β地中海贫血方法中的应用
5
作者 尹茉莉 徐婧哲 +3 位作者 闫宇 童祯骁 刘磊 王会岩 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第2期271-277,共7页
目的 建立初步诊断β地中海贫血(BT)双抗体夹心ELISA方法。方法 利用施孔数法筛选分泌抗胎儿血红蛋白(HbF)单抗的杂交瘤细胞株,采用ELISA、改良免疫细胞化学、Western blot方法进一步评价抗体的性质,采用戊二醛标记方法将碱性磷酸酶(ALP... 目的 建立初步诊断β地中海贫血(BT)双抗体夹心ELISA方法。方法 利用施孔数法筛选分泌抗胎儿血红蛋白(HbF)单抗的杂交瘤细胞株,采用ELISA、改良免疫细胞化学、Western blot方法进一步评价抗体的性质,采用戊二醛标记方法将碱性磷酸酶(ALP)和抗HbF单抗进行偶联,筛选最佳配对抗体用于双抗夹心ELISA方法,对40份临床血样进行检测。结果 筛选到9株高亲和力分泌抗HbF单抗的杂交瘤细胞株,其中4株HbF单抗(3F7、4G1、6C1、9H7)与HbF特异性结合,与血红蛋白(HbA和HbA_2)不发生交叉反应,抗体最高效价为1∶256 000,亲和力最高可达到2.36×10^(8) L/mol。与高效液相色谱法比,以3F7作为捕获抗体与ALP-4G1配对建立的双抗夹心ELISA方法通过定量检测HbF含量以区分胎儿和健康人血样,其敏感度达80%。结论 建立的夹心ELISA方法能够准确测量HbF水平,为临床上诊断BT提供帮助。 展开更多
关键词 胎儿血红蛋白 单克隆抗体 定量检测 施孔数法
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禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及初步应用
6
作者 韩京哲 黄萌萌 +11 位作者 许萌萌 王国栋 张玉龙 刘润杭 于航博 吴子文 柯二靖 凌丹 于晓雪 高玉龙 李留安 祁小乐 《中国家禽》 北大核心 2025年第9期66-73,共8页
为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂... 为研制禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)囊膜蛋白gp90单克隆抗体,试验构建重组原核表达质粒pCold-gp90,转化至感受态细胞BL21中进行蛋白诱导表达;采用纯化的gp90蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞分选技术筛选鉴定阳性杂交瘤细胞,并制备单克隆抗体腹水,对单克隆抗体的亚型、效价进行测定;并初步测试单克隆抗体在Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)中检测gp90蛋白和REV中的应用效果。结果显示:REV囊膜蛋白gp90获得成功表达和纯化,获得3株能稳定分泌REV gp90单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,该单克隆抗体亚型均为IgG1、Kappa,腹水效价均可达1∶64000;该单克隆抗体不仅可用于Western blot或IFA检测gp90原核表达蛋白和真核表达蛋白,还可用于IFA检测REV的TCID50效价。研究表明,成功制备的REV gp90单克隆抗体为进一步的REV检测方法建立和gp90蛋白功能研究提供了重要工具。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 囊膜蛋白gp90 原核表达 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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猪轮状病毒VP6蛋白的真核表达及单克隆抗体制备和应用
7
作者 魏黄思梧 张兴艺 +5 位作者 黄校花 刘昌锦 武文杰 沈政乔 罗锋 邓舜洲 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2750-2761,共12页
【目的】制备抗猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6蛋白单克隆抗体,为PoRV检测方法的开发提供参考。【方法】以痘苗病毒启动子P28为VP6的启动子,以G3型PoRV核酸为模板扩增VP6基因,通过无缝克隆方法将VP6基因片段克隆至pSWE178质粒,... 【目的】制备抗猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6蛋白单克隆抗体,为PoRV检测方法的开发提供参考。【方法】以痘苗病毒启动子P28为VP6的启动子,以G3型PoRV核酸为模板扩增VP6基因,通过无缝克隆方法将VP6基因片段克隆至pSWE178质粒,构建重组质粒pSWE178-P28-VP6;利用同源重组和蚀斑纯化技术获得表达VP6蛋白的重组猪痘病毒rSWE178-P28-VP6,用SDS-PAGE鉴定VP6蛋白表达形式。以G9型PoRV为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,以重组病毒表达的VP6蛋白为检测抗原,通过间接ELISA筛选分泌抗VP6单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过间接免疫荧光试验(IFA)检测单克隆抗体与G3、G4、G5、G9型PoRV的反应原性,选择其中1株单克隆抗体对人工感染PoRV的猪肠道组织进行免疫组化(IHC)检测。【结果】在构建了表达PoRV VP6蛋白的重组质粒pSWE178-P28-VP6基础上,成功构建了表达PoRV VP6蛋白的重组猪痘病毒,表达的蛋白分子质量大小45 ku,为可溶性表达。采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,筛选获得29株分泌抗VP6单克隆抗体的杂交瘤细胞株。IFA结果显示,26株单克隆抗体均能与G3、G4、G5、G9型PoRV反应,但荧光亮度存在差异。IHC检测结果显示,单克隆抗体能与感染PoRV的临床样品发生特异性免疫反应。【结论】本研究利用真核表达系统成功表达了PoRV VP6蛋白,采用杂交瘤技术筛选获得29株抗VP6单抗隆抗体,其中26株均能与G3、G4、G5、G9型PoRV反应。试验结果为PoRV免疫学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) VP6蛋白 真核表达 单克隆抗体
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盐酸可乐定单克隆抗体的制备及免疫层析试纸的研制
8
作者 王耀 景钰冰 +5 位作者 曹金博 孙亚宁 邢云瑞 陈秀金 李兆周 胡骁飞 《西北农业学报》 北大核心 2025年第6期1136-1144,共9页
盐酸可乐定(Clonidine hydrochloride,CLO)是一种新型的瘦肉精类药物替代品,在饲料和动物饮水中禁止添加。开发CLO的快速检测方法对于兽药残留监控,保障动物源性食品安全具有重要意义。制备免疫学特性优良的CLO鼠源单克隆抗体,并基于竞... 盐酸可乐定(Clonidine hydrochloride,CLO)是一种新型的瘦肉精类药物替代品,在饲料和动物饮水中禁止添加。开发CLO的快速检测方法对于兽药残留监控,保障动物源性食品安全具有重要意义。制备免疫学特性优良的CLO鼠源单克隆抗体,并基于竞争模式研制快速检测CLO残留的免疫层析试纸(Immunochromatographic strip,ICS)。ICS视觉检测消线值为2.5 ng/mL,且通过读条仪可进行定量检测,检测限为0.202 ng/mL。猪尿样品的加标回收试验结果显示,ICS的批内回收率为82.79%~92.96%,变异系数(Coefficient of variation,CV)最高为7.17%,批间回收率为82.36%~89.09%,CV最高为7.04%,具有良好的灵敏度和准确度,为CLO残留的高效监控提供一种实用的快速检测工具。 展开更多
关键词 盐酸可乐定 单克隆抗体 免疫层析试纸 快速检测
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犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
9
作者 龚婷 马辉 郑鸣 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第7期81-84,118,共5页
为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000... 为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000、1∶2048000,染色体数目分别为106、105、103,重链分别为IgG1、IgG2b和IgG1,轻链均为κ链,均能与VP2蛋白和CPV感染的F81细胞发生特异性反应,均与4种常见病毒不发生交叉反应。该研究获得了3株抗体效价高、特异性强、免疫学活性好的VP2蛋白单克隆抗体,可为CPV基础性研究和免疫学诊断试剂盒开发奠定基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 VP2蛋白 单克隆抗体 制备与鉴定
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禽腺病毒4型Penton蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
10
作者 岳筠 王涵钰 +4 位作者 毛以智 李乔斌 赵超 冯孝傲 程振涛 《贵州畜牧兽医》 2025年第4期29-31,共3页
为了对禽腺病毒4型(FAdV-4)的早期快速诊断与有效防控奠定基础,采用BL21(DE3)细胞表达FAdV-4 Penton蛋白,免疫BALB/c小鼠,用PEG将脾细胞与SP2/0细胞融合,并用HAT培养基与间接ELISA方法培养和筛选阳性杂交瘤细胞,应用间接ELISA方法和West... 为了对禽腺病毒4型(FAdV-4)的早期快速诊断与有效防控奠定基础,采用BL21(DE3)细胞表达FAdV-4 Penton蛋白,免疫BALB/c小鼠,用PEG将脾细胞与SP2/0细胞融合,并用HAT培养基与间接ELISA方法培养和筛选阳性杂交瘤细胞,应用间接ELISA方法和Western blotting测定单克隆抗体的效价和反应原性,制备小鼠腹水单克隆抗体。结果:通过脾细胞制备、细胞融合、杂交瘤细胞筛选获得1株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(命名为F12)。其培养物上清与重组蛋白Penton呈现特异性反应,证明杂交瘤细胞F12能够稳定分泌特异性抗体。制备的小鼠腹水单克隆抗体效价为1∶200,Western blotting结果显示腹水抗体与目的蛋白呈现特异性条带。结论:试验成功获得1株分泌特异性抗体的FAdV-4 Penton蛋白杂交瘤细胞株(F12),制备的腹水单克隆抗体可用于FAdV-4检测。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 Penton蛋白 单克隆抗体
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关于抗Aβ单克隆抗体的临床应用建议(2024版) 被引量：4
11
作者 王刚 李彬寅 +3 位作者 任汝静 肖金雯 陈生弟 陈晓春 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期120-126,共7页
最新研发的抗Aβ单克隆抗体陆续在国内外获批上市,并逐渐应用于我国临床实践。为促进抗Aβ单克隆抗体在我国阿尔茨海默病治疗中更合理、安全的应用,本文结合抗Aβ单克隆抗体现有临床试验证据及阿杜卡单抗在上海交通大学医学院附属瑞金... 最新研发的抗Aβ单克隆抗体陆续在国内外获批上市,并逐渐应用于我国临床实践。为促进抗Aβ单克隆抗体在我国阿尔茨海默病治疗中更合理、安全的应用,本文结合抗Aβ单克隆抗体现有临床试验证据及阿杜卡单抗在上海交通大学医学院附属瑞金医院海南医院的临床应用经验,总结抗Aβ单克隆抗体的临床应用建议,包括临床用药指征、用药前评估及准备、用药时医嘱及注意事项、用药后临床监测,旨在为临床医师提供翔实的用药指导和建议。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 淀粉样β肽类 抗体 单克隆 诊疗指南 综述
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非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定 被引量：2
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作者 王小格 司煊瑛 +8 位作者 闫志伟 王飞 尤龙琪 刘梗 蔡茂 梁珺珹 梁玉秀 杜永坤 张改平 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期781-791,共11页
[目的]采用原核表达系统表达并获得非洲猪瘟病毒(ASFV)p22重组蛋白,并进一步制备、鉴定p22重组蛋白的单克隆抗体。[方法]采用PCR方法扩增ASFV p22蛋白编码基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-p22,并通过IPTG诱导表达p22蛋白。将纯化后重... [目的]采用原核表达系统表达并获得非洲猪瘟病毒(ASFV)p22重组蛋白,并进一步制备、鉴定p22重组蛋白的单克隆抗体。[方法]采用PCR方法扩增ASFV p22蛋白编码基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-p22,并通过IPTG诱导表达p22蛋白。将纯化后重组蛋白免疫小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合制备单克隆抗体。通过Western blotting鉴定单克隆抗体特异性,通过ELISA方法测定腹水效价;利用在线软件预测p22蛋白抗原表位分布情况并合成重叠多肽,通过Dot blotting鉴定抗体识别的抗原表位。[结果]本研究成功构建了p22重组蛋白的原核表达质粒,获得原核系统表达的p22重组蛋白,分子质量约为22 ku。用纯化后p22蛋白作为免疫原免疫小鼠,成功筛选到4株阳性单克隆杂交瘤细胞株,分别为1G3D7G11、2G5H6H8、6D10G7D6和8F6F8B9,其腹水效价均达到1∶500 000。Western blotting结果显示,4株单克隆抗体均能与p22蛋白发生特异性反应。单克隆亚型鉴定结果显示,1G3D7G11、2G5H6H8和6D10G7D6株单克隆抗体的重链均为IgG1类,8F6F8B9株单克隆抗体的重链为IgG2a类,4株单克隆抗体轻链均为Kappa型。Dot blotting检测结果显示,1G3D7G11、2G5H6H8株单克隆抗体识别抗原表位位于第58—89位氨基酸处;8F6F8B9株单克隆抗体识别抗原表位位于第126—150位氨基酸处。[结论]本研究成功制备了4株ASFV p22蛋白的单克隆抗体,并初步鉴定了单克隆抗体所识别的B细胞表位区间。研究结果为p22蛋白的生物学功能研究和ASFV血清学检测提供了参考依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p22蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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抗IgE单克隆抗体联合变应原特异性免疫治疗的应用进展 被引量：2
13
作者 李淑娴 刘金玲 +1 位作者 何静(综述) 陈志敏(审校) 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期264-269,共6页
抗IgE单克隆抗体目前已被批准用于治疗哮喘和慢性荨麻疹,同时抗IgE单克隆抗体联合变应原特异性免疫治疗(AIT)作为过敏性疾病的辅助治疗已引起普遍关注。研究表明,在AIT治疗中或治疗前添加抗IgE单克隆抗体可显著减少AIT不良反应的发生频... 抗IgE单克隆抗体目前已被批准用于治疗哮喘和慢性荨麻疹,同时抗IgE单克隆抗体联合变应原特异性免疫治疗(AIT)作为过敏性疾病的辅助治疗已引起普遍关注。研究表明,在AIT治疗中或治疗前添加抗IgE单克隆抗体可显著减少AIT不良反应的发生频率和严重程度,明显改善症状评分,缩短达到维持剂量所需的时间。目前仍需要更大规模的高质量对照试验更好地识别抗IgE单克隆抗体联合AIT的获益人群,以及治疗最佳剂量和持续时间,并评估长期效益、进行成本-效益分析。本文就抗IgE单克隆抗体在AIT中作为辅助治疗的应用进展进行综述。 展开更多
关键词 抗IgE单克隆抗体 变应原特异性免疫治疗 辅助治疗
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不同单克隆抗体聚集与断裂行为的多维分析 被引量：1
14
作者 陆治锦 文玺凯 +5 位作者 刘鲁杰 王宜冰 沈春雷 伍维 沈智勇 赵黎明 《华东理工大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期42-49,共8页
采用尺寸排阻色谱法和分析型超速离心法对ZG154和ZG187抗体的分子大小变异体进行正交分析,系统解析了造成聚集和断裂的因素。结果表明,40℃时ZG154样品在天冬酰胺329位点发生脱酰胺修饰的比例增加了30.7%,通过增加分子间相互作用,相关... 采用尺寸排阻色谱法和分析型超速离心法对ZG154和ZG187抗体的分子大小变异体进行正交分析,系统解析了造成聚集和断裂的因素。结果表明,40℃时ZG154样品在天冬酰胺329位点发生脱酰胺修饰的比例增加了30.7%,通过增加分子间相互作用,相关修饰加速了聚集,并导致断裂的发生;40℃时ZG187样品在蛋氨酸430位点发生氧化修饰的比例增加了36.9%,相关修饰降低了蛋白的稳定性,导致了断裂的发生。研究结果为上述药物研发和生产过程中的聚集与断裂问题提供了检测和分析方法。 展开更多
关键词 单克隆抗体 聚集 断裂 脱酰胺 氧化
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沙门氏菌SifA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
15
作者 苗苏南 何嘉文 +5 位作者 王静 夏泽淼 廖宗杰 赵一丁 焦新安 耿士忠 《中国家禽》 北大核心 2025年第6期64-71,共8页
研究旨在制备沙门氏菌SifA蛋白的单克隆抗体,分析其亚类、腹水效价、亲和力和反应性,并初步应用于检测沙门氏菌感染巨噬细胞后SifA分泌的生物学特性。试验通过构建重组表达大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a-sifA和BL21(DE3)/pGEX-6P-1-sifA,... 研究旨在制备沙门氏菌SifA蛋白的单克隆抗体,分析其亚类、腹水效价、亲和力和反应性,并初步应用于检测沙门氏菌感染巨噬细胞后SifA分泌的生物学特性。试验通过构建重组表达大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a-sifA和BL21(DE3)/pGEX-6P-1-sifA,表达和纯化得到rHis-SifA和rGST-SifA蛋白,以rHis-SifA作为免疫抗原,rGST-SifA作为检测抗原,采用B细胞杂交瘤技术制备SifA单克隆抗体,并使用鼠源亚类鉴定试剂盒确定其亚类,间接ELISA方法测定其腹水效价和亲和力,Western blot分析其反应性、与肠杆菌科其他细菌交叉反应的特异性和巨噬细胞中沙门氏菌SifA的分泌特性,评价其效果或应用潜力。结果显示:成功制备10株单克隆抗体,其中单克隆抗体10G6亚型为IgG1,其效价达1.0×10^(6)以上,亲和常数为3.66×10^(9)/M,能特异性结合rHis-SifA和rGST-SifA蛋白,Western blot结果显示该单克隆抗体能特异性识别8种不同血清型沙门氏菌,并能确定沙门氏菌感染巨噬细胞后SifA的分泌特性。研究表明,成功制备10株单克隆抗体,其中单克隆抗体10G6具有良好的特性,为沙门氏菌的研究和检测提供生物材料。 展开更多
关键词 沙门氏菌 SifA蛋白 单克隆抗体 应用 分泌
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IBDV单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立
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作者 姜艳平 刘薇 +6 位作者 宫浩阳 蔡李萌 李佳璇 崔文 周晗 韩建春 唐丽杰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3433-3441,共9页
旨在建立一种快速有效的检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的方法,本研究以IBDV全病毒作为免疫原制备单克隆抗体,以获得的单抗6G3作为捕获抗体,单抗4C12作为检测抗体,建立检测IBDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该ELISA方法具有良好的... 旨在建立一种快速有效的检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的方法,本研究以IBDV全病毒作为免疫原制备单克隆抗体,以获得的单抗6G3作为捕获抗体,单抗4C12作为检测抗体,建立检测IBDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该ELISA方法具有良好的特异性,与REV、AEV、ALV和EDSV均无交叉反应;能检测病毒的最小量为1.585×10^(3) ELD50;批间和批内重复性试验显示,该方法具有良好的重复性;通过该方法对49份临床样品进行检测,与商品化的IBDV抗原检测卡进行比较,符合率达94.18%。综上,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于IBDV的快速检测,为制备商品化的IBDV检测试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 单克隆抗体 检测方法 双抗体夹心ELISA
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猪IL-15单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立
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作者 王飞燕 刘超凡 +5 位作者 张亚楠 周晓甜 任静 袁晨 李潭清 宋勤叶 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3442-3452,共11页
旨在制备猪白细胞介素-15(IL-15)的单克隆抗体(McAb),建立IL-15-ELISA定量检测方法。首先构建猪IL-15原核表达载体pET-28a-IL-15,应用大肠杆菌原核表达系统表达该重组蛋白,随后用其免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,在加强免疫后第3天,分离小... 旨在制备猪白细胞介素-15(IL-15)的单克隆抗体(McAb),建立IL-15-ELISA定量检测方法。首先构建猪IL-15原核表达载体pET-28a-IL-15,应用大肠杆菌原核表达系统表达该重组蛋白,随后用其免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,在加强免疫后第3天,分离小鼠脾细胞,将脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞,并对其分泌的IL-15单克隆抗体进行鉴定;然后基于单克隆抗体建立IL-15夹心ELISA方法。结果显示:获得9株分泌抗IL-15 McAb的杂交瘤细胞(1E8、1F4、2D3、2C10、2F3、2D10、3F4、3D4、3D5),分泌的抗体均为IgG2bκ型。以制备的单抗2D10和2C10分别为捕获抗体及酶标抗体建立的夹心ELISA最低可检测31.25 ng·mL^(-1)的IL-15蛋白,与其它细胞因子或蛋白(IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、Gzms-B、IFN-γ、TNF-α)无交叉反应,批内和批间重复的变异系数分别为2.56%和3.39%。该夹心ELISA可定量检测血清、组织液和细胞培养物等样品中的IL-15。综上,成功制备了猪IL-15单克隆抗体,建立了定量检测IL-15的双抗体夹心ELISA方法,为IL-15相关研究提供了重要工具。 展开更多
关键词 猪IL-15 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA 定量检测
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猪IL-1β单克隆抗体制备及其抗炎症反应活性
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作者 李璠 孙海凤 +5 位作者 孙萌 高雁怩 孙杨杨 张路捷 白娟 姜平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期890-899,共10页
IL-1β可介导炎症病理,阻断IL-1活性具有重要抗炎治疗作用。本研究通过构建猪IL-1β原核表达质粒,进行大肠杆菌表达和蛋白纯化,制备重组蛋白。采用细胞杂交瘤技术制备获得4株稳定分泌IL-1β单克隆抗体杂交瘤细胞株(1E2、2H3、5H3及7E7);... IL-1β可介导炎症病理,阻断IL-1活性具有重要抗炎治疗作用。本研究通过构建猪IL-1β原核表达质粒,进行大肠杆菌表达和蛋白纯化,制备重组蛋白。采用细胞杂交瘤技术制备获得4株稳定分泌IL-1β单克隆抗体杂交瘤细胞株(1E2、2H3、5H3及7E7);4株单抗腹水ELISA效价高达1∶1024000;5H3单抗识别的抗原表位为149 DLKREVVFCM 158;1E2、2H3和7E7单抗所识别的抗原表位为202 KRYPKRD 208。脂多糖(LPS)小鼠炎症模型抗炎试验结果显示,相对LPS对照组,IL-1β单抗处理组小鼠血清NO、TNF-α、IL-6和IL-1β含量及临床症状评分显著降低,表明4株单抗均有较好抗炎效果,其中1E2单抗抗炎作用最优,为猪IL-1β阻断药物研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 IL-1Β 单克隆抗体 炎症治疗
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猪流行性腹泻病毒N蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及单克隆抗体制备
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作者 柴茂 马震原 +8 位作者 杨海波 王淑娟 刘影 王东方 赵雪丽 王翠 谢彩华 王华俊 闫若潜 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期124-131,共8页
利用昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并制备单克隆抗体。构建PEDV N基因重组穿梭质粒pFastBac-N,转化至感受态细胞DH10Bac中获取重组杆粒Bacmid-N,将Bacmid-N转染至SF9昆虫细胞中制备重组蛋白。将重组蛋白... 利用昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并制备单克隆抗体。构建PEDV N基因重组穿梭质粒pFastBac-N,转化至感受态细胞DH10Bac中获取重组杆粒Bacmid-N,将Bacmid-N转染至SF9昆虫细胞中制备重组蛋白。将重组蛋白免疫小鼠,经融合、筛选、纯化出单克隆抗体,并测定单克隆抗体相关特性。获得重组杆状病毒rBV-N,获得大小为59 kDa重组N蛋白(rN),制备出抗N蛋白单克隆抗体3C8E3,该单克隆抗体为IgG1亚类,效价为1∶1.024×10^(5),效价高、特异性强、稳定性好,更具实用性。本研究为PEDV抗原/抗体诊断试剂盒、PEDV亚单位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒表达系统 猪流行腹泻病毒 单克隆抗体
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抗IgE单克隆抗体治疗过敏性哮喘的医药共管专家共识
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作者 中国药理学会药源性疾病学专业委员会呼吸疾病学分委会 广东省药学会 +4 位作者 广东省医学会变态反应学分会 王志鹏 朱政 魏理 李靖 《医药导报》 北大核心 2025年第8期1185-1198,共14页
目的进一步规范抗IgE单克隆抗体治疗过敏性哮喘的合理应用。方法通过系统检索和临床经验总结抗IgE单克隆抗体治疗管理的相关问题,按照证据分级进行质量评价,并运用德尔菲法就共识建议达成共识,形成《抗IgE单克隆抗体治疗过敏性哮喘的医... 目的进一步规范抗IgE单克隆抗体治疗过敏性哮喘的合理应用。方法通过系统检索和临床经验总结抗IgE单克隆抗体治疗管理的相关问题,按照证据分级进行质量评价,并运用德尔菲法就共识建议达成共识,形成《抗IgE单克隆抗体治疗过敏性哮喘的医药共管专家共识》(简称《共识》)。结果《共识》以奥马珠单抗为代表,形成了12条建议,涵盖了医药共管的工作模式、工作路径、分级诊疗和培训考核等内容,明确奥马珠单抗治疗过敏性哮喘医药共管的规范化管理路径。结论该《共识》为药师参与奥马珠单抗治疗过敏性哮喘的管理提供切实有效的建议,有助于提高患者的用药依从性和疾病预后,实现抗IgE单克隆抗体的医疗价值。 展开更多
关键词 过敏性哮喘 医药共管 抗IgE单克隆抗体 奥马珠单抗
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