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利用噬菌体展示技术筛选草鱼呼肠孤病毒VP39蛋白相互作用多肽
被引量:
1
1
作者
龙晨
徐宁
+1 位作者
谢雅晴
吕利群
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期859-865,共7页
VP39是草鱼呼肠孤Ⅲ型病毒(GCRV GenotypeⅢ,GCRV-Ⅲ)S9基因编码的蛋白,为研究VP39蛋白在GCRV-Ⅲ感染草鱼细胞过程中行使的生物学功能,将克隆VP39基因序列并构建原核表达载体pET32a-VP39,通过原核表达得到VP39-HIS融合蛋白;利用VP39蛋...
VP39是草鱼呼肠孤Ⅲ型病毒(GCRV GenotypeⅢ,GCRV-Ⅲ)S9基因编码的蛋白,为研究VP39蛋白在GCRV-Ⅲ感染草鱼细胞过程中行使的生物学功能,将克隆VP39基因序列并构建原核表达载体pET32a-VP39,通过原核表达得到VP39-HIS融合蛋白;利用VP39蛋白溶液免疫小鼠,制备鼠抗VP39多克隆抗体,通过Western Blot对抗体进行评估;利用制备的多克隆抗体探究GCRV-Ⅲ感染细胞过程中VP39蛋白表达动力学;利用噬菌体展示技术筛选与VP39蛋白特异性结合的多肽序列并进行分析。SDS-PAGE电泳结果显示,VP39-HIS融合蛋白可良好溶于PBS中,蛋白大小约为39 kD;Western Blot检测表明实验所制备的VP39多克隆抗体在1﹕10000稀释比例下,既能识别原核表达的VP39-HIS融合蛋白,也能识别GCRV-Ⅲ感染CIK细胞后表达的VP39蛋白,具有良好的效价与特异性;在病毒侵染过程中,VP39前期表达量较少,在中后期大量表达;噬菌体展示技术筛选出两条多肽与VP39蛋白有高度亲和性,经过在NCBI上比对后发现草鱼基因组中有7个基因与筛出的多肽具有同源性,表明其可能与VP39存在相互作用。研究制备了鼠抗VP39多克隆抗体,为GCRV-Ⅲ的免疫学检测方法提供了新的路径;结合多肽的筛选也为VP39在GCRV-Ⅲ侵染过程中参与的生物学功能研究奠定了基础。
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关键词
ⅲ型草鱼呼肠孤病毒
VP39蛋白
多克隆抗体
噬菌体展示技术
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职称材料
题名
利用噬菌体展示技术筛选草鱼呼肠孤病毒VP39蛋白相互作用多肽
被引量:
1
1
作者
龙晨
徐宁
谢雅晴
吕利群
机构
上海海洋大学国家水生动物病原库
上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源与利用重点实验室
出处
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期859-865,共7页
基金
国家现代农业产业技术体系项目(CARS-45)资助。
文摘
VP39是草鱼呼肠孤Ⅲ型病毒(GCRV GenotypeⅢ,GCRV-Ⅲ)S9基因编码的蛋白,为研究VP39蛋白在GCRV-Ⅲ感染草鱼细胞过程中行使的生物学功能,将克隆VP39基因序列并构建原核表达载体pET32a-VP39,通过原核表达得到VP39-HIS融合蛋白;利用VP39蛋白溶液免疫小鼠,制备鼠抗VP39多克隆抗体,通过Western Blot对抗体进行评估;利用制备的多克隆抗体探究GCRV-Ⅲ感染细胞过程中VP39蛋白表达动力学;利用噬菌体展示技术筛选与VP39蛋白特异性结合的多肽序列并进行分析。SDS-PAGE电泳结果显示,VP39-HIS融合蛋白可良好溶于PBS中,蛋白大小约为39 kD;Western Blot检测表明实验所制备的VP39多克隆抗体在1﹕10000稀释比例下,既能识别原核表达的VP39-HIS融合蛋白,也能识别GCRV-Ⅲ感染CIK细胞后表达的VP39蛋白,具有良好的效价与特异性;在病毒侵染过程中,VP39前期表达量较少,在中后期大量表达;噬菌体展示技术筛选出两条多肽与VP39蛋白有高度亲和性,经过在NCBI上比对后发现草鱼基因组中有7个基因与筛出的多肽具有同源性,表明其可能与VP39存在相互作用。研究制备了鼠抗VP39多克隆抗体,为GCRV-Ⅲ的免疫学检测方法提供了新的路径;结合多肽的筛选也为VP39在GCRV-Ⅲ侵染过程中参与的生物学功能研究奠定了基础。
关键词
ⅲ型草鱼呼肠孤病毒
VP39蛋白
多克隆抗体
噬菌体展示技术
Keywords
Grass carp reovirus type
ⅲ
VP39 protein
Polyclonal antibody
Phage display technology
分类号
S943 [农业科学—水产养殖]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
利用噬菌体展示技术筛选草鱼呼肠孤病毒VP39蛋白相互作用多肽
龙晨
徐宁
谢雅晴
吕利群
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
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