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转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ基因成肌细胞对骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型肌球蛋白重链及波形蛋白mRNA表达的影响
被引量：
6
1
作者
卫宏图
陈世益
+3 位作者
李云霞
陈疾忤
张鹏
李宏云
《中国运动医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期268-272,共5页
目的:观察转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ(HumanInsulin -likeGrowthFactor-Ⅰ,hIGF -Ⅰ)基因成肌细胞回输小鼠骨骼肌钝挫伤局部后,对小鼠骨骼肌愈合过程中Ⅱb型肌球蛋白重链(MyosinHeavyChain -Ⅱb ,MHC -Ⅱb)及波形蛋白(Vimentin)mRNA表...
目的:观察转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ(HumanInsulin -likeGrowthFactor-Ⅰ,hIGF -Ⅰ)基因成肌细胞回输小鼠骨骼肌钝挫伤局部后,对小鼠骨骼肌愈合过程中Ⅱb型肌球蛋白重链(MyosinHeavyChain -Ⅱb ,MHC -Ⅱb)及波形蛋白(Vimentin)mRNA表达的影响。方法:将90只7～12周雄性C3H小鼠右下肢腓肠肌中段内侧实施急性钝挫伤后,随机分为自然愈合组、单纯成肌细胞注射组和转基因成肌细胞注射组。挫伤后第3天,对单纯成肌细胞注射组、转基因成肌细胞注射组损伤局部分别注射等量单纯成肌细胞和转基因成肌细胞,并于损伤后第1、5、10、2 0、30天取材。检测不同时间点MHC -Ⅱb和VimentinmRNA表达水平,观察比较各组骨骼肌修复情况。结果:(1)在急性骨骼肌钝挫伤修复期,3组小鼠骨骼肌MHC -ⅡbmRNA均明显升高,第2 0天达到峰值。转基因成肌细胞注射组MHC -ⅡbmRNA表达水平最高,其次为单纯成肌细胞注射组。(2 )急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,转基因成肌细胞注射组VimentinmRNA的表达水平始终在3组中表达最低。结论:急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,注射转基因成肌细胞能提高损伤后MHC -IIbmR NA表达水平,促进肌纤维的增生,加速骨骼肌愈合进程。同时,损伤局部注射转hIGF -Ⅰ基因的成肌细胞后,使得损伤局部VimentinmRNA表达低于另两组。
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关键词
转人类胰岛素样生长因子-1
ⅱb型肌球蛋白重链
波形
蛋白
成肌细胞
修复
胰岛素样生长因子-Ⅰ
转基因成肌细胞
骨骼肌钝挫伤
肌球蛋白
重
链
MRNA表达
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职称材料
人γ干扰素基因转染成肌细胞在治疗骨骼肌损伤中的应用
2
作者
陈疾忤
陈世益
+1 位作者
李宏云
尚西亮
《中国运动医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期298-303,共6页
目的：构建转人γ干扰素（human interferonγ,hIFNγ）基因的成肌细胞,探讨hIFNγ对小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程的影响。方法：①应用基因重组技术,将hIFNγ基因克隆到pEGFP-C2真核表达载体中,以酶切和测序方法鉴定重组质粒pEGFP-C2-...
目的：构建转人γ干扰素（human interferonγ,hIFNγ）基因的成肌细胞,探讨hIFNγ对小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程的影响。方法：①应用基因重组技术,将hIFNγ基因克隆到pEGFP-C2真核表达载体中,以酶切和测序方法鉴定重组质粒pEGFP-C2-hIFNγ的正确性;②经脂质体介导转染C2C12成肌细胞,用RT-PCR和Western Blot法检测转基因细胞的hIFNγ表达。③64只7-12周雄性C3H小鼠,制作右侧腓肠肌钝挫伤动物模型,随机分成4组,即A组（注射hIFNγ）,B组（注射转hIFNγ的C2C12细胞）,C组（注射空白成肌细胞）,D组（未干预）。挫伤后第10天,A、B、C组的小鼠,于腓肠肌损伤局部注射不同药物,D组不进行干预以作为自然愈合对照。分别于伤后7、14、28、42天,从各组中随机抽取4只小鼠进行右侧腓肠肌损伤部位取材,以荧光定量PCR和免疫荧光化学染色检测不同时间点波形蛋白（Vimentin）及Ⅱb型肌球蛋白重链（MHC-Ⅱb）的表达。结果：①酶切和测序结果均证实成功构建了hIFNγ真核表达质粒pEGFP-C2-hIFNγ,RT-PCR和Western Blot检测到转染细胞中hIFNγ基因的表达;②干预后各时间点,A、B组小鼠损伤骨骼肌Vimentin表达较C组和D组降低;伤后42天,B组损伤骨骼肌Vimentin表达低于A组,其余时间点A、B两组间无显著差异;③各组MHC-Ⅱb表达无明显差异。结论：①成功制备了含hIFNγ基因的真核表达质粒,转染后获得了高效表达hIFNγ的鼠C2C12成肌细胞;②采用转染hIFNγ的C2C12成肌细胞局部注射,可以抑制骨骼肌纤维化标志产物波形蛋白的表达,与注射外源性IFNγ的作用近似。③局部注射转hIFNγ基因的成肌细胞或外源性IFNγ,未发现对骨骼肌再生标志产物MHC-Ⅱb表达有明显影响。
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关键词
人γ干扰素
成肌细胞
转染
ⅱb型肌球蛋白重链
波形
蛋白
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职称材料
题名
转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ基因成肌细胞对骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型肌球蛋白重链及波形蛋白mRNA表达的影响
被引量：
6
1
作者
卫宏图
陈世益
李云霞
陈疾忤
张鹏
李宏云
机构
复旦大学附属华山医院运动医学科
出处
《中国运动医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期268-272,共5页
基金
国家自然科学基金 (NSFC30 170 4 4 6 )
上海市"医学百人计划"(97BR0 17)项目资助。
文摘
目的:观察转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ(HumanInsulin -likeGrowthFactor-Ⅰ,hIGF -Ⅰ)基因成肌细胞回输小鼠骨骼肌钝挫伤局部后,对小鼠骨骼肌愈合过程中Ⅱb型肌球蛋白重链(MyosinHeavyChain -Ⅱb ,MHC -Ⅱb)及波形蛋白(Vimentin)mRNA表达的影响。方法:将90只7～12周雄性C3H小鼠右下肢腓肠肌中段内侧实施急性钝挫伤后,随机分为自然愈合组、单纯成肌细胞注射组和转基因成肌细胞注射组。挫伤后第3天,对单纯成肌细胞注射组、转基因成肌细胞注射组损伤局部分别注射等量单纯成肌细胞和转基因成肌细胞,并于损伤后第1、5、10、2 0、30天取材。检测不同时间点MHC -Ⅱb和VimentinmRNA表达水平,观察比较各组骨骼肌修复情况。结果:(1)在急性骨骼肌钝挫伤修复期,3组小鼠骨骼肌MHC -ⅡbmRNA均明显升高,第2 0天达到峰值。转基因成肌细胞注射组MHC -ⅡbmRNA表达水平最高,其次为单纯成肌细胞注射组。(2 )急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,转基因成肌细胞注射组VimentinmRNA的表达水平始终在3组中表达最低。结论:急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,注射转基因成肌细胞能提高损伤后MHC -IIbmR NA表达水平,促进肌纤维的增生,加速骨骼肌愈合进程。同时,损伤局部注射转hIGF -Ⅰ基因的成肌细胞后,使得损伤局部VimentinmRNA表达低于另两组。
关键词
转人类胰岛素样生长因子-1
ⅱb型肌球蛋白重链
波形
蛋白
成肌细胞
修复
胰岛素样生长因子-Ⅰ
转基因成肌细胞
骨骼肌钝挫伤
肌球蛋白
重
链
MRNA表达
Keywords
hlGF- Ⅰ , MHC-
ⅱ
b
, vimentin, myo
b
last, injury
分类号
R87 [医药卫生—运动医学]
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职称材料
题名
人γ干扰素基因转染成肌细胞在治疗骨骼肌损伤中的应用
2
作者
陈疾忤
陈世益
李宏云
尚西亮
机构
复旦大学运动医学中心华山医院运动医学与关节镜外科
出处
《中国运动医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第3期298-303,共6页
基金
上海市体育局十一五科技攻关计划资助(06JT017)
文摘
目的：构建转人γ干扰素（human interferonγ,hIFNγ）基因的成肌细胞,探讨hIFNγ对小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程的影响。方法：①应用基因重组技术,将hIFNγ基因克隆到pEGFP-C2真核表达载体中,以酶切和测序方法鉴定重组质粒pEGFP-C2-hIFNγ的正确性;②经脂质体介导转染C2C12成肌细胞,用RT-PCR和Western Blot法检测转基因细胞的hIFNγ表达。③64只7-12周雄性C3H小鼠,制作右侧腓肠肌钝挫伤动物模型,随机分成4组,即A组（注射hIFNγ）,B组（注射转hIFNγ的C2C12细胞）,C组（注射空白成肌细胞）,D组（未干预）。挫伤后第10天,A、B、C组的小鼠,于腓肠肌损伤局部注射不同药物,D组不进行干预以作为自然愈合对照。分别于伤后7、14、28、42天,从各组中随机抽取4只小鼠进行右侧腓肠肌损伤部位取材,以荧光定量PCR和免疫荧光化学染色检测不同时间点波形蛋白（Vimentin）及Ⅱb型肌球蛋白重链（MHC-Ⅱb）的表达。结果：①酶切和测序结果均证实成功构建了hIFNγ真核表达质粒pEGFP-C2-hIFNγ,RT-PCR和Western Blot检测到转染细胞中hIFNγ基因的表达;②干预后各时间点,A、B组小鼠损伤骨骼肌Vimentin表达较C组和D组降低;伤后42天,B组损伤骨骼肌Vimentin表达低于A组,其余时间点A、B两组间无显著差异;③各组MHC-Ⅱb表达无明显差异。结论：①成功制备了含hIFNγ基因的真核表达质粒,转染后获得了高效表达hIFNγ的鼠C2C12成肌细胞;②采用转染hIFNγ的C2C12成肌细胞局部注射,可以抑制骨骼肌纤维化标志产物波形蛋白的表达,与注射外源性IFNγ的作用近似。③局部注射转hIFNγ基因的成肌细胞或外源性IFNγ,未发现对骨骼肌再生标志产物MHC-Ⅱb表达有明显影响。
关键词
人γ干扰素
成肌细胞
转染
ⅱb型肌球蛋白重链
波形
蛋白
Keywords
human interferon γ, myo
b
lasts, transfection, MHC-
ⅱ
b
, vimentin
分类号
R685 [医药卫生—骨科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ基因成肌细胞对骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型肌球蛋白重链及波形蛋白mRNA表达的影响
卫宏图
陈世益
李云霞
陈疾忤
张鹏
李宏云
《中国运动医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人γ干扰素基因转染成肌细胞在治疗骨骼肌损伤中的应用
陈疾忤
陈世益
李宏云
尚西亮
《中国运动医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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