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淫羊藿苷通过miR-29c/COL2A1轴改善骨关节炎软骨细胞功能
1
作者
贺自克
王上增
《重庆医科大学学报》
北大核心
2025年第9期1271-1280,共10页
目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞功能的影响及其机制。方法:用不同浓度(0.1、0.5、1.0、5.0和10.0µmol/L)ICA处理软骨细胞后,采用噻唑蓝(methylthiazolydiphenyl-tetrazolium,MTT)法检测软...
目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞功能的影响及其机制。方法:用不同浓度(0.1、0.5、1.0、5.0和10.0µmol/L)ICA处理软骨细胞后,采用噻唑蓝(methylthiazolydiphenyl-tetrazolium,MTT)法检测软骨细胞活力,选择最适浓度的ICA进行后续实验。利用白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β;10 ng/mL)刺激软骨细胞24 h构建OA细胞模型,用最适浓度1µmol/L ICA处理细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测微小RNA-29c(microRNA-29c,miR-29c)的表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测Ⅱ型胶原α1链(collagen typeⅡalpha 1 chain,COL2A1)蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平。生物信息学网站预测miR-29c的靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-29c与COL2A1之间的靶向结合作用。通过挽救实验阐明ICA对OA炎症反应及细胞凋亡的影响及作用机制。结果:与Control组相比,IL-1β组软骨细胞上清液中MMP-3(P<0.001)和TNF-α(P<0.001)含量明显增加,COL2A1的表达水平明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显增加(P<0.001);与IL-1β组相比,ICA处理组中软骨细胞上清液中MMP-3(P=0.001、P<0.001)和TNF-α(P<0.001、P<0.001)含量明显减少,COL2A1的表达水平明显升高(P<0.001、P<0.001),细胞凋亡率明显降低(P<0.001、P<0.001)。与Control组相比,IL-1β组软骨细胞中miR-29c表达水平明显上调(P<0.001),而ICA处理则明显降低miR-29c表达水平(P<0.001)。与miR-NC组相比,miR-29c mimic组中软骨细胞上清液中MMP-3(P<0.001)和TNF-α(P<0.001)含量明显增加,COL2A1的表达水平显著降低(P=0.001),细胞凋亡率显著增加(P<0.001),而miR-29c inhibitor组则得到相反的结果。Tar‑getScan7.1数据库显示miR-29c与COL2A1存在结合位点。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-29c mimic明显抑制了野生型COL2A1载体的荧光素酶活性(P<0.001),而突变型的荧光素酶活性不受影响(P=0.152)。敲低COL2A1可部分逆转下调miR29c对软骨细胞中MMP-3(P<0.001)和TNF-α(P<0.001)分泌量,COL2A1蛋白表达水平(P<0.001)以及细胞凋亡率(P<0.001)的影响。ICA处理可减轻过表达miR-29c对软骨细胞中MMP-3(P<0.001)和TNF-α(P<0.001)分泌量、COL2A1蛋白表达水平(P=0.009)以及细胞凋亡率(P<0.001)的影响。结论:ICA能减轻IL-1β诱导的软骨细胞炎症因子的分泌和细胞凋亡的发生,其作用机制可能与miR-29c/COL2A1轴有关。
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关键词
骨关节炎
淫羊藿苷
微小RNA-29c
ⅱ型胶原α1链
细胞凋亡
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职称材料
题名
淫羊藿苷通过miR-29c/COL2A1轴改善骨关节炎软骨细胞功能
1
作者
贺自克
王上增
机构
河南省中医院关节病科
出处
《重庆医科大学学报》
北大核心
2025年第9期1271-1280,共10页
基金
河南省中医药科学研究专项课题资助项目(编号:2021JDZX2042)。
文摘
目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞功能的影响及其机制。方法:用不同浓度(0.1、0.5、1.0、5.0和10.0µmol/L)ICA处理软骨细胞后,采用噻唑蓝(methylthiazolydiphenyl-tetrazolium,MTT)法检测软骨细胞活力,选择最适浓度的ICA进行后续实验。利用白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β;10 ng/mL)刺激软骨细胞24 h构建OA细胞模型,用最适浓度1µmol/L ICA处理细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测微小RNA-29c(microRNA-29c,miR-29c)的表达水平,蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测Ⅱ型胶原α1链(collagen typeⅡalpha 1 chain,COL2A1)蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平。生物信息学网站预测miR-29c的靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-29c与COL2A1之间的靶向结合作用。通过挽救实验阐明ICA对OA炎症反应及细胞凋亡的影响及作用机制。结果:与Control组相比,IL-1β组软骨细胞上清液中MMP-3(P<0.001)和TNF-α(P<0.001)含量明显增加,COL2A1的表达水平明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显增加(P<0.001);与IL-1β组相比,ICA处理组中软骨细胞上清液中MMP-3(P=0.001、P<0.001)和TNF-α(P<0.001、P<0.001)含量明显减少,COL2A1的表达水平明显升高(P<0.001、P<0.001),细胞凋亡率明显降低(P<0.001、P<0.001)。与Control组相比,IL-1β组软骨细胞中miR-29c表达水平明显上调(P<0.001),而ICA处理则明显降低miR-29c表达水平(P<0.001)。与miR-NC组相比,miR-29c mimic组中软骨细胞上清液中MMP-3(P<0.001)和TNF-α(P<0.001)含量明显增加,COL2A1的表达水平显著降低(P=0.001),细胞凋亡率显著增加(P<0.001),而miR-29c inhibitor组则得到相反的结果。Tar‑getScan7.1数据库显示miR-29c与COL2A1存在结合位点。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-29c mimic明显抑制了野生型COL2A1载体的荧光素酶活性(P<0.001),而突变型的荧光素酶活性不受影响(P=0.152)。敲低COL2A1可部分逆转下调miR29c对软骨细胞中MMP-3(P<0.001)和TNF-α(P<0.001)分泌量,COL2A1蛋白表达水平(P<0.001)以及细胞凋亡率(P<0.001)的影响。ICA处理可减轻过表达miR-29c对软骨细胞中MMP-3(P<0.001)和TNF-α(P<0.001)分泌量、COL2A1蛋白表达水平(P=0.009)以及细胞凋亡率(P<0.001)的影响。结论:ICA能减轻IL-1β诱导的软骨细胞炎症因子的分泌和细胞凋亡的发生,其作用机制可能与miR-29c/COL2A1轴有关。
关键词
骨关节炎
淫羊藿苷
微小RNA-29c
ⅱ型胶原α1链
细胞凋亡
Keywords
osteoarthritis
icariin
microRNA-29cmiR-29c
collagen type
ⅱ
alpha
1
chain COL2A
1
cell apoptosis
分类号
R96 [医药卫生—药理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
淫羊藿苷通过miR-29c/COL2A1轴改善骨关节炎软骨细胞功能
贺自克
王上增
《重庆医科大学学报》
北大核心
2025
0
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