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Ⅱ型葡萄糖异构酶N端随机卷曲序列的嫁接效应
1
作者
邓辉
王广林
+1 位作者
陈乃东
陈乃富
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期953-961,共9页
木糖/葡萄糖异构酶(xylose/glucose isomerase,XIase/GIase)是果葡糖浆生产的关键用酶,也是重要的模式酶,其组成域的结构和功能一直是研究的热点。本研究采用重叠PCR技术将源自超嗜热菌Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus的Ⅱ型...
木糖/葡萄糖异构酶(xylose/glucose isomerase,XIase/GIase)是果葡糖浆生产的关键用酶,也是重要的模式酶,其组成域的结构和功能一直是研究的热点。本研究采用重叠PCR技术将源自超嗜热菌Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus的Ⅱ型葡萄糖异构酶(TTGIase)N端31个氨基酸序列融合到嗜热菌Thermobifida fusca的I型葡萄糖异构酶(TFGIase)的N端,构建了融合蛋白NTFGIase。发酵实验结果显示,在相同培养和诱导条件下,N-TFGIase菌体单位浓度产酶量比TFGIase高出约40%;酶学检测结果显示,N-TFGIase比酶活较TFGIase高出26%,最适温度较TFGIase高出5℃,75℃下的半衰期较TFGIase延长30%,最适p H较TFGIase降低1.0。序列分析表明,TTGIase N端序列的mRNA二级结构不形成有阻碍的颈环结构,提高了融合蛋白的表达效率;其含有的31个氨基酸残基的疏水性指数均小于0,利于融合蛋白的初始折叠和包装;其含有的酸性氨基酸残基比例约为碱性氨基酸残基比例的两倍,减小了酸性介质环境对融合蛋白分子表面的影响。实验结果提示,将来自超嗜热菌的Ⅱ型XIase/GIase的N端随机卷曲序列融合到I型XIase/GIase N端,能够提高后者的热稳定性、酸稳定性和表达效率等酶学性质,与我们的预测结果相一致,这为酶的分子改造和生产应用提供了参考。
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关键词
融合蛋白
ⅱ型木糖/葡萄糖异构酶n端序列
嫁接效应
序列
分析
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职称材料
题名
Ⅱ型葡萄糖异构酶N端随机卷曲序列的嫁接效应
1
作者
邓辉
王广林
陈乃东
陈乃富
机构
皖西学院生物与制药工程学院
中科院云计算中心公共安全研究院
六安市蛋白质分离与纯化研究中心
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期953-961,共9页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划
No.2012AA021500)
+2 种基金
国家自然科学基金(No.81274021
No.81573536)
皖西学院校级自然科学基金(No.WXZR201616)资助~~
文摘
木糖/葡萄糖异构酶(xylose/glucose isomerase,XIase/GIase)是果葡糖浆生产的关键用酶,也是重要的模式酶,其组成域的结构和功能一直是研究的热点。本研究采用重叠PCR技术将源自超嗜热菌Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus的Ⅱ型葡萄糖异构酶(TTGIase)N端31个氨基酸序列融合到嗜热菌Thermobifida fusca的I型葡萄糖异构酶(TFGIase)的N端,构建了融合蛋白NTFGIase。发酵实验结果显示,在相同培养和诱导条件下,N-TFGIase菌体单位浓度产酶量比TFGIase高出约40%;酶学检测结果显示,N-TFGIase比酶活较TFGIase高出26%,最适温度较TFGIase高出5℃,75℃下的半衰期较TFGIase延长30%,最适p H较TFGIase降低1.0。序列分析表明,TTGIase N端序列的mRNA二级结构不形成有阻碍的颈环结构,提高了融合蛋白的表达效率;其含有的31个氨基酸残基的疏水性指数均小于0,利于融合蛋白的初始折叠和包装;其含有的酸性氨基酸残基比例约为碱性氨基酸残基比例的两倍,减小了酸性介质环境对融合蛋白分子表面的影响。实验结果提示,将来自超嗜热菌的Ⅱ型XIase/GIase的N端随机卷曲序列融合到I型XIase/GIase N端,能够提高后者的热稳定性、酸稳定性和表达效率等酶学性质,与我们的预测结果相一致,这为酶的分子改造和生产应用提供了参考。
关键词
融合蛋白
ⅱ型木糖/葡萄糖异构酶n端序列
嫁接效应
序列
分析
Keywords
fusio
n
protei
n
n
-termi
n
al seque
n
ce of class
ⅱ
xylose/glucose isomerase
grafti
n
g effects
seque
n
ce a
n
alysis
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
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1
Ⅱ型葡萄糖异构酶N端随机卷曲序列的嫁接效应
邓辉
王广林
陈乃东
陈乃富
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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