猪Ⅱ型圆环病毒Cap基因重组腺病毒表达载体的构建 被引量：6

1

作者 马友记 柳纪省 +3 位作者 赵兴绪 李志勇 殷相平 李宝玉 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2005年第6期713-717,共5页

通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)衣壳蛋白Cap基因的重组腺病毒表达载体。首先将Cap基因亚克隆连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV上,再将重组质粒pAdTrack-CMV／Cap用Pme Ⅰ线性化后电转化携带有腺病毒骨架... 通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)衣壳蛋白Cap基因的重组腺病毒表达载体。首先将Cap基因亚克隆连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV上,再将重组质粒pAdTrack-CMV／Cap用Pme Ⅰ线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞,经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAdEasy-Cap。为进一步研究PCV2腺病毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪ⅱ型圆环病毒 Cap基因 重组腺病毒 同源重组

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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒美洲株与猪Ⅱ型圆环病毒混合感染仔猪的血液病理学研究 被引量：6

2

作者 娄忠子 王天户 +1 位作者 杨宪勇 刘思当 《西南农业学报》 CSCD 2008年第4期1120-1125,共6页

选取3周龄左右早期断奶仔猪单独感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSVATCCVR-2332株）并与猪Ⅱ型圆环病毒（PCV2）人工共同按种，在不同时期取外周血，进行外周血常规生理指标和血液生化指标的检测，比较不同按种组中各指标的差异性... 选取3周龄左右早期断奶仔猪单独感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSVATCCVR-2332株）并与猪Ⅱ型圆环病毒（PCV2）人工共同按种，在不同时期取外周血，进行外周血常规生理指标和血液生化指标的检测，比较不同按种组中各指标的差异性。外周血淋巴细胞采用碘化丙啶（PI）单染色法染色，借助流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果表明，两病毒感染对外周血各种指标都有一定的影响，WBC、GPT、GOT、LDH、GLO及TBIL感染组高于对照组；RBC、HGB、PLT及ALB感染组低于对照组；PRRSV单独感染以及与PCV2在混合感染的变化规律基本相同，但混合感染多项指标的变化幅度更大；MCV及TP无明显差异；两病毒接种组外周血淋巴细胞的凋亡比率显著高于对照组，攻毒后2～3d达到高峰，此后逐渐下降并趋于恢复，混合感染组的凋亡比率又高于单独感染组。文章就这些病理现象的发生及影响进行了分析讨论。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 猪ⅱ型圆环病毒 外周血生理生化指标 淋巴细胞凋亡

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猪Ⅱ型圆环病毒浙江分离株全基因组的克隆与序列分析 被引量：4

3

作者 张朝政 由振强 +1 位作者 卢觅佳 于涟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期777-782,共6页

越来越多的证据显示,猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)是断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原之一.本研究克隆了两株PCV2浙江分离株(JS2003和Zhuji2003)的全基因并对其进行测序.序列分析结果表明,这两个基因组全长均为1767nt,与GenBank中... 越来越多的证据显示,猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)是断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原之一.本研究克隆了两株PCV2浙江分离株(JS2003和Zhuji2003)的全基因并对其进行测序.序列分析结果表明,这两个基因组全长均为1767nt,与GenBank中的其它24株PCV2相比,核苷酸同源性为94.8%～99.8%,而与4株PCV1的核苷酸同源性仅为76.5%～78.0%.虽然PCV2基因从总体上来说相对稳定,但在不同地区分离到的PCV2中确实存在一定的基因差异. 展开更多

关键词 猪ⅱ型圆环病毒(PCV2) 断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS) 序列分析

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猪Ⅱ型圆环病毒ORF1、ORF2基因串联重组腺病毒的构建及其免疫效果 被引量：2

4

作者 祝卫国 王旭荣 +4 位作者 宋长绪 杨增岐 王建华 张春红 黄忠 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第3期75-79,84,共6页

【目的】构建含PCV2ORF1和ORF2基因的串联重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价。【方法】扩增PCV2的ORF1和ORF2基因,串联克隆入pMD18-T载体后亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后与骨架载体pAdeasy-1在... 【目的】构建含PCV2ORF1和ORF2基因的串联重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价。【方法】扩增PCV2的ORF1和ORF2基因,串联克隆入pMD18-T载体后亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后与骨架载体pAdeasy-1在细菌BJ5183内完成重组,获得重组腺病毒质粒。将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶线性化后转染293细胞,包装成重组腺病毒,然后从致细胞病变、荧光检测及PCR检测等方面对该重组腺病毒进行了鉴定。以该重组腺病毒免疫小鼠,对免疫鼠血清中PCV2的特异性抗体进行检测。【结果】得到了PCV2的ORF1和ORF2基因,pMD18-ORF1-ORF2和pAdCMV-ORF1-ORF2载体构建成功,获得了含有PCV2ORF1和ORF2基因的重组腺病毒。该重组腺病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中可检测到PCV2的特异性抗体。【结论】成功构建了含PCV2ORF1和ORF2基因的重组腺病毒,此腺病毒可诱导机体产生针对PCV2的特异性抗体。 展开更多

关键词 猪ⅱ型圆环病毒 ORF1 ORF2基因 重组腺病毒 免疫效果

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猪Ⅱ型圆环病毒-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建(初报) 被引量：2

5

作者 王印 郭万柱 +3 位作者 王新 徐志文 朱玲 王小玉 《四川农业大学学报》 CSCD 2006年第2期125-129,共5页

根据GenBank发表的PCV2序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2 ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF... 根据GenBank发表的PCV2序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2 ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF2与伪狂犬病毒SA215株基因组共转染真核ST细胞,通过空斑纯化得到了表达猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因和绿色荧光蛋白基因的重组伪狂犬病毒SA215(C)。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的ORF2基因蛋白和绿色荧光蛋白。并且重组病毒及亲本株在同一细胞上的增殖滴度基本相同,表明EGFP和PCV2 ORF2基因的插入不影响PRV SA215的增殖。该重组病毒可作为猪Ⅱ型圆环病毒和伪狂犬病毒候选疫苗毒株。 展开更多

关键词 猪ⅱ型圆环病毒 ORF2基因 伪狂犬病毒 重组病毒

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猪Ⅱ型圆环病毒广东分离株的全基因组克隆及序列分析 被引量：1

6

作者 王贵平 蒋智勇 +4 位作者 宋长绪 高向阳 赵亚华 林志雄 朱道中 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期248-251,共4页

根据GenBank中猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV_2 )基因序列 ,设计两对特异性引物。将PCV_2广东分离株 (GD1株 )用PK15细胞系培养 ,从细胞培养物中提取病毒总DNA并以之为模板 ,用PCR方法分段扩增病毒全基因组 ,分别克隆到pMD18_T载体 ,对阳性质粒... 根据GenBank中猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV_2 )基因序列 ,设计两对特异性引物。将PCV_2广东分离株 (GD1株 )用PK15细胞系培养 ,从细胞培养物中提取病毒总DNA并以之为模板 ,用PCR方法分段扩增病毒全基因组 ,分别克隆到pMD18_T载体 ,对阳性质粒进行序列测定。用DNAstar对序列进行拼接 ,得到PCV_2GD1株基因组全序列 ,全长为 176 7个碱基 ,包涵 2个开放阅读杠 (ORF1和ORF2 ) ,分别编码与复制相关的Rep蛋白和结构蛋白Cap。通过BLAST对所测GD1株核苷核酸序列早国内外已登录GenBank中的PCV_2病毒核苷酸序更进行同源性比较 ,与PCV_2参考毒株的核苷酸同源性介于 94 4 %～ 99 7%之间 ,与德国株PCV_2 (AF2 0 1897)的同源性最高 ,为 99 7% ;与猪Ⅰ型圆环病毒 (PCV_1)参考株 (AY184 2 87)的同源性仅为 70 %。 展开更多

关键词 猪ⅱ型圆环病毒(PCV-2) 基因组 克隆 序列分析

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猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因的克隆及其序列分析 被引量：1

7

作者 蒋智勇 宋长绪 +2 位作者 王贵平 高向阳 赵亚华 《动物医学进展》 CSCD 2005年第3期63-66,共4页

根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR从疑似断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出ORF2基因(702 bp).将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2并对其测序,结果... 根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,应用PCR从疑似断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出ORF2基因(702 bp).将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2并对其测序,结果表明所克隆的ORF2基因与德国分离株AF201897核苷酸序列同源性为99.5%.与其它PCV-2的ORF2核苷酸序列同源性在92.1%～99.9%之间,推导的氨基酸序列同源性在90.2%～99.5%之间. 展开更多

关键词 ORF2 猪ⅱ型圆环病毒 同源性 PCV 病料 多系统消耗综合征 猪圆环病毒 基因 克隆 核苷酸序列

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猪Ⅱ型圆环病毒ORF1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1

8

作者 蒋智勇 宋长绪 +2 位作者 王贵平 高向阳 赵亚华 《动物医学进展》 CSCD 2004年第5期59-62,共4页

根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)0RF1基因序列,设计合成了一对引物,对PCV2广东株(GD)ORF1基因进行PCR扩增,将扩增出的ORF1基因(942 bp)克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒,命名为pMD-ORF1。将ORF1的KpnⅠ和XbaⅠ双酶切产物插入原核... 根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)0RF1基因序列,设计合成了一对引物,对PCV2广东株(GD)ORF1基因进行PCR扩增,将扩增出的ORF1基因(942 bp)克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒,命名为pMD-ORF1。将ORF1的KpnⅠ和XbaⅠ双酶切产物插入原核表达载体pBAD／gⅢC,得到重组子,命名为pBAD／gⅢ-ORF1。测序分析表明克隆的ORF1与德国分离株AF201897核苷酸序列同源性高达99.5％。与其它PCV2核苷酸序列同源性为92.1％-99.9％,推导的氨基酸序列同源性为90.2％-99.5％。同时,测序结果表明所克隆的ORF1准确插入pBAD／gⅢC的多克隆位点,未改变读码框架。用L-Arabi-nose进行诱导表达,收集茵液进行SDS-PAGE和Western blotting分析,显示PCV2 ORF1在pBAD／gⅢC中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子量约为4.1万。 展开更多

关键词 猪ⅱ型圆环病毒 ORF1基因 基因克隆 大肠杆菌 基因表达

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鄂西北地区猪Ⅱ型圆环病毒血清学调查 被引量：3

9

作者 熊江林 周华林 +3 位作者 李军 黄霄 谭华祥 周健 《陕西农业科学》 2009年第1期27-28,共2页

2007年4月至2008年4月对鄂西北地区47个猪场的342份血清进行了猪Ⅱ型圆环病毒(Porcine circovirus,PCV-2)抗体检测。结果表明:血清抗体阳性率为80.4%,阴性率为19.5%,鄂西北地区猪场圆环病毒流行面广,感染情况严重。该调查结果为鄂西北地... 2007年4月至2008年4月对鄂西北地区47个猪场的342份血清进行了猪Ⅱ型圆环病毒(Porcine circovirus,PCV-2)抗体检测。结果表明:血清抗体阳性率为80.4%,阴性率为19.5%,鄂西北地区猪场圆环病毒流行面广,感染情况严重。该调查结果为鄂西北地区PCV-2的临床诊断、防治和研究提供了基础数据。 展开更多

关键词 鄂西北 猪ⅱ型圆环病毒 调查

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河北省猪Ⅱ型圆环病毒的血清学调查 被引量：4

10

作者 李鹏 李凯伦 +2 位作者 王建军 逯纪成 崔玉苍 《畜牧兽医科技信息》 2004年第8期50-51,共2页

关键词 河北 猪 ⅱ型圆环病毒 血清学

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检测猪伪狂犬病毒和猪Ⅱ型圆环病毒复合PCR方法的建立及其应用 被引量：2

11

作者 刘矿 董加才 +5 位作者 王江辉 邝爱丽 彭志峰 孙彦婷 陈陆 王川庆 《上海畜牧兽医通讯》 2008年第1期30-31,共2页

关键词 猪ⅱ型圆环病毒 猪伪狂犬病毒 复合PCR方法 猪断奶后多系统衰竭综合征 增生性坏死性肺炎 应用 检测 伪狂犬病病毒

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猪Ⅱ型圆环病毒河南株分离鉴定及其ORF2基因序列分析

12

作者 王江辉 陈陆 +7 位作者 吴青 刘红英 杨霞 彭志峰 孙彦婷 邝爱丽 王宏魁 王川庆 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第5期24-26,共3页

关键词 猪ⅱ型圆环病毒 ORF2基因 基因序列分析 河南地区 分离鉴定 断奶猪多系统衰竭综合征 猪皮炎肾病综合征 PCV2

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Ⅱ型圆环病毒山东泰安株的分离鉴定及系统进化分析

13

作者 娄忠子 王天户 +1 位作者 董李民 刘思当 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第4期509-514,共6页

采用双抗体夹心ELISA方法和PCR技术对来自山东泰安的病猪组织病料进行猪Ⅱ型圆环病毒（PCV2）检测。将检测为阳性的病料悬液接种无PCV1污染的PK-15细胞进行病毒分离,获得一株PCV2,命名为猪Ⅱ型圆环病毒山东泰安株（PCV2 sdt）。间接免... 采用双抗体夹心ELISA方法和PCR技术对来自山东泰安的病猪组织病料进行猪Ⅱ型圆环病毒（PCV2）检测。将检测为阳性的病料悬液接种无PCV1污染的PK-15细胞进行病毒分离,获得一株PCV2,命名为猪Ⅱ型圆环病毒山东泰安株（PCV2 sdt）。间接免疫荧光试验（IFA）检测可见接种病毒细胞中散在特异性荧光。提取全基因组为模板,进行病毒基因组1号开放阅读框（ORF1）、2号开放阅读框（ORF2）和全基因组序列扩增,得到长度分别约为999bp、749bp和1767bp左右的产物条带。将产物克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pMD18-T-ORF1、pMD18-T-ORF2和pMD18-T-PCV2。测序结果显示,所分离病毒的ORF1、ORF2和全基因组序列长度分别为945bp、702bp和1767bp。DNAStar生物学软件分析发现,PCV2分离毒株与参考株的全基因组同源性介于95.4%-98.8%之间,ORF1的同源性介于97.0%-98.8%,ORF2的同源性略低,介于91.9%-98.4%之间。 展开更多

关键词 猪ⅱ型圆环病毒 双抗体夹心ELISA PCR 病毒分离 间接免疫荧光试验

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猪Ⅱ型圆环病毒ORF2与猪GM-CSF基因重组腺病毒共表达及免疫效果分析

14

作者 陈降华 刘忠华 李文平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期124-128,共5页

旨在构建含融合基因pGMCSF-ORF2的重组腺病毒,并对其表达水平和免疫效果进行分析。运用PCR方法扩增PCV2ORF2和pGM-CSF基因,拼接后克隆入pMD18-T载体,然后再亚克隆入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后电转化... 旨在构建含融合基因pGMCSF-ORF2的重组腺病毒,并对其表达水平和免疫效果进行分析。运用PCR方法扩增PCV2ORF2和pGM-CSF基因,拼接后克隆入pMD18-T载体,然后再亚克隆入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后电转化含腺病毒基因组(AdEasy-1)的大肠杆菌细胞BJ5183-Ad-1,成功获得了重组腺病毒DNA。将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD293细胞,经过病毒基因组的PCR和转录水平的RT-PCR及Westernblot等方面对融合蛋白的表达进行了鉴定。以该病毒免疫Babl/c小白鼠,对免疫小鼠血清中PCV2抗体进行检测。结果显示,获得了pGMCSF-ORF2重组基因,重组腺病毒载体构建成功,获得了表达pGMCSF-ORF2融合蛋白的重组腺病毒。该病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中检测到了PCV2的特异性抗体。获得的重组腺病毒能有效表达pGMCSF-ORF2融合蛋白,且可诱导小鼠产生针对PCV2的特异性抗体。 展开更多

关键词 猪ⅱ型圆环病毒ORF2 pGM—CSF 重组腺病毒共表达免疫效果

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猪Ⅱ型圆环病毒病的研究进展 被引量：1

15

作者 王毅峰 陈庆新 +1 位作者 叶菊秀 周继勇 《浙江畜牧兽医》 2004年第2期12-13,共2页

关键词 猪 ⅱ型圆环病毒病 流行病学 致病性 致病机理 病毒检测

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与猪Ⅱ型圆环病毒有关的猪肠炎 被引量：1

16

作者 Junghyum Kim 吴硕显 《国外畜牧学（猪与禽）》 2005年第5期44-45,共2页

关键词 猪ⅱ型圆环病毒 肠炎 哺乳动物细胞 猪圆环病毒 DNA病毒 自律性 PCV and 鸽

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猪Ⅱ型圆环病毒病的系统诊断与防治技术研究进展 被引量：1

17

作者 刘朝明 《畜禽业》 2015年第5期30-31,共2页

猪Ⅱ型圆环病毒病(PCV2)是近年来新发现的一种主要感染仔猪或青年猪的传染病,是世界各国公认的制约养猪业发展的重要疫病之一,给养猪业造成了严重经济损。猪圆环病毒病在临床上以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)为主要特征,并能引发多... 猪Ⅱ型圆环病毒病(PCV2)是近年来新发现的一种主要感染仔猪或青年猪的传染病,是世界各国公认的制约养猪业发展的重要疫病之一,给养猪业造成了严重经济损。猪圆环病毒病在临床上以断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)为主要特征,并能引发多种猪病,给养猪业造成经济损失。针对该病的流行病学、临床症状、病理变化、实验室诊断等研究进展进行总结,并结合我国实际提出了对该病的防制对策。 展开更多

关键词 猪 ⅱ型圆环病毒病 仔猪多系统衰竭综合征 诊治

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“猪Ⅱ型圆环病毒”专栏二:由猪圆环病毒引起的病毒血症对生产性能的影响 被引量：2

18

作者 陶莉 Sergio Lopez Soria Joaquim Segales 《国外畜牧学（猪与禽）》 2013年第5期20-22,共3页

自1998年病毒血症与猪圆环病,现在也称作由PCV2引起的系统疾病（Systemic Disease due toPCV2,PCV2-SD）与联系起来后,与PCV2有关的病理学及其造成的养猪生产损失已成为研究的目标。自那时起，

关键词 猪圆环病毒 病毒血症 猪ⅱ型圆环病毒 生产性能 PCV2 生产损失 病理学 养猪

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“猪Ⅱ型圆环病毒”专栏六:西班牙和丹麦受感染猪场的猪个体感染断奶后多系统衰竭综合征的风险因素 被引量：1

19

作者 陶莉 Grau-Roma L +13 位作者 Stockmarr A Kristensen CS Enφe C López-Soria S Nofrarías M Bille-Hansen V Hjulsager CK Sibila M Jorsal SE Fraile L Baekbo P Vigre H Segalés J Larsen LE 《国外畜牧学（猪与禽）》 2013年第5期27-28,共2页

研究人员对来自西班牙（n=3）和丹麦（n=10）13家感染断奶后多系统衰竭综合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome,PMWS）的猪场进行了2项前瞻性纵向研究。

关键词 断奶后多系统衰竭综合征 猪ⅱ型圆环病毒 西班牙 风险因素 感染 猪场 丹麦 个体

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“猪Ⅱ型圆环病毒”专栏五:种猪群感染PCV2的常见问题 被引量：1

20

作者 陶莉 Tanja Opriessing 《国外畜牧学（猪与禽）》 2013年第5期26-27,共2页

猪圆环病毒Ⅱ型（Porcine Circovirus type 2,PCV2）与养猪生产各阶段的多种疾病的临床表现有关,这些疾病通常被称为猪圆环病毒相关疾病（PCV-Associated Disease,PCVAD）。

关键词 猪ⅱ型圆环病毒 PCV2 猪圆环病毒ⅱ型 种猪群 感染 相关疾病 临床表现 养猪生产

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