志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基单克隆抗体的制备 被引量：4

1

作者 丁琳 师东方 +3 位作者 付海兵 于迪 杨旭东 单安山 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期222-225,240,共5页

为建立针对仔猪水肿病SLT-Ⅱe毒素的检测方法,应用PCR技术克隆SLT-ⅡeB基因,并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术获得6株稳定分泌抗SLT-ⅡeB的单克隆抗体(McAb)细胞株,... 为建立针对仔猪水肿病SLT-Ⅱe毒素的检测方法,应用PCR技术克隆SLT-ⅡeB基因,并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达。以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术获得6株稳定分泌抗SLT-ⅡeB的单克隆抗体(McAb)细胞株,其抗体亚类包括IgM、IgA、IgG2b和IgG2a,而且轻链均为κ链。阻断ELISA结果显示,6株McAb均能特异性识别天然SLT-Ⅱe毒素。相加ELISA结果显示,3G7和4F3两株是针对不同抗原表位的McAb。 展开更多

关键词 仔猪水肿病 志贺样毒素ⅱ型变异体B亚基(SLT-ⅱeB) 单克隆抗体

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志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位及酶活性部位的基因缺失、突变株表达产物免疫生物学特性 被引量：2

2

作者 徐建生 成大荣 +2 位作者 陈雷 董国雄 李俊宝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期425-427,431,共4页

重组志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位pGEX＿Ansp及其酶活性部位的基因缺失株pGEX＿Ade及突变株pGEX＿Amu转化的大肠杆菌经诱导后,表达产物经超声波裂解并滤过除菌。ICR小鼠腹腔注射三种重组质粒转化菌诱导后菌体裂解物的除菌滤液,以检验重... 重组志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位pGEX＿Ansp及其酶活性部位的基因缺失株pGEX＿Ade及突变株pGEX＿Amu转化的大肠杆菌经诱导后,表达产物经超声波裂解并滤过除菌。ICR小鼠腹腔注射三种重组质粒转化菌诱导后菌体裂解物的除菌滤液,以检验重组表达产物的毒性和免疫原性;在Vero细胞上检测重组菌表达产物对Vero细胞的半数致死量(CD50)及免疫鼠血清对SLT＿Ⅱe毒素的中和实验三方面来比较pGEX＿Ansp、pGEX＿Ade和pGEX＿Amu的生物学特性,结果表明这三种基因工程菌表达产物经腹腔注射后可以诱导机体产生一定程度的保护性抗体。在Vero细胞上,pGEX＿Ansp的表达产物可在一定程度上使Vero细胞产生细胞病变,pGEX＿Amu的表达产物可在一定程度上抑制Vero细胞单层形成时间,而pGEX＿Ade对Vero细胞的生长无影响。 展开更多

关键词 重组志贺样毒素ⅱ型变异体A亚单位 毒性 免疫原性

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志贺样毒素Ⅱ型变异体对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IL-8 IL-6和PGI_2的影响 被引量：1

3

作者 张伟 索占伟 +2 位作者 刘钟杰 穆祥 范开 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第5期34-36,共3页

关键词 微血管内皮细胞 ⅱ型变异体 志贺样毒素 细胞分泌 肠黏膜 IL-8 IL-6 大鼠

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猪水肿病大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位与志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位的联合表达

4

作者 姜连连 董国雄 +2 位作者 徐建生 董辉 黄兵 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期80-84,共5页

扩增、克隆和表达了水肿病大肠杆菌的致病因子F18ab 菌毛的主要亚单位FedA全基因(包括信号肽序列),并与现有的另一致病因子志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位基因(stx 2eA)连接,然后进行联合表达。同时用已制备的抗Stx 2eA 单克隆抗体和抗F1... 扩增、克隆和表达了水肿病大肠杆菌的致病因子F18ab 菌毛的主要亚单位FedA全基因(包括信号肽序列),并与现有的另一致病因子志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位基因(stx 2eA)连接,然后进行联合表达。同时用已制备的抗Stx 2eA 单克隆抗体和抗F18ab菌毛单克隆抗体对联合表达的融合蛋白质进行检测鉴定。 展开更多

关键词 仔猪水肿病 F18ab菌毛 志贺样毒素ⅱ型变异体 联合表达 融合蛋白

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类志贺毒素II型变异体B亚单位单抗的制备和初步应用 被引量：3

5

作者 严振龙 董国雄 李俊宝 《动物医学进展》 CSCD 2003年第2期103-105,共3页

将表达类志贺毒素II型变异体B亚单位融合蛋白的菌株ppSLT-IIeB在含氨苄青霉素的2×YTA培养基中培养,至对数生长期时加入IPTG诱导,诱导的重组菌超声波裂解后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达融合蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose4... 将表达类志贺毒素II型变异体B亚单位融合蛋白的菌株ppSLT-IIeB在含氨苄青霉素的2×YTA培养基中培养,至对数生长期时加入IPTG诱导,诱导的重组菌超声波裂解后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达融合蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose4B亲和层析柱纯化融合蛋白,测定纯化蛋白的浓度,免疫BALB/C小鼠,细胞融合后经ELISA检测,得到一株阳性杂交瘤细胞,命名为7C3-1,制备的单抗腹水ELISA效价为210,Westernblet结果表明此单抗仅与融合蛋白反应,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测18株水肿病菌株,发现有13株产类志贺毒素II型变异体。 展开更多

关键词 ⅱ型变异体 B亚单位 制备 应用 类志贺毒素 单克隆抗体 融合蛋白 水肿病 猪

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12个中药方剂对小鼠仔猪水肿病模型的保护率观察比较 被引量：5

6

作者 高立云 周宏超 +2 位作者 王中杰 穆祥 陈耀兴 《中兽医医药杂志》 2007年第5期42-43,共2页

关键词 仔猪水肿病 中药方剂 溶血性大肠杆菌病 保护率 志贺样毒素 模型 小鼠 ⅱ型变异体

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SLT-Ⅱe对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响

7

作者 吴军 周传铎 +4 位作者 刘钟杰 索占伟 段慧琴 穆祥 李禹涛 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第6期35-36,共2页

关键词 微血管内皮细胞 细胞分泌 肠黏膜 NO 大鼠 致病因子 细胞因子 ⅱ型变异体

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SLT-Ⅱe对PIMVECs分泌炎症反应相关细胞因子的影响 被引量：1

8

作者 王伟然 施晓杰 +1 位作者 张蒙 穆祥 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第11期3467-3473,共7页

本试验旨在探究大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)处理后,猪小肠微血管内皮细胞(PIMVECs)分泌的肿瘤坏死因子α(TNF-ɑ)、P选择素(P-selectin)、一氧化氮(NO)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和内皮素(ET)水平的变化。采用超速离心法提取... 本试验旨在探究大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)处理后,猪小肠微血管内皮细胞(PIMVECs)分泌的肿瘤坏死因子α(TNF-ɑ)、P选择素(P-selectin)、一氧化氮(NO)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和内皮素(ET)水平的变化。采用超速离心法提取SLT-Ⅱe,采用BCA试剂盒测定其质量浓度,使用SDS-PAGE及Western blotting验证蛋白纯度;用WST-1法从0.1、0.5、1、5、10μg/mL SLT-Ⅱe和0、2、4、8、12、24 h中筛选出SLT-Ⅱe对PIMVECs最佳作用浓度与时间;ELISA法检测对照组(0μg/mL SLT-Ⅱe)和试验组(1μg/mL SLT-Ⅱe)细胞上清中TNF-ɑ、P-selectin、NO、ICAM-1和ET含量的变化。结果表明:所提蛋白为SLT-Ⅱe,蛋白含量为721.75μg/mL;1μg/mL的SLT-Ⅱe作用8 h后可极显著降低PIMVECs的活性(P<0.01);1μg/mL的SLT-Ⅱe作用9和12 h时PIMVECs的TNF-ɑ分泌量显著升高(P<0.05),NO/ET的值显著高于对照组(P<0.05),作用6、9、12 h时P-selectin的含量显著升高(P<0.05),作用12 h时的ICAM-1分泌量显著升高(P<0.05)。综上所述,SLT-Ⅱe浓度为1μg/mL时可以诱导PIMVECs分泌的TNF-ɑ、P-selectin、ICAM-1以及NO/ET上升,为研究仔猪水肿病发病机制提供参考。 展开更多

关键词 志贺样毒素ⅱ型变异体 小肠微血管内皮细胞 炎症反应细胞因子 猪

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氧化苦参碱对SLT-2e作用下肠黏膜微血管内皮细胞分泌IL-8的影响 被引量：3

9

作者 李禹涛 索占伟 +2 位作者 刘钟杰 穆祥 范开 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第6期51-53,共3页

关键词 氧化苦参碱 IL-8 细胞分泌 血管内皮 肠黏膜 猪水肿病 细菌性传染病 ⅱ型变异体

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SLT-IIeA基因在原核系统中的克隆与表达及其鉴定 被引量：1

10

作者 严振龙 陈雷 +4 位作者 姜连连 成大荣 徐建生 董国雄 李俊宝 《动物医学进展》 CSCD 2002年第5期73-75,88,共4页

PCR扩增并克隆在 p UC1 8质粒中的类志贺样毒素 II型变异体 ( SL T-IIe) A亚单位基因片段切出 ,按预定阅读框架插入到原核性表达载体 p GEX-6p-1的谷胱甘肽 S-转移酶( GST)基因的下游 ,获得重组质粒 pp GEX-A。重组质粒导入大肠杆菌 BL2... PCR扩增并克隆在 p UC1 8质粒中的类志贺样毒素 II型变异体 ( SL T-IIe) A亚单位基因片段切出 ,按预定阅读框架插入到原核性表达载体 p GEX-6p-1的谷胱甘肽 S-转移酶( GST)基因的下游 ,获得重组质粒 pp GEX-A。重组质粒导入大肠杆菌 BL2 1 ,用 IPTG进行诱导表达 ,通过对重组大肠杆菌的菌体裂解物的SDS-PAGE电泳分析及 Western-blot鉴定 ,表明重组菌能大量表达融合蛋白形式的 SL T-IIe A,即 SL T-IIe A蛋白与谷胱甘肽转移酶相连组成的蛋白质。本实验的研究结果 ,为进一步研究 SL T-IIe的生物学特性及研制仔猪水肿病亚单位苗提供了有效的生物材料。 展开更多

关键词 SLT-ⅱeA基因 原核系统 克隆 表达 鉴定 类志贺样毒素ⅱ型变异体 仔猪 水肿瘤

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SLT-2e对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌PGI2、TXA2和PAF的影响

11

作者 周宏超 范光丽 +2 位作者 穆祥 胡格 索占伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第4期25-26,共2页

关键词 微血管内皮细胞 肠黏膜 细胞分泌 PAF 仔猪水肿病 志贺样毒素 大鼠 ⅱ型变异体

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