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FMDV 3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用
被引量：
2
1
作者
苗勤
吴香菊
+4 位作者
齐静
丛晓燕
李均同
王林
杜以军
《山东农业科学》
北大核心
2024年第2期144-150,共7页
本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用。根据GenBank序列合成3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR...
本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用。根据GenBank序列合成3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15细胞,Western blotting及间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测3D蛋白在细胞内的表达及定位。通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)、Real-time PCR、TCID50等试验检测HEK-293T细胞中过表达3D蛋白对水疱性口炎病毒(Versicular stomatitis virus,VSV)诱导的Ⅰ型IFN信号通路的影响。结果显示,真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功;3D蛋白在HEK-293T细胞中表达,大小约为55 kDa,主要定位在细胞核中;3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平,促进了VSV的复制。本研究为深入探究3D蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路的作用机制奠定了基础。
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关键词
口蹄疫病毒
3D蛋白
真核表达
ⅰ型ifn信号通路
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职称材料
脑心肌炎病毒VP1蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路和促进病毒体外增殖
被引量：
3
2
作者
韩玉梅
谢晶莹
+2 位作者
毕英杰
许淑娟
冯若飞
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第1期18-26,共9页
脑心肌炎病毒是一种重要的人畜共患病病原,为了初步研究EMCV介导的天然免疫反应的分子机制,将VP1蛋白克隆至真核表达载体pCMV-HA,转染HEK293细胞后,使其在细胞内过表达,通过ELISA和实时荧光定量PCR检测VP1过表达对IFN-β表达和RLRs信号...
脑心肌炎病毒是一种重要的人畜共患病病原,为了初步研究EMCV介导的天然免疫反应的分子机制,将VP1蛋白克隆至真核表达载体pCMV-HA,转染HEK293细胞后,使其在细胞内过表达,通过ELISA和实时荧光定量PCR检测VP1过表达对IFN-β表达和RLRs信号通路相关因子,以及下游刺激基因表达的影响。结果表明,VP1蛋白可显著抑制IFN-β的表达。进一步研究发现,VP1可显著抑制EMCV引起的RLRs信号通路相关因子mRNA水平(P<0.01),并且随着VP1的表达,MAVS蛋白的表达明显减少,但对MDA5表达无影响。实验数据初步表明,VP1蛋白可以通过抑制MAVS的表达,进而抑制Ⅰ型IFN基因的表达并阻断其下游信号通路发挥作用。
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关键词
脑心肌炎病毒
结构蛋白VP1
ⅰ型ifn信号通路
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职称材料
题名
FMDV 3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用
被引量：
2
1
作者
苗勤
吴香菊
齐静
丛晓燕
李均同
王林
杜以军
机构
山东农业大学动物科技学院
山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室
农业农村部畜禽生物组学重点实验室
出处
《山东农业科学》
北大核心
2024年第2期144-150,共7页
基金
国家自然科学基金项目(32373094,32102710)
山东省自然科学基金项目(ZR2021ZD08,ZR2023MC076,ZR2021MC139)
+1 种基金
国家兽用生物制品工程技术研究中心开放课题(GTKF(23)009)
国家重点研发计划项目(2021YFD1800300)。
文摘
本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用。根据GenBank序列合成3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15细胞,Western blotting及间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测3D蛋白在细胞内的表达及定位。通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)、Real-time PCR、TCID50等试验检测HEK-293T细胞中过表达3D蛋白对水疱性口炎病毒(Versicular stomatitis virus,VSV)诱导的Ⅰ型IFN信号通路的影响。结果显示,真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功;3D蛋白在HEK-293T细胞中表达,大小约为55 kDa,主要定位在细胞核中;3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平,促进了VSV的复制。本研究为深入探究3D蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路的作用机制奠定了基础。
关键词
口蹄疫病毒
3D蛋白
真核表达
ⅰ型ifn信号通路
Keywords
Foot-and-mouth disease virus
3D protein
Eukaryotic expression plasmid
Type
ⅰ
ifn
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
脑心肌炎病毒VP1蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路和促进病毒体外增殖
被引量：
3
2
作者
韩玉梅
谢晶莹
毕英杰
许淑娟
冯若飞
机构
西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室
西北民族大学生命科学与工程学院
甘肃农业大学动物医学院
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第1期18-26,共9页
基金
国家自然科学基金(31460665)
2019年中央专项研究生科研创新项目(Yxm2019148)
+1 种基金
国家民委中青年英才计划[(2018)98]
教育部“创新团队发展计划”(IRT_17R88)。
文摘
脑心肌炎病毒是一种重要的人畜共患病病原,为了初步研究EMCV介导的天然免疫反应的分子机制,将VP1蛋白克隆至真核表达载体pCMV-HA,转染HEK293细胞后,使其在细胞内过表达,通过ELISA和实时荧光定量PCR检测VP1过表达对IFN-β表达和RLRs信号通路相关因子,以及下游刺激基因表达的影响。结果表明,VP1蛋白可显著抑制IFN-β的表达。进一步研究发现,VP1可显著抑制EMCV引起的RLRs信号通路相关因子mRNA水平(P<0.01),并且随着VP1的表达,MAVS蛋白的表达明显减少,但对MDA5表达无影响。实验数据初步表明,VP1蛋白可以通过抑制MAVS的表达,进而抑制Ⅰ型IFN基因的表达并阻断其下游信号通路发挥作用。
关键词
脑心肌炎病毒
结构蛋白VP1
ⅰ型ifn信号通路
Keywords
encephalomyocarditis virus
structural protein VP1
Type
ⅰ
ifn
signaling pathway
分类号
S855.99 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
FMDV 3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用
苗勤
吴香菊
齐静
丛晓燕
李均同
王林
杜以军
《山东农业科学》
北大核心
2024
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
脑心肌炎病毒VP1蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路和促进病毒体外增殖
韩玉梅
谢晶莹
毕英杰
许淑娟
冯若飞
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021
3
在线阅读
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职称材料
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