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Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 邵泽香 韦强 +3 位作者 鲍国连 崔言顺 刘燕 季权安 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期434-438,共5页
参考GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了一对引物,建立了适合DHV-Ⅰ快速检测的RT-PCR检测方法。以该方法对实验室分离并保存的DHV强毒株Z10株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到了预期大小... 参考GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了一对引物,建立了适合DHV-Ⅰ快速检测的RT-PCR检测方法。以该方法对实验室分离并保存的DHV强毒株Z10株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到了预期大小为699 bp的目的片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果与GenBank中的DHV-Ⅰ的相应基因序列比对分析,同源性均达90%以上,表明为DHV-Ⅰ的基因序列,对NDV,IBDV,DPV和GPV等常见病毒扩增结果为阴性。该方法敏感性检测结果表明,最低RNA模板检出量为24 pg。表明所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于I型鸭病毒性肝炎病毒的快速诊断。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭病毒性肝炎毒(DHV-) RT-PCR 检测
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Ⅰ型鸭病毒性肝炎卵黄抗体的最小预防剂量试验 被引量:1
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作者 张永欣 杨燚 +2 位作者 崔红军 刘冠星 苏建东 《饲料博览》 CAS 2022年第3期60-63,共4页
为确定Ⅰ型鸭病毒性肝炎卵黄抗体的最小预防剂量,将2批Ⅰ型鸭病毒性肝炎卵黄抗体中和效价稀释至1􀏑256,不同剂量分别皮下注射不同日龄雏鸭,1日龄和4日龄雏鸭注射剂量分别为0.1、0.3、0.5、1.0 mL·只^(-1),5日龄和7日龄雏... 为确定Ⅰ型鸭病毒性肝炎卵黄抗体的最小预防剂量,将2批Ⅰ型鸭病毒性肝炎卵黄抗体中和效价稀释至1􀏑256,不同剂量分别皮下注射不同日龄雏鸭,1日龄和4日龄雏鸭注射剂量分别为0.1、0.3、0.5、1.0 mL·只^(-1),5日龄和7日龄雏鸭注射剂量分别为0.3、0.5、1.0、1.5 mL·只^(-1)。注射24 h后,分别肌肉注射Ⅰ型鸭肝炎病毒RPZ株0.2 mL(含100 LD50),观察10 d。结果表明:1日龄和4日龄雏鸭卵黄抗体注射0.3 mL时,攻毒保护率为80%~90%;注射0.5和1.0 mL时,攻毒保护率为100%。5日龄和7日龄雏鸭注射0.5 mL时,攻毒保护率为85%~90%;注射1.0和1.5 mL时,攻毒保护率为100%。确定Ⅰ型鸭病毒性肝炎卵黄抗体对1日龄和4日龄雏鸭的最小预防剂量为0.3 mL·只^(-1),对5和7日龄雏鸭的最小预防剂量为0.5 mL·只^(-1)。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭病毒性肝炎 卵黄抗体 最小预防剂量
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单剂量一次性注射Ⅰ型鸭病毒性肝炎卵黄抗体的安全性试验
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作者 张永欣 杨燚 +2 位作者 崔红军 刘冠星 苏建东 《饲料博览》 CAS 2022年第2期59-61,65,共4页
为确定Ⅰ型鸭病毒性肝炎卵黄抗体对鸭生产性能的影响,取3批次卵黄抗体以单剂量一次性分别皮下注射7日龄樱桃谷肉鸭10只,1.0 mL·只^(-1) ,观察14 d。结果表明:3批卵黄抗体组鸭平均日增重分别为81.75、82.35 g·只^(-1) 和81.94 ... 为确定Ⅰ型鸭病毒性肝炎卵黄抗体对鸭生产性能的影响,取3批次卵黄抗体以单剂量一次性分别皮下注射7日龄樱桃谷肉鸭10只,1.0 mL·只^(-1) ,观察14 d。结果表明:3批卵黄抗体组鸭平均日增重分别为81.75、82.35 g·只^(-1) 和81.94 g·只^(-1) ,对照鸭平均日增重为82.11 g·只^(-1) ,试验组与对照组间无明显差异(P>0.05);所有雏鸭均健活,采食、饮水、行为、排便等均未见异常,无临床不良反应;注射部位未见红、肿、硬结等炎性反应;系统剖检均未见实质性脏器和空腔脏器异常,注射局部吸收良好。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭病毒性肝炎 卵黄抗体 生产性能
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Ⅰ型鸭病毒性肝炎弱毒疫苗对比试验
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作者 温纳相 顾节清 +3 位作者 张文文 周全 宋永峰 宋延华 《中国畜禽种业》 2009年第8期133-133,共1页
为了解自主研发的Ⅰ型鸭病毒性肝炎弱毒疫苗(简称:自Ⅰ型)免疫效果,将自Ⅰ型与目前使用的上海某公司生产的Ⅰ型鸭病毒性肝弱毒疫苗进行对比试验,分别对1日龄雏鸭进行免疫接种,通过动物攻毒保护试验结果评估疫苗免疫效果。结果显示,自Ⅰ... 为了解自主研发的Ⅰ型鸭病毒性肝炎弱毒疫苗(简称:自Ⅰ型)免疫效果,将自Ⅰ型与目前使用的上海某公司生产的Ⅰ型鸭病毒性肝弱毒疫苗进行对比试验,分别对1日龄雏鸭进行免疫接种,通过动物攻毒保护试验结果评估疫苗免疫效果。结果显示,自Ⅰ型比对比品对早期野毒感染预防效果更好。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭病毒性肝炎 弱毒疫苗 对比试验
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Ⅰ型鸭肝炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建与分析 被引量:2
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作者 云涛 倪征 +5 位作者 刘光清 余斌 陈柳 华炯钢 李双茂 张彦明 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第5期27-31,共5页
【目的】建立Ⅰ型鸭病毒性肝炎(Duck hepatitis virus,DHV)的反向遗传系统。【方法】根据Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)ZJ-V/2006株全基因组序列设计并合成5对特异引物,进而应用RT-PCR技术分5段扩增了DHV全基因组cDNA。将扩增的cDNA重叠片段A... 【目的】建立Ⅰ型鸭病毒性肝炎(Duck hepatitis virus,DHV)的反向遗传系统。【方法】根据Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)ZJ-V/2006株全基因组序列设计并合成5对特异引物,进而应用RT-PCR技术分5段扩增了DHV全基因组cDNA。将扩增的cDNA重叠片段A、B、C和DE片段分别克隆到载体pBluescriptⅡKS(+)中,获得了DHV-ⅠZJ-V/2006株全长基因组cDNA克隆pBLDHV。在扩增5′末端时,引入ApaⅠ酶切位点和SP6启动子序列;在基因组3′末段PolyA尾引入NruⅠ酶切位点,以供cDNA模板的线性化之用。【结果】核酸序列分析表明,DHV-ⅠZJ-V/2006株基因组全长为7 711个核苷酸,与DHV-ⅠZJ-V BHK-21细胞分离株的同源性为99.9%;全长基因组中有6个核苷酸发生突变,均未导致对应的氨基酸发生改变,为沉默突变。【结论】成功构建了DHV-ⅠZJ-V/2006株基因组全长cDNA。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭病毒性肝炎 全长CDNA克隆 感染性克隆
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Ⅰ型鸭肝炎病毒的研究进展 被引量:2
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作者 张宇辉 甘一迪 +4 位作者 刘家森 姜骞 司昌德 曲连东 黄鹤 《畜牧兽医科技信息》 2008年第9期10-11,共2页
鸭病毒性肝炎是鸭的五大传染病之一,由于近年鸭肝炎(Ⅰ型)发病率的不断上升,以及变异株的不断出现,养鸭比较集中的地区都遭受了巨大的经济损失和严重的威胁。随着病毒基因组的测序的完成,为该病毒的研究有了一些新的认识和思路。本文从... 鸭病毒性肝炎是鸭的五大传染病之一,由于近年鸭肝炎(Ⅰ型)发病率的不断上升,以及变异株的不断出现,养鸭比较集中的地区都遭受了巨大的经济损失和严重的威胁。随着病毒基因组的测序的完成,为该病毒的研究有了一些新的认识和思路。本文从病毒的流行病学、基因组结构和功能以及病毒的检测方法等方面,阐述了DHV-I的最新研究进展,为该病的防治提供理论基础。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭病毒性肝炎 型鸭肝炎毒(DHV—) 防治措施 毒基因组
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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因克隆及其原核表达 被引量:2
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作者 孔留五 康艳梅 +3 位作者 何逸民 李小康 潘全会 张桂红 《上海畜牧兽医通讯》 2009年第2期8-10,共3页
根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的包含有EcoRV和XhoⅠ酶切位点的引物,用该特异性引物从Ⅰ型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1,以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后... 根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的包含有EcoRV和XhoⅠ酶切位点的引物,用该特异性引物从Ⅰ型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1,以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目的基因正确插入了表达载体,转化宿主菌RossetaⅡ,用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1在大肠杆菌RossetaⅡ中表达量较高,表达产物的分子量约为48 ku、并能被Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清所识别。Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1蛋白在大肠杆菌RossetaⅡ中表达产物具有免疫原性。 展开更多
关键词 ⅰ型鸭病毒性肝炎 VP1基因 诱导表达
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