Ⅰ型缺陷C-S-H凝胶相热稳定性的反应分子动力学研究

1

作者 孙明 汤庆印 +2 位作者 郭浩然 王攀 袁雄洲 《硅酸盐通报》 北大核心 2025年第6期2046-2059,共14页

在高温条件下,C-S-H凝胶中缺陷和受限水的存在显著影响其强度和耐久性。本研究采用反应分子动力学方法,研究了Ⅰ型缺陷C-S-H凝胶在高温环境下的分子结构特征和反应性。研究发现:温度和Ca/Si比升高导致水分子流动性增强,加速其渗入层状结... 在高温条件下,C-S-H凝胶中缺陷和受限水的存在显著影响其强度和耐久性。本研究采用反应分子动力学方法,研究了Ⅰ型缺陷C-S-H凝胶在高温环境下的分子结构特征和反应性。研究发现:温度和Ca/Si比升高导致水分子流动性增强,加速其渗入层状结构,降低结构有序性和连通性,引起Q^(1)和Q^(0)增加,削弱C-S-H凝胶的热稳定性;Ⅰ型缺陷使C-S-H凝胶沿层间方向膨胀,且随温度和Ca/Si比升高,膨胀率增大;在高温、高Ca/Si比条件下,水分子反应性增强,促进水解反应和羟基形成,Ⅰ型缺陷快速扩展,显著影响凝胶结构稳定性。本研究成果可为改善混凝土在火灾等极端环境下的性能提供理论支持。 展开更多

关键词 C-S-H凝胶 高温环境 ⅰ型缺陷 钙硅比 分子动力学模拟 反应分子动力学

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Ⅰ型人免疫缺陷病毒gag-gp120嵌合基因核酸疫苗的构建与鉴定 被引量：4

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作者 江文正 金宁一 韩文瑜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期341-342,345,共3页

目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染... 目的 :构建含Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (HIV 1) gag gp12 0嵌合基因核酸疫苗的表达质粒。方法 :将gag和 gp12 0连接后的嵌合基因插入到真核表达载体 pVAX1中 ,构建真核表达质粒pVAXGE。用脂质体法将构建的重组质粒转染Hela细胞 72h后 ,取转染的Hela细胞进行RT PCR检测和和Dot ELISA分析。结果 :重组质粒转染细胞的总RNA中 ,可扩增出目的基因的转录产物。Dot ELISA的结果显示 ,目的基因在Hela细胞内得到表达。结论 :成功地构建了表达gag gp12 0嵌合基因的核酸疫苗质粒 ,为HIV 展开更多

关键词 ⅰ型人免疫缺陷病毒 gag-gp120 嵌合基因 核酸疫苗

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人类免疫缺陷病毒Ⅰ型载体研究进展

3

作者 侯军 王健民 闵碧荷 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期75-78,共4页

人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 (humanimmunodeficiencyvirustypeⅠ ,HIV Ⅰ )为慢病毒家族成员之一 ,除 gag ,pol与env等结构基因外 ,其结构中还含有编码 2个调节蛋白及 4个附属蛋白的基因。目前已构建了多种类型的复制缺陷性HIV Ⅰ载体 ,产生... 人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 (humanimmunodeficiencyvirustypeⅠ ,HIV Ⅰ )为慢病毒家族成员之一 ,除 gag ,pol与env等结构基因外 ,其结构中还含有编码 2个调节蛋白及 4个附属蛋白的基因。目前已构建了多种类型的复制缺陷性HIV Ⅰ载体 ,产生的病毒滴度最高可达 10 7TU /ml;对包装细胞系的研究发现 ,将 4个附属基因全部去除对载体的转导能力并无显著影响。基因组分离式包装系统降低了产生具有复制能力的病毒的可能性。HIV Ⅰ载体具有两大特点 :可有效转导人CD34+造血干 /祖细胞、重复注射不引起排斥反应。改建后的HIV Ⅰ载体具有广泛的宿主范围。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒ⅰ型 逆转录病毒 载体构建

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基于细胞穿透肽技术对p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白功能的研究 被引量：3

4

作者 杨丽萍 刘志锋 +2 位作者 黎永明 李志杰 姜勇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期553-557,共5页

目的构建基于TAT技术的p38MAPK蛋白转运系统并对导入细胞的融合蛋白的功能进行鉴定。方法采用亚克隆方法构建重组质粒pHis-TAT-p38和pHis-TAT-p38(AF)无活性突变体,并诱导原核表达纯化融合蛋白;将这两种蛋白加入培养的ECV304细胞,在高... 目的构建基于TAT技术的p38MAPK蛋白转运系统并对导入细胞的融合蛋白的功能进行鉴定。方法采用亚克隆方法构建重组质粒pHis-TAT-p38和pHis-TAT-p38(AF)无活性突变体,并诱导原核表达纯化融合蛋白;将这两种蛋白加入培养的ECV304细胞,在高渗刺激下,通过检测p38底物ATF2的磷酸化水平,以观察由TAT转导进入细胞His-TAT-p38及其无活性突变体对内源性p38活性的影响。结果酶切和测序结果表明,载体构建正确;SDS-PAGE凝胶电泳可见原核表达纯化得到高纯度目的蛋白;Westernblot表明,融合蛋白His-TAT-p38及其突变体能够以一种时间和浓度依赖性方式高效转导进入细胞;导入His-TAT-p38蛋白后,结果发现导入的野生型p38可增强内源性p38的功能,而无活性突变体则竞争性抑制了内源性p38MAPK蛋白的功能,从而阻止或抑制其对内源性底物ATF2的磷酸化,使得信号不能传递下去,进而抑制p38MAPK通路的活动。结论成功建立了基于TAT的蛋白转运系统,并证实TAT能够以浓度和时间依赖方式高效转运蛋白进入真核细胞;进入细胞的His-TAT-p38和His-TAT-p38无活性突变体蛋白均具有较高的生物学活性,在高渗刺激作用下前者可以增加p38磷酸化水平,而后者则显著抑制p38信号通路的活性。 展开更多

关键词 ⅰ型人免疫缺陷病毒转录激活蛋白 P38丝裂原活化蛋白激酶 蛋白转导

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慢病毒载体构建策略及生物安全性研究进展 被引量：6

5

作者 尹春光 杜立新 《动物医学进展》 CSCD 2008年第2期72-75,共4页

慢病毒可以感染分裂细胞和非分裂细胞,是较有前途的病毒载体,来源于HIV-1型载体,能阻止形成有复制能力的HIV-1病毒,构建一个更为安全的模式是慢病毒载体构建策略的焦点。该文介绍了慢病毒载体应用过程中的不同载体系统及构建策略,对载... 慢病毒可以感染分裂细胞和非分裂细胞,是较有前途的病毒载体,来源于HIV-1型载体,能阻止形成有复制能力的HIV-1病毒,构建一个更为安全的模式是慢病毒载体构建策略的焦点。该文介绍了慢病毒载体应用过程中的不同载体系统及构建策略,对载体的生物安全性进行了分析,展望了慢病毒在基因治疗、RNA干扰及转基因领域的应用前景。 展开更多

关键词 慢病毒 人类ⅰ型免疫缺陷病毒 载体系统

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p38L12-TAT融合肽对山梨糖醇引起的ECV304细胞ATF2磷酸化的抑制作用 被引量：1

6

作者 郭爱华 刘志锋 +7 位作者 李海玉 唐靖 李志杰 刘亚伟 龚小卫 刘靖华 邓鹏 姜勇 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期402-408,共7页

构建p38Loop12(L12)的TAT融合表达载体,纯化原核表达的p38L12融合蛋白并鉴定其在真核细胞内的功能.利用PCR方法分别扩增出p38L12及其“TXY”双磷酸化位点的AF突变体p38L12(AF)片段,克隆入His标记的TATEGFP融合蛋白原核表达载体pHTE(pET1... 构建p38Loop12(L12)的TAT融合表达载体,纯化原核表达的p38L12融合蛋白并鉴定其在真核细胞内的功能.利用PCR方法分别扩增出p38L12及其“TXY”双磷酸化位点的AF突变体p38L12(AF)片段,克隆入His标记的TATEGFP融合蛋白原核表达载体pHTE(pET14bHisTATEGFP),经酶切、测序鉴定正确后,将重组质粒转化原核表达菌,诱导表达纯化融合蛋白;将融合蛋白加入ECV304细胞后于荧光显微镜下观察并行Western印迹分析,检测融合蛋白的细胞内转导活性;通过检测内源性ATF2磷酸化水平,鉴定高渗刺激下p38L12对内源性p38活性的影响.成功构建了p38L12和p38L12(AF)片段与TAT的融合表达载体,并获得相应的融合蛋白.在ECV304细胞中可见导入的HTEp38L12和HTEp38L12(AF)融合蛋白具有较高的细胞内转导活性和转导效率,并可竞争性抑制高渗刺激对内源性p38的活化.基于HIV1TAT细胞转导系统证实p38L12可竞争性抑制高渗刺激诱导的内源性p38对ATF2的活化,从而发挥对p38激活特异性抑制的功能. 展开更多

关键词 ⅰ型人免疫缺陷病毒转录激活蛋白 丝裂原活化蛋白 LOOP 12 细胞转导系统

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清开灵注射液体外抑制HIV-1作用 被引量：2

7

作者 赵令斋 曾耀英 +3 位作者 黄秀艳 曾祥凤 林长乐 唐先高 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期176-179,共4页

目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用。方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后,与MT-2细胞混合培养,2 ... 目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用。方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后,与MT-2细胞混合培养,2 h后在荧光下计数融合细胞数目,评价QKL对两种细胞早期融合的影响;用MTT法检测QKL对HIV-1ⅢB急性感染的MT-2细胞的保护作用;用HIVp24抗原试剂盒检测HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞的培养上清p24抗原的含量,分析QKL对HIV-1复制的影响。结果:QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞的CC50分别为1/50.76和1/36.97;抑制H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞早期融合作用的EC50=1/235.29,SI=6.36;对HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞保护作用的EC50=1/144.93,SI=3.92;抑制p24抗原产生作用的EC50=1/175.44,SI=4.75。结论:QKL体外有抗HIV-1活性,作用机制可能是多靶点的,可抑制病毒进入细胞和胞内复制。 展开更多

关键词 清开灵注射液 人类免疫缺陷病毒ⅰ型(HIV-1) 细胞融合 抑制作用

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ELISA法分析HIV-1整合酶的生物学活性 被引量：3

8

作者 冯微宏 黄建松 詹金彪 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2007年第2期179-184,共6页

目的:建立一种能够较好地分析HIV-1整合酶的生物学活性以及大规模地筛选整合酶抑制剂的方法。方法:HIV-1整合酶经表达复性及纯化后,采用一种基于Biotin-Avidin EILSA(BA-ELISA)的方法,使用化学发光底物测定分析整合酶的生物学活性,以及... 目的:建立一种能够较好地分析HIV-1整合酶的生物学活性以及大规模地筛选整合酶抑制剂的方法。方法:HIV-1整合酶经表达复性及纯化后,采用一种基于Biotin-Avidin EILSA(BA-ELISA)的方法,使用化学发光底物测定分析整合酶的生物学活性,以及型核糖体失活蛋白luffin-a对整合酶的抑制作用。结果:1采用BA-ELISA法得到整合酶的比活性为54.92U/mg蛋白;2luffin-a对整合酶的半数抑制浓度为(0.63±0.026)μmol/L。结论:本实验所采用的基于BA-ELISA的方法能够较好地分析HIV-1整合酶的生物活性,适合于大规模体外HIV-1整合酶抑制剂的筛选。 展开更多

关键词 整合酶类/遗传学 人类免疫缺陷ⅰ型病毒 生物活性 酶联免疫吸附测定

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CCR5~Δ32及CCR5 siRNA共修饰的树突状细胞抗HIV-1的初步研究 被引量：1

9

作者 夏承来 李书华 《中国医学前沿杂志（电子版）》 2014年第9期19-22,共4页

目的：分析CCR5^△32及CCR5 siRNA共修饰的树突状细胞抗人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）的作用。方法采用Adeasy系统构建携带CCR5^△32及CCR5 siRNA的重组腺病毒载体；在体外将人外周血单个核细胞（PBMC）发育成树突状细胞；采用免疫印... 目的：分析CCR5^△32及CCR5 siRNA共修饰的树突状细胞抗人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）的作用。方法采用Adeasy系统构建携带CCR5^△32及CCR5 siRNA的重组腺病毒载体；在体外将人外周血单个核细胞（PBMC）发育成树突状细胞；采用免疫印迹法分析细胞内CCR5^△32、CCR5及HIV-1 p24的表达情况；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）分析HIV-1 p24含量。结果重组腺病毒载体感染人源性PBMC后，细胞内CCR5表达下降，CCR5^△32表达增加。HIV-1感染PBMC后，经修饰后的细胞中p24含量较低，而未修饰的细胞中p24含量持续上升。HIV-1感染PBMC来源的树突状细胞后，经修饰后的细胞中p24含量较低，而未修饰的细胞中p24含量持续上升。结论 CCR5^△32及CCR5 siRNA共修饰的树突状细胞具有抗HIV-1的功能。但将修饰后的细胞回输入体内能否重建机体免疫系统功能以及载体的安全性和高效性如何评价，尚需要进一步研究。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒ⅰ型 细胞免疫 感染性疾病

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利用定点突变研究CCR5膜外襻上与HIV gp120结合的关键残基

10

作者 道书艳 郭葆玉 卞广兴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期68-70,共3页

目的:研究CCR5在作为Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-Ⅰ)进入细胞的辅助受体时,发挥关键作用的氨基酸。方法:通过定点突变对CCR5膜外各襻上的某些氨基酸进行突变,将非极性氨基酸变为极性氨基酸,疏水氨基酸变为亲水氨基酸,芳香族氨基酸变为非... 目的:研究CCR5在作为Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-Ⅰ)进入细胞的辅助受体时,发挥关键作用的氨基酸。方法:通过定点突变对CCR5膜外各襻上的某些氨基酸进行突变,将非极性氨基酸变为极性氨基酸,疏水氨基酸变为亲水氨基酸,芳香族氨基酸变为非芳香族氨基酸,通过将其与gp120分别表达,进行结合实验,寻找与病毒结合活性降低的突变型。结果:当CCR5膜外第一襻用Tyr替代Cys,第三襻用Ser替代Pro后,CCR5与病毒表面糖蛋白gp120的结合活性极大降低。而对其他膜外襻上的氨基酸进行突变后,结合活性无明显改变。结论:病毒进入受体细胞需要受体和辅助受体的介导。CCR5作为辅助受体,主要是通过膜外特定的氨基酸与病毒的gp120发生识别,寻找到这些识别氨基酸就可以为AIDS的预防和治疗提供一定的靶点。 展开更多

关键词 CCR5 ⅰ型人类免疫缺陷病毒 点突变 氨基酸 HIV

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gp120mAb对gp120抑制大鼠海马脑片CA_1区LTP作用的研究

11

作者 董军 江振友 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期355-358,共4页

目的:探讨人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV 1)的包膜糖蛋白gp12 0特异抗体gp12 0mAb对gp12 0引起大鼠海马脑片CA1区的突触传递及可塑性变化的影响。方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位(EPSP) ,研究gp12 0mAb对gp1... 目的:探讨人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV 1)的包膜糖蛋白gp12 0特异抗体gp12 0mAb对gp12 0引起大鼠海马脑片CA1区的突触传递及可塑性变化的影响。方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位(EPSP) ,研究gp12 0mAb对gp12 0抑制高频电刺激Schaffer侧支引起的鼠海马长时程增强效应(LTP)作用的影响。结果:gp12 0对高频电刺激(HFS ,10 0Hz ,10 0 0ms×2 ,串间隔2 0秒,共2次)Schaffer侧支引起的大鼠海马CA1区LTP产生抑制作用,而对其基础EPSP没有影响。用浓度为2 0 0pmol/L的gp12 0灌流脑片,可引起LTP的维持发生抑制。这种抑制作用可被gp12 0特异抗体gp12 0mAb( 5 0ng/ml)所拮抗。结论:gp12 0mAb可能是通过拮抗gp12 0抑制海马CA1区的LTP诱发和维持而参与艾滋病痴呆(HIV 1associateddementia ,HAD) 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒ⅰ型 gp120特异抗体 长时程增强 海马脑片

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Lavendustin A对gp120抑制大鼠海马CA1区LTP的翻转作用

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作者 董军 陆大祥 +2 位作者 颜亮 付咏梅 李楚杰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期1646-1646,共1页

目的:为了探讨酪氨酸蛋白激酶抑制剂Lavendustin A(Lav A)对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)的包膜糖蛋白gp120引起大鼠海马脑片CA1区的长时程增强效应(long-term potentiation,LTP)的影响. 方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区... 目的:为了探讨酪氨酸蛋白激酶抑制剂Lavendustin A(Lav A)对人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)的包膜糖蛋白gp120引起大鼠海马脑片CA1区的长时程增强效应(long-term potentiation,LTP)的影响. 方法:应用离体脑片记录技术,记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位EPSP,研究了Lav A对gp120引起的大鼠海马脑片CA1区突触传递和可塑性变化的影响. 展开更多

关键词 酪氨酸蛋白激酶抑制剂 海马CA1区 GP120 大鼠 人类免疫缺陷病毒ⅰ型 LTP 兴奋性突触后电位 长时程增强效应 海马脑片

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HIV-1 nef基因的克隆及原核表达研究 被引量：2

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作者 闻洁君 江文正 +3 位作者 郝文丽 杜佳妮 樊燕 钱旻 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期348-350,共3页

目的:构建HIV-1 Nef基因的原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达,初步优化其表达条件。方法:利用特异性引物PCR扩增获得HIV-1 Nef基因片段,PCR产物经限制性内切酶双酶切后连接载体pET24a(+),构建重组质粒pET24a(+)-Nef。经双酶切鉴定及... 目的:构建HIV-1 Nef基因的原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达,初步优化其表达条件。方法:利用特异性引物PCR扩增获得HIV-1 Nef基因片段,PCR产物经限制性内切酶双酶切后连接载体pET24a(+),构建重组质粒pET24a(+)-Nef。经双酶切鉴定及序列测定后的重组质粒转化入E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白,优化表达条件,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定表达产物。结果:PCR扩增获得618bpDNA片段,酶切鉴定结果表明HIV Nef基因已克隆入原核表达载体pET24a(+)中,测序证明序列正确。SDS-PAGE和Western blot分析证实重组菌诱导后可表达相对分子质量(Mr)符合预期的融合蛋白。0.1mmol/LIPTG在37℃诱导6h为最佳表达条件,重组蛋白表达量可由15.8%增加到43.9%。结论:在大肠杆菌中成功地表达了HIV Nef蛋白,并初步获得了最优化的表达条件。 展开更多

关键词 人免疫缺陷病毒ⅰ型 NEF蛋白 原核表达

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基于α螺旋肽与多酚缀合的HIV-1融合抑制剂的设计、合成及活性初筛 被引量：2

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作者 程思绮 梁国栋 +2 位作者 姜喜凤 王潮 刘克良 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1287-1292,共6页

将α螺旋多肽与羟基酪醇等多酚类化合物通过共价键缀合,期望二者在发挥各自生物学作用的同时产生协同效应,据此设计了HIV-1融合抑制多肽.圆二色光谱表征结果表明,所设计的缀合多肽呈典型的α螺旋结构特征,且可以与靶标N36相互作用.HIV-... 将α螺旋多肽与羟基酪醇等多酚类化合物通过共价键缀合,期望二者在发挥各自生物学作用的同时产生协同效应,据此设计了HIV-1融合抑制多肽.圆二色光谱表征结果表明,所设计的缀合多肽呈典型的α螺旋结构特征,且可以与靶标N36相互作用.HIV-1包膜糖蛋白(Env)介导的细胞-细胞融合活性测试结果表明,这些具有α螺旋结构的缀合多肽可以在低微摩尔水平抑制病毒融合. 展开更多

关键词 人免疫缺陷病毒ⅰ型 融合抑制剂 α螺旋肽 多酚

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异肽键交联的N肽类HIV-1融合抑制剂的设计、合成及活性评价 被引量：2

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作者 李雪 来文庆 +2 位作者 姜喜凤 王潮 刘克良 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2016年第5期881-885,共5页

报道了一种通过在HIV-1 gp41 NHR区域的多肽(N肽)之间引入异肽键稳定N3螺旋的新方法;以天然N肽序列N38为模板,采用此方法设计合成了一系列异肽键交联的N38三股α螺旋结构.该结构具有极强的热稳定性和纳摩尔水平抑制HIV-1包膜糖蛋白(Env... 报道了一种通过在HIV-1 gp41 NHR区域的多肽(N肽)之间引入异肽键稳定N3螺旋的新方法;以天然N肽序列N38为模板,采用此方法设计合成了一系列异肽键交联的N38三股α螺旋结构.该结构具有极强的热稳定性和纳摩尔水平抑制HIV-1包膜糖蛋白(Env)介导的细胞融合活性. 展开更多

关键词 人免疫缺陷病毒ⅰ型 融合抑制剂 N端重复序列 卷曲螺旋

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HIV-1 Rev蛋白和人DDX3解旋酶对HCV RNA复制影响 被引量：1

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作者 罗亚东 洪国枯 +3 位作者 贾鸣 郭艳 刘明 毛青 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第23期2329-2333,共5页

目的研究人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression,Rev)和DEAD-box蛋白家族ATP依赖的RNA解旋酶3(DDX3)对HCV RNA复制的影响。方法利用HCV表达质粒p CDNA3.1-JFH1转染Huh7细胞以构... 目的研究人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression,Rev)和DEAD-box蛋白家族ATP依赖的RNA解旋酶3(DDX3)对HCV RNA复制的影响。方法利用HCV表达质粒p CDNA3.1-JFH1转染Huh7细胞以构建稳定的HCV细胞复制模型,另构建p CDNA3.1-Rev-Flag-m Cherry和p CDNA3.1-DDX3-YFP-Flag的过表达载体,通过PCR、Western blot和核苷酸测序等方法鉴定载体构建成功后,将实验分为2组对照实验,对照组均只将HCV复制质粒转染Huh7细胞:1组实验组为DDX3和HCV RNA复制质粒共转染入Huh7细胞;2组的实验组为Rev、DDX3和HCV RNA复制质粒共转染入Huh7细胞。最后通过q PCR定量测定各组HCV RNA复制水平并进行比较。结果转染后48 h测各组HCV RNA的复制水平,DDX3+HCV RNA复制质粒组中HCV RNA的水平(1.09×107±0.18×107)明显高于单独转染HCV RNA复制质粒组(4.79×106±1.24×106)(P=0.03);而Rev+DDX3+HCV RNA复制质粒组中HCV RNA的水平(1.74×107±0.40×107)明显低于单独转染HCV RNA复制质粒组(4.17×107±0.46×107)(P<0.001)。结论成功构建Rev蛋白和DDX3的过表达载体,并初步证明人DDX3解旋酶可促进HCV RNA的复制,而Rev蛋白和DDX3共同作用可抑制HCV RNA的复制。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒ⅰ型 病毒颗粒蛋白表达调节因子 DEAD-box蛋白家族的ATP依赖的RNA解旋酶3 丙型肝炎病毒

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TAR RNA结合蛋白在HIV-1感染中的作用

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作者 林晓燕 杨怡姝 曾毅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期886-891,共6页

TARRNA结合蛋白是细胞中双链RNA结合蛋白家族成员之一.它可以结合HIV-1TARRNA,并与Tat协同作用激活LTR表达,进而促进病毒的转录与翻译.TRBP也是将干扰素抗病毒通路与RNA干扰免疫通路相连的一种细胞蛋白.在干扰素诱生的PKR反应中,TRBP通... TARRNA结合蛋白是细胞中双链RNA结合蛋白家族成员之一.它可以结合HIV-1TARRNA,并与Tat协同作用激活LTR表达,进而促进病毒的转录与翻译.TRBP也是将干扰素抗病毒通路与RNA干扰免疫通路相连的一种细胞蛋白.在干扰素诱生的PKR反应中,TRBP通过直接抑制PKR的自磷酸化、与PKR竞争通用的RNA底物或与PACT形成异源二聚体等机制抑制细胞内的PKR反应,从而降低了PKR介导的对病毒表达的抑制作用.TRBP与Dicer和Ago2等组成的RNA诱导沉默复合体,在RNA干扰中发挥着关键作用并调控随后的序列特异性降解.在HIV-1感染中,TRBP更倾向于促进病毒的表达与复制,因此TRBP也成为控制HIV-1感染的新靶点. 展开更多

关键词 反式激活应答元件RNA结合蛋白 蛋白激酶R 人免疫缺陷病毒ⅰ型 RNA干扰

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