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缺失gE基因的牛Ⅰ型疱疹病毒构建及其体外增殖特性比较
1
作者 尹龙勃 尹文玲 +5 位作者 叶伟成 孙学强 杨鸣琦 王一成 袁秀芳 张存 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期839-843,共5页
为构建gE基因缺失的牛Ⅰ型疱疹病毒(BHV1),本研究在BHV1全基因组感染性细菌人工染色体克隆pBHV1-ZJ的基础上,利用Red E/T重组技术,分别构建了gE基因缺失、gE和gN双基因缺失的pBHV1突变体,通过转染获得了重组病毒rBHV1-△gE,而双基因缺... 为构建gE基因缺失的牛Ⅰ型疱疹病毒(BHV1),本研究在BHV1全基因组感染性细菌人工染色体克隆pBHV1-ZJ的基础上,利用Red E/T重组技术,分别构建了gE基因缺失、gE和gN双基因缺失的pBHV1突变体,通过转染获得了重组病毒rBHV1-△gE,而双基因缺失突变体pBHV1-△gN-△gE则未能观察到细胞病变。病毒噬斑大小和生长曲线试验表明,在感染细胞内和培养基中,rBHV1-△gE滴度与亲本毒株BHV1无明显差异,而rBHV1-△gN显著降低;重组病毒rBHV1-△gE和前期构建的rBHV1-△gN形成的噬斑均显著小于亲本病毒,其大小分别为亲本病毒的18%和64%。rBHV1-△gE和rBHV1-△gN的构建将有助于阐明gE与gN协同作用机制和为研制BHV1新型基因标记疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 牛ⅰ型疱疹病毒 感染性克隆 RedE/T重组 囊膜蛋白gN 囊膜蛋白gE
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中华绒螯蟹放养期仔蟹Ⅰ型疱疹病毒的电镜观察 被引量：7
2
作者 孙丽敏 国际翔 《水产科学》 CAS 北大核心 1999年第6期20-22,共3页
在营口市老边区采集的中华绒螯蟹仔蟹大量死亡两份样品的组织切片中， 发现Ⅰ型疱疹病毒， 其截面直径为０－４～１－３μｍ ， 具４ 层结构， 此病毒可能造成仔蟹大量死亡的原因。本文报道了电镜对此病毒的观察结果。
关键词 河蟹 死亡 电镜 ⅰ型疱疹病毒
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用PCR检测牛精液中牛Ⅰ型疱疹病毒
3
作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1997年第24期6-6,共1页
荷兰的研究人员研制了一种PCR测定法,用以检测选择性消化全牛精液中的牛Ⅰ型疱疹病霉(BHV-1)DNA。使用一种蛋白酶-K进行的简单处理以溶解游离病毒、在非精子细胞中存在的病毒及粘附于精子表面的病毒。这种处理不能使基因组牛DNA释放出... 荷兰的研究人员研制了一种PCR测定法,用以检测选择性消化全牛精液中的牛Ⅰ型疱疹病霉(BHV-1)DNA。使用一种蛋白酶-K进行的简单处理以溶解游离病毒、在非精子细胞中存在的病毒及粘附于精子表面的病毒。这种处理不能使基因组牛DNA释放出来。根据gD基因的核苷酸顺序选择引物和探针。用眼观溴乙锭染色的琼脂糖凝胶来检测PCR产物。 展开更多
关键词 牛ⅰ型疱疹病毒 牛精液 PCR检测 PCR测定法 非精子细胞 DNA释放 单处理 游离病毒 试验感染 精子表面
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一株猫疱疹病毒(Ⅰ型)的分离、鉴定及致病性研究
4
作者 冯可昕 高思璐 +3 位作者 陈梦茹 刘哲 刘家森 曲连东 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期245-251,共7页
猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)侵入猫上呼吸道系统引发的鼻气管炎是全世界猫科动物中常见的一种病毒性传染疾病,目前我国分离到FHV-1的报道并不多。本研究采集患呼吸系统疾病猫眼鼻拭子,利用猫肾细胞(F81)分离病毒和纯化,结果显示感染分离产物... 猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)侵入猫上呼吸道系统引发的鼻气管炎是全世界猫科动物中常见的一种病毒性传染疾病,目前我国分离到FHV-1的报道并不多。本研究采集患呼吸系统疾病猫眼鼻拭子,利用猫肾细胞(F81)分离病毒和纯化,结果显示感染分离产物的F81细胞出现明显的疱疹病毒细胞病变(CPE),对其细胞培养物上清进行PCR鉴定,目的条带符合预期大小(625 bp)。进一步对该分离株进行IFA鉴定,结果显示感染该分离株的F81与FHV-1多克隆抗体作用后出现特异性绿色荧光。对分离产物进行超速离心和纯化后经电子显微镜可观察到球形、有囊膜、直径约为200 nm的疱疹病毒样颗粒。将该分离株FHV-1命名为FHV-Q3株。PCR扩增FHV-Q3的gD基因片段,并对其进行测序,结果显示,与NCBI中已登录的FHV-1 gD基因的同源性达99%以上。利用Reed-Muench法测定FHV-Q3的TCID_(50),结果显示FHV-Q3的病毒效价为1.78×10^(6) TCID_(50)/mL。将FHV-Q3株第6代5倍稀释后以滴鼻点眼的方式接种3只3月龄的中华田园猫,同时设置PBS接种的猫作为对照组。于感染后3 d、6 d、9 d、12 d、15 d采集眼鼻拭子并进行临床症状观察和评分,感染后16 d剖杀各组猫并取气管、喉、肺,利用qPCR检测病毒载量,同时制作气管和肺脏的病理切片并观察。结果显示,FHV-Q3株感染后会引发典型的鼻气管炎症状,在实验的15 d内无死亡;眼鼻拭子病毒载量最高可达7.9×10^(6)拷贝/μL,组织脏器中喉部的病毒粒子含量最高可达7.9×10^(3)拷贝/mg;组织病理切片观察显示,仅肺部有明显的炎症性细胞浸润和肺泡上皮细胞增生。综上所述本研究在猫眼鼻拭子中分离出了FHV-1,该分离株可引起典型的猫病毒性鼻气管炎症状,该结果不仅丰富了我国FHV-1分离株的病毒库,也为今后FHV-1的临床研究以及FHV-1相关生物制品的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒ⅰ型 病毒的分离鉴定 致病性研究
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1例猫疱疹病毒Ⅰ型与猫杯状病毒混合感染病例的诊疗
5
作者 李明俊 王敏 赖金伦 《现代畜牧兽医》 2025年第7期55-58,共4页
1只4岁雌性中华田园猫因表现精神沉郁、食欲减退、牙龈红肿伴有疼痛、口腔流涎、口臭等症状来院就诊。临床检查发现,患猫口腔、牙龈红肿,轻度脱水,猫疱疹病毒Ⅰ型和猫杯状病毒PCR检测结果均为阳性,诊断为猫疱疹病毒Ⅰ型与猫杯状病毒混... 1只4岁雌性中华田园猫因表现精神沉郁、食欲减退、牙龈红肿伴有疼痛、口腔流涎、口臭等症状来院就诊。临床检查发现,患猫口腔、牙龈红肿,轻度脱水,猫疱疹病毒Ⅰ型和猫杯状病毒PCR检测结果均为阳性,诊断为猫疱疹病毒Ⅰ型与猫杯状病毒混合感染。以抗病毒、抗菌、对症治疗、营养支持为原则进行了7 d的治疗,患猫精神良好,食欲正常,口腔溃疡愈合,康复出院。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒ⅰ型 猫杯状病毒 混合感染 猫上呼吸道感染
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猫疱疹病毒Ⅰ型gIgE基因缺失毒株的构建及生物学特性分析 被引量：1
6
作者 张晶晶 孙慧敏 +1 位作者 宋家升 鲍恩东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期515-521,共7页
[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sg... [目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sgRNA及Cas9蛋白的质粒与含有RFP的转移载体共转染到猫肾细胞(F81),通过噬斑纯化以及有限稀释方法进行病毒纯化,以重组病毒感染F81细胞连续10代验证其遗传稳定性,通过测定重组病毒以及亲本病毒H07的病毒滴度、一步生长曲线以及判断噬斑大小评价其生物学特性。[结果]成功构建了FHV-1 gIgE基因缺失毒株并将其命名为FHV-ΔgIgE-RFP;提取重组病毒DNA,通过PCR验证gIgE基因无目的条带,表明重组病毒纯化成功,再通过PCR验证RFP基因有目的条带,表明重组病毒成功插入外源基因。病毒滴度测定结果显示,与亲本病毒相比重组病毒的病毒滴度下降了90%;在F 1—F 10连续传代过程中RFP荧光表达且无减弱现象,表明重组病毒可稳定表达外源基因;测定FHV-ΔgIgE-RFP以及H07的生长曲线,重组病毒的生长趋势与亲本病毒大致相同,表明插入外源基因并不会改变病毒本身的生长特性;噬斑观察及染色结果显示,在病毒感染细胞前、后期,重组病毒的噬斑都小于亲本病毒,表明缺失gIgE基因后病毒毒力下降。[结论]成功构建并筛选出FHV-1 gIgE基因缺失致弱毒株,为开发疱疹病毒弱毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒ⅰ型(FHV-1) 致弱毒株 重组病毒 病毒筛选
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1例猫杯状病毒与疱疹病毒Ⅰ型混合感染的诊疗 被引量：2
7
作者 朱仕炯 《贵州畜牧兽医》 2024年第5期78-80,共3页
文章介绍了1例猫杯状病毒-猫疱疹病毒Ⅰ型混合感染的诊疗情况。通过猫呼吸道病原体5联荧光核酸检测方法进行诊断,采用抗病毒、提升免疫力、消炎的治疗方案,14天后康复。
关键词 猫杯状病毒 猫疱疹病毒ⅰ型 混合感染
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猫疱疹病毒Ⅰ型荧光定量聚合酶链式反应检测方法的建立
8
作者 陆媛倩 姜骏飞 +3 位作者 程松 郑晓峰 李丕顺 孙相鑫 《湖南畜牧兽医》 2024年第1期35-41,共7页
研究旨在建立实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type Ⅰ,FHV-1)的方法,用于检测临床上猫的上呼吸道传染病样本。据GenBank已发表的猫疱疹病毒... 研究旨在建立实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type Ⅰ,FHV-1)的方法,用于检测临床上猫的上呼吸道传染病样本。据GenBank已发表的猫疱疹病毒的gE基因序列的保守区域设计并合成一对特异性引物及探针,建立FHV-1的实时荧光定量PCR检测方法,对此方法进行特异性、灵敏度及重复性的验证,并对广东佛山某流浪猫基地猫疱疹病毒的流行情况进行调查,即对该基地的94份临床样品进行检测。结果表明:研究成功建立了FHV-1实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法,此方法特异性强,与大多流行的犬猫病毒均未出现交叉反应;敏感性高,最低检出限为10 copies·μL^(-1);重复性好,批内变异系数为0.29%~0.71%,批间变异系数为0.88%~1.38%。应用此方法在94份临床样品中检出28份FHV-1核酸阳性样品。综上所述,研究建立的FHV-1荧光定量聚合酶链式反应方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,为临床上FHV-1的快速检测提供了可行的解决方案。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒ⅰ型 聚合酶链式反应 猫
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Ⅰ型单纯疱疹病毒潜伏感染及其应激复发 被引量：12
9
作者 罗卓 颜畅 +2 位作者 李怡芳 栗原博 何蓉蓉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1185-1190,共6页
Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)是常见的病原体,人是其唯一自然宿主。原发感染后,HSV-1在上皮细胞大量复制,然后沿轴突逆行至感觉神经节并潜伏下来。当机体在一定的应激负荷下,潜伏感染的病毒重新激活,从而造成复发性疾病。因此,阐明病毒潜伏... Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)是常见的病原体,人是其唯一自然宿主。原发感染后,HSV-1在上皮细胞大量复制,然后沿轴突逆行至感觉神经节并潜伏下来。当机体在一定的应激负荷下,潜伏感染的病毒重新激活,从而造成复发性疾病。因此,阐明病毒潜伏感染及应激复发的相关机制,将对Ⅰ型单纯疱疹病毒预防、治疗和控制带来新的启示。该文就HSV-1潜伏感染与应激复发的相关机制进行综述。 展开更多
关键词 ⅰ型单纯疱疹病毒 潜伏 复发 应激 ⅰ型干扰素 免疫逃逸
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大鼠鞘内注射单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体介导人前脑啡肽原基因的表达及对甲醛炎性痛的镇痛效应 被引量：7
10
作者 刘惠宁 邹望远 +3 位作者 杨勇 王锷 李准民 刘庚勋 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期742-746,共5页
目的:大鼠鞘内注射介导人前脑啡肽原基因(HPPE)单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)扩增子载体,观察LacZ和HPPE在脊髓神经元细胞中的共表达及对甲醛炎性痛的镇痛效应。方法:纯种雄性SD大鼠随机分为pHSVIRES-HPPE-LacZ载体组(SHPZ),pHSVIRES-LacZ... 目的:大鼠鞘内注射介导人前脑啡肽原基因(HPPE)单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)扩增子载体,观察LacZ和HPPE在脊髓神经元细胞中的共表达及对甲醛炎性痛的镇痛效应。方法:纯种雄性SD大鼠随机分为pHSVIRES-HPPE-LacZ载体组(SHPZ),pHSVIRES-LacZ空白载体组(SHZ),生理盐水组(NS),又分为分别注射SHPZ,SHZ和NS后3d,1周,2周,3周,4周,5周时观察镇痛效应组,并对1周组观察HPPE转染表达,每组6只。采用改良Yaksh法对大鼠进行鞘内置管后,将构建好的含HPPE的重组单纯疱疹病毒I型扩增子载体注入大鼠鞘内,通过X-gal染色原位检测报告基因LacZ的表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测HPPE的表达,放射免疫法检测脊髓组织脑啡肽浓度,并观察转染含HPPE基因载体对大鼠甲醛炎性疼痛的镇痛效应。结果:pHSVIRES-HPPE-LacZ在体感染大鼠中枢神经细胞后,用X-gal染色、RT-PCR和放射免疫检测方法均证实外源脑啡肽基因能有效表达。对甲醛诱发的炎性疼痛中,疼痛加权评分(PIS)于1周,2周,3周,4周时在第1相和第2相与对照组比较有显著差异,于第5周时第2相PIS接近对照组,对甲醛的镇痛效应可被鞘内注射纳洛酮拮抗。结论:SHPZ能成功地将外源HPPE转染到脊髓神经元细胞中,使之有效表达,提示扩增子载体SHPZ是良好的慢性疼痛转基因治疗工具;HPPE的表达产物可对甲醛炎性痛产生镇痛效应。 展开更多
关键词 疱疹病毒ⅰ型 脑啡肽 疼痛 基因治疗 神经元
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猫疱疹病毒Ⅰ型PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：9
11
作者 李航 刘俊平 +2 位作者 关平原 雷宇 李志 《动物医学进展》 北大核心 2017年第11期86-90,共5页
建立猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)PCR检测方法,应用于临床样品中FHV-1的快速检测。根据猫疱疹病毒Ⅰ型的gI基因序列设计了一对特异性引物,以疑似猫疱疹病毒Ⅰ型感染猫的眼鼻分泌物总DNA为模板,建立了PCR检测方法,对所建立的方法进行特异性、... 建立猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)PCR检测方法,应用于临床样品中FHV-1的快速检测。根据猫疱疹病毒Ⅰ型的gI基因序列设计了一对特异性引物,以疑似猫疱疹病毒Ⅰ型感染猫的眼鼻分泌物总DNA为模板,建立了PCR检测方法,对所建立的方法进行特异性、敏感性和重复性验证,并对26份临床样本进行检测。结果表明,所建立的PCR诊断方法与犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、绵羊肺炎支原体(M.ovis)、牛支原体(M.bovis)、牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)均无交叉性反应,最低检测DNA模板浓度为3.23×10~3 copies/μL。对26份临床病例进行检测,阳性率61.54%。说明建立的FHV-1PCR检测方法具有特异性强、敏感度高、方便快捷等优点,适合于临床FHV-1感染的快速检测。 展开更多
关键词 猫 猫疱疹病毒ⅰ型 PCR检测
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山羊疱疹病毒Ⅰ型的分离鉴定与致病性 被引量：3
12
作者 郝飞 毛立 +7 位作者 李文良 李基棕 杨蕾蕾 张纹纹 孙敏 钟纯燕 刘茂军 江杰元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1797-1802,共6页
为了查明引起2013—2014年江苏多地育肥羊出现呼吸道症状为主的疾病的病因,通过采集发病羊场鼻拭子,采用细胞接毒分离培养、病毒蚀斑纯化、病毒形态结构观察和病毒核酸鉴定,分离到一株山羊疱疹病毒Ⅰ型(caprine herpesvirus 1,CpHV-1),... 为了查明引起2013—2014年江苏多地育肥羊出现呼吸道症状为主的疾病的病因,通过采集发病羊场鼻拭子,采用细胞接毒分离培养、病毒蚀斑纯化、病毒形态结构观察和病毒核酸鉴定,分离到一株山羊疱疹病毒Ⅰ型(caprine herpesvirus 1,CpHV-1),命名为JSHA1405;并对其进行了致病性试验。分离鉴定结果表明:病料接种MDBK细胞后,盲传至第3代时产生明显细胞病变;电镜下可见直径约100nm有囊膜的病毒粒子;gB全基因测序表明其为CpHV-1,序列比对显示JSHA1405株与CpHV-1瑞士分离毒E/CH株相似性最高,为99.2%。致病性试验表明,JSHA1405分离株可导致山羊发热持续一周以上,体温最高可达41.8℃。山羊感染后临床症状明显,表现为精神沉郁、流浆液性或脓性鼻涕,可通过鼻腔/粪便排毒。山羊感染后第7天出现中和抗体,第28天达到最高。这是国内首次报道CpHV-1的分离鉴定及致病性,分离毒JSHA1405具有较强的致病性,为CpHV-1病原学及防控技术研究提供依据与参考。 展开更多
关键词 山羊疱疹病毒ⅰ型 分离鉴定 致病性 GB
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肉鸽圆环病毒、腺病毒及疱疹病毒Ⅰ型混合感染的多重PCR检测 被引量：9
13
作者 陈俊红 何宇 +6 位作者 祁宇晨 刘裕鹏 邢光东 王莹 徐善金 方光远 戴鼎震 《江苏农业科学》 北大核心 2021年第22期167-171,共5页
运用多重PCR同时检测肉鸽病原(圆环病毒、腺病毒及疱疹病毒Ⅰ型)的方法,分别设计与合成3种病毒基因扩增引物,并提取疑似病鸽的肝脏样品DNA、进行单一PCR扩增及基因序列测定,结果分别获得了大小为239、418、618 bp的DNA产物。通过摸索多... 运用多重PCR同时检测肉鸽病原(圆环病毒、腺病毒及疱疹病毒Ⅰ型)的方法,分别设计与合成3种病毒基因扩增引物,并提取疑似病鸽的肝脏样品DNA、进行单一PCR扩增及基因序列测定,结果分别获得了大小为239、418、618 bp的DNA产物。通过摸索多重PCR反应条件,应用多重PCR同时检测3种病毒基因片段,同时获得了鸽疱疹病毒Ⅰ型、鸽圆环病毒及鸽源腺病毒的基因片段。再对疑似混合感染这3种病毒的肝脏样品进行检测,发现50%(6/12)样品存在3种病毒的混合感染、25%(3/12)样品存在鸽圆环病毒和鸽源腺病毒的混合感染、8.3%(1/12)样品存在鸽源腺病毒和Ⅰ型鸽疱疹病毒的混合感染、8.3%(1/12)样品存在鸽圆环病毒和Ⅰ型鸽疱疹病毒的混合感染、8.3%(1/12)样品未发生任何感染。结果表明,多重PCR可快速检测鸽疱疹病毒Ⅰ型、鸽圆环病毒及鸽源腺病毒的混合感染,表明运用三重PCR检测3种病毒混合感染有很好的应用价值。 展开更多
关键词 鸽圆环病毒 鸽源腺病毒 鸽疱疹病毒ⅰ型 多重PCR 基因测序
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灰树花β-葡聚糖体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的试验 被引量：7
14
作者 王文秀 孙红武 徐泽平 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第9期10-13,共4页
本研究通过观察细胞病变效应对其细胞毒性、病毒灭活、吸附和增殖等进行体外抗病毒研究,从而研究其抗病毒效应。结果显示,β-葡聚糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒在Vero E6细胞上的增殖有明显的抑制作用,测定其IC50为5.18mg/mL,TI为34.1。结果表明... 本研究通过观察细胞病变效应对其细胞毒性、病毒灭活、吸附和增殖等进行体外抗病毒研究,从而研究其抗病毒效应。结果显示,β-葡聚糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒在Vero E6细胞上的增殖有明显的抑制作用,测定其IC50为5.18mg/mL,TI为34.1。结果表明,灰树花β-葡聚糖能明显抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒引起的CPE效应,具有较好的抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的作用。 展开更多
关键词 灰树花 Β-葡聚糖 抗病毒 ⅰ型单纯疱疹病毒
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表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定 被引量：8
15
作者 冯军科 朱远茂 +6 位作者 任宪刚 祖立闯 李娇 史鸿飞 高欲燃 童光志 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期81-85,共5页
为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BH... 为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 牛呼吸道合胞体病毒 G蛋白基因 牛疱疹病毒ⅰ型 磷酸钙-DNA沉淀法
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猫疱疹病毒Ⅰ型实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用 被引量：13
16
作者 王吉 卫礼 +5 位作者 付瑞 李晓波 王淑菁 巩薇 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第12期47-54,共8页
目的：建立猫疱疹病毒I型（ FHV-1）实时荧光定量PCR检测方法，应用于实验用猫及临床患猫FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1 TK基因序列设计特异引物和TaqMan探针，使用分子生物学方法制备质粒标准品，建立FHV-1实时荧光定量PCR... 目的：建立猫疱疹病毒I型（ FHV-1）实时荧光定量PCR检测方法，应用于实验用猫及临床患猫FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1 TK基因序列设计特异引物和TaqMan探针，使用分子生物学方法制备质粒标准品，建立FHV-1实时荧光定量PCR方法，并对方法的线性、特异性、敏感性、及稳定性等进行测定。用建立的方法对48份猫临床样品进行检测。结果成功建立FHV-1实时荧光定量PCR方法；该方法的线性范围为（1×102～1×109）copies／μL，与单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）、犬疱疹病毒（CHV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猫细小病毒（ FPV）均无交叉反应，检测灵敏度可达到10 copies／μL。批内变异系数均小于5％。应用该方法从48份猫临床样本中检测出33份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点，适合于临床FHV-1的快速定量检测。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒ⅰ型 实时荧光定量PCR 猫
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新型冠状病毒肺炎合并感染Ⅰ型单纯疱疹病毒的诊断 被引量：1
17
作者 李幸乐 卢世栋 +4 位作者 马红霞 李懿 叶莹 黄学勇 郭万申 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2021年第5期731-733,共3页
目的:回顾新型冠状病毒(2019-nCoV)合并Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染的诊断方法。方法:收集12例新型冠状病毒肺炎确诊病例的核酸阳性咽拭子样本,采用Vero和Vero E6细胞进行病毒分离,采用实时荧光定量PCR法进行2019-nCoV核酸检测,采用Mi... 目的:回顾新型冠状病毒(2019-nCoV)合并Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染的诊断方法。方法:收集12例新型冠状病毒肺炎确诊病例的核酸阳性咽拭子样本,采用Vero和Vero E6细胞进行病毒分离,采用实时荧光定量PCR法进行2019-nCoV核酸检测,采用MiSeq测序技术测定分离株基因组序列,采用MicroSpectrum病原体鉴定分析软件分析非2019-nCoV毒株组分。结果:12例12份咽拭子样本中分离得到5株病毒,其中4株病毒各代培养物均呈2019-nCoV核酸阳性,HN03株在培养过程中观察到支原体感染表现并逐渐表现为2019-nCoV核酸阴性。MiSeq测序获得4株2019-nCoV全基因组序列,HN03株获得部分2019-nCoV基因序列。HN03株的三代培养物经宏基因组序列测定、分析,结果提示HN03株为HSV-1和猪鼻支原体双阳性。结论:HN03株源病例为2019-nCoV和HSV-1合并感染。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 ⅰ型单纯疱疹病毒 合并感染 MiSeq测序
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Ⅰ型牛疱疹病毒活载体疫苗的构建及研究进展 被引量：3
18
作者 李继昌 鲁成武 殷会成 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第3期369-372,共4页
I型牛疱疹病毒(BHV-1)可引起牛的呼吸道疾病、生殖道损害、流产甚至致死性系统感染,给养牛业造成了严重的经济损失,疫苗接种是防治本病的主要措施。文章介绍了其活载体疫苗的构建原理、研究进展及应用前景方面内容。
关键词 ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1) 活载体疫苗 预防接种
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牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株gD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2
19
作者 庄东明 王建华 +4 位作者 吴春涛 霍蕾 侯艳梅 赵祥平 牛钟相 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期1-5,共5页
用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株的MDBK细胞中扩增gD基因,将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析,设计合成3对引物,以获得的克隆质粒为模板,PCR扩增gD胞外域基因,将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载... 用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株的MDBK细胞中扩增gD基因,将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析,设计合成3对引物,以获得的克隆质粒为模板,PCR扩增gD胞外域基因,将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载体中构建成表达质粒pGEX-4T-gDQ、pGEX-4T-gDQB、pGEX-4T-gDHB和pET-gDQ、pET-gDQB、pET-gDHB,利用上述质粒分别转化大肠杆菌BL21和BL21(DE3),IPTG诱导后SDS-PAGE检测,结果pGEX-4T-gDQ、pGEX-4T-gDQB、pGEX-4T-gDHB和pET-gDQ四个表达质粒出现表达且符合预期大小,Western blot表明表达产物均有抗原性。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒ⅰ型 gD糖蛋白基因 克隆 原核表达
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鲤疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型研究进展 被引量：9
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作者 罗丹 梁利国 +1 位作者 谢骏 吴旭东 《水生态学杂志》 北大核心 2014年第3期94-100,共7页
近年来,鲤疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型(Cyprinid herpesvirusⅠ、Ⅱ、Ⅲ)病毒给我国鲤科鱼的养殖造成了严重的经济损失。CyHV-Ⅰ主要危害1龄以上的鲤,对鲫、圆腹雅罗鱼、鲤与金鱼杂交种等也有危害。CyHV-Ⅱ仅感染金鱼、鲫及其普通变种如异育... 近年来,鲤疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型(Cyprinid herpesvirusⅠ、Ⅱ、Ⅲ)病毒给我国鲤科鱼的养殖造成了严重的经济损失。CyHV-Ⅰ主要危害1龄以上的鲤,对鲫、圆腹雅罗鱼、鲤与金鱼杂交种等也有危害。CyHV-Ⅱ仅感染金鱼、鲫及其普通变种如异育银鲫、金鱼和鲤的杂交体,对鱼卵、鱼苗、鱼种、亲鱼等各个时期均有危害,而幼鱼较成鱼易受到感染。鲤除了幼鱼不易受CyHV-Ⅲ影响,其他所有龄期均对其敏感。CyHV-Ⅲ不仅鲤能感染,其他鲤科鱼、锦鲤和鲫的杂交后代、锦鲤和金鱼的杂交后代均对其易感,金鱼、鲟均可作为CyHV-Ⅲ潜在的携带载体。就3种病毒的流行现状,临床症状,引发疾病的病理特征,检测方法等取得的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 鲤科疱疹病毒ⅰ型 鲤科疱疹病毒Ⅱ型 鲤科疱疹病毒Ⅲ型 病理特征 临床症状 检测方法
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