牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)免疫逃逸机制研究进展 被引量：2

1

作者 杨志元 闻晓波 冉旭华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2018年第4期42-46,共5页

牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)为α疱疹病毒亚科成员,是引起牛多种疾病的重要病原之一。BHV-1面对牛免疫系统的不断进化,产生出多种机制以逃逸宿主的免疫防御,其主要包括诱导外周血单个核细胞凋亡、感染淋巴细胞和抑制淋巴细胞反应、抑制干扰素... 牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)为α疱疹病毒亚科成员,是引起牛多种疾病的重要病原之一。BHV-1面对牛免疫系统的不断进化,产生出多种机制以逃逸宿主的免疫防御,其主要包括诱导外周血单个核细胞凋亡、感染淋巴细胞和抑制淋巴细胞反应、抑制干扰素-β表达和建立潜伏感染等多种免疫逃逸机制。BHV-1的免疫逃逸给治疗和预防BHV-1所导致的相关疾病造成了极大的困难。尤其以潜伏感染最为严重,它能使患病动物终身带毒并能实现病毒的再激活。故主要阐述BHV-1的上述免疫逃逸机制,以期对相关疾病的防制和疫苗创制提供一定的帮助。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒ⅰ型 免疫逃逸 潜伏感染

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赤羽病病毒、牛疱疹病毒1型和牛病毒性腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立

2

作者 张帆帆 韦家禛 +6 位作者 李杰茂 谭美芳 胡利珍 曾艳兵 龚小齐 杨群 徐俊 《福建农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第11期1242-1247,共6页

【目的】旨在建立一种可同时检测赤羽病病毒(akabane virus,AKAV)、牛疱疹病毒1型(bovine herpesvirus1,BoHV-1)和牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的多重RT-PCR检测方法,为牛繁殖障碍类疫病鉴别诊断及防控奠定基础... 【目的】旨在建立一种可同时检测赤羽病病毒(akabane virus,AKAV)、牛疱疹病毒1型(bovine herpesvirus1,BoHV-1)和牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的多重RT-PCR检测方法,为牛繁殖障碍类疫病鉴别诊断及防控奠定基础。【方法】针对AKAV的S基因、BoHV-1的gH基因和BVDV的3'UTR保守区域设计3对引物,通过反应条件参数的优化,建立AKAV、BoHV-1和BVDV多重RT-PCR检测方法。【结果】特异性结果显示,该方法仅对AKAV、BoHV-1和BVDV阳性样品检测为阳性,对牛细小病毒(bovine parvovirus,BPV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)、牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus 3,BPIV3)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)、牛流行热病毒(bovine ephemeral fever rhabdovirus,BEFV)等阳性样品检测为阴性。敏感性结果显示,该方法对AKAV、BoHV-1和BVDV重组质粒的下限阈值均为1.0×10^(3)拷贝·μL^(-1)。重复性结果显示,批内、批间重复性均较好。利用建立的方法对143份患繁殖障碍的牛全血/组织样品进行测定,并与现有的地方标准进行对比,验证本检测方法的实际临床应用效能。结果显示,AKAV、BoHV-1和BVDV的阳性率分别为2.80%(4/143)、21.68%(31/143)、38.46%(55/143),存在混合感染现象,与AKAV、BoHV-1和BVDV地方标准检测方法的符合率为99.3%、98.6%和97.2%,Kappa系数分别为0.885、0.960和0.942,表明本研究建立的方法与地方标准检测结果一致性良好。【结论】本研究开创性建立了一种特异性强、灵敏度高和成本低的多重RT-PCR检测方法,适用于AKAV、BoHV-1和BVDV的鉴别检测。 展开更多

关键词 赤羽病病毒 牛疱疹病毒1型 牛病毒性腹泻病毒 多重RT-PCR 繁殖障碍

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1型牛疱疹病毒(BHV-1)感染最新研究进展 被引量：5

3

作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 2003年第12期12-14,共3页

1病毒 1型牛疱疹病毒(BHV-1)可以引起传染性牛鼻气管炎(IBR).IBR是一种在世界各地都有发生的地方性疾病,常常引起大规模饲养场的暴发,引起轻微到严重的呼吸道和泌尿生殖道疾病,被列为OIE的B类疾病名单中,对社会经济和(或)公共卫生有重... 1病毒 1型牛疱疹病毒(BHV-1)可以引起传染性牛鼻气管炎(IBR).IBR是一种在世界各地都有发生的地方性疾病,常常引起大规模饲养场的暴发,引起轻微到严重的呼吸道和泌尿生殖道疾病,被列为OIE的B类疾病名单中,对社会经济和(或)公共卫生有重要的影响,对动物和动物产品的国际贸易有明显的影响. 展开更多

关键词 牛 1型牛疱疹病毒 传染性鼻气管炎 发病机理 诊断 免疫学 疫苗学

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猫疱疹病毒Ⅰ型gIgE基因缺失毒株的构建及生物学特性分析 被引量：1

4

作者 张晶晶 孙慧敏 +1 位作者 宋家升 鲍恩东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期515-521,共7页

[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sg... [目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sgRNA及Cas9蛋白的质粒与含有RFP的转移载体共转染到猫肾细胞(F81),通过噬斑纯化以及有限稀释方法进行病毒纯化,以重组病毒感染F81细胞连续10代验证其遗传稳定性,通过测定重组病毒以及亲本病毒H07的病毒滴度、一步生长曲线以及判断噬斑大小评价其生物学特性。[结果]成功构建了FHV-1 gIgE基因缺失毒株并将其命名为FHV-ΔgIgE-RFP;提取重组病毒DNA,通过PCR验证gIgE基因无目的条带,表明重组病毒纯化成功,再通过PCR验证RFP基因有目的条带,表明重组病毒成功插入外源基因。病毒滴度测定结果显示,与亲本病毒相比重组病毒的病毒滴度下降了90%;在F 1—F 10连续传代过程中RFP荧光表达且无减弱现象,表明重组病毒可稳定表达外源基因;测定FHV-ΔgIgE-RFP以及H07的生长曲线,重组病毒的生长趋势与亲本病毒大致相同,表明插入外源基因并不会改变病毒本身的生长特性;噬斑观察及染色结果显示,在病毒感染细胞前、后期,重组病毒的噬斑都小于亲本病毒,表明缺失gIgE基因后病毒毒力下降。[结论]成功构建并筛选出FHV-1 gIgE基因缺失致弱毒株,为开发疱疹病毒弱毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒ⅰ型(FHV-1) 致弱毒株 重组病毒 病毒筛选

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马疱疹病毒1型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：8

5

作者 王征 郭巍 +4 位作者 姬媛媛 曲娟娟 赵立平 李红梅 相文华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期116-119,共4页

为建立马疱疹病毒Ⅰ型(EHV-1)的检测方法,本研究以EHV-1 gB基因的一段保守区域(1 207 bp～1 509 bp)作为检测的目的片段设计引物,通过对其反应条件的优化,建立了特异性检测EHV-1的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。实验结果表明:该方法检... 为建立马疱疹病毒Ⅰ型(EHV-1)的检测方法,本研究以EHV-1 gB基因的一段保守区域(1 207 bp～1 509 bp)作为检测的目的片段设计引物,通过对其反应条件的优化,建立了特异性检测EHV-1的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。实验结果表明:该方法检测目的基因的灵敏度下限为10拷贝/μL,比常规PCR方法高100倍;与马疱疹病毒4型(EHV-4)及其他马传染病病原体无交叉反应;组内及组间的变异系数均小于2%。该方法检测速度快及高敏感性的特点为马鼻肺炎的防制提供了有力保障,同时也为进一步开展马鼻肺炎相关的研究提供了有效的辅助检测方法技术。 展开更多

关键词 马疱疹病毒1型 SYBR Greenⅰ 荧光定量PCR

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表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定 被引量：8

6

作者 冯军科 朱远茂 +6 位作者 任宪刚 祖立闯 李娇 史鸿飞 高欲燃 童光志 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期81-85,共5页

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BH... 为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 G蛋白基因 牛疱疹病毒ⅰ型 磷酸钙-DNA沉淀法

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Ⅰ型牛疱疹病毒活载体疫苗的构建及研究进展 被引量：3

7

作者 李继昌 鲁成武 殷会成 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第3期369-372,共4页

I型牛疱疹病毒(BHV-1)可引起牛的呼吸道疾病、生殖道损害、流产甚至致死性系统感染,给养牛业造成了严重的经济损失,疫苗接种是防治本病的主要措施。文章介绍了其活载体疫苗的构建原理、研究进展及应用前景方面内容。

关键词 ⅰ型牛疱疹病毒(bhv-1) 活载体疫苗 预防接种

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共表达与牛疱疹病毒1型VP22融合的猪繁殖与呼吸综合征病毒E及M蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫原性观察 被引量：7

8

作者 赵武 肖少波 +5 位作者 方六荣 江云波 宋云峰 严琳 余晓岚 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期401-407,共7页

为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程疫苗,以伪狂犬病毒(PRV)gE基因缺失标志疫苗株TK-/gE-/LacZ+为病毒载体,通过同源重组,构建了共表达与牛疱疹病毒1型VP22(BHV-1 VP22)融合的PRRSV E及M蛋白的重组伪狂犬病毒(rPRV)TK-/gE-/... 为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程疫苗,以伪狂犬病毒(PRV)gE基因缺失标志疫苗株TK-/gE-/LacZ+为病毒载体,通过同源重组,构建了共表达与牛疱疹病毒1型VP22(BHV-1 VP22)融合的PRRSV E及M蛋白的重组伪狂犬病毒(rPRV)TK-/gE-/VP22E+/VP22M+。经PCR、Southern blot、Westernblot证实rPRV构建正确,并能表达与BHV-1 VP22融合的PRRSV E及M蛋白。rPRV在IBRS-2、PK-15细胞中的增殖滴度与PRV亲本株相比无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV增殖。用该rPRV免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠抗PRRSV中和抗体及脾淋巴细胞增殖反应,并与未融合VP22的单表达PRRSV E蛋白及共表达E及M蛋白的rPRV TK-/gE-/E+与TK-/gE-/E+/M+进行比较。结果显示TK-/gE-/VP22E+/VP22M+可诱导小鼠产生更好的体液与细胞免疫反应,BHV-1 VP22发挥了佐剂效应。本研究为研制安全、有效的猪繁殖与呼吸综合征-伪狂犬病二价基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒1型VP22 猪繁殖与呼吸综合征病毒 修饰型ORF5基因 ORF6基因 重组伪狂犬病毒

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牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株gD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2

9

作者 庄东明 王建华 +4 位作者 吴春涛 霍蕾 侯艳梅 赵祥平 牛钟相 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期1-5,共5页

用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株的MDBK细胞中扩增gD基因,将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析,设计合成3对引物,以获得的克隆质粒为模板,PCR扩增gD胞外域基因,将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载... 用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株的MDBK细胞中扩增gD基因,将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析,设计合成3对引物,以获得的克隆质粒为模板,PCR扩增gD胞外域基因,将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载体中构建成表达质粒pGEX-4T-gDQ、pGEX-4T-gDQB、pGEX-4T-gDHB和pET-gDQ、pET-gDQB、pET-gDHB,利用上述质粒分别转化大肠杆菌BL21和BL21(DE3),IPTG诱导后SDS-PAGE检测,结果pGEX-4T-gDQ、pGEX-4T-gDQB、pGEX-4T-gDHB和pET-gDQ四个表达质粒出现表达且符合预期大小,Western blot表明表达产物均有抗原性。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒ⅰ型 gD糖蛋白基因 克隆 原核表达

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牛疱疹病毒Ⅰ型诱导MDBK细胞凋亡的初步研究 被引量：1

10

作者 张宽 许信刚 +3 位作者 童德文 丁丽 李兆才 李伟 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第12期21-25,30,共6页

【目的】研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-Ⅰ)对牛肾细胞(MDBK细胞)的作用,为探讨BHV-Ⅰ诱导细胞凋亡的分子机制奠定基础。【方法】常规方法培养MDBK细胞,于对数生长期感染BHV-Ⅰ,同时设立对照组,于感染后不同时间取样,采用细胞形态观察、细胞... 【目的】研究牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-Ⅰ)对牛肾细胞(MDBK细胞)的作用,为探讨BHV-Ⅰ诱导细胞凋亡的分子机制奠定基础。【方法】常规方法培养MDBK细胞,于对数生长期感染BHV-Ⅰ,同时设立对照组,于感染后不同时间取样,采用细胞形态观察、细胞活性检测、细胞核形态观察、DNA ladder检测、细胞凋亡率检测和细胞内Caspase-3活性检测等方法,对BHV-Ⅰ感染的MDBK细胞进行凋亡指标检测。【结果】接毒后24h,MDBK细胞即出现明显的细胞病变。活性检测表明,感染BHV-Ⅰ的细胞活性降低,并且呈病毒感染量和感染时间的依赖性。感染细胞出现核固缩,并呈新月形变化。DNA电泳结果和流式细胞术检测结果均表明,感染BHV-Ⅰ的细胞DNA出现规律的片段化,细胞凋亡比例随感染时间延长而增加,细胞内Caspase-3活性逐渐升高。【结论】BHV-Ⅰ能够诱导MDBK细胞凋亡,并且在诱导细胞凋亡过程中有Caspase-3参与。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒ⅰ型 MDBK细胞 细胞凋亡

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牛疱疹病毒Ⅰ型gB、gE基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建 被引量：1

11

作者 吴春涛 李艳梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期73-75,共3页

本试验用PCR方法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus-1,BHV-1)Bartha Nu/67株gB、gE基因片段,将其克隆到pGEM-T-easy载体。经转化、筛选、鉴定后将重组质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与经相同方法处理的杆状病毒转移载体pFastBac... 本试验用PCR方法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus-1,BHV-1)Bartha Nu/67株gB、gE基因片段,将其克隆到pGEM-T-easy载体。经转化、筛选、鉴定后将重组质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与经相同方法处理的杆状病毒转移载体pFastBacHTb连接,得到了重组质粒pFBHgB、pFBHgE。经酶切和测序鉴定后,将其转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,经抗性、蓝白斑筛选和PCR鉴定,得到了含gB、gE基因的重组穿梭载体。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒ⅰ型 gB、gE基因 杆状病毒表达系统 载体构建

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缺失gE基因的牛Ⅰ型疱疹病毒构建及其体外增殖特性比较

12

作者 尹龙勃 尹文玲 +5 位作者 叶伟成 孙学强 杨鸣琦 王一成 袁秀芳 张存 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期839-843,共5页

为构建gE基因缺失的牛Ⅰ型疱疹病毒(BHV1),本研究在BHV1全基因组感染性细菌人工染色体克隆pBHV1-ZJ的基础上,利用Red E/T重组技术,分别构建了gE基因缺失、gE和gN双基因缺失的pBHV1突变体,通过转染获得了重组病毒rBHV1-△gE,而双基因缺... 为构建gE基因缺失的牛Ⅰ型疱疹病毒(BHV1),本研究在BHV1全基因组感染性细菌人工染色体克隆pBHV1-ZJ的基础上,利用Red E/T重组技术,分别构建了gE基因缺失、gE和gN双基因缺失的pBHV1突变体,通过转染获得了重组病毒rBHV1-△gE,而双基因缺失突变体pBHV1-△gN-△gE则未能观察到细胞病变。病毒噬斑大小和生长曲线试验表明,在感染细胞内和培养基中,rBHV1-△gE滴度与亲本毒株BHV1无明显差异,而rBHV1-△gN显著降低;重组病毒rBHV1-△gE和前期构建的rBHV1-△gN形成的噬斑均显著小于亲本病毒,其大小分别为亲本病毒的18%和64%。rBHV1-△gE和rBHV1-△gN的构建将有助于阐明gE与gN协同作用机制和为研制BHV1新型基因标记疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 牛ⅰ型疱疹病毒 感染性克隆 RedE/T重组 囊膜蛋白gN 囊膜蛋白gE

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表达兔出血症病毒VP60蛋白重组牛疱疹病毒1型的构建及免疫原性分析 被引量：2

13

作者 黄艳秋 原冬伟 +8 位作者 刘行波 刘家森 陈淑慧 单丽玲 郭东春 姜骞 崔玉东 薛飞 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期597-601,共5页

为制备表达兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白的重组病毒疫苗,本研究将RHDV VP60基因插入到CMV启动子下,构建牛疱疹病毒1型(BoHV-1)gE基因缺失转移载体,利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与gE基因缺失的亲本病毒基因组DNA共转染牛肺细胞,制备... 为制备表达兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白的重组病毒疫苗,本研究将RHDV VP60基因插入到CMV启动子下,构建牛疱疹病毒1型(BoHV-1)gE基因缺失转移载体,利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与gE基因缺失的亲本病毒基因组DNA共转染牛肺细胞,制备了表达RHDV VP60基因的重组BoHV-1(rBoHV-1/gE-/VP60)。通过PCR、western blot及间接免疫荧光鉴定表明VP60基因在rBoHV-1/gE-/VP60中获得表达。并且体内试验表明重组病毒能够有效诱导小鼠产生RHDV特异性抗体。本研究构建了表达RHDV VP60基因的rBoHV-1/gE-/VP60,为研制预防兔出血症的BoHV-1活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 兔出血症病毒 VP60基因 牛疱疹病毒1型

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牛疱疹病毒1型gG/TK双基因缺失株对豚鼠免疫保护效力的研究 被引量：1

14

作者 杨姣 王琛 +5 位作者 王安平 陈颖钰 李庆妮 胡长敏 陈曦 郭爱珍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1275-1281,共7页

为了评价牛疱疹病毒1型(BoHV-1)gG/TK双基因缺失株(BoHV-1 gG-/TK-)免疫保护效力,本研究以豚鼠作为该缺失株免疫效力评价模型,将16只豚鼠随机平均分4组,3组为免疫组,1组为对照组。免疫组分别肌肉注射106 TCID50/只(低剂量组)、107 TCID... 为了评价牛疱疹病毒1型(BoHV-1)gG/TK双基因缺失株(BoHV-1 gG-/TK-)免疫保护效力,本研究以豚鼠作为该缺失株免疫效力评价模型,将16只豚鼠随机平均分4组,3组为免疫组,1组为对照组。免疫组分别肌肉注射106 TCID50/只(低剂量组)、107 TCID50/只(中剂量组)和108 TCID50/只(高剂量组)BoHV-1 gG-/TK-株,接种后21 d以相同剂量和方式加强免疫;对照组以相同方式接种DMEM培养基。免疫前及免疫后测定各组豚鼠直肠温度,观察临床症状,同时免疫后PCR检测排毒情况,进行安全性试验,结果显示,接种BoHV-1 gG-/TK-株后各组豚鼠体温均正常,首免后5 d,中剂量和高剂量组豚鼠出现鼻腔分泌物,持续3 d,而低剂量组和对照组无明显临床症状;排毒检测结果显示,各实验组豚鼠免疫后均不排毒。一免后采集血清,分别利用gB抗体检测试剂盒和微量细胞中和试验检测各组豚鼠抗体水平,结果显示,该缺失株可诱导豚鼠产生gB抗体、中和抗体,这两种抗体水平分别在首免后7 d和21 d升高,持续时间分别为28 d和35 d,加强免疫后各免疫组豚鼠中和抗体急剧升高,首免后35 d高剂量组豚鼠中和抗体水平显著高于其他免疫组和对照组;同时利用试剂盒检测各组豚鼠血清中IFN-γ的表达水平,结果显示,首免后5 d免疫组豚鼠血清中IFN-γ含量达到峰值,持续时间为2 d;对以上数据分析显示,3个剂量免疫组豚鼠血清中抗体水平和IFN-γ含量与免疫剂量呈正相关,并显著高于对照组。首免后35 d 4组豚鼠均以107 TCID50/只经鼻腔接种wt BoHV-1强毒进行攻毒试验,试验结果显示,攻毒后4组豚鼠均体温正常,仅对照组分离到病毒;各组均有豚鼠出现鼻腔分泌物,高剂量组2只,持续1 d,另外两个剂量组各1只,均持续7 d,而对照组3只,最长持续11 d;肺组织的病理变化显示,高剂量组豚鼠肺组织几乎无病变,另外两个剂量组豚鼠肺脏有不同程度损伤,而对照组表现为肺泡结构消失,局部坏死和炎性细胞浸润等。综上所述,BoHV-1 gG-/TK-株能诱导豚鼠体液免疫和细胞免疫,108 TCID50/只以下的剂量为肌注安全剂量,当免疫剂量为108 TCID50/只时能抵抗强毒株攻击,免疫效力最高,而106 TCID50/只~107 TCID50/只可产生部分保护效果。本研究为建立牛传染性鼻气管炎(IBR)疫苗的豚鼠评价模型奠定了基础,同时也为IBR基因工程疫苗的研制提供重要基础数据。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒1型 牛传染性鼻气管炎病毒 基因缺失 免疫保护 豚鼠

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牛疱疹病毒1型复制非必需基因UL0.5的鉴定

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作者 尹贻鑫 何宁宇 +4 位作者 张瑞竹 张炜 陈兴江 陈焕春 刘正飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期865-869,共5页

牛疱疹病毒1型(BHV-1)和5型(BHV-5)为同源性最高的两种α疱疹病毒亚科成员,分别引起牛的呼吸道和神经症状。序列比较显示,BHV-1基因组中具有一个独特的UL0.5基因。为研究该基因的功能,本研究构建BHV-1 UL0.5基因缺失转移质粒,与野生型... 牛疱疹病毒1型(BHV-1)和5型(BHV-5)为同源性最高的两种α疱疹病毒亚科成员,分别引起牛的呼吸道和神经症状。序列比较显示,BHV-1基因组中具有一个独特的UL0.5基因。为研究该基因的功能,本研究构建BHV-1 UL0.5基因缺失转移质粒,与野生型基因组共转染MDBK细胞,通过空斑纯化获得UL0.5基因缺失突变株(rBHV-1ΔUL0.5);PCR和western blot鉴定结果表明,重组病毒形成的空斑大小及一步法生长曲线与野生型基本相同;家兔接种试验表明,突变株与野生型在急性感染期、潜伏感染期及再激活期病毒排毒量无明显变化;Real time PCR检测3个时期三叉神经节中病毒基因组的拷贝数也无明显差别。综上所述,UL0.5基因是BHV-1的复制非必需基因,该基因缺失后对家兔致病性无显著影响。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒1型 UL0.5基因 增殖特性 致病性

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牛疱疹病毒1型主要囊膜糖蛋白研究进展 被引量：1

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作者 翟璐 张海威 +2 位作者 涂伟 黄艳梅 宋佰芬 《动物医学进展》 北大核心 2020年第2期88-92,共5页

牛疱疹病毒(BHV-1)属于α疱疹病毒亚科的DNA病毒,可引起牛高热、上呼吸道感染和母牛流产。该病毒能在牛的感觉神经节内建立潜伏感染,因此,对于该病毒感染的预防和治疗较为困难。BHV-1除了引起初始感染外,还可通过免疫抑制引起动物继发感... 牛疱疹病毒(BHV-1)属于α疱疹病毒亚科的DNA病毒,可引起牛高热、上呼吸道感染和母牛流产。该病毒能在牛的感觉神经节内建立潜伏感染,因此,对于该病毒感染的预防和治疗较为困难。BHV-1除了引起初始感染外,还可通过免疫抑制引起动物继发感染,导致动物死亡。研究发现,病毒入侵牛机体时,病毒囊膜糖蛋白在病毒与细胞间相互作用的过程中发挥了重要作用。论文对牛疱疹病毒1型主要囊膜糖蛋白(包括gB、gD、gN)的结构特征和生物学特征加以归纳总结,为该病毒的感染特性研究和预防提供参考。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒1型 囊膜糖蛋白 传染性牛鼻气管炎 感染性脓疱性外阴阴道炎 牛呼吸道疾病复合体

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重组牛疱疹病毒1型转移载体的构建与初步应用

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作者 戴莎莎 马小静 +3 位作者 王景松 田兴苗 王健霖 李继东 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第10期2311-2320,共10页

为构建一种能用于牛疱疹病毒1型(BHV-1)重组的转移载体,在真核表达载体pVAX1 CMV(cytomegalovirus)启动子的反向位点插入另一个CMV启动子,构建具有双向启动功能的表达载体prPP,在正、反向CMV启动子下游预置多克隆酶切位点;将绿色荧光蛋... 为构建一种能用于牛疱疹病毒1型(BHV-1)重组的转移载体,在真核表达载体pVAX1 CMV(cytomegalovirus)启动子的反向位点插入另一个CMV启动子,构建具有双向启动功能的表达载体prPP,在正、反向CMV启动子下游预置多克隆酶切位点;将绿色荧光蛋白标记基因置于反向启动子下,构建BHV-1重组载体prPgP;以BHV-1囊膜糖蛋白基因gE作为重组位点,将gE上下游同源臂插入prPgP载体中,牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E 2基因置于正向CMV启动子下,构建p△gErPgP-E2载体,用重组质粒转染已感染BHV-1的牛肾细胞(MDBK),产生的重组病毒经筛选、纯化、鉴定,命名为rBHV-1-△gE/E2,所含GFP和E 2基因正常表达。结果表明,重组载体prPgP能方便地用于BHV-1的重组,为相关研究及其疫苗研制提供了便捷。 展开更多

关键词 牛疱疹病毒1型 同源臂 转移载体 同源重组

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牛疱疹病毒1型糖蛋白E(gE)可溶性表达及其反应原性分析

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作者 杨晨 孙续 +1 位作者 丁学智 杨峰 《中兽医医药杂志》 CAS 2023年第3期17-21,共5页

为探索牛传染性鼻气管炎诊断新技术,本研究以GenBank公布的牛疱疹病毒1型(BHV1,NC_001847.1)基因序列为参考,预测并优化了BHV1的gE蛋白胞外区密码子序列。优化后的序列长度为1 275 bp,5’端和3’端分别添加限制性酶切位点SacⅠ和HindⅢ... 为探索牛传染性鼻气管炎诊断新技术,本研究以GenBank公布的牛疱疹病毒1型(BHV1,NC_001847.1)基因序列为参考,预测并优化了BHV1的gE蛋白胞外区密码子序列。优化后的序列长度为1 275 bp,5’端和3’端分别添加限制性酶切位点SacⅠ和HindⅢ后克隆至载体pUC19,进而构建原核表达载体pET-SUMO-gE,将其转入大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中表达重组蛋白,使用NiNTA亲和柱纯化重组蛋白。SDS-PAGE和Western blot检测结果证明,获得的牛疱疹病毒1型gE胞外区重组蛋白大小约为70 kDa,有良好的水溶性和反应原性。该研究结果为gE特异性单克隆抗体的制备及后续诊断试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎 牛疱疹病毒1型 gE蛋白 原核表达 载体构建

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Ⅰ型牛疱疹病毒VP22蛋白原核表达及多克隆抗体制备

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作者 郭伟强 段绪来 +3 位作者 解佳 赵学亮 刘英楠 陈鸿军 《动物医学进展》 北大核心 2023年第11期20-25,共6页

为制备Ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1)VP22蛋白抗体,选用国内分离株BHV-SHJS,在其UL49基因核酸序列第517至747位间设计引物扩增目的片段,构建pET-28a-UL49(172-249 aa)原核表达载体,转化载体至BL21(DE3)感受态细胞;经IPTG诱导表达并纯化VP22(172... 为制备Ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1)VP22蛋白抗体,选用国内分离株BHV-SHJS,在其UL49基因核酸序列第517至747位间设计引物扩增目的片段,构建pET-28a-UL49(172-249 aa)原核表达载体,转化载体至BL21(DE3)感受态细胞;经IPTG诱导表达并纯化VP22(172-249 aa)融合蛋白后;用该融合蛋白作抗原,以皮下注射的方式免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体;经间接ELISA、Western blot及间接免疫荧光(IFA)方法检测其灵敏度和特异性。结果表明,表达的VP22蛋白以包涵体形式存在;ELISA测定结果显示,制备的VP22蛋白抗体效价达到1∶16000;Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体能与BHV-SHJS VP22特异性结合,具有良好的反应原性。试验结果为后期BHV-1感染宿主细胞在机制方面的研究和VP22功能的探究奠定了基础。 展开更多

关键词 ⅰ型牛疱疹病毒 VP22蛋白表达 多克隆抗体制备

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通过序列分析筛选单纯疱疹病毒I型蛋白组中的PACS-1结合蛋白 被引量：1

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作者 刘军 李英辉 +5 位作者 薛采芳 甄荣芬 李旬 王宪锋 刘忠湘 万磊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期123-125,共3页

目的筛选单纯疱疹病毒I型蛋白组中的PACS1结合蛋白。方法根据筛选标准,利用ScanProsite和PSORT软件对蛋白质进行分析,并结合相关文献中的实验数据对分析结果进行校正。结果该方法可有效地筛选出PACS1结合蛋白。利用该方法,在单纯疱... 目的筛选单纯疱疹病毒I型蛋白组中的PACS1结合蛋白。方法根据筛选标准,利用ScanProsite和PSORT软件对蛋白质进行分析,并结合相关文献中的实验数据对分析结果进行校正。结果该方法可有效地筛选出PACS1结合蛋白。利用该方法,在单纯疱疹病毒I型蛋白组中,共筛选出可能与PACS1结合的蛋白质33种。结论建立了一种有效的筛选PACS1结合蛋白的方法。筛选出的单纯疱疹病毒I型的PACS1结合蛋白,将为研究PACS1在疱疹病毒发生及潜伏性感染中的作用提供指导。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒ⅰ型 PACS-1 蛋白组 序列分析 生物信息学 筛选

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