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猫Ⅰ型疱疹病毒DAN疫苗的构建及免疫效果的评估
1
作者 李立鹏 林委卫 +5 位作者 冯可昕 陈梦茹 康洪涛 姜骞 刘家森 赵鹏 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期751-756,共6页
猫Ⅰ型疱疹病毒(FHV-1)表面糖蛋白gB、gD是病毒感染侵入和复制过程所必须的糖蛋白,均具有免疫原性。为评价FHV-1 gB和gD基因DNA疫苗的免疫效果,本研究设计并优化基因编码序列后合成FHV-1 gB和gD基因,分别连接至pVAX1载体构建真核表达载... 猫Ⅰ型疱疹病毒(FHV-1)表面糖蛋白gB、gD是病毒感染侵入和复制过程所必须的糖蛋白,均具有免疫原性。为评价FHV-1 gB和gD基因DNA疫苗的免疫效果,本研究设计并优化基因编码序列后合成FHV-1 gB和gD基因,分别连接至pVAX1载体构建真核表达载体pVAX1-gB、pVAX1-gD,经PCR和测序鉴定结果显示二者插入位置及基因序列均与预期一致。将重组质粒pVAX1-gB、pVAX1-gD分别转染猫肾细胞(CRFK),经间接免疫荧光试验(IFA)检测gB和gD蛋白在细胞中是否表达。结果显示gB、gD蛋白在细胞中均获得了表达。分别取重组质粒pVAX1-gB、pVAX1-gD各50μg,经肌肉注射6周龄~7周龄雌性BALB/c小鼠,4次免疫后采用IFA检测小鼠抗体水平,结果显示小鼠体内产生的抗体效价在1:64~1:256。将50μg pVAX1-gB和50μg pVAX1-gD重组质粒混合后,分别经肌肉注射45日龄~90日龄中华田园猫,二免后不同时间采血分离血清,经固定病毒稀释血清法检测猫血清的中和抗体效价,结果显示其中和抗体效价达1:141左右。二免后21 d的猫经FHV-1(10^(6)TCID50/mL)滴鼻攻毒(0.5 mL/只),结果显示,对照组猫全部发病,免疫组猫仅产生轻微临床症状,表明本实验制备的含FHV-1 gD和gB重组质粒的混合物免疫后可诱导猫产生良好的免疫保护效果。本实验首次证实FHV-1 gB基因和gD基因的DNA疫苗具有良好的免疫原性,为FHV-1 DNA疫苗的研究提供了实验依据。 展开更多
关键词 猫ⅰ型疱疹病毒 gB蛋白 gD蛋白 DNA疫苗 免疫原性
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一株猫疱疹病毒(Ⅰ型)的分离、鉴定及致病性研究
2
作者 冯可昕 高思璐 +3 位作者 陈梦茹 刘哲 刘家森 曲连东 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期245-251,共7页
猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)侵入猫上呼吸道系统引发的鼻气管炎是全世界猫科动物中常见的一种病毒性传染疾病,目前我国分离到FHV-1的报道并不多。本研究采集患呼吸系统疾病猫眼鼻拭子,利用猫肾细胞(F81)分离病毒和纯化,结果显示感染分离产物... 猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)侵入猫上呼吸道系统引发的鼻气管炎是全世界猫科动物中常见的一种病毒性传染疾病,目前我国分离到FHV-1的报道并不多。本研究采集患呼吸系统疾病猫眼鼻拭子,利用猫肾细胞(F81)分离病毒和纯化,结果显示感染分离产物的F81细胞出现明显的疱疹病毒细胞病变(CPE),对其细胞培养物上清进行PCR鉴定,目的条带符合预期大小(625 bp)。进一步对该分离株进行IFA鉴定,结果显示感染该分离株的F81与FHV-1多克隆抗体作用后出现特异性绿色荧光。对分离产物进行超速离心和纯化后经电子显微镜可观察到球形、有囊膜、直径约为200 nm的疱疹病毒样颗粒。将该分离株FHV-1命名为FHV-Q3株。PCR扩增FHV-Q3的gD基因片段,并对其进行测序,结果显示,与NCBI中已登录的FHV-1 gD基因的同源性达99%以上。利用Reed-Muench法测定FHV-Q3的TCID_(50),结果显示FHV-Q3的病毒效价为1.78×10^(6) TCID_(50)/mL。将FHV-Q3株第6代5倍稀释后以滴鼻点眼的方式接种3只3月龄的中华田园猫,同时设置PBS接种的猫作为对照组。于感染后3 d、6 d、9 d、12 d、15 d采集眼鼻拭子并进行临床症状观察和评分,感染后16 d剖杀各组猫并取气管、喉、肺,利用qPCR检测病毒载量,同时制作气管和肺脏的病理切片并观察。结果显示,FHV-Q3株感染后会引发典型的鼻气管炎症状,在实验的15 d内无死亡;眼鼻拭子病毒载量最高可达7.9×10^(6)拷贝/μL,组织脏器中喉部的病毒粒子含量最高可达7.9×10^(3)拷贝/mg;组织病理切片观察显示,仅肺部有明显的炎症性细胞浸润和肺泡上皮细胞增生。综上所述本研究在猫眼鼻拭子中分离出了FHV-1,该分离株可引起典型的猫病毒性鼻气管炎症状,该结果不仅丰富了我国FHV-1分离株的病毒库,也为今后FHV-1的临床研究以及FHV-1相关生物制品的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒ⅰ型 病毒的分离鉴定 致病性研究
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1例猫疱疹病毒Ⅰ型与猫杯状病毒混合感染病例的诊疗
3
作者 李明俊 王敏 赖金伦 《现代畜牧兽医》 2025年第7期55-58,共4页
1只4岁雌性中华田园猫因表现精神沉郁、食欲减退、牙龈红肿伴有疼痛、口腔流涎、口臭等症状来院就诊。临床检查发现,患猫口腔、牙龈红肿,轻度脱水,猫疱疹病毒Ⅰ型和猫杯状病毒PCR检测结果均为阳性,诊断为猫疱疹病毒Ⅰ型与猫杯状病毒混... 1只4岁雌性中华田园猫因表现精神沉郁、食欲减退、牙龈红肿伴有疼痛、口腔流涎、口臭等症状来院就诊。临床检查发现,患猫口腔、牙龈红肿,轻度脱水,猫疱疹病毒Ⅰ型和猫杯状病毒PCR检测结果均为阳性,诊断为猫疱疹病毒Ⅰ型与猫杯状病毒混合感染。以抗病毒、抗菌、对症治疗、营养支持为原则进行了7 d的治疗,患猫精神良好,食欲正常,口腔溃疡愈合,康复出院。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒ⅰ型 猫杯状病毒 混合感染 猫上呼吸道感染
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非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型PCR-RFLP鉴别方法的建立
4
作者 孙仁杰 徐慧玲 +6 位作者 孙思琪 柴娟 虞一聪 谢荣辉 李肖梁 赵灵燕 张传亮 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第5期1017-1028,共12页
本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因Ⅰ型和Ⅱ型的PCR-RFLP鉴别方法。通过对ASFV基因Ⅰ型与基因Ⅱ型基因组序列的比对分析,针对B385R基因和B125R基因保守区设计1对特异性PCR-RFLP引物,与其他临床上常... 本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因Ⅰ型和Ⅱ型的PCR-RFLP鉴别方法。通过对ASFV基因Ⅰ型与基因Ⅱ型基因组序列的比对分析,针对B385R基因和B125R基因保守区设计1对特异性PCR-RFLP引物,与其他临床上常见的9种猪病病毒均无交叉反应。通过该引物扩增获得覆盖B646L基因全长的DNA片段作为检测靶标,结合BmgBⅠ酶切进行RFLP图谱分析,即可实现对B646L基因全序列的快速检测,有效区分ASFV基因Ⅰ型和Ⅱ型,最低检测DNA质量浓度可达到5 pg·mL^(-1)。模拟临床样本的研究结果表明,本方法还能够有效应对实际检测中基因Ⅰ型和Ⅱ型的混合感染。综上,本方法操作简便、准确性高、特异性强、灵敏度高、成本较低,具有良好的应用前景,为基层兽医技术人员开展非洲猪瘟疫情的监测和流行病学研究提供了一种新方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 基因ⅰ型 基因ⅱ型
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鹅星状病毒Ⅰ、Ⅱ型和鹅细小病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立与应用
5
作者 朱啟超 任曼 +5 位作者 张学刚 张进进 张鑫龙 李佳晋 曲光刚 李升和 《中国兽药杂志》 2025年第5期1-9,共9页
为建立一种可快速、特异检测鹅星状病毒Ⅰ型(GAstVⅠ)、Ⅱ型(GAstVⅡ)及鹅细小病毒(GPV)多重荧光定量PCR方法,根据GAstVⅠ型、GAstVⅡ型及GPV保守基因序列设计合成了特异性引物及三种荧光基团TaqMan探针,分别构建了带有三种病原靶基因... 为建立一种可快速、特异检测鹅星状病毒Ⅰ型(GAstVⅠ)、Ⅱ型(GAstVⅡ)及鹅细小病毒(GPV)多重荧光定量PCR方法,根据GAstVⅠ型、GAstVⅡ型及GPV保守基因序列设计合成了特异性引物及三种荧光基团TaqMan探针,分别构建了带有三种病原靶基因的重组质粒标准品。通过筛选引物,优化反应条件,分析了该方法的特异性、敏感性及重复性,并进行临床样品检测评价。结果显示:该方法特异性强,能够特异检测GAstVⅠ型、GAstVⅡ型与GPV,且与其他常见鹅病病原无交叉反应;敏感性高,对GAstVⅠ型、GAstVⅡ型及GPV对相应的标准质粒最低检出限均为10拷贝/μL;重复性好,重复性试验批内及批间变异系数均小于3%;该方法对90份临床样品检测结果与已发表的三种病毒单重荧光定量PCR方法的检测结果进行比较,其中GAstVⅠ型符合率为98.89%,GAstVⅡ型符合率为96.67%,GPV符合率为96.67%。研究建立的多重荧光定量PCR检测方法能够快速、特异、灵敏的检测GAstVⅠ型、GAstVⅡ型及GPV,实现一管检多病,实用性强,效率更高,为GAstVⅠ、Ⅱ型和GPV的监测和防控提供了高效技术手段。 展开更多
关键词 鹅星状病毒ⅰ型 鹅星状病毒ⅱ型 鹅细小病毒 多重荧光定量PCR
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抗单纯疱疹病毒1型的IgY制备及其生物学活性检测
6
作者 苏海涛 翟玥 +1 位作者 宋秀玲 徐坤 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期303-309,共7页
目的:制备抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的卵黄抗体(IgY),探讨该抗体的生物学活性,阐明其抗HSV-1的能力。方法:制备HSV-1灭活疫苗,采用鸡胸多点注射法免疫高产蛋鸡,采用聚乙二醇-6000(PEG-6000)法提纯IgY,采用间接ELISA法、十二烷基硫酸钠-... 目的:制备抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的卵黄抗体(IgY),探讨该抗体的生物学活性,阐明其抗HSV-1的能力。方法:制备HSV-1灭活疫苗,采用鸡胸多点注射法免疫高产蛋鸡,采用聚乙二醇-6000(PEG-6000)法提纯IgY,采用间接ELISA法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术和蛋白浓度定量试剂盒测定IgY效价、纯度及蛋白水平,采用间接ELISA法检测IgY中和病毒的能力,测定病毒阻断率,以Vero细胞为病毒感染靶细胞,测定不同抗体浓度(0.01560、0.03125、0.06250、0.12500、0.50000、和1.00000 g·L^(-1))作用后细胞病变效应(CPE),根据CPE程度测定IgY体外抗HSV-1能力。结果:制备的IgY效价随免疫时间逐渐升高,达到1/1024000后保持稳定;IgY轻链重链条带清晰;IgY平均蛋白水平为11.544 g·L^(-1);IgY对HSV-1的阻断率可高达77.90%;HSV-1致CPE程度随抗体浓度升高而逐渐降低,当IgY浓度达到0.50000g·L^(-1)及以上时,25%以下细胞(甚至无细胞)发生病变。结论:成功制备出抗HSV-1的IgY,该抗体对HSV-1具有明显的中和阻断能力和体外抑制活性,可用于药物及诊断方法的开发。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1型 卵黄抗体 中和病毒 体外抗病毒能力
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ASFV基因Ⅰ/Ⅱ型重组毒株与基因Ⅰ型、Ⅱ型高毒力毒株的致病力试验数据比较
7
作者 戈胜强 左媛媛 +5 位作者 常星 巩明霞 刘春菊 于小静 李金明 王志亮 《中国动物检疫》 2025年第8期72-77,共6页
非洲猪瘟病毒(ASFV)按其毒力分为高毒力、中毒力和低毒力三类。我国现有两类高毒力毒株,分别为2018年传入的基因Ⅱ型毒株和2021年出现的基因Ⅰ/Ⅱ型重组毒株。2023年越南和俄罗斯均发现了基因Ⅰ/Ⅱ型重组病毒,且其全基因组序列与中国分... 非洲猪瘟病毒(ASFV)按其毒力分为高毒力、中毒力和低毒力三类。我国现有两类高毒力毒株,分别为2018年传入的基因Ⅱ型毒株和2021年出现的基因Ⅰ/Ⅱ型重组毒株。2023年越南和俄罗斯均发现了基因Ⅰ/Ⅱ型重组病毒,且其全基因组序列与中国分离株高度相似。为研究基因Ⅰ/Ⅱ型重组病毒的毒力水平,汇总了中国、越南和俄罗斯开展的重组病毒动物试验数据,并与基因Ⅰ型、Ⅱ型高毒力毒株进行致病力比较。结果显示同等攻毒剂量下,重组病毒导致的死亡起始或终止时间更早,提示其毒力可能更强。本文为非洲猪瘟相关研究和防控提供了参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 基因ⅰ/ⅱ型重组毒株 高毒力毒株
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猫疱疹病毒Ⅰ型gIgE基因缺失毒株的构建及生物学特性分析 被引量：1
8
作者 张晶晶 孙慧敏 +1 位作者 宋家升 鲍恩东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期515-521,共7页
[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sg... [目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sgRNA及Cas9蛋白的质粒与含有RFP的转移载体共转染到猫肾细胞(F81),通过噬斑纯化以及有限稀释方法进行病毒纯化,以重组病毒感染F81细胞连续10代验证其遗传稳定性,通过测定重组病毒以及亲本病毒H07的病毒滴度、一步生长曲线以及判断噬斑大小评价其生物学特性。[结果]成功构建了FHV-1 gIgE基因缺失毒株并将其命名为FHV-ΔgIgE-RFP;提取重组病毒DNA,通过PCR验证gIgE基因无目的条带,表明重组病毒纯化成功,再通过PCR验证RFP基因有目的条带,表明重组病毒成功插入外源基因。病毒滴度测定结果显示,与亲本病毒相比重组病毒的病毒滴度下降了90%;在F 1—F 10连续传代过程中RFP荧光表达且无减弱现象,表明重组病毒可稳定表达外源基因;测定FHV-ΔgIgE-RFP以及H07的生长曲线,重组病毒的生长趋势与亲本病毒大致相同,表明插入外源基因并不会改变病毒本身的生长特性;噬斑观察及染色结果显示,在病毒感染细胞前、后期,重组病毒的噬斑都小于亲本病毒,表明缺失gIgE基因后病毒毒力下降。[结论]成功构建并筛选出FHV-1 gIgE基因缺失致弱毒株,为开发疱疹病毒弱毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒ⅰ型(FHV-1) 致弱毒株 重组病毒 病毒筛选
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鸽Ⅰ型副黏病毒、圆环病毒和疱疹病毒混合感染的诊断 被引量：4
9
作者 黄运福 颜国庆 +5 位作者 梁海皇 银慧慧 赵武 曾雪颜 兰天艳 刘伟 《现代畜牧兽医》 2024年第3期59-63,共5页
研究旨在确诊广西某肉鸽场中出现神经症状的病鸽并为该场提供相应的防治方案,通过临床诊断、病理解剖、分子生物学检测、细菌分离、病毒分离等方法对广西某肉鸽场病鸽进行诊断。结果显示,剖检可见病鸽肝脾肿大、坏死,花斑肾;分子生物学... 研究旨在确诊广西某肉鸽场中出现神经症状的病鸽并为该场提供相应的防治方案,通过临床诊断、病理解剖、分子生物学检测、细菌分离、病毒分离等方法对广西某肉鸽场病鸽进行诊断。结果显示,剖检可见病鸽肝脾肿大、坏死,花斑肾;分子生物学检测结果显示,鸽Ⅰ型副黏病毒(pigeon paramyxovirus type 1,PPMV-1)、圆环病毒(pigeon circovirus,PiCV)和疱疹病毒(pigeon herpesvirus,PiHV)为阳性;对病样进行细菌培养,结果未分离到细菌;将病样接种SPF鸡胚进行病毒分离,结果显示,尿囊液血凝效价稳定在8 log2,其血凝性可被新城疫病毒(NDV)阳性血清抑制,但不能被禽流感病毒(AIV)阳性血清抑制。研究表明,最终诊断结果为PPMV-1、PiCV和PiHV混合感染。 展开更多
关键词 鸽ⅰ型副黏病毒 鸽圆环病毒 鸽疱疹病毒
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转录因子NF-κB对鲤疱疹病毒Ⅱ型基因启动子的表达调控研究
10
作者 谢雅晴 龙晨 吕利群 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期88-93,共6页
为深入探究NF-κB信号通路对CyHV-2感染过程的影响,在CyHV-2感染的GiCF细胞中加入NF-κB激动剂,通过RT-qPCR和Western Blot分析在感染24、72、96 h后CyHV-2编码基因在转录和翻译水平的表达情况。结果显示,在加入NF-κB激动剂后的72、96 ... 为深入探究NF-κB信号通路对CyHV-2感染过程的影响,在CyHV-2感染的GiCF细胞中加入NF-κB激动剂,通过RT-qPCR和Western Blot分析在感染24、72、96 h后CyHV-2编码基因在转录和翻译水平的表达情况。结果显示,在加入NF-κB激动剂后的72、96 h,CyHV-2编码基因转录和翻译水平均明显高于对照组,提示NF-κB促进CyHV-2编码基因的转录及翻译。为进一步阐明NF-κB如何影响CyHV-2的转录和翻译,利用生物信息学软件预测CyHV-2部分编码基因的启动子序列中和NF-κB的结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验分析NF-κB对启动子活性的影响。结果表明,NF-κB过表达提高了病毒基因启动子活性,提示NF-κB可以通过促进CyHV-2基因的启动子活性来增强病毒复制水平。研究结果有助深入探究CyHV-2基因的表达翻译机制,也为开发基于NF-κB信号通路靶点的新的抗病毒抑制剂提供理论支撑。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒ⅱ型 NF-ΚB 启动子 转录调控 双荧光素酶报告基因
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Ⅰ型单纯疱疹病毒潜伏感染及其应激复发 被引量：12
11
作者 罗卓 颜畅 +2 位作者 李怡芳 栗原博 何蓉蓉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1185-1190,共6页
Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)是常见的病原体,人是其唯一自然宿主。原发感染后,HSV-1在上皮细胞大量复制,然后沿轴突逆行至感觉神经节并潜伏下来。当机体在一定的应激负荷下,潜伏感染的病毒重新激活,从而造成复发性疾病。因此,阐明病毒潜伏... Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)是常见的病原体,人是其唯一自然宿主。原发感染后,HSV-1在上皮细胞大量复制,然后沿轴突逆行至感觉神经节并潜伏下来。当机体在一定的应激负荷下,潜伏感染的病毒重新激活,从而造成复发性疾病。因此,阐明病毒潜伏感染及应激复发的相关机制,将对Ⅰ型单纯疱疹病毒预防、治疗和控制带来新的启示。该文就HSV-1潜伏感染与应激复发的相关机制进行综述。 展开更多
关键词 ⅰ型单纯疱疹病毒 潜伏 复发 应激 ⅰ型干扰素 免疫逃逸
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ELISA法检测单纯疱疹病毒Ⅱ型特异性抗体的临床应用研究 被引量：10
12
作者 杨慧兰 杨军 +4 位作者 刘荣卿 杨太成 王捷 冼江 李建军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期383-384,共2页
目的探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV 2)感染的早期特异检测手段。方法对52例性病门诊的生殖器疱疹患者用改良的ELISA方法进行了HSV gD2IgG检测并同细胞分离方法进行对比观察。结果病毒分离的阳性率为69.2 % ,ELISA法检测抗体的阳性率为65 % ... 目的探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV 2)感染的早期特异检测手段。方法对52例性病门诊的生殖器疱疹患者用改良的ELISA方法进行了HSV gD2IgG检测并同细胞分离方法进行对比观察。结果病毒分离的阳性率为69.2 % ,ELISA法检测抗体的阳性率为65 % ,两种方法检测结果差异无显著性。结论ELISA法检测血清疱疹病毒IgG抗体具有简便 ,快速 ,特异的优点 ,适合于临床大规模检测之用。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 ⅱ型 糖蛋白D ELISA
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中药黄白液抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒复制的实验研究 被引量：10
13
作者 杨志波 欧阳恒 +1 位作者 欧柏生 谭金华 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2003年第3期308-310,共3页
目的 :探讨黄白液治疗预防复发性生殖器疱疹的作用。方法 :采用体外细胞培养技术观察黄白液对Ⅱ型单纯疱疹病毒 (HSV 2 )复制的抑制作用 ,并与环胞苷、阿昔洛韦作比较。结果 :黄白液对HSV 2的复制有明显抑制作用 ,其最小有效浓度为2 .5g... 目的 :探讨黄白液治疗预防复发性生殖器疱疹的作用。方法 :采用体外细胞培养技术观察黄白液对Ⅱ型单纯疱疹病毒 (HSV 2 )复制的抑制作用 ,并与环胞苷、阿昔洛韦作比较。结果 :黄白液对HSV 2的复制有明显抑制作用 ,其最小有效浓度为2 .5g·L- 1 ,治疗指数为 3 ,黄白液 2 .5g·L- 1 对HSV 2的抑制作用不亚于环胞苷 ,两者抑毒指数为 2 .83 ,阿昔洛韦抗HSV 2作用较强 ,抑制指数为 5 .3 1。结论 :黄白液可治疗复发性生殖器疱疹 ,与其抑制HSV 展开更多
关键词 中药 黄白液 ⅱ型单纯疱疹病毒 实验 复发性生殖器疱疹 预防
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靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制 被引量：7
14
作者 吕延成 潘晓瑜 +2 位作者 周丹丹 袁俊杰 黄畅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期759-766,共8页
按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo.... 按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo.通过脂质体介导重组表达载体转染HEK293细胞(human embryonic kidney 293 cell)再接种HSV-2.采用实时荧光定量PCR(real-timefluorescent quantitative PCR)技术检测UL27各组的mRNA转录水平,终点滴定法检测细胞上清液中的病毒滴度,四甲基偶氮唑盐(four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,Western印迹法检测蛋白表达效果.结果显示,UL27shRNA75组对UL27基因mRNA表达抑制效果最佳,同时能显著抑制感染细胞的CPE(cytopathic effect,CPE),降低上清液中的病毒感染滴度,提高细胞的生存率,抑制UL27基因的蛋白表达.提示本研究构建的pGPU6/GFP/Neo-UL27表达载体能在细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL27基因表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中复制. 展开更多
关键词 RNA干扰 ⅱ型单纯疱疹病毒 UL27基因
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敲减单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)UL30蛋白表达可抑制HSV-2复制 被引量：7
15
作者 冯海 张浩 +3 位作者 屠静 罗凌琪 周琦 彭宜红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1025-1030,共6页
按照shRNA(small hairpin RNA)设计要求,选择编码单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA多聚酶催化亚单位的UL30(unique long 30,UL30)基因序列保守区域,设计、合成并构建表达UL30序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pUL30.通过磷酸钙转染... 按照shRNA(small hairpin RNA)设计要求,选择编码单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA多聚酶催化亚单位的UL30(unique long 30,UL30)基因序列保守区域,设计、合成并构建表达UL30序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pUL30.通过磷酸钙转染法将其转染入HEK(human embryonic kidney)293细胞中,用蛋白印迹法检测对HSV-2 UL30蛋白表达的影响,观察受染细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),终点滴定法测定细胞上清液中病毒感染滴度(50%tissue culture infective dose,TCID50).结果表明,针对UL30基因的siRNA能有效抑制UL30蛋白表达,同时显著抑制受染细胞的CPE,降低上清液中病毒感染滴度.提示本研究建立的针对UL30基因特异性siRNA能有效阻断HSV-2在HEK293细胞内的复制,UL30基因是一个潜在的抗HSV-2复制的药物靶标. 展开更多
关键词 RNA干扰 单纯疱疹病毒ⅱ型 UL30 TCID50
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大鼠鞘内注射单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体介导人前脑啡肽原基因的表达及对甲醛炎性痛的镇痛效应 被引量：7
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作者 刘惠宁 邹望远 +3 位作者 杨勇 王锷 李准民 刘庚勋 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期742-746,共5页
目的:大鼠鞘内注射介导人前脑啡肽原基因(HPPE)单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)扩增子载体,观察LacZ和HPPE在脊髓神经元细胞中的共表达及对甲醛炎性痛的镇痛效应。方法:纯种雄性SD大鼠随机分为pHSVIRES-HPPE-LacZ载体组(SHPZ),pHSVIRES-LacZ... 目的:大鼠鞘内注射介导人前脑啡肽原基因(HPPE)单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)扩增子载体,观察LacZ和HPPE在脊髓神经元细胞中的共表达及对甲醛炎性痛的镇痛效应。方法:纯种雄性SD大鼠随机分为pHSVIRES-HPPE-LacZ载体组(SHPZ),pHSVIRES-LacZ空白载体组(SHZ),生理盐水组(NS),又分为分别注射SHPZ,SHZ和NS后3d,1周,2周,3周,4周,5周时观察镇痛效应组,并对1周组观察HPPE转染表达,每组6只。采用改良Yaksh法对大鼠进行鞘内置管后,将构建好的含HPPE的重组单纯疱疹病毒I型扩增子载体注入大鼠鞘内,通过X-gal染色原位检测报告基因LacZ的表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测HPPE的表达,放射免疫法检测脊髓组织脑啡肽浓度,并观察转染含HPPE基因载体对大鼠甲醛炎性疼痛的镇痛效应。结果:pHSVIRES-HPPE-LacZ在体感染大鼠中枢神经细胞后,用X-gal染色、RT-PCR和放射免疫检测方法均证实外源脑啡肽基因能有效表达。对甲醛诱发的炎性疼痛中,疼痛加权评分(PIS)于1周,2周,3周,4周时在第1相和第2相与对照组比较有显著差异,于第5周时第2相PIS接近对照组,对甲醛的镇痛效应可被鞘内注射纳洛酮拮抗。结论:SHPZ能成功地将外源HPPE转染到脊髓神经元细胞中,使之有效表达,提示扩增子载体SHPZ是良好的慢性疼痛转基因治疗工具;HPPE的表达产物可对甲醛炎性痛产生镇痛效应。 展开更多
关键词 疱疹病毒ⅰ型 脑啡肽 疼痛 基因治疗 神经元
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大青叶提取物抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的体外实验研究 被引量：19
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作者 喻淑庆 陈湘漪 余凌 《医药导报》 CAS 2008年第4期394-396,共3页
目的检测大青叶提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用。方法以Vero细胞为宿主细胞,阿昔洛韦为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和改良MTT比色法来测定药物的细胞毒性、药物对HSV-Ⅱ的直接灭活作用,以及药物抗HSV-Ⅱ对细... 目的检测大青叶提取物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的作用。方法以Vero细胞为宿主细胞,阿昔洛韦为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和改良MTT比色法来测定药物的细胞毒性、药物对HSV-Ⅱ的直接灭活作用,以及药物抗HSV-Ⅱ对细胞的吸附和对HSV-Ⅱ在细胞内复制增殖的抑制,算出药物抗HSV-Ⅱ的治疗指数。结果大青叶提取物在体外对HSV-Ⅱ无直接灭活作用,也无抗HSV-Ⅱ吸附细胞的作用,但能抑制HSV-Ⅱ在细胞内的复制增殖,其治疗指数达3.56。结论大青叶提取物在体外有一定的抗HSV-Ⅱ感染效果,主要是通过抑制病毒在细胞内的复制增殖而发挥作用。 展开更多
关键词 大青叶 抗病毒作用 单纯疱疹病毒ⅱ型
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下调细胞P21^(WAF1/CIP1)基因表达可抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型复制 被引量：6
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作者 周琦 张浩 +4 位作者 王波 彭宜红 屠静 朱萌 徐萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期339-344,共6页
为了揭示细胞P21蛋白在单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type2,HSV-2)复制中的作用,通过用HSV-2感染和感染前用特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制P21基因表达,应用Western印迹方法检测宿主细胞和病毒蛋白水平,... 为了揭示细胞P21蛋白在单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type2,HSV-2)复制中的作用,通过用HSV-2感染和感染前用特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制P21基因表达,应用Western印迹方法检测宿主细胞和病毒蛋白水平,用终点滴定法测定病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及观察感染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)等3个方面,揭示细胞P21蛋白水平的变化对病毒复制的影响.结果表明,HSV-2在细胞内复制时可引起P21蛋白水平增高;而用特异性siRNA下调细胞P21基因表达时,可显著地抑制HSV-2gB蛋白水平,减少培养细胞上清液中病毒TCID50.提示P21蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用. 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒ⅱ型 P21蛋白 小干扰RNA
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MEK1-ERKs级联激活方式是调控单纯疱疹病毒Ⅱ型复制的重要机制 被引量：5
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作者 易婷 张浩 +3 位作者 彭宜红 朱萌 何晓燕 黄孝天 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期142-147,共6页
本研究通过阐明MEK1和MEK2亚型在单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type 2,HSV2)复制中介导的Raf/MEK/ERK(简称ERK)通路活化中的作用,以期进一步阐明该通路调控病毒复制的机制.研究中应用了MEK抑制剂U0126、针对MEK1和MEK2的特异... 本研究通过阐明MEK1和MEK2亚型在单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type 2,HSV2)复制中介导的Raf/MEK/ERK(简称ERK)通路活化中的作用,以期进一步阐明该通路调控病毒复制的机制.研究中应用了MEK抑制剂U0126、针对MEK1和MEK2的特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),以及用死、活病毒攻击易感细胞,分别检测细胞ERK通路的激活和病毒复制的水平.结果表明,HSV2活病毒感染能引起ERK通路双相激活,U0126则能有效地抑制该通路的活化以及病毒复制;而死病毒只能引起ERK通路早期时相激活;单独敲降(knockdown)MEK1可抑制死、活病毒引发的ERK通路早期时相激活及活病毒引发的晚期时相激活,而敲降MEK2未见对病毒引起的该通路双相激活产生显著影响.提示HSV2复制引起ERK通路双相激活是基于MEK1-ERKs方式调控的,这种信号蛋白激活传递模式在HSV2整个复制周期中具有重要的正调控作用.该结果进一步证明了本室的前期报道:MEK1和MEK2亚型在病毒复制时发挥的作用不同.这对揭示MEK激酶功能的复杂性和ERK通路调控HSV2复制的机制,具有重要的意义. 展开更多
关键词 细胞外信号调节激酶通路 MEK1 MEK2 单纯疱疹病毒ⅱ型 小干扰RNA
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鲤疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型研究进展 被引量：9
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作者 罗丹 梁利国 +1 位作者 谢骏 吴旭东 《水生态学杂志》 北大核心 2014年第3期94-100,共7页
近年来,鲤疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型(Cyprinid herpesvirusⅠ、Ⅱ、Ⅲ)病毒给我国鲤科鱼的养殖造成了严重的经济损失。CyHV-Ⅰ主要危害1龄以上的鲤,对鲫、圆腹雅罗鱼、鲤与金鱼杂交种等也有危害。CyHV-Ⅱ仅感染金鱼、鲫及其普通变种如异育... 近年来,鲤疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型(Cyprinid herpesvirusⅠ、Ⅱ、Ⅲ)病毒给我国鲤科鱼的养殖造成了严重的经济损失。CyHV-Ⅰ主要危害1龄以上的鲤,对鲫、圆腹雅罗鱼、鲤与金鱼杂交种等也有危害。CyHV-Ⅱ仅感染金鱼、鲫及其普通变种如异育银鲫、金鱼和鲤的杂交体,对鱼卵、鱼苗、鱼种、亲鱼等各个时期均有危害,而幼鱼较成鱼易受到感染。鲤除了幼鱼不易受CyHV-Ⅲ影响,其他所有龄期均对其敏感。CyHV-Ⅲ不仅鲤能感染,其他鲤科鱼、锦鲤和鲫的杂交后代、锦鲤和金鱼的杂交后代均对其易感,金鱼、鲟均可作为CyHV-Ⅲ潜在的携带载体。就3种病毒的流行现状,临床症状,引发疾病的病理特征,检测方法等取得的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 鲤科疱疹病毒ⅰ型 鲤科疱疹病毒ⅱ型 鲤科疱疹病毒Ⅲ型 病理特征 临床症状 检测方法
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