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面向多元主体参与的韧性社区更新规划决策研究 被引量：2
1
作者 董文丽 陈晓薇 《现代城市研究》 北大核心 2025年第4期20-28,共9页
韧性社区规划对建设韧性城市和社区,实现规划的精细化、系统化和全过程管理至关重要,而以多元主体参与为基础的群体决策是社区更新与韧性治理的重要决策机制。文章基于相关文献厘定研究对象、内涵和方法,探索社区韧性规划的决策框架体系... 韧性社区规划对建设韧性城市和社区,实现规划的精细化、系统化和全过程管理至关重要,而以多元主体参与为基础的群体决策是社区更新与韧性治理的重要决策机制。文章基于相关文献厘定研究对象、内涵和方法,探索社区韧性规划的决策框架体系;通过模糊群决策的方法、机制和技术平台探索实现公众参与社区规划的技术路径。面向多元主体参与的社区规划群决策机制探索,为提高社区规划的韧性提供了新的研究视角和实践参考。 展开更多
关键词 社区规划韧性 韧性规划 社区更新 模糊综合评价 群决策
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“不能更X了”构式的功能及其形成机制
2
作者 禹平 赵晓明 《汉语学习》 北大核心 2025年第2期65-73,共9页
“不能更X了”构式形式上是情态的否定表达,后附语气词“了”触发构式定型。“不能更X了”结构的构式化具有认知上的理据性,认知突显转移推动语义范畴渐变,客观识解转向主观识解促进主观义的形成。“不能更X了”构式经历性状强化和感叹... “不能更X了”构式形式上是情态的否定表达,后附语气词“了”触发构式定型。“不能更X了”结构的构式化具有认知上的理据性,认知突显转移推动语义范畴渐变,客观识解转向主观识解促进主观义的形成。“不能更X了”构式经历性状强化和感叹提升等程序,具有感叹性评价功能。构式的发展演化主要体现在“能”的语义范畴变化,与语言接触、语体环境、语用频率及语言使用者的交际心理等密切相关。 展开更多
关键词 “不能更X了” 突显转移 构式化 功能特征
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犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
3
作者 龚婷 马辉 郑鸣 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第7期81-84,118,共5页
为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000... 为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000、1∶2048000,染色体数目分别为106、105、103,重链分别为IgG1、IgG2b和IgG1,轻链均为κ链,均能与VP2蛋白和CPV感染的F81细胞发生特异性反应,均与4种常见病毒不发生交叉反应。该研究获得了3株抗体效价高、特异性强、免疫学活性好的VP2蛋白单克隆抗体,可为CPV基础性研究和免疫学诊断试剂盒开发奠定基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2蛋白 单克隆抗体 制备与鉴定
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织梦归巢:基于双重编织的社区微空间参与式更新
4
作者 罗丹 郑琬蕾 +1 位作者 肖竞 汪智洋 《风景园林》 北大核心 2025年第10期139-142,共4页
中心湾社区坐落于重庆市沙坪坝区,作为曾经“西南工业之母”——重庆特钢厂的家属区,见证了重庆乃至整个西南地区的工业崛起与繁荣。然而当后工业时代的潮水逐渐退去,这里不仅面临着物质空间的衰败,更经历着集体记忆的社会性流失。作为... 中心湾社区坐落于重庆市沙坪坝区,作为曾经“西南工业之母”——重庆特钢厂的家属区,见证了重庆乃至整个西南地区的工业崛起与繁荣。然而当后工业时代的潮水逐渐退去,这里不仅面临着物质空间的衰败,更经历着集体记忆的社会性流失。作为重庆市社区规划艺术节的活动单元之一,重庆大学建筑城规学院“空间之间”营造团队(CQU Inter-Space Studio)携手社区居民,展开微更新实践,将沸腾的工业记忆重新“锻造”为温暖的人文景观。 展开更多
关键词 双重编织 织梦归巢 社区更新 社区微空间
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更昔洛韦联合曲安奈德玻璃体内注射治疗急性视网膜坏死综合征效果观察
5
作者 张曙光 项杰 +4 位作者 王慧芳 乔玉璞 翟宇佳 徐一帆 王瑞峰 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第5期719-722,共4页
目的:评价更昔洛韦联合曲安奈德玻璃体内注射治疗急性视网膜坏死综合征的临床效果。方法:郑州市第二人民医院2019年2月至2024年6月收治急性视网膜坏死综合征患者22例(22眼),在给予全身抗病毒用药的基础上,12例(12眼)单纯行更昔洛韦玻璃... 目的:评价更昔洛韦联合曲安奈德玻璃体内注射治疗急性视网膜坏死综合征的临床效果。方法:郑州市第二人民医院2019年2月至2024年6月收治急性视网膜坏死综合征患者22例(22眼),在给予全身抗病毒用药的基础上,12例(12眼)单纯行更昔洛韦玻璃体内注射,3 mg/次,每周2次,注射4次(对照组),10例(10眼)在第4次注射更昔洛韦时给予曲安奈德1 mg玻璃体内注射(观察组)。测定并观察2组患者治疗前及末次注药2个月后最佳矫正视力、眼前后节情况、眼内房水IL-6水平及病毒滴度。结果:末次注药2个月后,观察组视力较治疗前改善(P=0.018),对照组无改善(P=0.506)。2组玻璃体混浊及眼底表现均有改善,对照组3例、观察组1例出现视网膜脱离。治疗后2组房水IL-6水平均降低,且观察组降幅大于对照组(P<0.05)。治疗后2组房水病毒滴度均降低(P<0.05),但2组病毒滴度的变化差异无统计学意义(P=0.080)。结论:在急性视网膜坏死综合征治疗中,全身抗病毒用药联合玻璃体内注射抗病毒药物及小剂量曲安奈德,能有效改善视力,控制炎症反应及病毒复制。 展开更多
关键词 更昔洛韦 曲安奈德 玻璃体内注射 急性视网膜坏死综合征
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猪轮状病毒VP6蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：2
6
作者 潘向英 曾智勇 +7 位作者 梁海英 汤德元 王彬 叶泥 田红利 边孟婷 柳佳佳 黄书 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1231-1240,共10页
【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6... 【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6重组质粒为模板扩增VP 6截短基因。利用pET-32a(+)原核表达载体构建pET32a-PoRV-VP6重组质粒。以大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞为宿主菌,对重组质粒进行诱导表达,并优化表达条件。利用His标签镍柱对pET32a-PoRV-VP6重组蛋白进行纯化,以此作为包被抗原,通过单一变量法优化抗原包被浓度、血清稀释度、二抗稀释度及一抗、二抗孵育时间等工作条件。确定间接ELISA方法的阴阳性临界值,检验其特异性、敏感性、重复性及符合性,并对2021—2024年采自贵州地区不同猪场的384份临床猪血清进行检测。【结果】试验成功构建pET32a-PoRV-VP6重组表达载体,实现VP6蛋白的原核截短表达,蛋白分子质量大小约40 ku,具有良好的反应原性。对间接ELISA方法条件进行优化,确定VP6包被抗原最佳浓度为2μg/mL、阳性血清稀释度为1∶100、血清样品和二抗孵育时间均为60 min、TMB反应时间为10 min、阴阳性临界值(D 450 nm)为0.410。建立的间接ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒标准阳性血清不发生反应,特异性强;批内和批间重复试验变异系数均<10%,重复性好;与PoRV A型ELISA抗体检测试剂盒的总体符合率为96.80%。间接ELISA方法检测临床384份猪血清样品结果显示,样品总阳性率为28.91%。【结论】本研究成功实现了PoRV VP6蛋白的截短表达,并建立了PoRV间接ELISA抗体检测方法,适用于临床PoRV抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) vp6蛋白 截短表达 间接ELISA
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大西洋鲑传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的构建及其表达 被引量：1
7
作者 李守湖 秦闯 +1 位作者 李新苍 石建高 《水产科技情报》 2025年第1期26-32,共7页
传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组... 传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组腺病毒载体,利用PCR方法分别扩增出IPNV VP2基因和VP3基因,通过多基因片段同源重组技术将IPNV VP2基因和VP3基因克隆到pAd-Track-CMV载体,经过线性化后与pAd-easy-1载体在BJ5183菌体内进行同源重组,构建出重组腺病毒质粒;通过PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,再经PacⅠ线性化后用于转染293T细胞,获得重组腺病毒;通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达监控重组腺病毒的复制情况,用Western-blotting法分别检测IPNV VP2蛋白和VP3蛋白的表达,并测定重组病毒滴度。结果显示,分别克隆出IPNV VP2和VP3基因,基因总长度为2211 bp,构建出目的基因重组腺病毒载体,该病毒在293T细胞中分别表达出蛋白分子质量约为54 kD和26 kD的产物,滴度为1.0×10^(9)个/mL TCID_(50)。结果表明,已成功获得IPNV VP2基因和VP3基因重组腺病毒,该病毒在293T细胞中滴度较高,能够稳定表达。传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的成功构建可为大西洋鲑传染性胰腺坏死病活载体疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 大西洋鲑 传染性胰腺坏死病 vp2基因 vp3基因 腺病毒载体
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北京花园城市的微花园社区更新网络治理途径探索——以景山和朝阳门花园社区为例 被引量：1
8
作者 侯晓蕾 郭婧 +2 位作者 刘欣 姚莉莎 孔泑涵 《中国园林》 北大核心 2025年第4期16-22,共7页
北京花园城市建设目标推动城市更新走向精细化、生态化和综合化,微花园社区微更新成为重要实践路径。微花园社区更新以公众参与为核心,是空间建设转向社会网络治理的载体,构建了“空间网络-社会网络-网络耦合-场景呈现”的分析体系。从... 北京花园城市建设目标推动城市更新走向精细化、生态化和综合化,微花园社区微更新成为重要实践路径。微花园社区更新以公众参与为核心,是空间建设转向社会网络治理的载体,构建了“空间网络-社会网络-网络耦合-场景呈现”的分析体系。从空间和社会网络治理双重角度,提出有效行动路径,通过实证案例验证其促进社会网络修复的可行性。进一步从多元参与协同机制、动态弹性反馈机制和长效韧性协同增益机制3个层面,提出微花园双网耦合治理框架。以景山和朝阳门花园示范社区为例,探索出“1+n+∞”模式,即通过一个示范中心辐射带动多个微花园落地,激发公众参与,形成可持续的社区治理模式。 展开更多
关键词 风景园林 花园城市 微花园 社区更新 空间网络 社会网络 双网耦合
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“NP的VP”式的DP结构重议
9
作者 曹道根 潘海华 《语言科学》 北大核心 2025年第4期362-375,共14页
文章重新论证"NP的VP"式(如"这本书的出版")具有"内动外名"的句法构造。主要观点如下:1)只要承认其中"NP的"是领有成分,就必须承认此式有(零形)D功能投射,即此式有外层名词性句法构造。2)此式... 文章重新论证"NP的VP"式(如"这本书的出版")具有"内动外名"的句法构造。主要观点如下:1)只要承认其中"NP的"是领有成分,就必须承认此式有(零形)D功能投射,即此式有外层名词性句法构造。2)此式内层谓词性结构通常为词汇层VP或题元层vP/VoiceP,但名物化层级也存在向形态层最为有限的功能扩展。3)按所述物化事件是否涉及可数性特征核验或是否有数量描述,此式外层名词性架构区分为两类,差别在于DP内是否包含量词性轻名投射;量词性轻名词同时在语义和句法层面实现名物化。4)DP不含轻名投射的情形下(即[DP-VP]型式),领有名词移位生成;反之(即[DP-nP-VP]型式),领有名词基础生成于[Spec,DP],并成为VP中空主语或空宾语Pro的控制成分。5)"的"在此式中只是领格标记,既不构成此式作为名物化结构的结构中心,也不构成"NP的"这一领有短语的结构中心;"的"在此式中没有发生功能投射。 展开更多
关键词 名物化 NP的vp DP结构 的
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脑心肌炎病毒VP22A基因真核表达载体的构建 被引量：1
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作者 邵帅 纪晓岚 +1 位作者 刘明启 李琼毅 《中国动物保健》 2025年第1期240-241,共2页
为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至... 为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性单克隆菌落,对阳性单克隆提取重组质粒并双酶切进行验证,对阳性重组质粒进行测序。重组质粒双酶切和测序结果表明,pc DNA3.1-Flag-VP2和pc DNA3.1-Flag-2A真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 vp2基因 2A基因 真核表达载体
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大口黑鲈双RNA病毒VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备
11
作者 张秋爽 马宝福 +6 位作者 郑果 林强 梁红茹 牛银杰 罗霞 李宁求 付小哲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第7期18-25,共8页
【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重... 【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重组VP2蛋白为抗原,皮下多点注射免疫新西兰大白兔,耳中央动脉采血并分离血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体,用BCA法测定纯化后抗体的浓度。通过Western blot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性;采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价。【结果】PCR扩增获得了1266 bp的VP2基因片段。PCR和测序鉴定结果表明,重组质粒pET-VP2构建成功。VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了64 ku的重组蛋白,符合预期大小。成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体,其质量浓度为10 mg/mL,效价为1∶1024000,可特异性识别LBBV VP2蛋白;血清中和试验结果显示,VP2多抗中和抗体效价为1∶64。【结论】成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白,制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体,该多抗对LBBV具有中和作用。 展开更多
关键词 大口黑鲈 大口黑鲈双RNA病毒 vp2蛋白 多克隆抗体
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猫杯状病毒VP1蛋白B细胞表位的串联表达及间接ELISA方法的建立
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作者 王真真 汤傲星 +9 位作者 刘春草 李娜 林亮亮 宋若楠 贾楠楠 杜汉宇 朱杰 李传峰 刘光清 孟春春 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期103-109,共7页
为建立一种检测猫杯状病毒抗体的间接ELISA方法,本试验将截短的猫杯状病毒VP1蛋白表达为重组蛋白纯化后作为包被抗原。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了比较。结果显示,抗... 为建立一种检测猫杯状病毒抗体的间接ELISA方法,本试验将截短的猫杯状病毒VP1蛋白表达为重组蛋白纯化后作为包被抗原。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了比较。结果显示,抗原包被量为2μg/mL,血清最佳稀释度为1∶1000,37℃作用1 h;二抗的最佳工作浓度为1∶10000;TMB底物显色液37℃避光显色反应15 min。特异性试验结果显示,同FPV和FHV阳性血清均无交叉反应。此方法对猫细小病毒阳性血清的敏感性为1∶40960;组内、组间变异系数均小于5%。与本实验室建立的包被全病毒的方法平行比较,显示其检测阴阳性血清的值高度一致。结果表明,建立的基于截短的猫杯状病毒VP1蛋白建立的间接ELISA方法非常适用于临床样本的检测,可为猫杯状病毒的防控工作提供技术支撑。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 vp1蛋白 串联的B细胞表位 间接ELISA
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A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体制备与竞争ELISA方法的建立
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作者 何启杰 农作荣 +7 位作者 王豪 牛晨霞 莫勇芳 欧阳康 陈樱 黄伟坚 黄稳妃 韦祖樟 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期23-29,共7页
依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其... 依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其特异性。随后建立竞争ELISA方法,并对实验室收集的2016-2019年广西11个地区64个规模猪场592份猪血清进行SVA抗体检测。结果显示,诱导表达出的重组VP2蛋白主要以可溶性形式表达,血清中VP2抗体效价大于1∶64000,且制备的VP2抗体能特异结合SVA感染细胞中的VP2蛋白。竞争ELISA检测结果显示广西地区猪场SVA血清阳性率高达76.6%,血清样品阳性率高达55.9%,研究结果为SVA的检测和研究奠定了基础。 展开更多
关键词 A型塞内卡 vp2蛋白 原核表达 多克隆抗体 竞争ELISA
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新型鹅星状病毒AH-2021株的分离鉴定及其VP27-VP34蛋白多克隆抗体的制备
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作者 殷冬冬 朱星星 +7 位作者 兰梦蝶 彭梦玲 尹磊 戴银 沈学怀 王洁茹 赵瑞宏 潘孝成 《华北农学报》 北大核心 2025年第2期210-217,共8页
为分析安徽六安地区新型鹅星状病毒(GAstV)的变异情况并表达其VP27-VP34蛋白,从六安某养殖场采集鹅痛风病料,经RT-PCR检测为阳性后,首先对鹅胚传代培养分离病毒,其次对分离毒株进行动物回归试验、全基因组扩增测序及遗传进化分析;随后,... 为分析安徽六安地区新型鹅星状病毒(GAstV)的变异情况并表达其VP27-VP34蛋白,从六安某养殖场采集鹅痛风病料,经RT-PCR检测为阳性后,首先对鹅胚传代培养分离病毒,其次对分离毒株进行动物回归试验、全基因组扩增测序及遗传进化分析;随后,将分离株的VP27-VP34序列克隆至pCold-TF载体进行诱导表达,并将纯化后的重组蛋白免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备多克隆抗体。通过间接免疫荧光(IFA)检测多克隆抗体特异性,利用琼脂扩散法检测血清抗体效价。结果表明,从临床病料样本中分离到1株鹅星状病毒,命名为AH-2021株。动物回归试验可见雏鹅心脏、肝脏表面尿酸盐沉积明显,肾脏发白、肿胀。遗传进化结果显示,AH-2021株属于GAstV-1,与GenBank中的其他GAstV-1相似性为98.0%~99.0%。重组表达载体pCold-TF-VP27-VP34经IPTG诱导获得了目的蛋白,SDS-PAGE显示,重组蛋白分子质量约为110 ku,主要以上清形式存在。IFA试验结果显示,制备的多克隆抗体能够特异性识别新型鹅星状病毒,琼脂扩散结果显示,抗体效价可达1∶16。综上所述,从临床痛风雏鹅中分离鉴定到1株新型鹅星状病毒AH-2021株,动物回归试验表明,新型鹅星状病毒是导致雏鹅痛风的病原,制备了VP27-VP34融合蛋白的多克隆抗体。 展开更多
关键词 新型鹅星状病毒 vp27-vp34融合蛋白 分离鉴定 原核表达 多克隆抗体
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猪捷申病毒5型VP1蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
15
作者 邵永恒 倪民婷 +6 位作者 高梦玲 汤娇 张耕馨 林圣宇 刘光亮 陈佳宁 王雯慧 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第2期883-889,共7页
旨在建立针对猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)5型的间接ELISA检测方法,为其防控提供物质储备。PTV是猪的一种急性、烈性病原,以高发病率和高致死率为主要特征。其临床表现包括脑炎、肺炎、繁殖障碍、心肌炎及腹泻等多种症状。但该... 旨在建立针对猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)5型的间接ELISA检测方法,为其防控提供物质储备。PTV是猪的一种急性、烈性病原,以高发病率和高致死率为主要特征。其临床表现包括脑炎、肺炎、繁殖障碍、心肌炎及腹泻等多种症状。但该病原亚型众多,不同亚型间临床表现差异较大,且缺乏高效、特异的血清学检测方法,阻碍了对PTV-5的防治。本研究针对危害较大的PTV-5构建了pET-30a-VP1重组质粒,通过原核表达获得了VP1蛋白,以纯化的VP1为包被抗原,经条件优化成功建立了针对PTV-5的间接ELISA方法。该方法与常见猪源病毒标准阳性血清无交叉反应,最低检测稀释度为1∶3200,批内与批间变异系数均低于10%,具有良好的特异性、敏感性和重复性。利用该方法对东北地区279份临床样本进行检测,其阳性率为67.74%,与报道的流行情况相符。本研究建立的间接ELISA检测方法综合评价良好,为PTV-5的临床检测提供技术支持。 展开更多
关键词 猪捷申病毒 vp1蛋白 原核表达 间接ELISA
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猪轮状病毒VP8截短蛋白-铁蛋白纳米颗粒的制备与免疫原性分析
16
作者 彭凤巧 李博硕 +1 位作者 杜恩岐 周宏超 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期59-65,共7页
在铁蛋白纳米颗粒骨架上集中展示猪轮状病毒(PoRV)VP8截短蛋白,制备一种以铁蛋白(Ferritin)为载体的PoRV纳米颗粒亚单位疫苗并评估其免疫原性。将PoRV VP8截短蛋白和铁蛋白利用SpyCatcher/SpyTag系统连接形成PoRV VP8-Ferritin,通过透... 在铁蛋白纳米颗粒骨架上集中展示猪轮状病毒(PoRV)VP8截短蛋白,制备一种以铁蛋白(Ferritin)为载体的PoRV纳米颗粒亚单位疫苗并评估其免疫原性。将PoRV VP8截短蛋白和铁蛋白利用SpyCatcher/SpyTag系统连接形成PoRV VP8-Ferritin,通过透射电镜(TEM)、高效液相色谱(HPLC)、动态光散射(DLS)对纳米颗粒进行表征分析,并配伍佐剂制备亚单位疫苗免疫小鼠。对免疫后各时间点小鼠血清的特异性IgG抗体和35 d的特异性IgG抗体进行分型(IgG2a和IgG1)检测。结果显示,VP8-Ferritin能较好地在体外组装形成平均粒径为15.56 nm的颗粒结构,组装效率可达85%。免疫后14 d VP8-Ferritin免疫组和VP8免疫组均能在小鼠血清中检测到特异性IgG抗体,OD 450值分别为0.521和0.229;免疫后42 d各免疫组的特异性IgG抗体水平达到峰值,OD 450值分别为1.197和0.531。免疫后的VP8-Ferritin亚单位疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,其特异性IgG抗体水平极显著高于VP8亚单位疫苗(P<0.01);VP8-Ferritin免疫组IgG2a/IgG1比值为2.564,显著高于VP8免疫组的IgG2a/IgG1比值1.791(P<0.05)。结果表明VP8-Ferritin纳米颗粒亚单位疫苗增强了VP8抗原的免疫原性,主要表现TH1型免疫反应,该结果为猪轮状病毒亚单位疫苗的研究提供了新思路。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 vp8蛋白 纳米颗粒 免疫原性
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牛肠病毒VP1基因重组腺病毒的构建及其对小鼠的免疫原性评价
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作者 马思琪 吕雯雯 +9 位作者 陈俊贞 李建林 刘昱成 关团 丁剑 刘浩然 叶鸿艳 杨莉 付强 史慧君 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4615-4625,共11页
构建表达牛肠病毒(bovine enterovirus,BEV)结构蛋白VP1的重组腺病毒,并对其进行免疫原性和安全性的初步验证。首先,应用PCR扩增BEV VP1基因,并将其克隆至腺病毒载体pDC316-CMV-copGFP,获得的重组质粒pDC316-VP1-copGFP与pBHGlox-△E1,3... 构建表达牛肠病毒(bovine enterovirus,BEV)结构蛋白VP1的重组腺病毒,并对其进行免疫原性和安全性的初步验证。首先,应用PCR扩增BEV VP1基因,并将其克隆至腺病毒载体pDC316-CMV-copGFP,获得的重组质粒pDC316-VP1-copGFP与pBHGlox-△E1,3cre共转染至293细胞后,进行病毒滴度测定及RT-PCR鉴定;其次,构建pET-32a-BEV-VP1原核表达质粒,优化诱导时间和温度后纯化BEV VP1蛋白;同时,将阴性对照腺病毒rAdv-copGFP、重组腺病毒rAdv-VP1及空白对照PBS分别肌注免疫BALB/c小鼠,观察小鼠临床症状;随后于免疫21 d后感染BEV,并于攻毒第0、5、10、15天采集小鼠肝、肺、脾、肾、小肠,分别提取组织RNA并制作病理切片,检测各组织中病毒载量并观察组织病理变化;最后,使用ELISA检测免疫血清中总IgG抗体、特异性抗体、细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果显示:成功构建腺病毒载体pDC316-VP1-copGFP;筛选出最优VP1原核表达条件为37℃诱导8 h,成功纯化出pET-32a-BEV-VP1蛋白;腺病毒免疫小鼠血清能够识别纯化后的VP1蛋白;重组腺病毒免疫能使小鼠产生特异性抗体,从而提高体液免疫与细胞免疫水平。本研究成功构建表达BEV VP1蛋白的重组腺病毒,在免疫小鼠后能够较好地诱导小鼠体内产生体液免疫应答和细胞免疫应答,从而对BEV感染起到了一定的保护作用,为进一步研发BEV新型疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 牛肠病毒 重组腺病毒 结构蛋白vp1 细胞免疫
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基于真核表达塞内卡病毒A VP2蛋白的间接ELISA检测方法
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作者 裴宗飞 于凯蓝 +2 位作者 安欣娜 陈俊雯 张永宁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2025年第1期65-74,共10页
为建立检测塞内卡病毒A(SVA)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),本试验利用昆虫杆状病毒表达系统表达SVA的主要结构蛋白和保护性抗原VP2,通过间接免疫荧光试验(IFA)验证VP2的免疫反应性,并使用氨基三乙酸镍(NiNTA)树脂亲和纯化重组VP2... 为建立检测塞内卡病毒A(SVA)抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),本试验利用昆虫杆状病毒表达系统表达SVA的主要结构蛋白和保护性抗原VP2,通过间接免疫荧光试验(IFA)验证VP2的免疫反应性,并使用氨基三乙酸镍(NiNTA)树脂亲和纯化重组VP2蛋白。以纯化的VP2蛋白为包被抗原,利用棋盘滴定法确定最优的抗原包被浓度和待检血清稀释度,通过优化反应条件和确定临界值,建立了检测SVA抗体的间接ELISA检测方法,并评估了其特异性、敏感性、重复性及与IFA的检测符合率。结果显示,重组VP2蛋白在杆状病毒感染的Sf9细胞内呈现可溶性表达,能够被SVA VP2特异性单克隆抗体2F5识别;经Ni-NTA纯化后,获得了分子量约31 kDa的重组VP2蛋白;间接ELISA的最佳抗原包被浓度为2μg/mL,最佳血清稀释度为1∶100,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.287;与口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型抗血清无交叉反应;批内与批间变异系数均低于10%。利用建立的间接ELISA检测了实验室保存的52份猪血清样本,与IFA的检测符合率为96.15%(50/52)。综上,本试验间接ELISA的成功建立为SVA抗体检测和流行病学调查提供了有力工具。 展开更多
关键词 塞内卡病毒A(SVA) vp2蛋白 昆虫杆状病毒表达系统 间接ELISA 抗体
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猪轮状病毒VP6蛋白的真核表达及单克隆抗体制备和应用
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作者 魏黄思梧 张兴艺 +5 位作者 黄校花 刘昌锦 武文杰 沈政乔 罗锋 邓舜洲 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2750-2761,共12页
【目的】制备抗猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6蛋白单克隆抗体,为PoRV检测方法的开发提供参考。【方法】以痘苗病毒启动子P28为VP6的启动子,以G3型PoRV核酸为模板扩增VP6基因,通过无缝克隆方法将VP6基因片段克隆至pSWE178质粒,... 【目的】制备抗猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6蛋白单克隆抗体,为PoRV检测方法的开发提供参考。【方法】以痘苗病毒启动子P28为VP6的启动子,以G3型PoRV核酸为模板扩增VP6基因,通过无缝克隆方法将VP6基因片段克隆至pSWE178质粒,构建重组质粒pSWE178-P28-VP6;利用同源重组和蚀斑纯化技术获得表达VP6蛋白的重组猪痘病毒rSWE178-P28-VP6,用SDS-PAGE鉴定VP6蛋白表达形式。以G9型PoRV为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,以重组病毒表达的VP6蛋白为检测抗原,通过间接ELISA筛选分泌抗VP6单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过间接免疫荧光试验(IFA)检测单克隆抗体与G3、G4、G5、G9型PoRV的反应原性,选择其中1株单克隆抗体对人工感染PoRV的猪肠道组织进行免疫组化(IHC)检测。【结果】在构建了表达PoRV VP6蛋白的重组质粒pSWE178-P28-VP6基础上,成功构建了表达PoRV VP6蛋白的重组猪痘病毒,表达的蛋白分子质量大小45 ku,为可溶性表达。采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,筛选获得29株分泌抗VP6单克隆抗体的杂交瘤细胞株。IFA结果显示,26株单克隆抗体均能与G3、G4、G5、G9型PoRV反应,但荧光亮度存在差异。IHC检测结果显示,单克隆抗体能与感染PoRV的临床样品发生特异性免疫反应。【结论】本研究利用真核表达系统成功表达了PoRV VP6蛋白,采用杂交瘤技术筛选获得29株抗VP6单抗隆抗体,其中26株均能与G3、G4、G5、G9型PoRV反应。试验结果为PoRV免疫学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) vp6蛋白 真核表达 单克隆抗体
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从“随同”到“参照”——论事件融合构式“跟着NP+VP”的形成与发展
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作者 陈景元 蒋雯 《新疆大学学报(哲学社会科学版)》 北大核心 2025年第1期150-157,共8页
事件融合构式“跟着NP+VP”,由两个行动关联事件融合为一个事件而成,其形成和发展是事件融合和语法化的产物。构式共时层面多元化共存,具有承继性和多义性,可分为随同构式和参照构式两大类型。随同构式为原型构式,围绕原型构式扩展到参... 事件融合构式“跟着NP+VP”,由两个行动关联事件融合为一个事件而成,其形成和发展是事件融合和语法化的产物。构式共时层面多元化共存,具有承继性和多义性,可分为随同构式和参照构式两大类型。随同构式为原型构式,围绕原型构式扩展到参照构式,构式从低融合走向高融合,构式化程度不断增强。因其结构紧凑,语境适用面广,表达功效特殊,具有较强的人际互动功能和语篇统辖功能,该构式被广泛使用于文章标题、视频标题、书名、影视名、栏目名等,呈现标题化趋势。 展开更多
关键词 跟着NP+vp 事件融合 构式 构式演变
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