无PERV传染性“中畜”五指山小型猪近交系全基因组重测序分析

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作者 章冰艳 范瑞 +3 位作者 冯书堂 贾俊婷 张建斌 马玉媛 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2459-2467,共9页

【目的】自前期选育获得的无猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)传染性“中畜”五指山小型猪近交系(Zhong Xu Wuzhishan Mini-pig Inbred line,ZXWIPIG)新品系中,选取1头雌性猪(ZXWIPIG505)进行全基因组重测序分析... 【目的】自前期选育获得的无猪内源性反转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)传染性“中畜”五指山小型猪近交系(Zhong Xu Wuzhishan Mini-pig Inbred line,ZXWIPIG)新品系中,选取1头雌性猪(ZXWIPIG505)进行全基因组重测序分析,以进一步从分子水平上阐释无PERV传染性猪新品系的序列特征。【方法】分离ZXWIPIG505外周血单个核细胞并提取其基因组DNA,利用Illumina HiSeq-4000测序平台进行全基因组重测序。分别使用BLAST和SAMtools 0.1.19软件,提取ZXWIPIG505基因组中整合的PERV长片段和PERV-pol基因序列片段,并使用DNAStar软件对整合的PERV结构基因序列进行分析。将ZXWIPIG505中整合的PERV-pol基因序列特征与前期鉴定的PERV-pol缺陷型ZXWIPIG452中PERV-pol基因序列进行比较研究。【结果】ZXWIPIG505全基因组重测序平均测序深度为14.32×,测序数据有效率为97.21%,Q20为94.37%,Q30为87.03%,GC含量为43.38%,表明本次测序数据质量较高。ZXWIPIG505基因组中共整合5条PERV长片段,其中仅scaffold5028含有PERV全部结构基因,但均为缺陷型。ZXWIPIG505基因组中共整合85条PERV-pol基因片段序列,比对发现所有PERV-pol基因片段均不完整,为缺陷型。ZXWIPIG505和ZXWIPIG452基因组中整合的PERV-pol基因序列存在高度相似性,60条序列长度相同,75条序列在猪基因组中的整合位点相同,42条序列的PERV-pol基因提前终止位点相同。【结论】前期选育的ZXWIPIG505为PERV-pol基因缺陷型猪,并且ZXWIPIG505和ZXWIPIG452中整合的PERV-pol基因序列具有高度相似性。 展开更多

关键词 猪内源性反转录病毒 “中畜”五指山小型猪近交系 基因缺陷型 全基因组重测序

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近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞体外分泌肝细胞生长因子延缓慢性肾脏病纤维化进展 被引量：7

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作者 向杨 龙家乐 +8 位作者 邢健生 高元慧 程庆 蔡勇 刘振湘 张淑芳 陈列 杨超 白志明 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1260-1269,共10页

目的:分离培养近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs),并建立其慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型,体外研究同物种BM-MSCs对CKD肾纤维化的修复作用及其可能机制。方法:采用密度梯... 目的:分离培养近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs),并建立其慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型,体外研究同物种BM-MSCs对CKD肾纤维化的修复作用及其可能机制。方法:采用密度梯度法分离培养BM-MSCs,并从细胞形态、表面抗原、分化能力等方面鉴定;采用左侧输尿管部分梗阻(left partial ureteral obstruction,LPUUO)方法制作CKD模型,并通过B超、单光子发射计算机断层成像术(single-photon emission computed tomography,SPECT)、病理染色等评估;体外实验分为肾组织与BM-MSCs共培养、肾组织单独培养、BM-MSCs单独培养3组,体外培养7 d,每天收集3组上清液,酶联免疫吸附法测定肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)累积分泌量。肾组织行HE染色,Masson染色。结果:分离培养的BM-MSCs表达抗原CD29,CD90而不表达CD45,成骨诱导茜素红染色阳性,成软骨诱导阿利新蓝染色阳性。LPUUO术后12周,B超示左肾皮质变薄、肾盂积液;SPECT示左肾充盈延迟、梗阻性肾功能受损。上清液HGF累积含量示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组第1,5,6,7天HGF累积分泌量明显高于CKD肾组织单独培养组(P<0.05)。HE染色显示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组和CKD肾组织单独培养组中肾均出现不同程度的病变,并随时间延长加重,但CKD肾组织单独培养组病变更严重;Masson染色显示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组术后第5,6,7天肾组织被染成蓝色的胶原纤维的累计光密度值明显低于CKD肾组织单独培养组(P<0.05)。结论:近交系五指山小型猪BM-MSCs体外分泌HGF,抑制或延缓CKD纤维化进展。 展开更多

关键词 近交系五指山小型猪 骨髓间充质干细胞 慢性肾脏病 肾纤维化 肝细胞生长因子

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近交系五指山小型猪泌尿系统的解剖学研究 被引量：8

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作者 杨述林 靳二辉 +7 位作者 单同领 张勇 牟玉莲 冯书堂 彭克美 刘华珍 唐文花 李奎 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第10期59-62,共4页

采用大体解剖学方法对近交系五指山小型猪泌尿系统的解剖学结构特点进行观察研究,发现近交系五指山小型猪泌尿器官的大体形态和位置与人及其它小型猪的基本相似。从解剖学角度来看,成年近交系五指山小型猪肾脏更适合于异种肾移植,为比... 采用大体解剖学方法对近交系五指山小型猪泌尿系统的解剖学结构特点进行观察研究,发现近交系五指山小型猪泌尿器官的大体形态和位置与人及其它小型猪的基本相似。从解剖学角度来看,成年近交系五指山小型猪肾脏更适合于异种肾移植,为比较医学和临床上异种肾移植提供形态学资料。 展开更多

关键词 近交系五指山小型猪 肾脏 解剖学特征

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近交系五指山小型猪脂肪间充质干细胞分离培养及生物学特性 被引量：4

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作者 黄邓高 曹卉 +6 位作者 王顺兰 郑琳麟 陈宗文 文小红 张淑芳 向杨 高元慧 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期297-306,共10页

目的:建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)脂肪间充质干细胞(adiposederived mesenchymal stem cells,ASCs)体外分离培养和鉴定方法。方法:选取6月龄健康ILMW 3头,从颈部皮下无菌获取脂肪组织约100 g... 目的:建立近交系五指山小型猪(inbreed line miniature pig of Wuzhishan,ILMW)脂肪间充质干细胞(adiposederived mesenchymal stem cells,ASCs)体外分离培养和鉴定方法。方法:选取6月龄健康ILMW 3头,从颈部皮下无菌获取脂肪组织约100 g,采用0.1%I型胶原酶消化组织,获得ILMW-ASCs,并进行体外培养和增殖;取第3,5,8,13代细胞进行如下实验:测量细胞大小,观察细胞形态,检测细胞表型、细胞周期、细胞凋亡,并进行细胞诱导分化和绘制细胞增殖曲线。结果:体外分离培养的ILMW-ASCs在体外贴壁,呈成纤维样或旋涡状生长;原代细胞培养36 h出现贴壁,第5天进入对数增殖期,约7 d后80%的细胞汇合。ILMW-ASCs细胞直径及体积分别为(17.00±0.54)μm和(2.58±0.24)×10–9 L。细胞表面抗原CD29,CD44和CD90呈高表达,不同代数之间的差异不明显(均P>0.05);CD45,CD8a和HLA-DR呈低表达,与第3代相比,随着代数的增加细胞表面抗原的阳性率逐渐增高(均P<0.05)。ILMW-ASCs成脂诱导结果为油红O染色呈阳性;ILMW-ASCs成骨诱导结果为茜素红染色呈阳性。ILMW-ASCs的第13代细胞出现凋亡和衰老,与较低培养代数相比细胞周期S期的比例下降(均P<0.05)。结论:ILMW-ASCs取材方便,贴壁时间早,细胞增殖活跃,传代周期短,传代后能保持稳定的生物学特性,是猪来源ASCs的最佳选择之一,可为大动物疾病模型和组织器官修复的细胞治疗提供候选干细胞来源。 展开更多

关键词 近交系五指山小型猪 脂肪间充质干细胞 分离培养 生物学特性 组织修复

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近交系五指山小型猪消化器官的解剖学研究 被引量：6

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作者 靳二辉 单同领 +7 位作者 张勇 牟玉莲 冯书堂 彭克美 李奎 刘华珍 唐文花 杨述林 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第12期66-69,共4页

本研究采用大体解剖学的方法观察了近交系五指山小型猪消化器官的解剖学特征,并对其消化器官的解剖学常数进行测量。结果显示:4月龄较2月龄五指山小型猪近交系部分消化器官的解剖学数据与人的更相似,小肠、大肠和胰腺的形态与人存在较... 本研究采用大体解剖学的方法观察了近交系五指山小型猪消化器官的解剖学特征,并对其消化器官的解剖学常数进行测量。结果显示:4月龄较2月龄五指山小型猪近交系部分消化器官的解剖学数据与人的更相似,小肠、大肠和胰腺的形态与人存在较大差异。表明4月龄五指山小型猪近交系部分消化器官比2月龄更适合用于异种移植,但其中一些器官在形态学上不适合整个器官的移植,可能适用于细胞的移植。本试验为比较医学和异种器官移植的研究提供基础资料。 展开更多

关键词 近交系五指山小型猪 消化器官 解剖特征 解剖常数

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近交系五指山小型猪心脏的解剖学研究 被引量：3

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作者 靳二辉 彭克美 +7 位作者 张勇 单同领 牟玉莲 冯书堂 李奎 刘华珍 唐文花 杨述林 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第11期66-70,共5页

利用大体解剖学方法对20头不同月龄近交系五指山小型猪心脏的解剖特点进行细致观察并测量,获得了心脏的有关解剖数据。结果表明:2和4月龄近交系五指山小型猪心脏的大体形态、腔室划分和内部结构是相同的,而且与人的基本一致,但心脏的大... 利用大体解剖学方法对20头不同月龄近交系五指山小型猪心脏的解剖特点进行细致观察并测量,获得了心脏的有关解剖数据。结果表明:2和4月龄近交系五指山小型猪心脏的大体形态、腔室划分和内部结构是相同的,而且与人的基本一致,但心脏的大小和某些解剖学常数与成年人有明显差异,心基部各血管的直径与其它地方猪种和人的相比也有明显不同。本研究通过对心脏的解剖,为近交系五指山小型猪用于比较医学和临床器官移植提供了基础资料。 展开更多

关键词 近交系五指山小型猪 心脏 解剖学特点 解剖常数

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不同月龄近交系五指山小型猪免疫器官的组织形态学 被引量：5

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作者 靳二辉 李奎 +4 位作者 冯书堂 牟玉莲 王趁芳 彭克美 杨述林 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第12期1-4,I0001,I0002,共6页

目的对不同月龄近交系五指山小型猪免疫器官组织特点进行观察,为其用于建立人类免疫相关疾病模型提供基础形态学资料。方法2、4和12月龄小型猪免疫器官被分别固定,常规石蜡切片、HE染色,光镜观察。结果4月龄前,胸腺内胸腺细胞和胸腺小... 目的对不同月龄近交系五指山小型猪免疫器官组织特点进行观察,为其用于建立人类免疫相关疾病模型提供基础形态学资料。方法2、4和12月龄小型猪免疫器官被分别固定,常规石蜡切片、HE染色,光镜观察。结果4月龄前,胸腺内胸腺细胞和胸腺小体的数量均随年龄的增长逐渐增多;12月龄时,胸腺细胞数量有所减少,排列比较疏松,胸腺小体的数量和体积基本没有变化;2月龄时胸腺小体周围可见许多大小不同的空泡状细胞和细胞碎片。4月龄前,脾白髓动脉周围组织淋巴鞘和脾小结在也随年龄增长而逐渐增多增大,但12月龄时有所减少并维持在一定水平,其变化与大鼠和鸡的基本一致。2月龄淋巴结皮质靠内,髓质靠外,4月龄两者分界不明显,12月龄淋巴小结较大,淋巴细胞排列疏松,髓质内淋巴细胞较少,毛细血管增多。结论从整体结构上观察,近交系五指山小型猪免疫器官的组织学结构与人和其它哺乳动物之间没有明显的差异。 展开更多

关键词 近交系五指山小型猪 免疫器官 组织形态学

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GGTA1/β4GalNT2双基因敲除近交系五指山小型猪的建立 被引量：6

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作者 李楚 任雪洋 +11 位作者 李琳 厉小雪 金永 张曼玲 刘晓蕊 熊强 张立宁 王盈 李荣凤 杨海元 冯书堂 戴一凡 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期835-840,共6页

目的:利用CRISPR/Cas9技术建立五指山小型猪近交系GGTA1/β4GalNT2双基因敲除克隆猪。方法:设计合成靶向猪GGTA1和β4GalNT2基因的单导向RNA(single guide RNA,sgRNA),以pX330质粒为骨架,分别构建GGTA1和β4GalNT2的Cas9打靶载体,转染... 目的:利用CRISPR/Cas9技术建立五指山小型猪近交系GGTA1/β4GalNT2双基因敲除克隆猪。方法:设计合成靶向猪GGTA1和β4GalNT2基因的单导向RNA(single guide RNA,sgRNA),以pX330质粒为骨架,分别构建GGTA1和β4GalNT2的Cas9打靶载体,转染至近交系五指山小型猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast,PFF)中,通过G418药物筛选和测序鉴定获得双基因敲除的单细胞克隆,然后利用体细胞克隆技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)获得双基因敲除的近交系五指山小型猪,并利用流式细胞技术检测克隆猪外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中αGal和Sd(a)抗原的表达。结果:成功构建GGTA1和β4GalNT2基因的Cas9/sgRNA表达载体,转染后获得双基因敲除的近交系五指山小型猪PFF细胞克隆9个。SCNT成功获得了10只五指山小型猪近交系双基因敲除的克隆猪,其PBMC无αGal和Sd(a)抗原的表达。结论:CRISPR/Cas9技术可以实现对猪GGTA1/β4GalNT2基因的编辑。本实验首次成功制备了GGTA1/β4GalNT2双基因敲除的近交系五指山型猪,为异种器官移植研究与应用提供了新的供体材料。 展开更多

关键词 近交系五指山小型猪 GGTA1/β4GalNT2 CRISPR/Cas9 异种移植

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五指山小型猪近交系异种移植产业化研发进展 被引量：4

9

作者 冯书堂 戴一凡 +1 位作者 章金刚 潘志强 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期469-473,共5页

为了早日实现五指山小型猪(WZSP)近交系异种移植产业化目标,努力推进近交繁育获得近交系,同时开展克服异种移植免疫排斥和猪内源性逆转录病毒(PERV)传染生物安全性两大难题的研发内容。本文从WZSP近交系双基因敲除克隆猪繁育成功、猪-... 为了早日实现五指山小型猪(WZSP)近交系异种移植产业化目标,努力推进近交繁育获得近交系,同时开展克服异种移植免疫排斥和猪内源性逆转录病毒(PERV)传染生物安全性两大难题的研发内容。本文从WZSP近交系双基因敲除克隆猪繁育成功、猪-猴异种角膜内皮移植取得突破性进展、WZSP近交系PERV无传染性群体建立、WZSP近交系是理想的动物模型和异种移植供体等方面,介绍WZSP近交系异种移植产业化的研发进展。 展开更多

关键词 五指山小型猪 近交系猪 异种移植 免疫排斥反应 α-1 3-半乳糖基转移酶基因敲除(αGTKO) 猪内源性逆转录病毒(PERV) 非α-1 3-半乳糖(Gal)抗原 CRISPR/Cas9基因编辑技术

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五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因变异特征研究 被引量：2

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作者 张念 马玉媛 +3 位作者 向思龙 贾俊婷 吴健敏 章金刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期248-250,共3页

为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98... 为分析近交系连续3代次五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因(PERV-env)变异特征,本研究采用PCR方法对该基因进行扩增、克隆和序列测定,将其与参考序列比对和遗传进化分析。序列分析显示:PERV-env核苷酸序列与参考序列之间的同源性为98.3%～99.3%,具有明显G→A突变,并且偏好发生于GA、GG。进一步分析表明,在PERV-env序列190 bp和1 875 bp位置均有G→A突变发生。PERV-env基因遗传进化树分析表明,五指山来源的PERV与国外小型猪PERV-A亲缘关系较近,但仍存在差异。本实验将有助于PERV分子特性的研究,为进一步开展异种移植中PERV的安全性评价奠定基础。 展开更多

关键词 近交系 五指山小型猪 猪内源性反转录病毒 囊膜基因 G→A突变

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五指山小型猪选育成功 被引量：1

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作者 宋卫国 《畜牧兽医科技信息》 1997年第10期4-5,共2页

“实验用五指山小型猪选育”项目在“八五”期间取得可喜成果。五指山小型猪由几头扩繁到百余头,培育出近交系五指山小型猪核心群40头,6月龄体重13.43±3.27Kg,经产母猪产仔6—8头。通过一系列试验证明,五指山小型猪确实有体形小、... “实验用五指山小型猪选育”项目在“八五”期间取得可喜成果。五指山小型猪由几头扩繁到百余头,培育出近交系五指山小型猪核心群40头,6月龄体重13.43±3.27Kg,经产母猪产仔6—8头。通过一系列试验证明,五指山小型猪确实有体形小、性成熟早、近亲繁殖、遗传稳定,肉质好等特点。该猪还具有较强的伤口愈合能力,白血球分类中淋巴细胞占75％,高于其他品种猪(50％)和人类(25— 展开更多

关键词 五指山小型猪 DNA指纹图 近交系 伤口愈合能力 白血球分类 近亲繁殖 6月龄体重 系列试验 猪白细胞抗原 母猪产仔

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我国科学家首次育成小型猪近交系

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《今日畜牧兽医》 2014年第1期67-67,共1页

我国科学家在863计划等支持下,全球首次育成被称为人类理想"替难者"的小型猪近交系。相关成果"小型猪近交系研究与鉴定"12月16日在京通过专家组鉴定,被认为实现了猪种质资源创新,丰富了大型哺乳动物近交系理论与实... 我国科学家在863计划等支持下,全球首次育成被称为人类理想"替难者"的小型猪近交系。相关成果"小型猪近交系研究与鉴定"12月16日在京通过专家组鉴定,被认为实现了猪种质资源创新,丰富了大型哺乳动物近交系理论与实践,达到同类研究国际领先水平。据该研究第一完成人、中国农科院北京畜牧兽医所研究员冯书堂介绍,近交系动物以其遗传高度稳定、基因高度纯合,以及偏差小。 展开更多

关键词 小型猪 近交系 五指山猪 大型哺乳动物 书堂 理论与实践 异种器官移植 兽医所 纯合 种质资源创新

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哺乳动物近交系资源创新百年 被引量：8

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作者 冯书堂 高倩 刘岚 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期181-195,共15页

21世纪是生物技术大发展、竞争日益激烈的新时代,而资源更是竞争的核心。驱动资源创新已列为当代世界各国首要实现的任务和目标,而动物资源创新是其主要内容之一。近年来中国政府出巨资开展转基因动物专项研究,将鼠、猪等列入＂科技攻... 21世纪是生物技术大发展、竞争日益激烈的新时代,而资源更是竞争的核心。驱动资源创新已列为当代世界各国首要实现的任务和目标,而动物资源创新是其主要内容之一。近年来中国政府出巨资开展转基因动物专项研究,将鼠、猪等列入＂科技攻关、基础性研究、863、973＂等项目,足以彰显中国对动物资源创新的高度重视并已付诸实施。 展开更多

关键词 近交系 资源创新 五指山小型猪 动物资源 五指山猪 实验动物 专项研究 转基因动物 杂合度 纯合度

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北京：WZSP近交系鉴定研讨会在京召开

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《中国畜禽种业》 2010年第11期156-156,共1页

10月18日下午，五指山小型猪近交系鉴定研讨会在中国农业科学院北京畜牧兽医研究所顺利召开。本次研讨会邀请了从事实验动物、近交系研究、免疫学以及猪育种研究等诸多专家。研讨会由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所基因与细胞工程室... 10月18日下午，五指山小型猪近交系鉴定研讨会在中国农业科学院北京畜牧兽医研究所顺利召开。本次研讨会邀请了从事实验动物、近交系研究、免疫学以及猪育种研究等诸多专家。研讨会由中国农业科学院北京畜牧兽医研究所基因与细胞工程室冯书堂研究员主持， 展开更多

关键词 近交系 北京 鉴定 畜牧兽医研究所 中国农业科学院 五指山小型猪 实验动物 细胞工程

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