干扰素诱导的跨膜蛋白-1基因的扩增、克隆及蛋白表达 被引量：5

1

作者 刘宇虎 钟东 +5 位作者 柳娟 张振书 陈村龙 武金宝 肖冰 郭文英 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第10期1221-1224,共4页

目的研究干扰素诱导的跨膜蛋白-1(interferon-inducibletransmembraneprotein-1,IFITMP-1)基因的扩增、克隆及蛋白表达。方法以含IFITMP-1基因的cDNA为模板,用Pfu酶做PCR扩增,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,将目的基因克隆到pUCm-T质粒测序。... 目的研究干扰素诱导的跨膜蛋白-1(interferon-inducibletransmembraneprotein-1,IFITMP-1)基因的扩增、克隆及蛋白表达。方法以含IFITMP-1基因的cDNA为模板,用Pfu酶做PCR扩增,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,将目的基因克隆到pUCm-T质粒测序。进一步克隆到pET-Trx蛋白表达载体质粒,优化蛋白表达条件。结果含有IFITMP-1基因的PCR产物约1000bp。重组pUCm-T质粒经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,有相应大小的cDNA片段插入,测序结果显示其序列正确,证实目的基因的扩增、克隆成功,并成功克隆进pET-Trx蛋白表达载体,经IPTG诱导,在BL21(DE3)plysS中有融合蛋白表达。结论成功扩增克隆IFITMP-1基因,并成功表达该基因编码的蛋白,为进一步研究IFITMP-1基因在大肠癌中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 干扰素 跨膜蛋白-1基因 大肠肿瘤 PCR 克隆 蛋白表达

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犬γ-干扰素基因的克隆、序列分析及蛋白质结构预测 被引量：1

2

作者 谢昆 蒋成砚 +3 位作者 唐秀华 周文树 王海荣 汪镜 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期170-175,共6页

根据Gen Bank上犬γ-干扰素基因(IFN-γ)序列(序列号WO318193),利用Primer 5.0软件设计特异性引物,应用RT-PCR技术从100μg/ml Con A刺激24 h后的犬外周血淋巴细胞总RNA中扩增出γ-干扰素基因,测序后应用DNAStar软件对克隆的犬γ-干扰... 根据Gen Bank上犬γ-干扰素基因(IFN-γ)序列(序列号WO318193),利用Primer 5.0软件设计特异性引物,应用RT-PCR技术从100μg/ml Con A刺激24 h后的犬外周血淋巴细胞总RNA中扩增出γ-干扰素基因,测序后应用DNAStar软件对克隆的犬γ-干扰素基因进行序列分析,并与Gen Bank上发表的犬、牛、大熊猫、鸡、牦牛、人、猪、野猪、斑马鱼、土拨鼠等的IFN-γ基因序列进行同源性比较。结果显示,克隆的犬IFN-γ基因大小501 bp,编码166个氨基酸,与犬、牛、大熊猫、鸡、牦牛、人、猪、野猪、斑马鱼、土拨鼠IFN-γ基因的核苷酸序列同源性分别为98.4%、81.6%、26.1%、26.1%、22.7%、22.7%、80.8%、81.0%、28.5%和25.0%;氨基酸序列同源性分别为95.8%、72.5%、5.4%、5.4%、6.6%、6.6%、68.9%、69.5%、5.4%和5.4%。运用DNAstar软件对犬γ-干扰素进行蛋白结构预测的结果显示,犬γ-干扰素蛋白含有10个α-螺旋、9个β-折叠、11个β-转角和5个无规则卷曲。 展开更多

关键词 犬 γ-干扰素基因 克隆 序列分析 蛋白质结构预测

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猪β干扰素成熟蛋白编码基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达与纯化 被引量：1

3

作者 吴阳 李玲玲 +2 位作者 李玉林 李晨阳 王岁楼 《动物医学进展》 CSCD 2006年第12期75-78,共4页

从猪肝脏中提取基因组DNA,利用PCR法直接扩增了猪β干扰素成熟蛋白编码基因。将PCR产物亚克隆至pGEM-7Zf(+)载体,转化入大肠埃希菌TG1,筛选出阳性菌株后进行测序。序列分析结果表明,克隆片段含编码猪β干扰素成熟蛋白质的495个核苷酸,与... 从猪肝脏中提取基因组DNA,利用PCR法直接扩增了猪β干扰素成熟蛋白编码基因。将PCR产物亚克隆至pGEM-7Zf(+)载体,转化入大肠埃希菌TG1,筛选出阳性菌株后进行测序。序列分析结果表明,克隆片段含编码猪β干扰素成熟蛋白质的495个核苷酸,与GenBank上(登录号:S41178)的序列同源性达到100%。在此基础上,构建了猪β干扰素原核表达载体pQE30/poIFN-β并转化入大肠埃希菌M15。该工程菌在37℃经0.03mmol/LIPTG诱导4h后,进行SDS-PAGE电泳,结果在分子质量约20ku的位置出现了明显的目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在。经凝胶分析软件Bandscan分析,表达产物约占菌体总蛋白的18%。包涵体用6mol/L盐酸胍溶解,经过Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白,为下一步对猪β干扰素进行复性及活性研究打下了基础。 展开更多

关键词 猪β干扰素成熟蛋白 基因克隆 原核表达 亲和纯化

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鸭α干扰素成熟蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

4

作者 任桂萍 李景鹏 +3 位作者 许丽娜 李洪涛 藏玉婷 王君伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期343-344,共2页

关键词 鸭α干扰素 成熟蛋白基因 基因克隆 大肠杆菌 基因表达 氨基酸

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北京鸭干扰素-α基因的分子克隆与表达 被引量：13

5

作者 阮小飞 林常有 +2 位作者 杨天耀 史喜菊 夏春 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第12期11-13,共3页

采用 PCR法从北京鸭 (Anas platyrhynchosdoestica L innaeus)基因组中克隆了其干扰素 - α基因 (BJ- Du IFN- α)。克隆片段长 4 86 bp,编码 1 6 1个 Du IFN-α成熟肽。与已报道的北京鸭干扰素 -α基因相比 ,BJ- Du IFN-α在 2 85位发... 采用 PCR法从北京鸭 (Anas platyrhynchosdoestica L innaeus)基因组中克隆了其干扰素 - α基因 (BJ- Du IFN- α)。克隆片段长 4 86 bp,编码 1 6 1个 Du IFN-α成熟肽。与已报道的北京鸭干扰素 -α基因相比 ,BJ- Du IFN-α在 2 85位发生了同义变异。将 BJ-Du IFN-α插入原核表达载体 p QE3 0 ,在 E.Coli JM1 0 9工程菌中表达了重组蛋白。经 SDS- PAGE、Western Blot和抗病毒活性测定 ,表达产物占菌体总蛋白的 2 3 %,为重组鸭干扰素 -α(r Du IFN-α)。 r Du IFN-α抗滤泡性口炎病毒 (VSV)活性高达 7.9× 1 0 5U /mg。 展开更多

关键词 干扰素-Α IFN-Α Α基因 表达产物 分子克隆 抗病毒活性 总蛋白 北京鸭 VSV 口炎

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干扰素诱导的跨膜蛋白-1对诊断结直肠癌的临床价值 被引量：6

6

作者 刘宇虎 柳娟 +7 位作者 郭健 游志坚 王在国 钟东 杨兴龙 张振书 肖冰 郭文英 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1950-1953,共4页

目的探讨干扰素诱导的跨膜蛋白-1(IFITM1)基因在肿瘤组织中的表达,血清抗IFITM1的抗体反应以及对临床诊断结直肠癌的意义。方法应用半定量RT-PCR方法检测IFITM1基因mRNA在正常大肠粘膜、结直肠癌组织、大肠炎性息肉、腺瘤性息肉、胃癌... 目的探讨干扰素诱导的跨膜蛋白-1(IFITM1)基因在肿瘤组织中的表达,血清抗IFITM1的抗体反应以及对临床诊断结直肠癌的意义。方法应用半定量RT-PCR方法检测IFITM1基因mRNA在正常大肠粘膜、结直肠癌组织、大肠炎性息肉、腺瘤性息肉、胃癌、食管癌和肝癌组织中的表达。采用Western印迹法检测患者血清抗IFITM1的抗体反应。分析有IFITM1基因表达癌肿的病理特点。结果结直肠癌组织中IFITM1基因mRNA表达率为47.4%(18/38),显著高于大肠腺瘤性息肉的15%(3/20)和胃癌组织的4.8%(1/21)(P<0.05),而正常大肠粘膜、大肠炎性息肉、食管癌和肝癌组织均无表达。结直肠癌组织IFITM1基因mRNA呈强表达,其表达水平(0.8048±0.2273)显著高于大肠腺瘤性息肉(0.4447±0.0989)(P<0.001)。结直肠癌血清相应的抗体反应率为36.8%(14/38),明显高于胃癌的9.5%(2/21)(P<0.05),而在食管癌、肝癌、大肠炎性息肉和大肠腺瘤性息肉以及健康人血清则未检测出相应的抗体反应。有IFITM1基因表达的结直肠癌多数直径大于5cm,侵及浆膜,有淋巴结和远处转移,多属DukesC期和D期,以高分化腺癌为主。结论IFITM1基因可能在结直肠癌的发生、发展和转移过程中起重要作用,有望成为临床诊断结直肠癌的一个良好标志物。 展开更多

关键词 结直肠癌 干扰素诱导的跨膜蛋白-1 基因表达 抗体反应

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γ-干扰素对弓形虫MIC3的基因免疫效果研究 被引量：5

7

作者 江涛 周艳琴 +4 位作者 聂浩 陈声国 方瑞 姚宝安 赵俊龙 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期519-523,共5页

将编码弓形虫微线蛋白3(MIC3)的真核表达质粒pcMIC3和编码γ-干扰素(IFN-γ)的真核表达质粒pcIFN-γ各100μg混合肌肉注射,间隔2周、3次免疫Balb/c小鼠,同时设相同剂量的pcMIC3、pcDNA和PBS免疫对照组。分别以酶联免疫吸附试验(ELISA)... 将编码弓形虫微线蛋白3(MIC3)的真核表达质粒pcMIC3和编码γ-干扰素(IFN-γ)的真核表达质粒pcIFN-γ各100μg混合肌肉注射,间隔2周、3次免疫Balb/c小鼠,同时设相同剂量的pcMIC3、pcDNA和PBS免疫对照组。分别以酶联免疫吸附试验(ELISA)、四氮甲唑蓝(MTT)比色法和乳酸脱氢酶释放法(LDH)检测试验小鼠血清的特异性抗体、脾淋巴细胞的增殖应答和细胞毒性T细胞(CTL)活性,并观察腹腔接种弓形虫RH株速殖子后质粒的免疫保护效果。结果表明:与其它试验组相比,pcMIC3+pcIFN-γ组试验小鼠在免疫8周后的ELISA抗体水平、脾淋巴细胞的增殖应答和CTL活性显著或极显著提高,免疫小鼠45 d时的生存率为100%,能有效抵抗小剂量弓形虫强毒株的攻击。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 弓形虫微线蛋白3(MIC3) γ-干扰素 基因免疫

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根癌农杆菌介导的人骨形成蛋白-3成熟肽基因向油菜转化的研究 被引量：4

8

作者 张大鹏 郭蔼光 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第5期41-44,共4页

　用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培养法,将骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)基因导入甘蓝型自交系油菜(BrassicanapusL.)品种秦油-3号,并获得了hBMP-3m基因整合到油菜基因组中的植株。试验所用外植体为油菜4～5d苗龄的下胚轴;... 　用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培养法,将骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)基因导入甘蓝型自交系油菜(BrassicanapusL.)品种秦油-3号,并获得了hBMP-3m基因整合到油菜基因组中的植株。试验所用外植体为油菜4～5d苗龄的下胚轴;根癌农杆菌为LBA4404,其Ti质粒pCAMBIA-hBMP3m含hBMP-3m基因。切取2mm左右的下胚轴侵染根癌农杆菌后在分化培养基(MS+5.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA)上共培养2d,然后转到附加25mg/L潮霉素和500mg/L羧苄青霉素的分化培养基上。切下分化出的茎芽,插入附加25mg/L潮霉素的生根培养基(MS+0.4mg/LIBA)中,形成完整的植株。经PCR检测和Southernblot分析,证实hBMP-3m基因已插入到油菜细胞基因组中。 展开更多

关键词 根癌农杆菌介导 人骨形成蛋白-3成熟肽基因 油菜 下胚轴 转基因 药用蛋白基因

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根癌农杆菌介导法获得烟草转人骨形成蛋白-3成熟肽基因植株 被引量：5

9

作者 高书颖 郭蔼光 《西北植物学报》 CAS CSCD 2001年第6期1128-1133,共6页

利用冻融法将质粒 p CAMBIA- h BMP- 3 m直接转入根癌农杆菌 LBA440 4 ,以烟草无菌苗叶盘为外植体 ,通过农杆菌介导法进行遗传转化 ,获得了在含 2 5 mg/L潮霉素 (Hy-gromycin,Hyg)的筛选培养基上再生的抗性植株 ,经 PCR检测呈阳性 ,初... 利用冻融法将质粒 p CAMBIA- h BMP- 3 m直接转入根癌农杆菌 LBA440 4 ,以烟草无菌苗叶盘为外植体 ,通过农杆菌介导法进行遗传转化 ,获得了在含 2 5 mg/L潮霉素 (Hy-gromycin,Hyg)的筛选培养基上再生的抗性植株 ,经 PCR检测呈阳性 ,初步鉴定并筛选整合了人骨形成蛋白 - 展开更多

关键词 烟草 人骨形成蛋白-3成熟肽 hBMP-3m 根癌农杆菌介导法 转基因

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疏水作用色谱法同时纯化及复性基因重组人干扰素-α 被引量：5

10

作者 郭立安 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期301-303,共3页

使用高效疏水作用色谱直接从大肠杆菌表达的基因重组人干扰素 α(rhIFN α)包涵体的裂解液中纯化了rhIFN α ,并在纯化的同时获得了高的复性效率 ,使复性和纯化一步完成 ,大大地简化了操作步骤。用凝胶排阻色谱对该法纯化的rhIFN α进... 使用高效疏水作用色谱直接从大肠杆菌表达的基因重组人干扰素 α(rhIFN α)包涵体的裂解液中纯化了rhIFN α ,并在纯化的同时获得了高的复性效率 ,使复性和纯化一步完成 ,大大地简化了操作步骤。用凝胶排阻色谱对该法纯化的rhIFN α进行了纯度测定 ,纯度达到 95 %以上。该法的活性回收率分别比稀释法和透析法高 1 0倍和 1 展开更多

关键词 高效液相色谱 纯化 重组蛋白质 基因重组人干扰素-α 高效疏水作用色谱

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基于cGAS-STING通路和突触融合蛋白17介导的自噬在脑缺血再灌注损伤中的作用研究进展

11

作者 杨航 高安邦 +2 位作者 倪莹 马跃 高名同 《中国卒中杂志》 北大核心 2025年第4期479-485,共7页

急性缺血性卒中后,脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)可进一步损伤患者的神经功能,影响其预后。自噬在CIRI的病理过程中是一把“双刃剑”,其不同的激活程度以及在CIRI的不同时期,可对脑组织产生保护或损伤... 急性缺血性卒中后,脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)可进一步损伤患者的神经功能,影响其预后。自噬在CIRI的病理过程中是一把“双刃剑”,其不同的激活程度以及在CIRI的不同时期,可对脑组织产生保护或损伤的相反作用。环鸟苷酸-腺苷酸合酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,cGAS)-干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon gene,STING)通路是先天免疫中重要的效应通路,突触融合蛋白17(syntaxin 17,STX17)是可溶性N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性因子附着蛋白受体亚家族成员,两者在CIRI过程中对细胞自噬和线粒体自噬均具有重要的调节作用。本文对cGAS-STING通路和STX17在CIRI中调控自噬的机制及其相互关系进行综述,以期为CIRI的干预提供新的思路和依据。 展开更多

关键词 环鸟苷酸-腺苷酸合酶-干扰素基因刺激因子通路 突触融合蛋白17 自噬 脑缺血再灌注损伤

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基因工程鸡α-干扰素纯化制品在鸡体内的消长规律

12

作者 赵风立 刘光晓 +4 位作者 姜德仟 杨静 王俊超 于静静 林娜 《家禽科学》 2015年第5期43-45,共3页

干扰素（interferon，IFN）是一类具有广泛生物学活性的蛋白质，具有调节机体免疫功能、抗病毒、抗肿瘤等多种作用，是机体防御系统的重要组成部分[1]。干扰素是在特定的诱导剂作用下，由细胞产生的一种具有高度生物学活性的糖蛋白，当... 干扰素（interferon，IFN）是一类具有广泛生物学活性的蛋白质，具有调节机体免疫功能、抗病毒、抗肿瘤等多种作用，是机体防御系统的重要组成部分[1]。干扰素是在特定的诱导剂作用下，由细胞产生的一种具有高度生物学活性的糖蛋白，当它再作用于其他细胞时，使其它细胞立即获得抗病毒和抗肿瘤等多方面的免疫力[2]。α-干扰素是单核细胞产生的相对分子量18000的多肽，因其蛋白质分子的变异及肽链23位和34位氨基酸序列的组分不同，又可分为α2a、α2b、α2c等[3]。干扰素的活力具有相对的种属特异性，α-干扰素具有广谱的抗病毒活性，对DNA 病毒和RNA 病毒均有抑制作用[4]。 展开更多

关键词 Α-干扰素 消长规律 基因工程 抗病毒活性 机体免疫功能 生物学活性 蛋白质分子 单核细胞

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基因工程人β干扰素的原核表达及纯化研究 被引量：3

13

作者 陈国友 蒋应明 +7 位作者 张意 黄欣 厉永建 施群英 王全兴 张明徽 何龙 曹雪涛 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第2期130-133,共4页

目的 :摸索一种适合于中试生产的点突变重组人 β干扰素 ( 17Ser IFN β)发酵与纯化工艺。 方法 :研究不同培养基和热诱导时间对17Ser IFN β表达的影响 ;观察pH、蛋白浓度和层析条件对17Ser IFN β纯化的影响。 结果 :17Ser IFN β工... 目的 :摸索一种适合于中试生产的点突变重组人 β干扰素 ( 17Ser IFN β)发酵与纯化工艺。 方法 :研究不同培养基和热诱导时间对17Ser IFN β表达的影响 ;观察pH、蛋白浓度和层析条件对17Ser IFN β纯化的影响。 结果 :17Ser IFN β工程菌在含甘油、酪蛋白水解物及微量元素的M9培养基中 ,17Ser IFN β表达量明显增加。灰度扫描显示热诱导 4h后的表达量最高 ,目的蛋白可达菌体总蛋白的 2 0 %以上。17Ser IFN β可以相对特异性地被仲丁醇抽提至有机相中 ,纯度达 80 % ,经S2 0 0凝胶过滤柱层析后纯度达 90 % ,用G2 5柱转换缓冲液 ,使缓冲液pH值 >8,同时去除缓冲液中的还原剂DTT ,将复性后的样品用C4反相柱层析进行精制 ,最终获得纯度 >98%和比活性 >3× 10 7U/mg的17Ser IFN β制品。 结论 :成功地建立了注射用新型重组人 β 干扰素的中试生产工艺 ,为随后进行的临床前研究及临床试验打下基础。 展开更多

关键词 Β-干扰素 蛋白纯化 蛋白表达 原核表达 基因工程

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鸡α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达、纯化及其抗病毒活性测定 被引量：3

14

作者 吴静 李玉峰 +3 位作者 宋敏训 黄兵 马秀丽 李峰 《山东农业科学》 2006年第1期61-64,共4页

本试验将已构建的鸡α-干扰素重组酵母表达质粒pPIC-ChIFNα克隆至Pichia pastorisGS115基因组中,从阳性转化子中筛选出2株能高效表达鸡α-干扰素的重组酵母菌株,并对表达产物进行了纯化和抗病毒活性的测定。结果表明,Pichia pastoris... 本试验将已构建的鸡α-干扰素重组酵母表达质粒pPIC-ChIFNα克隆至Pichia pastorisGS115基因组中,从阳性转化子中筛选出2株能高效表达鸡α-干扰素的重组酵母菌株,并对表达产物进行了纯化和抗病毒活性的测定。结果表明,Pichia pastoris表达的重组ChIFNα具有较高的抗病毒活性,其活性单位为570×104U/ml,结合蛋白定量计算其比活性为2 980×104U/mg。 展开更多

关键词 鸡α-干扰素成熟蛋白 PICHIA PASTORIS 基因表达 分离纯化 抗病毒活性

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可在鱼体内表达hu-IFN-α的基因重组构建及转化 被引量：9

15

作者 张学文 章怀云 +3 位作者 符少辉 陈韬 陈立祥 肖调义 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第4期1-5,共5页

通过分子重组 ,将人α 干扰素 (hu IFN α)基因编码序列克隆到鲤鱼β 肌动蛋白基因启动子下游 ,构建成能在鱼体内组成型表达hu IFN α的基因重组分子。经限制性酶切分析、Southern杂交和序列测定 ,证明重组分子构建的正确性。采用显微... 通过分子重组 ,将人α 干扰素 (hu IFN α)基因编码序列克隆到鲤鱼β 肌动蛋白基因启动子下游 ,构建成能在鱼体内组成型表达hu IFN α的基因重组分子。经限制性酶切分析、Southern杂交和序列测定 ,证明重组分子构建的正确性。采用显微注射法将这一重组基因转化草鱼受精卵 ,获得了表达人α 展开更多

关键词 人α-干扰素 鲤鱼β-肌动蛋白基因启动子 基因重组 出血病 转基因草鱼

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IFN-α/HBV PreS2融合基因表达载体的构建和表达 被引量：4

16

作者 徐东平 王福生 +3 位作者 施红 韩风连 程云 金磊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期103-105,共3页

目的构建IFN α/HBVPreS2融合基因表达载体并进行表达。方法采用PCR技术分别扩增IFN α2b和HBVPreS2编码基因片段 ,并经分步克隆获得IFN α/HBVPreS2融合基因。然后将其插入质粒 pBV220 ,构建重组表达载体pBV IFN PreS2。结果经转化E.c... 目的构建IFN α/HBVPreS2融合基因表达载体并进行表达。方法采用PCR技术分别扩增IFN α2b和HBVPreS2编码基因片段 ,并经分步克隆获得IFN α/HBVPreS2融合基因。然后将其插入质粒 pBV220 ,构建重组表达载体pBV IFN PreS2。结果经转化E.coli后 ,诱导表达出相对分子质量(Mr)为27000的融合蛋白。SDS PAGE分析显示 ,表达量占菌体总蛋白质的15 %。Westemblot分析表明 ,表达蛋白能与抗IFN α2b抗体结合。结论IFN α/HBVPreS2融合基因表达载体的构建 ,为进一步探讨HBV感染的特异性免疫治疗提供了实验依据。 展开更多

关键词 Α-干扰素 融合蛋白 基因表达载体 构建 HBV

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hBMP-3m基因在烟草中的表达

17

作者 高书颖 范三红 +2 位作者 郭蔼光 朱帮福 陈苏民 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第4期577-580,共4页

PCR扩增人骨形成蛋白-3成熟肽 hBMP-3m cDNA,纯化后连接入pUC19质粒,构建克隆载体pUC19B3m;用EcoR 和Hind 酶解pUC19B3m和pJIT163,将目的片段插入pJIT163,构建中间载体pJIT163-B3m;再构建植物表达载体pCAMBIA1300-B3m.利用冻融法将质粒p... PCR扩增人骨形成蛋白-3成熟肽 hBMP-3m cDNA,纯化后连接入pUC19质粒,构建克隆载体pUC19B3m;用EcoR 和Hind 酶解pUC19B3m和pJIT163,将目的片段插入pJIT163,构建中间载体pJIT163-B3m;再构建植物表达载体pCAMBIA1300-B3m.利用冻融法将质粒pCAMBIA-hBMP3m转入根癌农杆菌 A-grobacteriumtumefaciens LBA4404.以烟草 NicotianatabacumL. 无菌苗叶盘为外植体,通过根癌农杆菌介导法进行遗传转化,获得了在含25mg/L潮霉素 Hygromycin,Hyg 的筛选培养基上再生的抗性植株,经PCR证实其中部分植株已将人骨形成蛋白-3成熟肽基因整合到烟草基因组中,WesternBlot结果表明已有微量BMP表达. 展开更多

关键词 人骨形成蛋白-3成熟肽 hBMP-3m 基因表达 烟草 根癌农杆菌介导法

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淋巴因子和干扰素

18

《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第1期85-85,共1页

910214 人干扰素基因在葡萄球菌激酶信号控制下在大肠杆菌和枯草杆菌的孢内表达和分泌表达[英]/Breitling,R.…//FoliaMicrobiol.-1989,34(5).-383～384[译自DBA,1990,9(12),90-06849] 金黄色葡萄球菌噬菌体42D的葡萄球菌激酶基因的表... 910214 人干扰素基因在葡萄球菌激酶信号控制下在大肠杆菌和枯草杆菌的孢内表达和分泌表达[英]/Breitling,R.…//FoliaMicrobiol.-1989,34(5).-383～384[译自DBA,1990,9(12),90-06849] 金黄色葡萄球菌噬菌体42D的葡萄球菌激酶基因的表达和分泌信号与人成熟干扰素-α-1基因融合,用融合蛋白的基因转化大肠杆菌产生的转化子能分泌100000000U/l生物活性干扰素α-1.有部分干扰素α-1分泌到周质内. 展开更多

关键词 干扰素-Α 转化子 基因融合 分泌表达 融合蛋白 干扰素Α 周质 核糖体结合位点 基因转化 顺反子

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A型流感病毒NS1蛋白抑制IFN抗病毒作用的机制 被引量：5

19

作者 史一博 孙建和 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1030-1032,共3页

关键词 IFN-α/β 抗病毒作用 A型流感病毒 蛋白抑制 干扰素-Α 病毒感染宿主 调控基因 传染病流行

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芦花鸡IFITM3基因克隆及生物信息学分析

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作者 姜莉莉 许腾 +1 位作者 周宛蓉 樊兆斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期330-337,共8页

本研究旨在对芦花鸡的干扰素诱导的跨膜蛋白-3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)基因进行克隆及生物信息学分析。根据GenBank中鸡IFITM3基因序列(登录号:NM_001350061.1)设计特异性引物,利用RT-PCR技术对芦花鸡IFITM... 本研究旨在对芦花鸡的干扰素诱导的跨膜蛋白-3(interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)基因进行克隆及生物信息学分析。根据GenBank中鸡IFITM3基因序列(登录号:NM_001350061.1)设计特异性引物,利用RT-PCR技术对芦花鸡IFITM3基因进行克隆、测序和生物信息学分析。结果表明,芦花鸡IFITM3基因片段大小为414bp,与GenBank中发表的鸡IFITM3基因序列(登录号:NM_001350061.1)同源性为99.9%;编码137个氨基酸。IFITM3基因理论分子质量为14.95ku,理论等电点(pI)为6.89,不稳定系数为33.98,脂肪系数为103.14,平均疏水指数为0.300,存在3个明显的疏水区,无信号肽,存在2个跨膜区,分别位于第46-68、101-123位氨基酸处;二级结构预测显示,IFITN3蛋白主要以无规则卷曲为主,存在多个α-螺旋和β-折叠区域。本研究成功克隆了芦花鸡IFITM3基因,为进一步研究IFITM3蛋白功能及阐明其抗病毒分子机制奠定了理论基础。 展开更多

关键词 干扰素诱导的跨膜蛋白-3(IFITM3)基因 克隆 序列分析 生物信息学分析

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