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SHV-28型β内酰胺酶的原核表达及其性质鉴定
1
作者
周伟琳
沈萍
+3 位作者
俞云松
周志慧
李兰娟
马亦林
《中国抗感染化疗杂志》
2004年第1期25-27,共3页
目的:获得SHV-28型β内酰胺酶蛋白,并研究其特性。方法:将SHV-28型β内酰胺酶基因连接到pET-28b载体上,重组质粒pET-28b/SHV-28转化大肠埃希菌BL21(DE3)。用酶抑制剂增强的纸片扩散法检测重组菌的表型,等电聚焦电泳测定其表达蛋白的等...
目的:获得SHV-28型β内酰胺酶蛋白,并研究其特性。方法:将SHV-28型β内酰胺酶基因连接到pET-28b载体上,重组质粒pET-28b/SHV-28转化大肠埃希菌BL21(DE3)。用酶抑制剂增强的纸片扩散法检测重组菌的表型,等电聚焦电泳测定其表达蛋白的等电点。结果:SHV-28型β内酰胺酶的等电点为7.6.为非超广谱β内酰胺酶。结论:SHV-28型β内酰胺酶蛋白表达正确,为进一步研究新基因型β内酰胺酶奠定了基础。
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关键词
Β内酰胺酶
原核表达
等电聚焦电泳
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职称材料
LEN-5型β-内酰胺酶基因的克隆及原核表达
2
作者
卢月梅
张阮章
+4 位作者
胡玉华
钟运华
武学成
陈升汶
王沙燕
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期266-268,共3页
目的对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达。方法从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大...
目的对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达。方法从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。超声破碎法提取蛋白表达产物,头孢硝噻吩检测其活性,并检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得879bp的产物,DNA序列显示该片断序列与目的序列完全一致。重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,表达产物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体〔pET-26b(+)/LEN-5〕构建成功。表达蛋白的等电点为7.6。结论β-内酰胺酶LEN-5基因在原核细胞中完成了重组和表达,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。
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关键词
Β-内酰胺酶
原核表达
等电聚焦电泳
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职称材料
CTX-M-38型β-内酰胺酶的克隆与表达
3
作者
卢月梅
张阮章
+4 位作者
王沙燕
胡玉华
穆雪鵾
何林
陈升汶
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期743-746,共4页
目的构建新型β-内酰胺酶CTX-M-38的表达载体。方法应用PCR扩增CTX-M-38基因全长编码序列,经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白...
目的构建新型β-内酰胺酶CTX-M-38的表达载体。方法应用PCR扩增CTX-M-38基因全长编码序列,经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得894bp的产物,重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/CTX-M-38]构建成功。蛋白pI为8.4。结论β-内酰胺酶CTX-M-38在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。
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关键词
Β-内酰胺酶
原核表达
等电聚焦电泳
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职称材料
题名
SHV-28型β内酰胺酶的原核表达及其性质鉴定
1
作者
周伟琳
沈萍
俞云松
周志慧
李兰娟
马亦林
机构
浙江大学医学院附属第一医院传染科
出处
《中国抗感染化疗杂志》
2004年第1期25-27,共3页
基金
国家自然科学基金(30270074)
浙江省自然科学基金(302711)资助
文摘
目的:获得SHV-28型β内酰胺酶蛋白,并研究其特性。方法:将SHV-28型β内酰胺酶基因连接到pET-28b载体上,重组质粒pET-28b/SHV-28转化大肠埃希菌BL21(DE3)。用酶抑制剂增强的纸片扩散法检测重组菌的表型,等电聚焦电泳测定其表达蛋白的等电点。结果:SHV-28型β内酰胺酶的等电点为7.6.为非超广谱β内酰胺酶。结论:SHV-28型β内酰胺酶蛋白表达正确,为进一步研究新基因型β内酰胺酶奠定了基础。
关键词
Β内酰胺酶
原核表达
等电聚焦电泳
Keywords
β-lactamase
prokaryotic
expression
isoelectric
focusing
electrophoresis
分类号
R446.5 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
LEN-5型β-内酰胺酶基因的克隆及原核表达
2
作者
卢月梅
张阮章
胡玉华
钟运华
武学成
陈升汶
王沙燕
机构
深圳市人民医院暨南大学第二临床医学院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期266-268,共3页
文摘
目的对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达。方法从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。超声破碎法提取蛋白表达产物,头孢硝噻吩检测其活性,并检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得879bp的产物,DNA序列显示该片断序列与目的序列完全一致。重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,表达产物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体〔pET-26b(+)/LEN-5〕构建成功。表达蛋白的等电点为7.6。结论β-内酰胺酶LEN-5基因在原核细胞中完成了重组和表达,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础。
关键词
Β-内酰胺酶
原核表达
等电聚焦电泳
Keywords
β-lactamase prokaryotic expression isoelectric focusing electrophoresis
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
CTX-M-38型β-内酰胺酶的克隆与表达
3
作者
卢月梅
张阮章
王沙燕
胡玉华
穆雪鵾
何林
陈升汶
机构
深圳市人民医院暨南大学第二临床学院
出处
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期743-746,共4页
文摘
目的构建新型β-内酰胺酶CTX-M-38的表达载体。方法应用PCR扩增CTX-M-38基因全长编码序列,经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得894bp的产物,重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/CTX-M-38]构建成功。蛋白pI为8.4。结论β-内酰胺酶CTX-M-38在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。
关键词
Β-内酰胺酶
原核表达
等电聚焦电泳
Keywords
β-lactamase
prokaryot
e
expression
isoelectric
focusing
electrohporesis
分类号
R978.11 [医药卫生—药品]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SHV-28型β内酰胺酶的原核表达及其性质鉴定
周伟琳
沈萍
俞云松
周志慧
李兰娟
马亦林
《中国抗感染化疗杂志》
2004
0
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职称材料
2
LEN-5型β-内酰胺酶基因的克隆及原核表达
卢月梅
张阮章
胡玉华
钟运华
武学成
陈升汶
王沙燕
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
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下载PDF
职称材料
3
CTX-M-38型β-内酰胺酶的克隆与表达
卢月梅
张阮章
王沙燕
胡玉华
穆雪鵾
何林
陈升汶
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
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