目的:探讨S100A4在低氧条件下对胃癌细胞SGC-7901迁移及侵袭的作用及其可能的机制。方法:将化学合成的si-S100A4质粒和阴性对照(si-Ctrl)质粒分别转染胃癌细胞株SGC-7901,根据培养条件的不同分为常氧条件(normal,Nor)+si-S100A4组、Nor+...目的:探讨S100A4在低氧条件下对胃癌细胞SGC-7901迁移及侵袭的作用及其可能的机制。方法:将化学合成的si-S100A4质粒和阴性对照(si-Ctrl)质粒分别转染胃癌细胞株SGC-7901,根据培养条件的不同分为常氧条件(normal,Nor)+si-S100A4组、Nor+si-Ctrl组、低氧条件(hypoxia,Hyp)+si-Ctrl)组、Hyp+si-S100A4组。应用Western blotting检测低氧条件下胃癌SGC-7901细胞中HIF-1及S100A4蛋白的表达变化,检测低氧条件下胃癌细胞中抑制S100A4的表达对细胞中S100A4、β-catenin及TCF-4表达的影响,Transwell小室法分别检测低氧及S100A4对胃癌SGC-7901细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:低氧条件下:(1)胃癌SGC-7901细胞中HIF-1和S100A4表达水平均明显升高(3.12±0.23 vs 1.02±0.05,P<0.01;2.75±0.32 vs 1.05±0.07,P<0.01),且两者变化明显相关(r=0.67,P<0.01);(2)胃癌SGC-7901细胞的侵袭及迁移能力增加[(223.31±35.12)vs(131.29±26.40)、(142.27±26.37)个,P<0.05]。干扰低氧条件中S100A4的表达:(1)明显减少低氧对细胞中β-catenin及TCF-4的促进作用(均P<0.01);(2)明显减少低氧对SGC-7901细胞的侵袭及迁移能力的促进作用[(161.37±31.02)vs(88.21±22.42)、(95.36±21.29)个,P<0.05]。结论:S100A4能够促进胃癌细胞SGC-7901的迁移和侵袭,该作用可能是通过S100A4协同HIF-1通过Wnt/β-catenin通路的调控实现的。展开更多
目的探讨β4整合素结合蛋白ITGB4BP对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将对照组空载体pCMV-3B质粒和实验组pCMV-ITGB4BP质粒分别转染至HEK293细胞中,用Western blot和激光共聚焦技术检测细胞中β-catenin含量的变化,用含TCF/LEF启动...目的探讨β4整合素结合蛋白ITGB4BP对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将对照组空载体pCMV-3B质粒和实验组pCMV-ITGB4BP质粒分别转染至HEK293细胞中,用Western blot和激光共聚焦技术检测细胞中β-catenin含量的变化,用含TCF/LEF启动子的荧光素酶TOPFlash质粒和内参pRL-TK质粒共转染对照组和实验组的HEK293细胞,用荧光素酶活性分析法检测ITGB4BP转染后HEK293细胞TCF/LEF活性的变化。设不转染质粒组为正常组,对照组和实验组均分别设未加LiCl组和加LiCl组。结果 Western blot检测结果:与正常组或对照组比较,实验组细胞β-catenin表达显著减少(P<0.05)。加LiCl之后,β-catenin的表达显著增强(P<0.05),与未加有LiCl的正常组或对照组比较,加LiCl的实验组细胞内β-catenin仍有较高的表达,但差异无显著性。激光共聚焦技术观察:实验组β-catenin(绿色荧光)表达较对照组降低。加LiCl之后,β-catenin(绿色荧光)表达增强,与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光强度。荧光素酶活性分析法检测:实验组的荧光素酶活性较对照组显著降低(P<0.05)。LiCl作用之后,Wnt/β-catenin信号通路活性明显增强(P<0.05),与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光素酶活性(P<0.05)。结论ITGB4BP可以下调Wnt/β-catenin信号通路的活性。展开更多
Wnt信号通路在机体多种生理过程中均具有重要作用,已证明有多种蛋白质参与其调节,包括DKK(Dickkopf)家族成员。然而,DKK4在乳腺癌中的生物学功能和分子机制尚不清楚。本研究通过在线数据库TCGA(the cancer genome atlas)和UALCAN(ualcan...Wnt信号通路在机体多种生理过程中均具有重要作用,已证明有多种蛋白质参与其调节,包括DKK(Dickkopf)家族成员。然而,DKK4在乳腺癌中的生物学功能和分子机制尚不清楚。本研究通过在线数据库TCGA(the cancer genome atlas)和UALCAN(ualcan.path.uab.edu/)分析发现,DKK4在乳腺癌中的表达与其甲基化程度负相关,并影响其肿瘤分期和患者生存率。MethHC数据库分析显示,DKK4在多数乳腺癌组织中的表达低于癌旁组织。RT-PCR检测发现,DKK4在8种人乳腺癌细胞株中不表达或低表达,在2种人正常乳腺细胞中表达;qPCR分析发现,13对组织标本中有11对癌组织的表达低于癌旁组织(P<0.0001)。构建过表达DKK4的人乳腺癌细胞株MCF7和YCCB1,克隆形成的结果显示,MCF7和YCCB1稳定细胞株形成的细胞集落数量分别为对照组的28.66%和37.26%,增殖能力明显低于对照组细胞(P<0.001);Transwell实验结果显示,细胞迁移能力减弱(590 vs. 2 052;1 310 vs. 5 137,P<0.001);侵袭能力也明显减弱(220 vs. 872;2 532 vs. 5 089;P<0.001)。流式细胞仪分析发现,DKK4可将乳腺癌细胞周期阻滞于G0/G1期((57.06±0.64)%vs.(50.13±1.08)%;(51.94±0.93)%vs.(31.00±1.03)%,P<0.001),细胞凋亡率明显增高((31.55±0.77)%vs.(9.85±0.58)%;(28.19±0.99)%vs.(17.92±0.58)%,P<0.001)。进一步采用Western印迹检测结果显示,DKK4能够使细胞周期调控蛋白P53、P27、P21和细胞凋亡因子胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-9表达上调。Western印迹检测过表达DKK4对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果表明,细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、C-Myc蛋白、环氧合酶2 (cyclooxygenase 2,Cox 2)、C-Jun蛋白、磷酸化应激活化蛋白激酶(p-JNK)和活化的β-联蛋白(activeβ-catenin)等的表达下调,而上皮型钙黏着蛋白(E-Cadherin)表达上调。综上所述,DKK4通过负调控Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞周期,并促进其凋亡。展开更多
文摘目的:探讨S100A4在低氧条件下对胃癌细胞SGC-7901迁移及侵袭的作用及其可能的机制。方法:将化学合成的si-S100A4质粒和阴性对照(si-Ctrl)质粒分别转染胃癌细胞株SGC-7901,根据培养条件的不同分为常氧条件(normal,Nor)+si-S100A4组、Nor+si-Ctrl组、低氧条件(hypoxia,Hyp)+si-Ctrl)组、Hyp+si-S100A4组。应用Western blotting检测低氧条件下胃癌SGC-7901细胞中HIF-1及S100A4蛋白的表达变化,检测低氧条件下胃癌细胞中抑制S100A4的表达对细胞中S100A4、β-catenin及TCF-4表达的影响,Transwell小室法分别检测低氧及S100A4对胃癌SGC-7901细胞迁移及侵袭能力的影响。结果:低氧条件下:(1)胃癌SGC-7901细胞中HIF-1和S100A4表达水平均明显升高(3.12±0.23 vs 1.02±0.05,P<0.01;2.75±0.32 vs 1.05±0.07,P<0.01),且两者变化明显相关(r=0.67,P<0.01);(2)胃癌SGC-7901细胞的侵袭及迁移能力增加[(223.31±35.12)vs(131.29±26.40)、(142.27±26.37)个,P<0.05]。干扰低氧条件中S100A4的表达:(1)明显减少低氧对细胞中β-catenin及TCF-4的促进作用(均P<0.01);(2)明显减少低氧对SGC-7901细胞的侵袭及迁移能力的促进作用[(161.37±31.02)vs(88.21±22.42)、(95.36±21.29)个,P<0.05]。结论:S100A4能够促进胃癌细胞SGC-7901的迁移和侵袭,该作用可能是通过S100A4协同HIF-1通过Wnt/β-catenin通路的调控实现的。
文摘目的探讨β4整合素结合蛋白ITGB4BP对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将对照组空载体pCMV-3B质粒和实验组pCMV-ITGB4BP质粒分别转染至HEK293细胞中,用Western blot和激光共聚焦技术检测细胞中β-catenin含量的变化,用含TCF/LEF启动子的荧光素酶TOPFlash质粒和内参pRL-TK质粒共转染对照组和实验组的HEK293细胞,用荧光素酶活性分析法检测ITGB4BP转染后HEK293细胞TCF/LEF活性的变化。设不转染质粒组为正常组,对照组和实验组均分别设未加LiCl组和加LiCl组。结果 Western blot检测结果:与正常组或对照组比较,实验组细胞β-catenin表达显著减少(P<0.05)。加LiCl之后,β-catenin的表达显著增强(P<0.05),与未加有LiCl的正常组或对照组比较,加LiCl的实验组细胞内β-catenin仍有较高的表达,但差异无显著性。激光共聚焦技术观察:实验组β-catenin(绿色荧光)表达较对照组降低。加LiCl之后,β-catenin(绿色荧光)表达增强,与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光强度。荧光素酶活性分析法检测:实验组的荧光素酶活性较对照组显著降低(P<0.05)。LiCl作用之后,Wnt/β-catenin信号通路活性明显增强(P<0.05),与未加LiCl的对照组相比,加LiCl的实验组仍有较强的荧光素酶活性(P<0.05)。结论ITGB4BP可以下调Wnt/β-catenin信号通路的活性。
文摘Wnt信号通路在机体多种生理过程中均具有重要作用,已证明有多种蛋白质参与其调节,包括DKK(Dickkopf)家族成员。然而,DKK4在乳腺癌中的生物学功能和分子机制尚不清楚。本研究通过在线数据库TCGA(the cancer genome atlas)和UALCAN(ualcan.path.uab.edu/)分析发现,DKK4在乳腺癌中的表达与其甲基化程度负相关,并影响其肿瘤分期和患者生存率。MethHC数据库分析显示,DKK4在多数乳腺癌组织中的表达低于癌旁组织。RT-PCR检测发现,DKK4在8种人乳腺癌细胞株中不表达或低表达,在2种人正常乳腺细胞中表达;qPCR分析发现,13对组织标本中有11对癌组织的表达低于癌旁组织(P<0.0001)。构建过表达DKK4的人乳腺癌细胞株MCF7和YCCB1,克隆形成的结果显示,MCF7和YCCB1稳定细胞株形成的细胞集落数量分别为对照组的28.66%和37.26%,增殖能力明显低于对照组细胞(P<0.001);Transwell实验结果显示,细胞迁移能力减弱(590 vs. 2 052;1 310 vs. 5 137,P<0.001);侵袭能力也明显减弱(220 vs. 872;2 532 vs. 5 089;P<0.001)。流式细胞仪分析发现,DKK4可将乳腺癌细胞周期阻滞于G0/G1期((57.06±0.64)%vs.(50.13±1.08)%;(51.94±0.93)%vs.(31.00±1.03)%,P<0.001),细胞凋亡率明显增高((31.55±0.77)%vs.(9.85±0.58)%;(28.19±0.99)%vs.(17.92±0.58)%,P<0.001)。进一步采用Western印迹检测结果显示,DKK4能够使细胞周期调控蛋白P53、P27、P21和细胞凋亡因子胱天蛋白酶-3、胱天蛋白酶-7、胱天蛋白酶-9表达上调。Western印迹检测过表达DKK4对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果表明,细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、C-Myc蛋白、环氧合酶2 (cyclooxygenase 2,Cox 2)、C-Jun蛋白、磷酸化应激活化蛋白激酶(p-JNK)和活化的β-联蛋白(activeβ-catenin)等的表达下调,而上皮型钙黏着蛋白(E-Cadherin)表达上调。综上所述,DKK4通过负调控Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,阻滞细胞周期,并促进其凋亡。
