水分胁迫对山黧豆萌发过程中β-ODAP和氨基酸的影响 被引量：4

1

作者 薛崧 张林生 +2 位作者 曹让 王明华 汪沛洪 《西北植物学报》 CAS CSCD 2001年第4期620-624,共5页

山黧豆 ( L athyrus sativus)种子在萌发过程中 ,根芽中 β- N-草酰基 - L- 2 ,3-二氨基丙酸( β- ODAP) 6d前逐渐增加 ,尔后不断下降 ;在水分胁迫条件下 ,β- ODAP和游离氨基酸含量随水分胁迫的增加而上升。子叶中 β- ODAP在 3d前高... 山黧豆 ( L athyrus sativus)种子在萌发过程中 ,根芽中 β- N-草酰基 - L- 2 ,3-二氨基丙酸( β- ODAP) 6d前逐渐增加 ,尔后不断下降 ;在水分胁迫条件下 ,β- ODAP和游离氨基酸含量随水分胁迫的增加而上升。子叶中 β- ODAP在 3d前高于根芽 ,然后下降并低于根芽 ,子叶中 β-ODAP含量随着胁迫的增加而降低。 展开更多

关键词 水分胁迫 山黧豆 游离氨基酸 β-N-草酰基-L-2 3-二氨基丙酸 种子萌发 抗逆性

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山黧豆中β-ODAP及其他氨基酸的提取和HPLC分析 被引量：2

2

作者 李小波 樊琛 +5 位作者 龙立梅 李柰 曹学丽 李雪帆 牛晓峰 贾平 《食品科学技术学报》 CAS 2015年第2期42-47,共6页

利用氯甲酸对硝基卞酯（PNZ-Cl）作为柱前衍生化试剂,建立了山黧豆中神经毒素β-N-草酰基-L-α,β-二氨基丙酸（β-N-oxalyl-α,β-diaminopropionic,β-ODAP）及其他游离氨基酸的同时分析法。HPLC法为色谱柱Ultimate XB-C18,流动相乙... 利用氯甲酸对硝基卞酯（PNZ-Cl）作为柱前衍生化试剂,建立了山黧豆中神经毒素β-N-草酰基-L-α,β-二氨基丙酸（β-N-oxalyl-α,β-diaminopropionic,β-ODAP）及其他游离氨基酸的同时分析法。HPLC法为色谱柱Ultimate XB-C18,流动相乙腈和乙酸-乙酸钠缓冲溶液（p H值=4.6）,梯度洗脱程序0~5 minφ（乙腈）25%,5~30 minφ（乙腈）25%~90%,流速0.8 m L/min,柱温30℃,检测波长300 nm。利用该方法对山黧豆中β-ODAP及其他游离氨基酸的提取条件中乙醇体积分数、山黧豆粉的质量浓度（ρ（山黧豆粉））、提取温度等进行了优化。结果表明,在φ（乙醇）为10%,ρ（山黧豆粉）为0.025 g/m L,提取温度为60℃时,提取效率较高。 展开更多

关键词 山黧豆 β-N-草酰基-L-α β-二氨基丙酸 氨基酸

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6个山黧豆品种的β-ODAP含量与蛋白酶抑制剂活性及其关系分析

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作者 付筱 宋瑶瑶 +1 位作者 陈红 徐全乐 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1068-1075,共8页

山黧豆(Lathyrus spp.)种质资源评价与筛选长期聚焦于获得低β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-L-α,β-diaminopropionicacid,β-ODAP)含量或低蛋白酶抑制剂活性的品种。为了研究β-ODAP含量与蛋白酶抑制剂活性之间的潜在关系... 山黧豆(Lathyrus spp.)种质资源评价与筛选长期聚焦于获得低β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-L-α,β-diaminopropionicacid,β-ODAP)含量或低蛋白酶抑制剂活性的品种。为了研究β-ODAP含量与蛋白酶抑制剂活性之间的潜在关系,该研究利用SDS-PAGE、酶活检测和相关性分析等方法对家山黧豆(L.sativus)、扁荚山黧豆(L.cicera)等6个山黧豆品种的蛋白酶抑制剂活性、β-ODAP含量及二者之间的关系进行了分析。结果表明:(1)不同山黧豆品种的醇溶蛋白和可溶蛋白电泳图谱呈现出显著的差异。(2)不同山黧豆种子的胰蛋白酶抑制剂活性介于100~190 TIU之间,胰凝乳蛋白酶抑制剂活性介于5~9 CIU之间。(3)β-ODAP含量与丝氨酸乙酰基转移酶活性的皮尔逊相关系数可达0.76,呈显著正相关关系。(4)山黧豆转录组数据(SRP145030)中的β-ODAP生物合成关键基因与Bowman-Birk蛋白酶抑制剂(Bowman-Birk inhibitor, BBi)基因表达水平呈显著负相关关系。该研究结果为进一步探讨分析山黧豆β-ODAP和BBi生物合成的调控与平衡,改善山黧豆的含硫氨基酸水平等奠定了基础。 展开更多

关键词 山黧豆 抗营养因子 β-odap 胰蛋白酶抑制剂 胰凝乳蛋白酶抑制剂

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山黧豆活性成分β-ODAP的检测方法研究进展

4

作者 杨玲娟 焦成瑾 +1 位作者 张小寒 赵菲佚 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期507-516,共10页

β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-L-α,β-diaminopropionic acid,β-ODAP)是山黧豆中的一种重要非蛋白氨基酸,与三七中的三七素为同一种次生代谢物,具有止血、兴奋神经、抗菌等多种生物活性。自20世纪60年代和80年代在山黧... β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-L-α,β-diaminopropionic acid,β-ODAP)是山黧豆中的一种重要非蛋白氨基酸,与三七中的三七素为同一种次生代谢物,具有止血、兴奋神经、抗菌等多种生物活性。自20世纪60年代和80年代在山黧豆等豆类和三七等植物中分别发现β-ODAP以来,科研工作者建立了多种检测方法。该文对近年来国内外有关检测β-ODAP的传统分析法、高效液相色谱法(HPLC)、色谱-质谱法(GC/LC-MS)、毛细管电泳法及酶学分析法等的基本原理及应用研究进展进行了综述,这些检测方法各有所长,具体选择依实验条件和实验目的而定。其中,柱前衍生化高效液相色谱法是目前应用最广泛的方法,高成本同位素内标的LC-MS则被誉为“金标准”。但特异、快速和低成本的检测方法一直是人们的追求目标,因而进一步完善酶传感器技术是β-ODAP检测领域在将来的主要研究方向。 展开更多

关键词 β-odap 色谱 毛细管电泳 酶学分析

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丛枝菌根真菌-山黧豆毛状根共生体系对NaCl胁迫条件下毛状根生长的影响

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作者 刘逸凡 张雪萍 +5 位作者 郭慧莹 尚天雪 曹宁 刘晓宁 连荣芳 徐全乐 《西南农业学报》 北大核心 2025年第6期1162-1168,共7页

【目的】探究丛枝菌根真菌(AMF)对山黧豆耐盐性及β-ODAP含量的影响,为山黧豆在盐碱地中的推广应用提供理论依据。【方法】构建山黧豆毛状根与AMF的共培养体系,利用HPLC法分析NaCl胁迫条件下AMF共生对山黧豆毛状根中β-ODAP含量的调控作... 【目的】探究丛枝菌根真菌(AMF)对山黧豆耐盐性及β-ODAP含量的影响,为山黧豆在盐碱地中的推广应用提供理论依据。【方法】构建山黧豆毛状根与AMF的共培养体系,利用HPLC法分析NaCl胁迫条件下AMF共生对山黧豆毛状根中β-ODAP含量的调控作用,检测β-ODAP生物合成关键酶丝氨酸乙酰基转移酶(SAT)及β-腈基丙氨酸合成酶(CAS)活性。【结果】利用发根农杆菌C58C1浸染山黧豆幼苗诱导毛状根的产生。使用湿筛法获得AMF孢子,其在山黧豆毛状根中的接种可产生新生菌丝及新生孢子。醋酸墨水染色和巢式PCR分析表明,AMF在山黧豆毛状根中成功定殖。在盐胁迫条件下,50 mmol/L NaCl处理对于山黧豆毛状根的萌发和生长影响不显著,100 mmol/L和150 mmol/L NaCl处理显著降低毛状根的诱导率、根长和发根数目。AMF共生则显著促进NaCl胁迫条件下山黧豆毛状根的诱导率。此外,AMF与毛状根共生上调山黧豆β-ODAP生物合成关键酶SAT活性、下调CAS活性,减缓NaCl胁迫条件下山黧豆毛状根中β-ODAP的进一步积累。【结论】AMF共生显著改善山黧豆毛状根在NaCl胁迫条件下的生长状况,增强山黧豆毛状根的耐盐性。 展开更多

关键词 山黧豆 毛状根 丛枝菌根真菌 NACL胁迫 β-odap

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山黧豆毒素生物化学及去毒研究进展 被引量：6

6

作者 焦成瑾 王崇英 +1 位作者 李志孝 王亚馥 《草业学报》 CSCD 2005年第1期100-105,共6页

对近年来山黧豆毒素的生物化学和去毒研究进展作了综述。毒素生物化学包括毒素的化学成分、生物合成以及外界环境对毒素生物合成的影响;去毒研究主要涉及毒素的遗传和低毒品种的选育、组织培养和遗传转化及食用前种子去毒方面的近况。... 对近年来山黧豆毒素的生物化学和去毒研究进展作了综述。毒素生物化学包括毒素的化学成分、生物合成以及外界环境对毒素生物合成的影响;去毒研究主要涉及毒素的遗传和低毒品种的选育、组织培养和遗传转化及食用前种子去毒方面的近况。就毒素的可能生物学意义进行了扼要讨论,对今后山黧豆的研究方向作了简要展望。 展开更多

关键词 山黧豆 神经毒素(β-odap) 毒素生物化学 低毒品系 组织培养

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山黧豆中α—及β—草酰二氨基丙酸相对含量的电泳测定及分离 被引量：5

7

作者 李志孝 孟延发 +1 位作者 张立 陈耀祖 《兰州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期89-92,共4页

本文用电泳扫描法对国内一些山黧豆样品中α—及β—草酰二氟基丙酸的相对含量进行了测定井改进了二者的分离方法.

关键词 电泳 测定 山黧豆 毒素 β-odap

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山黧豆160年研究历程及进展 被引量：11

8

作者 徐全乐 蒋景龙 +4 位作者 焦成瑾 张大伟 Neil C.Turner Shiv Kumar 熊友才 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1583-1604,共22页

在全球范围内曾多次发生因过量食用山黧豆导致神经中毒事件,使得国内外对于山黧豆的种植和利用存在一定的误解和偏见,山黧豆的优良农艺价值和潜在功能食品利用价值也受到一定限制。但山黧豆适应性强、分布范围广,是全球气候变化条件下... 在全球范围内曾多次发生因过量食用山黧豆导致神经中毒事件,使得国内外对于山黧豆的种植和利用存在一定的误解和偏见,山黧豆的优良农艺价值和潜在功能食品利用价值也受到一定限制。但山黧豆适应性强、分布范围广,是全球气候变化条件下农业可持续发展和地力维持的优选作物,在食品安全、生态文明建设和乡村振兴新形势下,进一步研究和挖掘利用这一古老的优良作物具有重要的战略意义。山黧豆相关研究报道可追溯到1861年,距今已有160年的历史。在同行学者的不懈努力下,山黧豆基础研究及种质资源利用等方面均取得了显著的阶段性成果。该文系统回顾了山黧豆研究160年以来的发展历程,依托历史文献进行了梳理和分析。首先,基于山黧豆神经活性物质β-ODAP的分离和鉴定、神经山黧豆中毒机制的探索、β-ODAP生物合成途径解析等重要研究节点将整个山黧豆研究进程划分为山黧豆中毒因素的探索、神经山黧豆中毒机理解析和神经山黧豆中毒及β-ODAP生物学功能的再认识等三个阶段。其次,总结了山黧豆在毒理学研究、种质资源利用、品质改良基础研究等方面取得的重要进展。特别是以兰州大学为代表的中国学者在β-ODAP的分析检测、生物合成途径、山黧豆生理生态学研究及种质资源利用等方面进行了深入探讨,确立了中国在国际山黧豆研究中的主流地位。最后,针对目前山黧豆分子生物学基础研究相对滞后、种质资源缺乏系统利用等问题进行了展望,提出了未来的重点发展方向,为山黧豆种质资源的进一步深入挖掘和应用提供参考。 展开更多

关键词 山黧豆 β-odap 神经兴奋性作用 膳食平衡 功能食品

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山黧豆LsSULTR基因的克隆与表达分析 被引量：2

9

作者 陈红 曾鹏 徐全乐 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1954-1961,共8页

为研究山黧豆(Lathyrus sativus)硫酸盐转运蛋白(sulfate transporter,SULTR)与内源活性物质β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-L-α,β-diaminopropionic acid,β-ODAP)含量之间的关系,该研究采用序列比对的方法,从山黧豆转录... 为研究山黧豆(Lathyrus sativus)硫酸盐转运蛋白(sulfate transporter,SULTR)与内源活性物质β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-L-α,β-diaminopropionic acid,β-ODAP)含量之间的关系,该研究采用序列比对的方法,从山黧豆转录组数据(SRP145030)中查找SULTR基因序列,并进行生物信息学分析;采用PCR方法克隆基因全长序列并进行组织特异性表达分析,以筛选与β-ODAP含量相关的SULTR基因。结果表明:(1)经序列比对共查找到13条SULTR基因序列,其编码蛋白分别隶属于SULTRⅠ-Ⅳ。其中LsSULTR3;3和LsSULTR3;5具有SULTR蛋白家族保守的STAS结构域(PF01740)和Sulfate_transp结构域(PF00916),且二者活性受到转录因子MYB和激素响应等多个顺式作用元件的共同调节,并受蛋白水平互作及磷酸化等翻译后修饰调控。(2)成功获得LsSULTR3;3和LsSULTR3;5基因全长cDNA分别为1962 bp和1923 bp,分别编码653和640个氨基酸。(3)半定量RT-PCR分析显示,LsSULTR3;3在山黧豆主根、成熟叶、茎、花、盛荚初期(S2)种子和鼓粒满期(S6)种子中表达,并在茎中的表达量较高;LsSULTR3;5在山黧豆主根、侧根、花、S2时期种子中均有表达,且花中的表达量最为显著。该研究结果为进一步研究山黧豆中硫酸盐的吸收、转运及同化、β-ODAP的生物合成途径等奠定了基础。 展开更多

关键词 山黧豆 硫酸盐转运蛋白 β-odap 基因克隆 蛋白活性调控

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草酸与家山黧豆中ODAP生物合成及其抗逆性关系的研究 被引量：1

10

作者 张大伟 邢更妹 +3 位作者 严则仪 王崇英 李志孝 王亚馥 《兰州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期63-69,共7页

山黧豆中含β-N-草酰-α,β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-α,β-diaminopropionic,ODAP),ODAP是引起山黧豆中毒的主要成分．在山黧豆不同发育期,用草酸合成抑制剂、外源草酸和水分胁迫等处理后分析各器官中ODAP积累消长动态与山黧豆抗逆性... 山黧豆中含β-N-草酰-α,β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-α,β-diaminopropionic,ODAP),ODAP是引起山黧豆中毒的主要成分．在山黧豆不同发育期,用草酸合成抑制剂、外源草酸和水分胁迫等处理后分析各器官中ODAP积累消长动态与山黧豆抗逆性及其产量因子等之间的关系,结果如下:BHB不仅降低了各器官中草酸的质量浓度,而且明显抑制了ODAP积累;外源草酸或水分胁迫处理后,促进了内源草酸和ODAP的积累;BHB在降低了成熟种子中ODAP质量分数的同时,也降低了山黧豆的抗逆性,但在生长后期处理既可抑制种子中ODAP积累,又不致严重影响山黧豆的产量和抗逆性．这表明,草酸是ODAP生物合成的前体物之一,为获得低毒山黧豆提供了一条切实可行而有效的途径． 展开更多

关键词 山黧豆 β-N-草酰-α β-二氨基丙酸 草酸 2-羟基丁炔酸丁酯 聚乙二醇

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山黧豆β-腈基丙氨酸合成酶基因LsCAS的原核表达及蛋白聚合状态分析 被引量：1

11

作者 贾海燕 李辰浩 +3 位作者 宋瑶瑶 刘凤娟 焦成瑾 徐全乐 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1605-1610,共6页

该研究从山黧豆种子萌发6 d后的幼苗根中扩增到β-腈基丙氨酸合成酶基因(LsCAS)的CDS序列,并构建pGEX2T-LsCAS表达载体;经诱导表达后,通过GST亲和层析进行LsCAS蛋白纯化,并利用GST标签抗体和大豆半胱氨酸合成酶(Cysteine synthase,CS)... 该研究从山黧豆种子萌发6 d后的幼苗根中扩增到β-腈基丙氨酸合成酶基因(LsCAS)的CDS序列,并构建pGEX2T-LsCAS表达载体;经诱导表达后,通过GST亲和层析进行LsCAS蛋白纯化,并利用GST标签抗体和大豆半胱氨酸合成酶(Cysteine synthase,CS)抗体对纯化蛋白进行Western-blot验证;纯化后的LsCAS蛋白经凝血酶切除GST标签抗体后,利用凝胶过滤预装柱Superdex 200 Increase 10/300 GL分析判断分子量。结果显示:(1)山黧豆LsCAS基因的CDS序列为1035 bp,编码344个氨基酸;其编码的蛋白质具有典型的CBS-like蛋白功能结构域胱硫醚β-合酶(CBS)和半胱氨酸合成酶(CS)。(2)成功构建LsCAS基因的原核表达载体pGEX2T-LsCAS并进行蛋白纯化;SDS-PAGE检测表明,所获融合蛋白条带单一,大小在64 kD左右;Western-blot分析发现,诱导后的菌体蛋白和纯化后的重组蛋白中均能检测到特征条带,说明所获融合蛋白为山黧豆LsCAS蛋白。(3)纯化的山黧豆LsCAS蛋白在412 nm的特征吸收峰显示,LsCAS隶属于磷酸吡哆醛(PLP)依赖的半胱氨酸合成酶家族;分子排阻试验证实山黧豆LsCAS为PLP依赖性蛋白酶,可能以四聚体方式发挥作用。研究结果为进一步探讨山黧豆LsCAS的调控及其功能奠定了基础。 展开更多

关键词 山黧豆 β-腈基丙氨酸合成酶 原核表达 蛋白纯化 磷酸吡哆醛

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两步固态法发酵降解山黧豆毒素的研究 被引量：1

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作者 赵兴秀 李志孝 孟延发 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期37-40,共4页

从保存的菌种中筛选到B_2和B_(13)2株菌,通过2步固态发酵,在山黧豆培养基中先接菌株B_2培养3d (37℃),灭菌后再接菌株B_(13),培养3d(37℃),灭菌后用0.2 mol/L的HClO_4在0～4℃提取1h,然后利用2,4-二硝基氟苯(FDNB)为柱前衍生试剂,通过... 从保存的菌种中筛选到B_2和B_(13)2株菌,通过2步固态发酵,在山黧豆培养基中先接菌株B_2培养3d (37℃),灭菌后再接菌株B_(13),培养3d(37℃),灭菌后用0.2 mol/L的HClO_4在0～4℃提取1h,然后利用2,4-二硝基氟苯(FDNB)为柱前衍生试剂,通过高效液相色谱(HPLC),检测了对照和处理中α,β-草酰氨基丙氨酸(ODAP)的含量及降解率。结果发现,对照中β-ODAP和α-ODAP平均含量分别为1.146 mg/g和0.653 mg/g,处理中β-ODAP和α-ODAP的平均含量分别为0.203 mg/g和0.0909 mg/g,处理中的β-ODAP和α-ODAP比对照中的β-ODAP和α-ODAP的平均含量降低了82.2%和86%,而且发酵后处理的蛋白含量明显高于对照。 展开更多

关键词 固态发酵 山黧豆 β-N-草酰基-α β-二氨基丙酸

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