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利用TALE-TFs在小鼠成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子表达载体
1
作者 皮文辉 梁龙 +6 位作者 唐红 张译元 郭延华 王立民 向春和 周平 刘守仁 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2014年第5期13-16,I0003,共5页
目的利用TALE-TFs,在小鼠成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子,为检测β-酪蛋白基因启动子—目的基因表达框的表达结果,提供一种检测途径。方法将构建的TALE-TFs和β-酪蛋白基因启动子—Red报告基因质粒电转染进入小鼠成纤维细胞,通过... 目的利用TALE-TFs,在小鼠成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子,为检测β-酪蛋白基因启动子—目的基因表达框的表达结果,提供一种检测途径。方法将构建的TALE-TFs和β-酪蛋白基因启动子—Red报告基因质粒电转染进入小鼠成纤维细胞,通过荧光显微镜直接观察报告基因表达情况。结果与结论利用TALE人工转录因子,在小鼠成纤维细胞中能够激活β-酪蛋白基因启动子表达框,为替代乳腺上皮细胞表达验证系统提供了新的途径。 展开更多
关键词 TALE-TFs 小鼠成纤维细胞 β-酪蛋白基因启动子 表达调控
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山羊β-酪蛋白基因启动子指导人血清白蛋白基因在小鼠组织中的特异性表达 被引量：5
2
作者 曹新 曾溢滔 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期518-520,共3页
对本所构建的pcDNA3.1- β6 .7hALBm表达载体行尾静脉注射直接转染哺乳期母鼠的活体组织。通过RT-PCR检测hALBm基因在小鼠几种组织中的表达来研究该构建体的组织特异性。结果 :构建体在受试鼠组织中的表达显示了较好的乳腺组织特异性。... 对本所构建的pcDNA3.1- β6 .7hALBm表达载体行尾静脉注射直接转染哺乳期母鼠的活体组织。通过RT-PCR检测hALBm基因在小鼠几种组织中的表达来研究该构建体的组织特异性。结果 :构建体在受试鼠组织中的表达显示了较好的乳腺组织特异性。说明构建具有较长 5′端上游乳蛋白调控区的乳腺特异性表达载体对组织特异性表达是必需的。 展开更多
关键词 启动子 表达载体 特异性表达 山羊β-酪蛋白基因 人血清白蛋白
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多浪羊LIN28A基因启动子区克隆、序列分析及蛋白表达研究
3
作者 李伟 黄巧艳 +4 位作者 王鑫昆 谷若怀 孙慧萍 朱乐萧 邢凤 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期2992-3003,共12页
【目的】探究多浪羊LIN28A基因的启动子区序列特征及蛋白表达规律,为进一步研究其在初情期的转录调控机理奠定基础。【方法】根据NCBI中绵羊LIN28A基因序列(登录号:NC_056055.1)设计引物进行PCR扩增、克隆测序及序列比对,获取多浪羊LIN... 【目的】探究多浪羊LIN28A基因的启动子区序列特征及蛋白表达规律,为进一步研究其在初情期的转录调控机理奠定基础。【方法】根据NCBI中绵羊LIN28A基因序列(登录号:NC_056055.1)设计引物进行PCR扩增、克隆测序及序列比对,获取多浪羊LIN28A基因启动子区序列,并利用在线分析软件对其进行生物信息学分析。采集幼年期、初情期前、初情期及初情期后多浪羊的下丘脑、垂体和卵巢组织,利用Western blotting检测LIN28A蛋白在下丘脑-垂体-卵巢(HPO)轴中的表达情况。【结果】多浪羊LIN28A基因启动子区序列长2089 bp,GC含量为56.28%。LIN28A基因启动子序列包含MEIS1、STAT3、COMP1等65个转录因子结合位点,3个TATA-box,1个CpG岛,以及9个潜在转录起始位点。LIN28A蛋白在多浪羊3个组织中均有表达,以卵巢中表达水平最高,下丘脑次之,垂体中表达量最低。在初情期前多浪羊下丘脑中LIN28A蛋白表达量显著高于幼年期(P<0.05),在幼年期和初情期前多浪羊垂体中LIN28A蛋白表达量显著高于初情期及初情期后(P<0.05),卵巢中LIN28A蛋白表达量在初情期启动前后呈现稳定趋势(P>0.05);在同一时期,LIN28A蛋白在多浪羊下丘脑、垂体和卵巢组织中的表达量均无显著差异(P>0.05)。【结论】多浪羊LIN28A基因启动子区有多个与初情期相关的转录因子结合位点,为后续转录因子验证和启动子活性检测提供了试验材料。LIN28A蛋白在多浪羊HPO轴表达差异显著,为进一步研究LIN28A基因功能及调控机制提供了科学依据。 展开更多
关键词 多浪羊 LIN28A基因 启动子 初情期 下丘脑-垂体-卵巢轴
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A1/A2β-酪蛋白基因型的鉴定及其消化性能的比较 被引量：1
4
作者 李师行 徐洪涛 +6 位作者 李笑 孙美玲 杨鑫焱 项鹏宇 杨智浩 满朝新 姜毓君 《食品工业科技》 北大核心 2025年第5期160-167,共8页
A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白由于一级结构上的差异,消化后产生的物质也不相同。为了更全面地探究其对人体可能产生的生物活性影响,通过分析和监测该蛋白质在消化过程中的变化情况,进一步实现对A1/A2β-酪蛋白生物功能的探索。在本研究中,... A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白由于一级结构上的差异,消化后产生的物质也不相同。为了更全面地探究其对人体可能产生的生物活性影响,通过分析和监测该蛋白质在消化过程中的变化情况,进一步实现对A1/A2β-酪蛋白生物功能的探索。在本研究中,对采自某一牧场不同奶牛的牛奶进行等位基因特异性PCR鉴别,并借助阴离子交换色谱和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法对牛奶分离出的β-酪蛋白进行纯化和鉴定,最后构建静态体外消化模型比较β-酪蛋白在消化性能上的差异。结果显示,分离纯化的A1和A2β-酪蛋白的浓度分别为0.62 mg/mL和0.66 mg/mL,纯度分别为95.28%和96.60%。两种β-酪蛋白的最终消化率均在90%左右,差异不显著。A2β-酪蛋白自肠消化阶段开始直至消化结束表现出了更高的水解度,为25.34%。随着胃肠消化时间的增加,两种β-酪蛋白的粒径不断减小,电位绝对值不断增大,并且A2β-酪蛋白在粒径和电位上的变化程度大于A1β-酪蛋白。综上所述,本研究揭示了A1和A2β-酪蛋白在静态体外消化过程中的理化特性差异,并在一定程度上表明A2β-酪蛋白可能具有比A1β-酪蛋白更好的消化性能,为进一步拓宽A2β-酪蛋白在乳制品中的应用提供一定科学依据。 展开更多
关键词 A1 β-酪蛋白 A2 β-酪蛋白 等位基因特异性PCR 体外模拟消化 消化性能
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山羊β-酪蛋白基因调控区的克隆及启动子活性的检测 被引量：1
5
作者 郑艳玲 唐爽 张涌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第6期1-5,共5页
为了克隆山羊β-酪蛋白基因的调控区并检测5′调控区的启动子活性,利用Long PCR技术对西农莎能奶山羊β-酪蛋白基因(CSN2)5′和3′调控区进行了克隆(5′调控区分两段进行克隆,3′调控区进行直接克隆)、测序,将克隆的5′调控区的两个片... 为了克隆山羊β-酪蛋白基因的调控区并检测5′调控区的启动子活性,利用Long PCR技术对西农莎能奶山羊β-酪蛋白基因(CSN2)5′和3′调控区进行了克隆(5′调控区分两段进行克隆,3′调控区进行直接克隆)、测序,将克隆的5′调控区的两个片段通过共有的单一性酶切位点HindⅢ融合成一个长为6.7 kb的片段,用其替代表达载体pEGFP-C1上原来的启动子CMV,指导报告基因绿色荧光蛋白(GFP)在山羊乳腺上皮细胞中的瞬时表达。结果表明,克隆的GC 3.3、GC 4.3、GC 6.6 3个片段与GenBank中登录的山羊CSN2基因相应序列相比,同源性均为99%,其包含了TATA box、GC island、CAAT box、SAR、AP1、Oct-1、Sm、Glyco、Pu-1、CAC等复合元件和转录翻译调节因子的作用位点,并且5′调控区可以有效指导报告基因的表达,从而初步验证了所克隆的山羊CSN2基因5′调控区的有效性,表明克隆的调控区可用于乳腺生物反应器的研究。 展开更多
关键词 山羊 β-酪蛋白基因(CSN2) 调控区 PCR GFP基因
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三色堇VwF3H基因启动子克隆及其功能分析
6
作者 许晓兰 黎洁 +4 位作者 许慧娴 周扬 赵莹 彭婷 王健 《南方农业学报》 北大核心 2025年第2期368-377,共10页
【目的】探究三色堇黄烷酮-3-羟化酶基因(VwF3H)启动子功能,并验证其与花青素相关MYB转录因子的互作关系,为揭示F3H基因在植物花青素合成过程中的调控机制提供参考依据。【方法】以三色堇为研究材料,通过FPNI-PCR克隆VwF3H基因启动子序... 【目的】探究三色堇黄烷酮-3-羟化酶基因(VwF3H)启动子功能,并验证其与花青素相关MYB转录因子的互作关系,为揭示F3H基因在植物花青素合成过程中的调控机制提供参考依据。【方法】以三色堇为研究材料,通过FPNI-PCR克隆VwF3H基因启动子序列,分析其功能元件、组织表达特异性及核心功能片段等,并通过酵母单杂交试验探究VwMYB27和VwMYB29能否与VwF3H基因启动子结合。【结果】VwF3H基因启动子序列长2017 bp,含有较多光响应元件及激素响应元件;根据MYB等重要转录因子的位置,将其分为4段:VwF3H1(2017 bp)、VwF3H2(1353 bp)、VwF3H3(745 bp)和VwF3H4(446 bp)。VwF3H基因在三色堇花瓣中的相对表达量最高,显著高于根、茎和叶片中的相对表达量(P<0.05,下同)。VwF3H基因启动子全长具有较强的转录活性,缺失片段-2017~-1353 bp的VwF3HS2转录活性明显降低,缺失更多碱基的VwF3HS3和VwF3HS4则基本无转录活性,说明VwF3H基因启动子的高活性序列位于-2017~-1353 bp区域。VwF3H基因启动子在烟草叶片和花中启动GUS基因的能力不同,以花器官中的转录活性更强,说明VwF3H基因表达存在一定组织特异性;此外,VwF3H基因启动子在烟草中的转录活性明显低于CaMV35S启动子,但在三色堇中的转录活性明显高于CaMV35S启动子,推测VwF3H基因还存在物种偏好性,且更适合作为三色堇花瓣转化载体的启动子。VwF3H基因启动子的3-氨基-1,2,4-三唑(3-AT)自激活抑制浓度为250 mmol/L;VwMYB27与VwF3H基因启动子存在互作关系,而VwMYB29与VwF3H基因启动子无直接的互作关系。【结论】VwF3H基因启动子在三色堇中具有较强的转录活性,其高活性序列位于-2017~-1353 bp区域;VwF3H基因启动子能与VwMYB27相互作用,而参与三色堇花瓣色斑的形成。 展开更多
关键词 三色堇 黄烷酮-3-羟化酶基因(F3H) 启动子 MYB转录因子
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β-酪蛋白不同基因型荷斯坦奶牛瘤胃微生物群落特征和功能分析
7
作者 赵金燕 王川川 +4 位作者 禹保军 马若霜 胡佳欢 张娟 顾亚玲 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期537-550,共14页
β-酪蛋白是乳汁中最重要的蛋白质之一,在荷斯坦奶牛中存在A1和A2这2种主要基因型。为探究β-酪蛋白不同基因型荷斯坦奶牛瘤胃微生物群落的差异,试验选取体况良好、第1胎次的A1A1、A1A2和A2A2基因型荷斯坦奶牛各15头(各基因型奶牛乳脂... β-酪蛋白是乳汁中最重要的蛋白质之一,在荷斯坦奶牛中存在A1和A2这2种主要基因型。为探究β-酪蛋白不同基因型荷斯坦奶牛瘤胃微生物群落的差异,试验选取体况良好、第1胎次的A1A1、A1A2和A2A2基因型荷斯坦奶牛各15头(各基因型奶牛乳脂率和乳蛋白率相近),采集瘤胃液后通过Illumina HiSeq 2000平台进行宏基因组测序,并利用Diamond 0.9.7软件进行分类和功能注释,分析3种基因型奶牛瘤胃微生物群落的组成和功能。结果表明:1)A1A1基因型奶牛瘤胃中特征微生物有Intestinibaculum、戴阿利斯特杆菌属(Dialister)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)和不动杆菌属(Acinetobacter)等;A1A2基因型奶牛瘤胃中特征微生物有普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)的帕拉普雷沃氏菌属(Paraprevotella)和Paraprevotella xylaniphila;A2A2基因型奶牛瘤胃中特征微生物包括醋杆菌属(Acetobacter)和黄单胞菌属(Xanthomonas)等。2)A1A2和A2A2基因型奶牛瘤胃中富含与木质纤维素和纤维素降解相关的酶;A1A2基因型奶牛瘤胃参与淀粉和蔗糖代谢、脂肪酸生物合成、蛋白质消化与吸收、精氨酸和脯氨酸代谢以及RNA降解通路的基因数量更多;A2A2基因型奶牛瘤胃参与炎症介质调节通路的基因数量更多。由此可知,A1A1基因型荷斯坦奶牛的瘤胃标志物微生物是Intestinibaculum和戴阿利斯特杆菌属,可能与减少甲烷排放和A1型β-酪蛋白以及部分疾病存在潜在关联;A1A2基因型奶牛的瘤胃标志微生物是普雷沃氏菌科,可能对饲粮消化有促进作用;A2A2基因型奶牛的瘤胃标志微生物是醋杆菌属,其相对丰度对乳脂含量有调节作用。 展开更多
关键词 荷斯坦奶牛 β-酪蛋白 A2奶 瘤胃微生物 宏基因组学
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乳山羊αsi-酪蛋白基因启动子的功能测试
8
作者 秦春圃 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第2期59-59,共1页
小鼠乳腺上皮细胞株NmuMG于4种不同培养系统中，利用内分泌素诱导后都可形成类腺泡细胞。唯有其中以培养于EHS-Insert’系统之细胞，最早于12小时就形成类腺泡结构，以后试验而将带有5种不同表现质体的NMuMG细胞培养于EHS-Insert’系统... 小鼠乳腺上皮细胞株NmuMG于4种不同培养系统中，利用内分泌素诱导后都可形成类腺泡细胞。唯有其中以培养于EHS-Insert’系统之细胞，最早于12小时就形成类腺泡结构，以后试验而将带有5种不同表现质体的NMuMG细胞培养于EHS-Insert’系统，经体外培养3～6天，转染乳牛BCN／GFP。 展开更多
关键词 乳山羊 αsi-酪蛋白基因 启动子 类腺泡细胞 多态性检测
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牛乳β-酪蛋白基因分型及A1β-酪蛋白对人体健康的潜在影响
9
作者 唐运萍 孙蕊仙 +2 位作者 李会民 宋艳秋 隋世燕 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第23期368-376,共9页
长期以来,牛奶为人们提供优质蛋白质和钙等微量元素。β-酪蛋白作为牛乳蛋白质的重要组成部分,具有多种分型,其中最常见的是A1型和A2型,且因与人体健康密切相关而受到广泛关注。BCM-7是A1β-酪蛋白消化产生的一种生物活性肽,具有阿片样... 长期以来,牛奶为人们提供优质蛋白质和钙等微量元素。β-酪蛋白作为牛乳蛋白质的重要组成部分,具有多种分型,其中最常见的是A1型和A2型,且因与人体健康密切相关而受到广泛关注。BCM-7是A1β-酪蛋白消化产生的一种生物活性肽,具有阿片样性质,推测其可能与胃肠功能紊乱、I型糖尿病、心血管疾病和神经系统疾病等慢性非传染性疾病密切相关,而也有少数文献报道,A1β-酪蛋白对机体是有益的。因此,该文从β-酪蛋白的基因分型及其与人体健康的关系等方面进行阐述,为阐明A1和A2型β-酪蛋白牛奶对人体健康的具体影响以及各自发挥作用的机理奠定基础,并为A1和A2型β-酪蛋白牛奶的消费选择提供一定的理论参考。 展开更多
关键词 β-酪蛋白 BCM-7 基因分型 人体健康 牛乳
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基质金属蛋白酶-1启动子基因的单核苷酸多态性及其与牙周病的关系
10
作者 曹正国 朱光勋 李成章 《国外医学（口腔医学分册）》 2003年第6期420-421,共2页
基质金属蛋白酶-1(MMP-1)与牙用病密切相关。研究表明在基质金属蛋白酶-1启动子-1607bp位点由于鸟嘌呤插入造成的单核苷酸多态性可以促进基质金属蛋白酶-1转录水平和蛋白水平的提高。本文就MMP-1启动子基因的单核苷酸多态性及其与牙周... 基质金属蛋白酶-1(MMP-1)与牙用病密切相关。研究表明在基质金属蛋白酶-1启动子-1607bp位点由于鸟嘌呤插入造成的单核苷酸多态性可以促进基质金属蛋白酶-1转录水平和蛋白水平的提高。本文就MMP-1启动子基因的单核苷酸多态性及其与牙周病的相关性作一综述。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶-1 启动子基因 单核苷酸多态性 牙周病
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人Aγ-珠蛋白基因-173T→C突变对启动子功能的影响
11
作者 黄小东 张俊武 +2 位作者 阳学贤 王以弘 赵华路 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期252-256,共5页
目的　研究人Ａγ珠蛋白基因－ １７３ Ｔ→Ｃ突变对反式作用因子与启动子的结合及对启动子活性的影响。方法　采用电泳迁移改变分析和荧光素酶报告基因瞬时转染分析。结果　Ａγ珠蛋白基因－ １７３ Ｔ→Ｃ突变使ＧＡＴＡ１ 与... 目的　研究人Ａγ珠蛋白基因－ １７３ Ｔ→Ｃ突变对反式作用因子与启动子的结合及对启动子活性的影响。方法　采用电泳迁移改变分析和荧光素酶报告基因瞬时转染分析。结果　Ａγ珠蛋白基因－ １７３ Ｔ→Ｃ突变使ＧＡＴＡ１ 与突变启动子片段（－ ２０１～－ １５８）的结合降低了９６％ （Ｐ＜ ００１），并且使Ｏｃｔ１ 与相同的ＤＮＡ 片段的结合降低５５％ （Ｐ＜ ００５）。在ＭＥＬＧＭ９７９ 细胞中，突变启动子活性是正常启动子的２ 倍（Ｐ＜ ００５）；在Ｋ５６２ 和Ｈｅｌａ 细胞中，突变和正常启动子活性基本相同。结论　Ａγ启动子－ １７３ Ｔ→Ｃ突变导致ＧＡＴＡ１ 与突变启动子片段结合显著减少，提示在成年期该转录因子可能是Ａγ珠蛋白基因的负调控因子；－ １７３ 展开更多
关键词 Aγ-珠蛋白基因 启动子 点突变 转录因子 GATA-1
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小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白基因启动子克隆及20-HETE对其转录活性的影响
12
作者 武晶晶 孔令慧 贾茹 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期29-33,共5页
目的克隆小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白(Nkcc2)基因启动子序列,初步探讨20-HETE对该基因转录活性的调控作用。方法应用生物信息学软件ALiBaba2.1和TRANSFAC TESS分析小鼠Nkcc2基因启动子序列;以小鼠基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增得... 目的克隆小鼠Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白(Nkcc2)基因启动子序列,初步探讨20-HETE对该基因转录活性的调控作用。方法应用生物信息学软件ALiBaba2.1和TRANSFAC TESS分析小鼠Nkcc2基因启动子序列;以小鼠基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增得到小鼠Nkcc2基因启动子区片段(-1 462 bp～+40 bp),并克隆入pGL3-Basic载体,构建萤光素酶报告基因载体;脂质体法将重组报告基因载体转染到HEK293T细胞24 h后,再以20-HETE处理转染细胞2 h,利用双萤光素酶报告基因检测系统分析萤光素酶活性。结果成功构建小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体;20-HETE可以显著下调小鼠Nkcc2基因启动子萤光素酶报告基因载体的转录活性。结论 20-HETE通过转录调控机制下调小鼠Nkcc2基因的表达。 展开更多
关键词 Na^+-K^+-2Cl^-共转运蛋白 启动子 20-HETE 基因克隆
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乙型肝炎病毒基因组中前前-S-编码基因启动子序列的确定及转录活性的鉴定 被引量：25
13
作者 杨倩 董菁 +4 位作者 成军 刘妍 洪源 王建军 张树林 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期761-762,765,共3页
为了解前 前 S编码区ORF上游是否具有启动子活性 ,选取其起始密码子ATG上游 2 77bp的DNA序列 ,将其克隆至报告基因表达载体pCAT3中 ,构建pCAT3 前 前 S promoter表达载体 ,以该质粒转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测氯霉素... 为了解前 前 S编码区ORF上游是否具有启动子活性 ,选取其起始密码子ATG上游 2 77bp的DNA序列 ,将其克隆至报告基因表达载体pCAT3中 ,构建pCAT3 前 前 S promoter表达载体 ,以该质粒转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果发现 ,质粒pCAT3 前 前 S promoter能够激活CAT的表达 ,吸光度 (A值 )是pCAT3 basic的 10倍 ,说明pCAT3 前 前 S promoter具有启动子活性 ,为在HBV基因组DNA序列中界定、研究新的前 前 SORF提供了直接的实验依据。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 前-前-S基因 启动子
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中国荷斯坦奶牛κ-酪蛋白基因第四外显子多态性与产奶性状的关联分析 被引量：15
14
作者 鞠志花 李秋玲 +5 位作者 王洪梅 李建斌 安利国 杨桂文 仲跻峰 王长法 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1312-1318,共7页
以544头中国荷斯坦奶牛为研究对象,以κ-酪蛋白基因为产奶性状的候选基因,扩增779bp的片段,结合测序结果采用PCR-RFLP方法来检测κ-酪蛋白基因3个位点的多态性。结果在exon4的第10891bp、10927bp和10988bp处分别发生了T/C、C/A错义突变... 以544头中国荷斯坦奶牛为研究对象,以κ-酪蛋白基因为产奶性状的候选基因,扩增779bp的片段,结合测序结果采用PCR-RFLP方法来检测κ-酪蛋白基因3个位点的多态性。结果在exon4的第10891bp、10927bp和10988bp处分别发生了T/C、C/A错义突变和G/A同义突变,据此分别选择了TaqⅠ、HindⅢ、PstⅠ等3种限制性内切酶检测了其多态性。发现3个位点的A、B等位基因在群体中都有分布,且处于低度多态;A和B等位基因的频率分别为86.03%和13.97%;AA,AB和BB基因型频率分别为73.71%,24.63%和1.66%;χ2适合性检验表明,该群体在这3个位点的突变达到Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);BB和AB基因型个体乳脂率显著高于AA基因型个体(P<0.05),AB基因型个体脂蛋白比显著高于AA基因型个体(P<0.05),但不同基因型对产奶量和乳蛋白率没有显著影响;3个位点的酶切多态性在所研究群体中是紧密连锁的。说明在中国荷斯坦奶牛群体中,κ-酪蛋白B等位基因可作为改良奶牛乳脂率性状的分子遗传标记。 展开更多
关键词 荷斯坦奶牛 Κ-酪蛋白基因 多态性 PCR-RFLP 产奶性状
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精氨酸水平对奶牛乳腺上皮细胞体外生长及κ-酪蛋白基因表达的影响 被引量：13
15
作者 徐柏林 王梦芝 +4 位作者 张兴夫 哈斯 王春艳 敖长金 王洪荣 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期852-858,共7页
本试验旨在研究培养基中添加不同浓度的精氨酸(Arg)对乳腺上皮细胞体外增殖及κ-酪蛋白(CSN3)基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养,以无Arg的培养基(0.00 mg/L)为对照(0组),试验培养基分别添加69.50(0.25组)、1... 本试验旨在研究培养基中添加不同浓度的精氨酸(Arg)对乳腺上皮细胞体外增殖及κ-酪蛋白(CSN3)基因表达的影响。选用中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞进行体外培养,以无Arg的培养基(0.00 mg/L)为对照(0组),试验培养基分别添加69.50(0.25组)、139.00(0.50组)、278.00(1.00组)、556.00(2.00组)、1 112.00(4.00组)和2 224.00 mg/L(8.00组)的精氨酸。结果表明:Arg能促进乳腺上皮细胞的增殖,24 h时,0.25～4.00组与0组相比均差异显著(P<0.05),8.00组与0组相比差异不显著(P>0.05);48和72 h时,各试验组与0组相比均差异显著(P<0.05)。Arg能促进CSN3基因的表达,各试验组与0组相比均差异显著(P<0.05),当Arg浓度为556.00 mg/L时,CSN3基因表达量最高。结果提示,Arg对乳腺上皮细胞增殖及CSN3基因表达均具有明显的促进作用,且在Arg浓度为69.50～1 112.00 mg/L时促细胞增殖效果较佳,在Arg浓度为556.00 mg/L时促CSN3基因表达作用最强。 展开更多
关键词 乳腺上皮细胞 精氨酸 细胞增殖 Κ-酪蛋白基因 基因表达
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花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因启动子的克隆及功能分析 被引量：8
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作者 石磊 苗利娟 +7 位作者 齐飞艳 张忠信 高伟 孙子淇 黄冰艳 董文召 汤丰收 张新友 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1629-1637,共9页
Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶（SAD）是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因（Ah SAD）起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5＇RAC... Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶（SAD）是决定植物体内饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸比值的关键酶。以花生品种豫花9326基因组DNA为模板,通过基因组步移技术,克隆到花生Δ~9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因（Ah SAD）起始密码子ATG上游720 bp片段,利用5＇RACE方法获得了该基因的5＇UTR序列,通过序列比对确定720 bp片段为Ah SAD启动子区域。PLACE在线启动子预测分析表明,该序列具有真核生物启动子必需的核心元件TATA-box和CAAT-box,含有多个与光诱导和激素响应相关顺式序列元件。将Ah SAD启动子片段替换pBI121质粒中的CaMV35S启动子驱动下游GUS基因表达,构建植物表达载体pBI-PAh SAD。通过农杆菌介导法转化拟南芥和在花生不同组织中瞬时表达,利用GUS组织化学染色研究其表达特性。表明在拟南芥和花生受体中,AhSAD启动子主要调控下游基因在根、茎、叶片和子叶中表达,在花生的果针中也检测到GUS活性;拟南芥的茎生叶只有叶脉中具有GUS活性,而花生整个叶片中都具有GUS活性。 展开更多
关键词 花生 Δ9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因(SAD) 启动子 基因组步移 GUS报告基因
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IL-6和IL-18基因启动子多态性与广东汉族人群类风湿性关节炎相关性研究 被引量：8
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作者 黄宪章 庄俊华 +2 位作者 任燕歌 周罗晶 周强 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1661-1664,共4页
目的了解我国广东地区汉族人群白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-18(IL-18)基因启动子单核苷酸多态性及与类风湿性关节炎(RA)的相关性。方法应用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术检测168名健康体检者和120例RA患者的IL-6基因启... 目的了解我国广东地区汉族人群白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-18(IL-18)基因启动子单核苷酸多态性及与类风湿性关节炎(RA)的相关性。方法应用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)技术检测168名健康体检者和120例RA患者的IL-6基因启动子-572和-174及IL-18基因启动子-607C/A和-137G/C单核苷酸多态性。结果对照组和患者组IL-6基因启动子-572位点、-174位点和IL-18基因启动子-607C/A位点、-137G/C位点均存在单核苷酸多态性。IL-6-572位点、-174位点和IL-18-607位点基因型和等位基因频率分布在RA组和对照组间差异均有显著性(P<0.001)。IL-18-137位点基因型频率在两组间无统计学意义(P=0.141),但等位基因分布频率在两组间差异有显著性(P=0.024)。经Logistic回归分析,年龄、性别、IL-6-572位点、-174位点和IL-18-137位点与RA有相关性(P<0.05)。结论广东汉族人群IL-6基因启动子-572和-174单核苷酸多态性与RA可能相关,IL-18基因启动子-607C/A和-137G/C单核苷酸多态性与RA是否相关需进一步研究。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 白细胞介素-6 白细胞介素-18 基因多态性 启动子
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天祝白牦牛α_(S1)-酪蛋白基因和κ-酪蛋白基因的PCR-RFLP研究 被引量：5
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作者 白文林 郑玉才 +2 位作者 尹荣焕 罗光彬 朱建勇 《湖北农业科学》 北大核心 2005年第3期15-17,共3页
利用PCR—RFLP技术熏检测了天祝白牦牛αS1-酪蛋白(αS1-casein,αS1-CN)基因和κ-酪蛋白(κ-casein,κ-CN)基因部分序列的遗传多态性熏结果表明:天祝白牦牛群体αS1-CN基因表现单态,κ-CN基因存在遗传多态性。κ-CN基因PCR-RFLP位点等... 利用PCR—RFLP技术熏检测了天祝白牦牛αS1-酪蛋白(αS1-casein,αS1-CN)基因和κ-酪蛋白(κ-casein,κ-CN)基因部分序列的遗传多态性熏结果表明:天祝白牦牛群体αS1-CN基因表现单态,κ-CN基因存在遗传多态性。κ-CN基因PCR-RFLP位点等位基因A和B的基因频率分别为0.0745和0.9255。κ-CN基因PCR-RFLP位点的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定理(P>0.05)。天祝白牦牛群体内平均基因一致度、基因多样度和有效等位基因数分别为0.9311、0.0689和1.0739。 展开更多
关键词 天祝白牦牛 αS1-广酪蛋白基因 Κ-酪蛋白基因 PCR—RFLP
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大豆脂肪氧化酶-3基因(Lox3)启动子的克隆及其瞬时表达分析 被引量：5
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作者 赵艳 史岩玲 +5 位作者 钱丹丹 张庆林 闫帆 王庆钰 张艳 李景文 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期65-69,共5页
利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离脂肪氧化酶-3基因启动子片段Lox3p。PLACE在线启动子预测工具分析表明:序列中含有多种典型的种子及胚特异性表达元件。将克隆得到的Lox3p片段替换pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-Lox3... 利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离脂肪氧化酶-3基因启动子片段Lox3p。PLACE在线启动子预测工具分析表明:序列中含有多种典型的种子及胚特异性表达元件。将克隆得到的Lox3p片段替换pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-Lox3p。通过农杆菌介导法在大豆种子中进行瞬时表达,GUS组织化学染色及荧光测定都显示出Lox3p驱动GUS基因表达的强度高于CaMV35S启动子。结果表明,该Lox3p启动子片段具备一定的胚特异表达特性,为探明大豆脂肪氧化酶-3基因启动子胚特异表达调控序列及其调控机制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 大豆 脂肪氧化酶-3基因 启动子 瞬时表达
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花生β-1,3-葡聚糖酶基因启动子的克隆及功能分析 被引量：10
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作者 王合春 陈新利 +3 位作者 隋炯明 毕英娜 王晶珊 乔利仙 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期864-870,共7页
植物β-1,3-葡聚糖酶属于一种重要的植物病程相关蛋白(PR蛋白),容易受到激发子的诱导而积累。用1.5 mmol/L水杨酸(SA)对花生品种花育20号幼苗进行诱导处理0.5、12、24、36、48和72 h后,提取RNA进行荧光定量检测β-1,3-葡聚糖酶基因(Ah-G... 植物β-1,3-葡聚糖酶属于一种重要的植物病程相关蛋白(PR蛋白),容易受到激发子的诱导而积累。用1.5 mmol/L水杨酸(SA)对花生品种花育20号幼苗进行诱导处理0.5、12、24、36、48和72 h后,提取RNA进行荧光定量检测β-1,3-葡聚糖酶基因(Ah-Glu)的表达量。结果表明,经诱导24 h后β-1,3-葡聚糖酶基因的表达量达到最高,是未经SA诱导的1.8倍。根据前期已克隆的花生β-1,3-葡聚糖酶基因序列(GenBank JQ801335),在其5'端设计3个嵌套的特异性引物扩增其上游启动子序列。以花育20号基因组DNA为模板,利用TAIL-PCR方法,扩增得到973 bp的花生β-1,3-葡聚糖酶基因启动子片段,在NCBI网站注册序列号为GenBank KC290400,并命名为Ah-Glu-Pro。PLACE和PlantCARE在线预测分析表明,Ah-Glu-Pro序列中含有TATA-box和CAAT-box等核心元件,还含有病原菌及水杨酸响应的顺式调控元件。根据Ah-Glu-Pro序列设计上下游引物,采用普通PCR法从花育20号扩增得到931 bp的启动子序列,命名为Ah-Glu-P。将Ah-Glu-P取代pCAMBIA1301质粒中的CaMV35S启动子,构建植物表达载体pCAMBIA1301-Ah-Glu-P。通过农杆菌介导法将pCAMBIA1301-Ah-Glu-P转化洋葱表皮细胞,经5 mmol/L SA诱导处理48 h后进行GUS染色。结果表明:经SA诱导后的洋葱表皮细胞GUS组织化学染色显示为蓝色,未经SA诱导的洋葱表皮细胞GUS组织化学染色未显示蓝色,说明Ah-Glu-P是一个可被诱导的启动子,可能含有对SA响应的顺式调控元件。 展开更多
关键词 花生 β-1 3-葡聚糖酶基因(Ah-Glu) 诱导型启动子 染色体步移 表达载体
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